全 文 ：相对响应系数法辅助测定中药多成分含量的研究
李 铮１，王 旭２，邬国庆１，张小茜１，方 颖１
（１．北京市药品检验所，北京 １０００３５；
２．国家药典委员会，北京 １０００６１）
［摘要］ 目的：建立采用系数计算通过一个对照品，计算出多个成分的含量的方法，以全面控制药品质量。方
法：基于ＬａｍｂｅｒｔＢｅｅｒ定律，用高效液相色谱法测定峰面积，折算出２个成分的计算系数。结果：测得了４组成分的
系数，并进行了验证，结果较满意。结论：该方法在一定范围内可行。
［关键词］ 系数计算；ＨＰＬＣ；折算
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１７２０９７０３
［收稿日期］ ２００８０３０６
［基金项目］ 国家中医药管理局中医药科学技术研究专项课
题（０４０５ＺＰ０６）
［通讯作者］ 李铮，Ｔｅｌ：（０１０）６６１２４４１４，Ｅｍａｉｌ：ｍｕｚｉｚｈｅｎｇ１１
＠２６３．ｎｅｔ
中药以多成分、疗效好而被广泛应用，也因为含
有多个成分，不宜以单一成分为指标来控制质量。
目前很多成熟的ＨＰＬＣ色谱条件和前处理方法已可
在一张色谱图中分离出多个色谱峰，且重现性好，但
苦于没有对照品，只能分析出其中一个或几个成分，
而即使明确全部成分，制备每个对照品并对每个色
谱峰都进行定量测定也是一项繁重的工作。作者根
据物质在一定波长下的紫外吸收系数一定的 Ｌａｍ
ｂｅｒｔＢｅｅｒ定律，采用在相同溶剂的条件下，测定并计
算出待测成分与已知对照品的吸收系数比，在仅有
一个对照品的情况下，计算出其他成分的含量。
１ 方法设想（以２个成分为例）
１．１ 用紫外可见分光光度计测系数
设成分１浓度为ｃ１，成分２浓度为ｃ２，同一测定
波长下吸光度为Ａ１，Ａ２，摩尔质量为 Ｍ１，Ｍ２，则根据
公式［１］Ｅ％１ＣＭ＝Ａ／ＣＬ，ε＝Ｍ／１０×Ｅ
１％
１ＣＭ，可以分别求出
２个成分的摩尔吸收系数，将２个成分摩尔吸收系
数的比值定义为要求得的系数ｆ。
１．２ 用高效液相色谱法测系数
设成分１浓度为ｃ１，成分２浓度为ｃ２，同一色谱
条件下测得的峰面积分别为Ａ１，Ａ２，用Ａ／ｃ求出响应
因子，将２个成分响应因子之比定义为要求得的系
数ｆ。
１．３ 运用系数ｆ计算结果
成分２的测定结果为用成分１对照品的浓度ｃ１
和峰面积Ａ１来进行计算，结果再除以系数ｆ而得。
１．４ 通过比较计算结果与实际测定结果，验证系数
将成分２用系数法求得的结果与对照品法求得
的结果进行比较，用相对测定值的偏差来评定。
２ 试验工作
以厚朴酚与和厚朴酚为例说明，系数 ｆ（和厚朴
酚／厚朴酚），以下简称ｆ。
２．１ 用紫外可见分光光度计进行测定
平行精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品３份，
稀释成不同的浓度比例，在５台仪器上测定吸收度，
分别计算出厚朴酚与和厚朴酚的摩尔吸收系数，用
和厚朴酚／厚朴酚得到系数ｆ。
２．１．１ 仪器与试药 紫外可见分光光度计，编号
ａ０１００３３， ｂ０４００９１， ｃ０２００７９， ｄ９８０１５４，
ｅ９６００２６。
厚朴 酚 （０７２９２００１０７）、和 厚 朴 酚 （０７３０
２００２０６）对照品由中国药品生物制品检定所提供；
厚朴酚对照品质量浓度分别为００１０６７，００１０２２，
００１０１０ｇ·Ｌ－１；和厚朴酚对照品质量浓度分别为
００１０５６，００１０１３，０００９８８ｇ·Ｌ－１。两两配对成
对照品组１～３。
２．１．２ 不同仪器和不同浓度比例 ｆ的考察情况
结果见表１。
２．１．３ 不同浓度考察 选用仪器ａ试验，按表２比
例，对３个对照品组进行配制。
２．２ 用高效液相色谱仪进行测定
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第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
表１ 不同仪器考察结果
色谱柱 １ ２ ３ ｆ ＲＳＤ／％
ａ １２５７ １２６０ １１８１ １２３３ １３
ｂ １２５３ １２４６ １１８４ １２２８
ｃ １２８３ １２５９ １２０９ １２５０
ｄ １２９４ １２４７ １１９９ １２４７
ｅ １３１３ １２８４ １２０９ １２６９
表２ 不同浓度比例考察结果
浓度比例（和／厚） ① ② ③ ｆ ＲＳＤ／％
１∶０８ １２８８ １２５１ １２０８ １２４９ ０８
１∶１ １２５７ １２６０ １１８１ １２３３
