全 文 ：-1720· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第1l期2005年11月
裹4小区试验中不同接种处理对组墙苗茎粗的影响
Table4 EffectofInoculationsORdJameter
oftest-tubeplantlersinplottest
1000
750
M
5。0
；250
蓥 o
-250
500
—750
口地上都分●地下部分
b
旦 a a
r] r]
-_l ■ab 曲 a
圈l小区试验中不同接种处理对组培酋生物■的影响
(不同小写字母衰示部分生物量差异显薯PFig．1EffectofInoculationsonbiomassoftest-tube
plantleLsinplottest(differentlett rsmean
significantdifference，P中地上部分鲜质量达到852．00g／100丛，比对照增
加32．78％；地下部分鲜质量达到496．67g／100丛，
比对照增加49．30％，而接种Dt8、接种细菌菌肥对
生物量都没有显著影响。
从小区试验来看：菌根真菌Dr5是杯鞘石斛组
培苗的有益共生菌，接种效果在整个试验阶段都明
显，能与根系形成共生关系而持续发挥作用，增加根
际范围，促进石斛对基质养分的吸收。细菌菌肥在施
用后一段较短的时间内，对鲤培苗茎的生长有促进
作用，但由于没有追施，在根际的特殊效应不能持
续，付开聪等‘“也有相似的看法。随着土著微生物种
群的恢复和发展，菌肥的接种效应会被逐渐削弱，因
而试验进行一年后细菌菌肥对石斛生物量的作用并
不显著。
3小绪
通过杯鞘石斛组培苗接种细菌菌肥和菌根真菌
的盆栽和小区试验，可以发现兰科菌根真菌Dr5的
接种效果最好，对入药部分茎的生长有显著促进作
用，年产量明显高于对照和其他接种处理。另外，施
用细菌菌肥的短期效果比较明显，能在一定程度上
增加石斛组培苗的株高和茎粗。
References：
[1]ZhangzG，LiuH，WangL，eta1．Studsoilculturecondi—
tionforproliferationofDe drobiumcandidumprotocorm
[J]．c6抽TradilHerbDrags(中草药)，1992，23(8)；431
433．
[23FanL．GuoSx，CaoW0，以a1．Isolation，culture，idemi—
tieationandbiologicalactivityofM cenaorchldicolasp．Nov．
inCymbidiums nense(Orchidaceae)[J]ActaMycolSin(真
菌学报)，1996．i5(4)·251—255．
Is]GuoSx，CaoWq，c帅H．Isolationndbiologicalactivi—
tyofmycorrhizalfungifromDendrobiumcandidumandA
nNnle口]．ChinaJChinMaterIVied(ep国中药杂志)t2000，
25(6)：338—340．
[43FuKC．FengDQ，ZhangSYteta1．Studiesofthighpro-
ductiontechnologyinscalecultivationofDe drobiumofflcl-
hale[J]．c胁”TraditHerbDrugs(中草药)．2003t34(4)：
】77一】79．
HPLC—ELSD法测定黄苠药材中黄芪甲苷
徐希科，李慧梁，柳润辉，苏娟，张川，周 耘，张卫东+
(第二军医大学药学院，上海200433)
黄芪为常用补气药，是我国重要的传统药材。
《中国药典》规定，药用黄芪为豆科植物蒙古黄芪
Astragalusmembranaceus(Fisch．)Bungevar．
nongholicus(Bunge)Hsiao及膜荚黄芪A．mem—
branaceus(Fisch．)Bunge的干燥根。黄芪中含有多
种化学成分，如皂苷类、黄酮类、术脂素类、氨基酸
类、多糖类及多种微量元素等“]。研究表明黄芪甲昔
具有降血压、镇静、镇痛及抗氧化等作用o“]，是黄
芪的主要活性成分，因此黄芪甲昔常作为指标性成
分应用于 药材的质量监控。我国黄芪药用资源
丰富，在华北大部分省区均有大面积种植。本实验采
用HPLC—ELSD法对全国5个省共10个产地的人
鉴銎冒昌：酱蠡!等誉．项目(2003AA223507)；上海市科技发展基金攻关项目(02Dzl。147，03Dzl9503，04Dzl9843—3，04Dzl9856
。通讯作者04：；}要饕7)T。l，(021)25070386E—m。il：啊d小。。gy@hotmil．com
