全 文 ：批次样品 x份 o每份样品各 sqx ªo置于 x个 tss °
锥形瓶中 o精密加入熊果酸对照品溶液 t °
kt1swy °ª# °pt l∀按 2q2方法制备供试品溶液 x
份 o按上述方法测定 ∀结果样品的平均回收率为
|zqxh o ≥⁄为 sqw|h ∀
2q9 样品测定 按供试品溶液的制备方法分别制
备贵州 v个不同地点采收的连钱草供试品溶液 o分
别吸取对照品与样品溶液各 ts Λo注入液相色谱
仪 ∀以外标法计算熊果酸的含量 o结果贵阳花溪 !贵
阳乌当 !贵州凯里连钱草样品中熊果酸的含量分别
为 sqtyh osquxh osqvuh ∀
3 讨论
3q1 提取条件的选择 根据熊果酸的溶解性能 o选
择氯仿 !甲醇 !乙醚作为提取溶剂 o比较了 v种提取
溶剂提取方法 k超声 !回流及索氏提取 l和不同提取
时间 ksqxotqsotqx «l对提取效果的影响 ∀结果显
示采用超声提取方法的提取率最高 o氯仿和甲醇对
熊果酸的提取率基本一致 ∀但甲醇提取物中杂质
多 o测定时干扰较大 ∀因此选用氯仿作为溶剂 o超声
tqs «为宜 ∀
3q2 分离条件的选择 根据文献调研 ≈vow o选择了
甲醇 2水 !甲醇 2sqth磷酸水溶液 !乙腈 2水 !乙腈 2缓
冲溶液 !乙腈 2sqtxh磷酸水溶液等系统进行测定 ∀
结果表明乙腈 2sqtxh磷酸水溶液系统能使供试品
中熊果酸与齐墩果酸基本达到基线分离 ∀
3q3 采用本试验的 °≤测定方法 o熊果酸具有较
好的分离效果和线性关系 ∀且消除了异构体齐墩果
酸的干扰 ∀本方法简单快速 !灵敏度高 !重复性好 o
可用于含连钱草药材及其制剂的质量控制 ∀
≈参考文献
≈t 国家中医药管理局中华本草编委会 q中华本草 ≈ 1第 z卷 1
上海 }上海科学技术出版社 ot|||}wzq
≈u 罗启剑 o祝德秋 o崔 岚 o等 q分光光度法测定连钱草中熊果酸
的含量 ≈ q药学服务与研究 oussvo v kwl} uy{q
≈v 刘成红 o刘 云 q高效液相色谱法测定马鞭草中熊果酸的含量
≈ q中国中药杂志 oussuo uz ktul} |tyq
≈w 袁 珂 o李根林 o李俊芝 o等 q车前草中熊果酸 !齐墩果酸的
°≤测定 ≈ q中草药 ot|||o vs ktul} |stq
≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussx2tt2tw
≈基金项目 国家 /十五 0科技攻关项目 kusst
zstx|l
≈通讯作者 3 张丽萍 oר¯}kstslyu{||zwv
蒙古黄芪和膜荚黄芪种子酯酶同工酶的研究
张丽萍 3 o史 静 o陈 阳 o李先恩
k中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 o北京 tsss|wl
黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Αστραγαλυσµ εµ βρανα2
χευσkƒ¬¶¦«1l
ª¨ 1 √¤µ1 µ ονγηολιχυσk
ª¨ 1l ¶¬¤²或
膜荚黄芪 Α1µ εµ βραναχευσk ƒ¬¶¦«1 l
ª¨ 1 的干燥
根 ≈t ∀二者的化学成分有差异导致其药效不同 ≈u o
蒙古黄芪的药效更佳 o膜荚黄芪不仅药效 o而且栽培
管理技术 !产值均不如蒙古黄芪 ≈v ∀二者在植物形
态特征和生物学特征方面有明显区别 o但其种子外
形比较相近 o肉眼难以区别 ∀本研究利用种子酯酶
同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳快速简便的鉴别了蒙古
黄芪和膜荚黄芪种子 ∀为蒙古黄芪种子真实性的检
验提供理论依据 ∀
1 材料与方法
111 供试材料 所采用的 z份蒙古黄芪种子和 v
份膜荚黄芪种子的编号 !产地和采收时间见表 ∀¯
表 t 供试材料
编号 种子来源 种类 采集年份
t 内蒙古包头 蒙古黄芪 usst
u 内蒙古包头 蒙古黄芪 ussu
v 内蒙古包头 蒙古黄芪 ussv
w 内蒙古赤峰 蒙古黄芪 ussw
x 宁夏 蒙古黄芪 ussv
y 山西浑源 蒙古黄芪 ussw
z 山西广灵 蒙古黄芪 ussw
{ 河北安国 膜荚黄芪 ussv
| 内蒙古赤峰 膜荚黄芪 ussw
ts 山东济南 膜荚黄芪 ussw
#wvxt#
