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Tissue distribution of solid lipid nanoparticles loaded garlic oil in rats

大蒜油固体脂质纳米粒中二硫化物和三硫化物在大鼠体内的组织分布



全 文 :大蒜油固体脂质纳米粒中二硫化物和三硫化物
在大鼠体内的组织分布
孙学惠1,郭 涛1,何 进1,聂淑芳2,刘新新3
(1.沈阳军区总医院 药剂科,辽宁 沈阳 110016;
2.沈阳药科大学,辽宁 沈阳 110016;3.大连医科大学,辽宁 大连 110000)
[摘要] 目的:考察大蒜油固体脂质纳米粒(GOSLN)中二硫化物(DADS)和三硫化物(DATS)在大鼠体内的
组织分布。方法:建立了测定大鼠体内大蒜油中二硫化物(DADS)和三硫化物(DATS)的气相电子捕获法,色谱条
件:恒温110℃,检测器300℃,汽化室180℃,载气N2(纯度>99999%),流速10mL·min
-1,分流比1∶10;尾吹
60mL·min-1;进样量1μL。并测定大鼠颈静脉注射GOSLN和GO注射液后组织中的药物浓度。结果:此色谱条
件下各组织的标准曲线、精密度等实验结果表明,该方法适于分析大鼠体内大蒜油中DADS和DATS含量。与 GO
注射液相比,GOSLN在大鼠体内的分布特性有不同程度的改变,GOSLN在各组织中分布均相对较高。结论:SLN
能一定程度上提高药物的被动靶向性并延长药物在各组织中的作用时间。
[关键词] 大蒜油;固体脂质纳米粒;二烯丙基三硫化合物;二烯丙基二硫化合物;气相电子捕获法;组织分布
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)23277204
[收稿日期] 20080520
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30371782)
[通讯作者] 郭涛,Tel:(024)23994860,Email:sy_guotao@
263.net
[作者简介] 孙学惠,主管药师,博士,研究方向:中药纳米制
剂,Email:sunxh4545@163.com
  大蒜油是百合科葱属大蒜 AliumsativumL经
水蒸气蒸馏或有机溶剂萃取等方法提取所得,因其
在抗真菌[1]、抑肿瘤、降血脂、调节机体免疫等[23]
方面都有显著的药理活性而一直受到人们的重视,
但临床因其水不溶性、刺激性、易挥发性而受到限
制,多局限于保健品的层次。对于大蒜油中成分的
研究表明,主要由有机硫醚类化合物组成[4],其体
外分析方法多为气相色谱法[5]、高效液相色谱
法[67]等,本研究在前期研究的基础上,采用气相电
子捕获(GCECD)方法[89]对大蒜油固体脂质纳米
粒通过颈静脉注射给药后在各组织中的分布进行了
研究,以大蒜油注射液为参比制剂,比较大蒜油制成
固体纳米粒后在组织分布上的变化,为临床应用提
供依据。
1 材料
气相色谱仪:Angilent6890,DB-1毛细管石英
柱(035mm×30m);63NiECD检测器(Angilent公
司);JascoPlusLC-2000,HiQSilC18柱(10mm×
250mm,10μm),N2000双通道色谱工作站;TDL-
5台式高速离心机(上海安亭仪器厂);YKH-Ⅱ涡
旋混合器(江西医疗器械厂)。
二烯丙基三硫化合物(DATS,山东金乡食品药
品有限公司,纯度 >90%,精制后纯度 >990%),
二烯丙基二硫化合物(DADS,Sigma公司,精制后纯
度>990%);大蒜油固体脂质纳米粒(自制,批号
051102,40g·L-1);大蒜油注射液(自制,批号
051105,40g·L-1);1,4二氯硝基苯、正己烷、石油
醚、醋酸乙酯、无水乙醚为分析纯,甲醇、乙腈为色谱
纯,水为重蒸水。
Wistar大鼠,雌雄各半,体重(300±50)g,沈阳
军区总医院动物实验科提供,合格证号辽试动字
[2003]012号。
2 方法与结果
2.1 大鼠组织内DATS和DADS测定
2.1.1 色谱条件
恒温110℃,检测器300℃,汽化室180℃,载
气N2(纯度 >9999%),流速10mL·min
-1,分流
比1∶10,尾吹60mL·min-1,进样量1μL,见图1。
2.1.2 组织样品的采集和处理
取健康大鼠36只,随机分成2组,分别颈静脉  
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A.空白组织;B.加入三硫化合物和内标的空白组织;
C.组织样品;1.三硫化合物;2.内标
图1 大鼠组织中三硫化合物的气相色谱图
插管注射给药05mLGOSLN和GO注射液(含GO
10mg),于给药后5,30,60min气体栓塞处死大鼠,
取出心、肝、脾、肺、肾和脑,组织用生理盐水冲洗干
净,立即称取各组织样品05g,加入含内标的乙腈
溶液2mL,用组织匀浆器粉碎,再加入正己烷2mL,
涡旋混合05min,3000r·min-1离心10min,取正
己烷1μL进样测定,记录色谱图和峰面积。
2.1.3 方法专属性
取大鼠空白组织各05g,除不加内标外,其余
按2.1.2项下方法处理并分析,获得空白样品的色