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 721·
工种植黄芪药材中的黄芪甲苷进行测定。
1仪器与试药
岛津LC一10AT型输液泵j法国sEDEx55型
蒸发光散射检测器(EI，SD)；美国HP3395型积分
仪。AB一8型大孔吸附树脂为天津南开大学化工厂
生产。
乙腈为色谱纯：水为重蒸馏水；甲醇为分析纯；
乙醇为化学纯{黄芪甲苷对照品(供测定用)由中国
药品生物制品检定所提供，批号为0781—200010。
根据药材不同来源，将其依次编为1～10号，原
植物由第二军医大学生药学教研室张汉明教授鉴定
为蒙古黄芪A．membranaceus(Fisch．)Bge．vat．
mongholicus(Bge．)Hsiao及膜荚黄芪A．mem—
branaceus(Fisch．)Bge．。供试品来源详见表1。
衰1供试晶来漂
Table1 Sourceoftestedsampie
2方法与结果
2．1色谱条件：DiamonsilC18(250mm×4．6mm，
5pm)色谱柱：流动相乙腈一水(36：64)；体积流量：
0．8mL／min；进样量20“L，检测器漂移管温度为
35℃，载气压力为2．0×105Pa，柱温为(25士1)℃。
2。2对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品约
100mg，用甲醇配成2mg／mI。的溶液，作为储备液。
2．3供试品溶液的制备：取本品粗粉约2．0g，精密
称定，置圆底烧瓶中，加甲醇40mL，冷浸过夜，再加
甲醇适量，回流4h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残
渣加水10mL，微热使溶解，放冷。通过AB-8型大孔
吸附树脂柱(内径1．5cm，长12cm)，以水50mL洗
脱，弃去水液，再用40％乙醇30mL洗脱，弃去40％
乙醇洗脱液，继用70％乙醇50mL洗脱，收集洗脱
液，蒸干，残渣用甲酵定容至2mL，用0．45pm微孔
滤膜滤过，续滤液为供试液。其色谱图见图1。
2．4线性范围考察：分别精密吸取上述对照品溶液
10．0、7．5、5．0、2．5、1．25mL置10mL量瓶中，加
甲醇定容至刻度，摇匀，进样20止，以进样量的自
然对数值为横坐标(x)，峰面积的自然对数值为纵
f／rain
田1对照品(A)殛样品(B)的HPLC色谱嗣
Fig．1HPLCehromatogramsfreference
substance(A)andsample(B)
坐标(y)，回归方程为：y；1．345x+11．284，r一
0．9997(一5)。黄芪甲苷在5～40btg呈良好的线
性关系。
2．5精密度试验：精密吸取供试品溶液，重复进样
8次，结果所得黄苠甲苷峰面积的RSD为1．68％。
2．6稳定性试验；取供试品溶液分别在0、2、4、8、
12、24h测定，峰面积的RSD为1．52％，表明黄芪
甲苷在24h内基本稳定。
2．7重现性试验：精密称取黄芪样品共7份，按
2．3项制成供试液。结果黄芪甲苷平均质量分数为
0．475％，RSD为1．17％。
2．8加样回收试验：采用加样回收法，精密称取已
知黄芪甲苷量的黄苠样品约1g，分别精密加入1．0
mg／mL黄芪甲苷对照品溶液(o．4、0．4、0．4、0．5、
0．5、0．5、0．6、0．6、0．6mL)，按2．3项方法制成2
mL供试品溶液，按2．9项下方法测定、计算，求得
黄芪药材中黄芪甲苷的平均回收率为98．56％，
RSD为1．42％h一9)。
2．9 测定方法：分别精密吸取对照品溶液lo、20
皿及供试品溶液20止，注入液相色谱仪中，将峰
面积及对照品进样量均取自然对数后采用外标两点
法进行计算，求出供试品的质量分数。测定了10批
样品，结果见表2。
囊2不局产地黄苠药材中黄黄甲苷白筝3)
Table2 Determinationof stragalosldeIVinRad／x
Astragalifromdifferenthabitats抽=3)
万方数据
·1722· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
3讨论
目前黄芪甲苷的测定主要采用薄层扫描法，如
2000年版《中国药典》收载黄芪药材中黄芪甲苷的
测定方法即为TLCS法，但其操作繁琐，重现性差。
黄芪甲苷最大紫外吸收波长k。一200．8nm，为末
端吸收，不适于应用紫外吸收检测器测定。蒸发光散
射检测器(El，SD)作为HPLC法的一种检测器，对
无紫外吸收的物质较为适用，因此，参照高效液相色