１∶１２ １２８５ １２７１ １１９４ １２５０
平行精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品３份，
照选定的色谱条件用３根色谱柱在３台不同型号的
高效液相色谱仪上进行测定。对２份对照品在不同
色谱柱、不同仪器及不同浓度情况化下的 ｆ进行考
察。
２．２．１ ＨＰＬＣ色谱条件 仪器 Ａ岛津 ＬＣ－
１０ＡＶＰ，Ｂ岛津ＬＣ－２０ＡＴ，ＣＨＰ１１００；色谱柱均为
Ｃ１８柱，①ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＯＤＳ（４６ｍｍ×１５ｃｍ），②
ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ（４６ｍｍ×１５ｃｍ），③Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘｌｕ
ｎａ（４６ｍｍ×２５ｃｍ）；流动相甲醇水（７８∶２２）；检
测波长２９４ｎｍ。
厚朴酚对照品分别为００２０３６，００２４７０，００１
９９６ｇ·Ｌ－１；和厚朴酚对照品分别为 ００１９９０，
００２７９４，００２２１６ｇ·Ｌ－１，两两配对成为对照品组
①，对照品组②，对照品组③。
２．２．２ 不同色谱柱考察情况 选用仪器 Ａ进行试
验，结果见表３。
表３ 不同色谱柱考察（ｎ＝２）
色谱柱 １ ２ ３ ｆ ＲＳＤ／％
① １１６２ １１１７ １０２４ １１０１ ３０
② １１３７ １１２７ １０３７ １１００
③ １０７５ １０６８ ０９９２ １０４５
２．２．３ 不同高效液相色谱仪考察情况 选用柱②
进行试验，结果见表４。
表４ 不同ＨＰＬＣ色谱仪考察
仪器 １ ２ ３ ｆ ＲＳＤ／％
Ａ １０８６ １０６９ ０９８６ １０４７ ２５
Ｂ １１１８ ０９９８ １１２２ １０７９
Ｃ １１３７ １１２７ １０３７ １１００
２．２．４ 不同浓度考察情况 选用仪器Ａ，柱②进行
试验，结果见表５。
２．３ 实验验证
表５ 不同浓度比例考察
浓度比例（厚／和） １ ３ ｆ ＲＳＤ／％
１：０２ １１９２ １１７５ １１８３ ２０
１：０４ １１８３ １１０３ １１４３
１：０６ １１７６ １０８８ １１３２
１：０８ １１７５ １０７３ １１２４
１：１０ １１７０ １０６６ １１１８
１：１２ １１７７ １０６１ １１１９
１：１４ １１７４ １０６７ １１２１
１：１６ １１６４ １０６５ １１１５
１：１８ １１６３ １０６０ １１１２
１：２０ １１６２ １０５９ １１１０
取藿香正气软胶囊（批号２９２００４６），按标准［２］
进行测定，得到厚朴酚与和厚朴酚的峰面积，得到厚
朴酚与和厚朴酚的含量，再分别通过前面测得的系
数ｆ折算出和厚朴酚的含量，结果见表６。
表６ 藿香正气软胶囊中和厚朴酚含量测定结果与
计算结果比较情况
方法
测定结果
／ｍｇ·ｇ－１
ｆ
折算结果
／ｍｇ·ｇ－１
相对测定值的偏差
／％
紫外 ２２６ １２５１ ２０４ ９７
液相 ２２６ １０８２ ２３５ ４０
由表可见：紫外可见分光光度计测得的系数误
差较大，分析认为其一分光光度计准确度与稳定性
不如高效液相色谱仪；其二液相测得的系数用于液
相的计算，可以消除系统误差。综合考虑，选用高效
液相色谱仪进行系数的测定。
２．４ 前期报告验证的情况
将确定的方法应用于测得结果的厚朴药材和藿
香正气水中，和厚朴酚含量测定结果与用系数计算
结果比较，部分见表７。
表７ 厚朴药材及藿香正气水测定结果与计算结果比较
样品 检号
测定结果
平均值
计算结果
平均值
相对测定值的偏差
／％
厚朴 Ｇ４０９５９ ０３１９５ ０３３３２ ４３
药材 Ｇ４０８２９ ００４６７ ００４８８ ４５
Ｇ４０６５２ １１３７４ １２０１７ ５７
Ｇ４１３３３ ０６３０９ ０７０６２ １１９
Ｇ４１６４８ ０８９９１ ０９９４８ １０６
Ｇ４２０３１ ０７７９２ ０７８５８ ０８
藿香 Ｇ３３７２３ ４４５６ ４５８０ ２８
正气水 Ｇ３３３７６ ３３９５ ３５７２ ５２
Ｇ３３１１５ ４０３６ ４３６９ ８３
Ｇ３２７８６ ４８４８ ５１５７ ６４
Ｇ３２６５３ ３００６ ３１０７ ３４
Ｇ３２４１９ ２４９６ ２６３０ ５４
以上选择的样品，包括了不同厂家，不同试验人
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员，不同仪器和不同色谱柱的情况，不同检品间偏差