谱图;将一定浓度 DATS和 DADS标准溶液加入空
白组织中,同法操作,得相应的色谱图;同样操作得
静脉给药后含有GO的组织样品色谱图。该色谱条
件下,DATS保留时间为136min,DADS保留时间
为54min,内标保留时间为 187min,结果表明,
DADS,DATS和内标分离良好,不受样品中内源性
杂质峰的干扰。
2.1.4 标准曲线制备
2.1.4.1 DATS标准曲线制备 取大鼠空白组织
(心、肝、脾、肺、肾、脑)各 05g,分别加入 04,2,
10,20,40,100mg·L-1的DATS系列标准甲醇溶液
10μL和2mg·L-1的内标甲醇溶液20μL,配制成
DATS为20,100,500,1000,2000,5000μg·L-1的
上述组织样品,按212项下依法操作。以组织样
品中待测物浓度为横坐标,待测物与内标的峰面积
比值为纵坐标,用加权(1/C2)最小二乘法进行线性
回归运算,求得直线方程。各组织中 DATS标准曲
线见表1。
表1 三硫化合物在不同组织的标准曲线(n=6)
组织 回归方程 r
心 Y=7279X+23 09921
肝 Y=7260X+37 09933
脾 Y=18074X+74 09918
肺 Y=8733X-372 09946
肾 Y=12515X-386 09902
脑 Y=8726X-523 09960
  由表1可见,在20~5000μg·L-1DATS浓度
与峰面积比呈良好的线性关系。根据标准曲线,心、
肝、脾、肺、肾、脑中 DATS测定的线性范围为20~
5000μg·L-1,最低检测限为10μg·L-1。
2.1.4.2 DADS标准曲线制备 同理,各组织中
DADS标准曲线见表2。
表2 二硫化合物在不同组织的标准曲线(n=6)
组织 回归方程 r
心 Y=22718X+27 09914
肝 Y=31355X-271 09908
脾 Y=30011X-192 09937
肺 Y=36333X-656 09954
肾 Y=37838X-692 09967
脑 Y=30913X-157 09901
  由表2可见,在50~2000μg·L-1,DADS浓度
与峰面积比呈良好的线性关系。根据标准曲线,心、
肝、脾、肺、肾、脑中 DADS测定的线性范围为
50~2000μg·L-1,最低检测限为30μg·L-1。
2.1.5 方法回收率和精密度考察
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取大鼠各空白组织05g,按2.1.4项下分别制
备DATS和 DADS高、中、低浓度的质量控制样品
(50,1000,5000μg·L-1和50,1000,2000μg·
L-1),每种浓度5份样品,进行测定,计算本法的回
收率和精密度,回收率结果见表3,4。结果表明该
法可用于测定生物样品中DATS和DADS的浓度。
表3 二硫化合物在不同组织的回收率(n=5) % 
组织
50μg·L-1 1000μg·L-1 2000μg·L-1
回收率 RSD 回收率 RSD 回收率 RSD
心 901±734 815 927±405 437 985±138 139
肝 917±604 662 951±582 612 986±382 387
脾 941±756 803 973±437 449 992±379 382
肺 936±679 725 943±432 458 992±213 215
肾 968±524 541 963±341 354 995±124 125
脑 903±836 926 933±617 661 973±317 326
表4 三硫化合物在不同组织的回收率(n=3) % 
组织
50μg·L-1 1000μg·L-1 2000μg·L-1
回收率 RSD 回收率 RSD 回收率 RSD
心 913±753 825 946±469 496 971±238 245
肝 923±601 651 967±423 437 982±183 186
脾 932±603 647 958±526 549 982±315 321
肺 941±439 467 967±424 438 985±195 198
肾 959±624 651 972±537 552 993±244 246
脑 912±923 1012 945±713 754 973±342 351
2.2 组织样品测定结果
测定给静脉给药后5,30,60min心、肝、脾、肺、
肾、脑组织匀浆中DADS和DATS浓度,并计算每克
不同组织中的DADS和DATS含量,考察了GOSLN
和GOINJ在健康大鼠各主要组织的分布情况,各时
间点的浓度见图2。将 DADS和 DATS含量求和后
作图见图3。
A.5min;B.30min;C.60min
图2 静脉注射大蒜油纳米粒和大蒜油注射液
后不同时间点二硫化合物和三硫化合物在大鼠
各组织中的浓度(n=3)
3 讨论
组织分布的研究更进一步明确了 GOSLN和
GO注射液中 DATS和 DADS在体内的动态变化
  
A.5min;B.30min;C.60min
图3 静脉注射大蒜油纳米粒和注射液后
不同时间点二硫化合物和三硫化合物在大鼠
各组织中的总浓度(n=3)
过程。颈静脉给药后,5min时 GOSLN在各组织中