谱法(《中国药典》2000年版一酃附录ⅥD)，经对比
文献报道的黄芪甲苷测定方法，并经过反复优化，建
立了黄芪甲苷的高教液相一蒸发光散射法测定方法。
经过对线性范围、精密度、供试品溶液稳定性、重现
性、回收率等方法学考察，证明本方法操作简便、准
确可行。
Refel旭nces=
r1]EditorialBoardofChinaHerbal，StateAdministrafionof
TraditionaIChineseMediclne．China．ChinaHerbal(中华本
草)[M]ShanghaiShanghaiScientificandTechnicalPub-
fIshers．1999．
[2]LuoYMtQinz，Hongz，Ⅳa1．Astragaloside”protects
againsti chemicbrainjuryinamurinemodeloftransient
focalischemiaEJ]．Neuroscik“，2004，363：218—223．
D]ZhangYD，WangYI，，ShenJP，eta1．Anti—inflammatioa
andecompressionactivityfastragalosldew[J]．Ac旭
PierreSin(药学学报)。1984，1(5)：33337．
[43ZhangYD，WangYi。．ShenJP，eta1．Analgesiaandeda-
tlonactivityofastragalosldeⅣ口]．JNanfijtgMedUniv
(南京医学院学报)，1984，4(4)：225—227．
HPLC法测定草木犀中香豆素
张兴福1，薛艳2，张铁军2，袁丹1
(1．沈阳药科太学中药学院，辽宁沈阳110016}2．天津药物研究院，天津300193)
草木犀为赢科(Leguminosae)草木犀属
(MelilotusMill．)一年或两年生草本植物，该属植物
全世界约有zo种，其中黄香革术犀M．officinalls
(L．)Desr．主要分布于温带、亚热带、欧亚大陆及
地中海地区，是家畜重要的优质牧草之一，同时民间
以叶、花制成软膏，用作外伤药；或煎服用于治疗浮
肿、腹痛、疟疾等症o]。具有止咳平喘、清热解毒、解
痉止痛、化湿和中的功效o]。我国《部颁标准》、《藏药
标准》和《上海市药材标准》有所收载。草木犀中主要
有效成分为香豆素(coumarin)，目前该成分的定量
分析方法主要为紫外分光光度法，薄层扫描法和高
效液相色谱法口]。以高效液相色谱法最为简便、快
速、准确。因此，本试验建立了一种快速、简便、准确
的HPLC测定方法，并对不同产地、采收时期及草
木犀不同部位中的香豆素进行了测定，对控制草木
犀的质量、合理的采收期和资源利用具有理论意义
和实用价值。
1材料与仪器
1．1材料：草木犀分别采自江苏(苗期、成熟期)、天
津(军粮城、蓟县、汉沽)、南戴河、内蒙古、青海，经天
津药物研究院张铁军研究员鉴定为黄香草木犀M．
officinalis(L．)Desr．和白花草木犀M．albus
Desr．。香豆素对照品由Sigma公司提供，质景分数
收藕ra期：2005一01—27
为99％。乙腈为色谱纯，购白天津市康科德科技有
限公司，水为去离子水，用时均过微孔滤膜，其他试
剂为分析纯。
1．2仪器：高教液相色谱仪：DIONEX液相系统，
变色龙色谱工作站；分析柱：天河一C，。(250mm×
4．6mm，10pm)。
2方法及测定结果
2．1 色谱条件：色谱柱为天河一C¨(250mm×4．6
mm，10pm)；流动相：乙腈一水一冰醋酸(20I 80：1)；
体积流量为1．0mL／min；检测波长为273nm，柱温
为室温；进样量20pL。按外标法测定。色谱图见图1。
I 8
n ～ JL
0 0 10．0 ：o 0 30．0o彳一’l百r—1i可一。丽0
t／rain
图1香豆索对照品(A)殛样品(B)色谱图
Fig．1Chromatogramsfcou arinreference
substance(A)andsamples(B)
2．2对照品溶液的制备：精密称取香豆素对照品
3．22mg，于100mL量瓶中，加甲醇至刻度．摇匀，
作为储备液，精密吸取2mL，于10mL量瓶中，加
万方数据
HPLC-ELSD法测定黄芪药材中黄芪甲苷
作者： 徐希科， 李慧梁， 柳润辉， 苏娟， 张川， 周耘， 张卫东
作者单位： 第二军医大学药学院,上海,200433
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 10次

参考文献(4条)
1.中华本草 1999