的差异较大，与上述因素可能引入的误差应该都有
关系，但这样更能比较全面的反映出系数计算法在
实际应用中的情况。
２．５ 其他系数测定结果
选取了大黄素与大黄酚、槲皮素与山柰素、升麻
苷与５Ｏ甲基维斯阿米醇苷３组成分，按上述方法
进行了系数的测定，并进行了验证。结果３组的 ｆ
分别为１３０６，１０１５，１０２３，相对测定值的偏差范
围分别为０２％～９％，１％～４％，６％～１０％。
３ 结论
测定折算得到４组成分的计算系数，并进行了
实验验证和带入以前测定报告的验证工作，结果较
满意，认为方法基本可行。
４ 分析与讨论
上述方法计算结果与测定值的偏差多在１０％
左右，在企业品种相对单一，实验条件、人员相对稳
定，对结果有一定预期的情况下，结果应较为理想。
由于中药对照品提取分离困难，且大部分从植物中
提取，致使对照品价格昂贵，对于某些生产单一品
种的药厂来讲，每次都配制新的对照品，确实是一
笔不小的花费。采用该方法可望仅在样品含量在
限度附近的样品使用对照品比较法，高于或低于限
度２０％以上时使用计算法，以节省部分对照品的
花费；同时将减少对照品制备的工作量，也将降低
各种自然资源的消耗和减少由于提取对照品所产
生的废弃化学物品的污染，将产生良好的经济和社
会效益。
由于其理论是成熟的，方法简单，建立方法后，
很多单位均可自行进行系数测定，用于日常检验工
作或委托有关部门测定系数，逐步完善数据库，在色
谱峰分离完全的基础上，建立大批的液相系数测定
的药品标准，作为现行标准的补充，以提高中药研究
的整体水平。尽管本方法与在化学药杂质检查中响
应因子测定的方法有相同之处，但此法目的主要用
于控制多个有效成分，使之应用于中药整体质量控
制上。
计算法在中药研究中由于受到杂质干扰和不明
误差的引进，经常不被推荐使用，本方法旨在建立一
种模糊计算的方法。
［参考文献］
［１］ 孙毓庆．分析化学．下册［Ｍ］．４版．北京：人民卫生出版社，
２０００：４０．
［２］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：６６２．
ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ
ｂｙｍｏｄｕｌｅｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ
ＬＩＺｈｅｎｇ１，ＷＡＮＧＸｕ２，ＷＵＧｕｏｑｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧＸｉａｏｑｉａｎ１，ＦａｎｇＹｉｎｇ１
（１．ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａＣｏｍｍｉｔｅｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００６１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｂｙ
ｍｏｄｕｌｅｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｎｖｉｅｗｏｆｔｈｅｌａｗｏｆｌａｍｂｅｒｔｂｅｅｒ，ｔｈｅｍｏｄｕｌｕｅｏｆｔｗｏｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｗａｓｃｏｎｖｅｒｔｅｄｏｎｂａｓｉｓｏｆｐｅａｋａｒｅａ
ｂｙＨＰＬＣ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｏｄｕｌｕｅｓｏｆｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｇｏｔｅｎａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｖａｌｉｄａｔｉｏｎｗｅｒｅｗｅｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｆｅａｓｉ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍｏｄｕｌｅｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ；ｃｏｎｖｅｒｔ；ＨＰＬＣ
［责任编辑 鲍 雷］
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