的分布均比相应的GO注射液的高,尤其脾组织的药
物总浓度约是GO注射液的70倍,肝组织的药物浓
度药物总浓度约是 GO注射液的15倍,心、脑、肺的
药物总浓度分别约是 GO注射液的2~25倍,而且
GOSLN中以DATS为主要成分。GOSLN在肾组织
中的总浓度依然比GO注射液的高,但以DADS为主
要形式。到达30min后,各组织中药物浓度有所变
化,虽然在脾、脑、肺、心中药物总浓度依然比 GO注
射液的高,但相差比例已经减小很多,此时 GOSLN
在肝、肾中的药物总浓度已比GO注射液的略低。不
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同之处在于GOSLN中DATS的浓度约是DADS的2
倍,而GO注射液恰恰相反,DADS的浓度较高,DATS
的浓度偏低。60min时,GO注射液中DATS基本不
存在了,而主要以 DADS形式存在,GOSLN则仍以
DATS和DADS2种形式存在。这说明 GO制成 SLN
后,快速分布于组织后,有一个从SLN中释放的过程,
从而DATS能一定程度上受到保护,不直接被组织中
的酶代谢或破坏掉。脾、肺、心中的 GOSLN的浓度
比GO注射液的略高,而作为排泄器官的肾中 GO
SLN的浓度比 GO注射液的进一步降低。以上的研
究结果表明,SLN能一定程度上提高药物的靶向性并
延长药物在各组织中的作用时间,同时对大蒜油在血
液中浓度迅速下降给予很好的解释。
[参考文献]
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Tissuedistributionofsolidlipidnanoparticlesloadedgarlicoilinrats
SUNXuehui1,GUOTao1,HEJin1,ZHAOMinghong1,NIEShufang2
(1.DepartmentofPharmacy,GeneralHospitalofShenyangMilitaryRegion,Shenyang110016,China;
2.ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)
[Abstract] Objective:Toinvestigatethetissuedistributionofthedialyldisulfide(DADS)anddialyltrisulfide(DATS)in
solidlipidnanoparticlesloadedgarlicoil(GOSLN)inrats.Method:Thegaschromatographyelectroncapturedetection(GCECD)
methodwasestablishedtodeterminedtheDADSandDATSsimultaneouslyinthebiologicalsamplesofratsafteradministrationof05
mLgarlicoilinjectionorGOSLN(containingabout10mggarlicoil)viajugularveincannula.Theconditionsforgaschromatographic
separationwereasfolows.Theoventemperaturewassetat110℃ andmaintainedfor15min.Temperaturesattheinjectionportand
detectorwere180℃ and300℃,respectively.Ultrapurenitrogen(purity>99999%,ShenyangKeruiSpecialGasesCo.Ltd.,
China)wasusedasacariergasandmadeupgasatflowratesof1mL·min-1and60mL·min-1,respectively.Alinjectionswere
cariedoutinthesplitinjectionmodewithasplitratioof1∶10.Result:TheGCECDmethodwasfitfordetermingtheconcentrationof
DADSandDATSingarlicoil.ThedistributioncharacterofGOSLNinratshadchangedtosomeextentandtheconcentrationofGO
SLNintissueswashigherthanthatofGOInjection.Conclusion:TheSLNcanelevatethepassivetargetingofdrugsandlengthentheir
actiontimeintissues.
[Keywords] garlicoil;solidlipidnanoparticles;dialyltrisulfide;dialyldisulfide;electroncapturegaschromatography;tis
suedistribution
[责任编辑 鲍 雷]
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