2.Luo Y M;Qin Z;Hong Z Astragaloside Ⅳ protects against ischemic brain injury in a murine model of
transient focal ischemia[外文期刊] 2004
3.Zhang Y D;Wang Y L;Shen J P Anti-inflammation and decompression activity of astragaloside Ⅳ
1984(05)
4.Zhang Y D;Wang Y L;Shen J P Analgesia and sedation activity of astragaloside Ⅳ 1984(04)

本文读者也读过(9条)
1. 高文霞.姚日生.张霄翔.GAO Wen-xia.YAO Ri-sheng.ZHANG Xiao-xiang 右旋糖苷-阿司匹林高分子挂接药物的
体外释放[期刊论文]-合肥工业大学学报(自然科学版)2005,28(3)
2. 石君辉.豆海港.SHI Jun-hui.DOU Hai-gang 气相色谱-质谱法鉴定白胡椒的抗氧化成分[期刊论文]-中国调味品
2010,35(4)
3. 丘明明 HPLC-ELSD测定止血灵胶囊中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-中成药2008,30(8)
4. 姜勇.金芳.鲍忠.石子仪.屠鹏飞 不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析[期刊论文]-中国中药杂志
2006,31(11)
5. 史磊.李永吉.孙凌.孙爽.郭玉岩 高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定苦瓜降糖丸中黄芪甲苷的含量[期刊论文
]-中国中医药信息杂志2010,17(10)
6. 万红贵.朱庆平.蔡恒.蔡立明.宁健飞.陆彬.Wan Honggui.Zhu Qingping.Cai Heng.Cai Liming.Ning Jianfei.
Lu Bin HPLC-ELSD法定量测定发酵液中的L-异亮氨酸[期刊论文]-食品与发酵工业2007,33(3)
7. 叶慧.YE Hui HPLC-ELSD法测定发酵液中L-鸟氨酸的含量[期刊论文]-氨基酸和生物资源2007,29(1)
8. 赵文.黄亚东.张爱丰.白卫宾.ZHAO Wen.HUANG Ya-dong.ZHANG Ai-feng.BAI Wei-bin 新疆黄芪抗氧化活性研究
及保健作用评价[期刊论文]-食品研究与开发2007,28(1)
9. 魏朝良 黄芪抗氧化活性研究及化学成分的分离[学位论文]2004

引证文献(10条)
1.杜志谦.夏华玲.袁秀荣.冯怡 膝悦颗粒的定性定量方法[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2010(8)
2.冯欣煜 高效液相色谱法测定胃康胶囊中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-中国药物与临床 2013(2)
3.窦玉红.崔力剑.黄芸.李清 贞灵固本片中黄芪甲苷的固相萃取-高效液相色谱-蒸发光散射测定[期刊论文]-时珍
国医国药 2009(12)
4.田振坤.顾媛媛.王建明 高效液相色谱——蒸发光散射法测定肾炎灵胶囊中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-中医药学
报 2008(3)
5.马淑杰 高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-时珍国医国药 2007(1)
6.付金凤 HPLC-ELSD法测定龙丹通络胶囊中黄芪甲苷的含量[期刊论文]-黑龙江医药 2013(3)
7.段静雨.李岩.么焕开.孙远峰.李典.魏群利 黄芪中黄芪甲苷的提取工艺优化[期刊论文]-安徽农业科学 2011(22)
8.陈有根.辛敏通.杨滨.郭洪祝 黄芪药材中黄芪甲苷含量测定方法的改进[期刊论文]-中国新药杂志 2008(21)
9.郭青.宁青 益气止血颗粒质量标准研究[期刊论文]-中成药 2008(3)
10.刘浩文.刘嘉仪.杨妙荣.陈建萍.王冬梅 黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究[期刊论文]-中药
新药与临床药理 2011(6)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200511049.aspx