第 vt卷第 t{期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ t{
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
112 方法
11211 酶提取液的制备 取干种子 s1x ªo加入样
品提取液 ks1t °²¯ # } t ×µ¬¶2≤ o¯³ {1sl和 t滴
tsh的甘油 o样品 2提取液 ktΒylo冰浴研磨匀浆 ot
万 µ# °¬±} t条件下离心 ts °¬±∀上清液即为酶提
取液 o置于 w ε 冰箱备用 ∀
11212 酯酶同工酶的测定 采用不连续聚丙烯酰胺
凝胶电泳 o电极缓冲液为 ×µ¬¶2甘氨酸 o³ {1zo分离胶
tsh o浓缩胶 vh o在 w ε 条件下 o浓缩胶稳压 tus ∂ o
分离胶稳压 uus ∂ o电泳 w ∗ x «o每个样品重复 v次 ∀
快兰 盐 o乙酸 2Α2萘酸 ,乙酸 2Β2萘酸各 tss °ªo用
ts °丙酮溶解后 o加入稀释 u倍的磷酸缓冲液 k³
y1wltss °o过滤后使用 o现用现配 o定温下染色 t «
左右 o然后用自来水冲洗 o再用 xh醋酸固定 o可以长
时间保留 o进行照相等 ∀
11213 酶带位置的标定 计算相对泳动率 Ρ©kΡ©
酶带迁移距离 r前沿指示剂距离 l!标定酶带位置 ∀
2 结果与分析
211 不同产地蒙古黄芪种子和膜荚黄芪种子的酯
酶同工酶 酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果
k见图 tlo不同栽培产地内蒙古 !宁夏和山西的蒙古
黄芪种子具有相同的酯酶同工酶 o不同栽培产地内
蒙古 !河北和山东的膜荚黄芪种子具有相同的酯酶
同工酶 ∀而蒙古黄芪和膜荚黄芪种子的酯酶同工酶
存在较大的差异 ∀
从图 t可以看到 o蒙古黄芪种子有 ∞t o∞u o∞v o
∞w o∞x o∞z o∞{ o∞| {条酶带 o其中 ∞t o∞u o ∞x v条带清
晰 o分辨率高 o为主酶带 o可以作为蒙古黄芪种子酯
酶同工酶的特征酶带 ∀膜荚黄芪种子有 ∞t o∞u o∞v o
∞w o∞y o∞z o∞{ o∞|{条酶带 o其中 ∞t o∞u o∞v o∞y w条带
清晰 o分辨率高 o为主酶带 o可以作为膜荚黄芪种子
酯酶同工酶的特征酶带 ∀蒙古黄芪种子与膜荚黄芪
种子的酯酶同工酶的区别在于蒙古黄芪种子的 ∞t o
∞u o∞vv条酶带明显没有膜荚黄芪种子的 ∞t o∞u o∞v
粗浓 o更明显的区别在于蒙古黄芪种子有 ∞x条酶
图 t 蒙古黄芪和膜荚黄芪的酯酶同工酶电泳酶带图
k
l及模式图 kl
在
图中 o右 ts条为蒙古黄芪 o左 v条为膜荚黄芪
带 o无 ∞y条酶带 o而膜荚黄芪种子有 ∞y酶带 o无 ∞x
酶带 ∀各酶带的相对迁移率 Ρ©分别为 }∞t s1www~∞u
s1w{y~∞v s1xut~ ∞w s1xxy~ ∞x s1x{v~ ∞y s1yxv~ ∞z
s1y|w~∞{s1zxs~∞|s1z|u∀
3 小结
种子检验在药材种子上的应用尚处于起步阶
段 o蒙古黄芪和膜荚黄芪都是 5中国药典 6ussx年版
一部收录的药材黄芪的基源植物 o在分类学上是 u
个不同的种 o经过对不同栽培产地的蒙古黄芪和膜
荚黄芪种子酯酶同工酶电泳分析 o发现 u种黄芪种
子具有不同的酯酶同工酶酶谱 o利用酯酶同工酶谱
技术完全可以鉴别蒙古黄芪和膜荚黄芪种子 ∀此
外 o同工酶谱分析鉴别方法可靠 !简便快速 o所用仪
器均为常规仪器 o价格便宜 o所以具有鉴别蒙古黄芪
和膜荚黄芪种子的应用价值 o值得推广 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 ≈≥ 1一部 1 ussx}utu1
≈u 葛 莉 o戴春福 1t||z ∗ t||{年黄芪研究进展 ≈ 1中国中医
药信息杂志 ot|||oykttl}tx1
≈v 燕 玲 o孙文斌 1膜荚黄芪与蒙古黄芪植物学特征分析 ≈ 1
内蒙古农业大学学报 ousstouukwl}zt1
≈w 景建洲 o孙 渭 o李沛光 o等 1同工酶谱技术在烟草种子鉴别
中的应用研究 ≈ 1西北大学学报 k自然科学版 lot||{ou{
kyl}xws1
≈责任编辑 张宁宁
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