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Studies on constituents of Dendrobium gratiosissimum

杯鞘石斛化学成分研究



全 文 :杯鞘石斛化学成分研究
王 敏,张朝凤,王峥涛,张 勉
(中国药科大学 生药学研究室,江苏 南京 210038)
[摘要] 目的:对杯鞘石斛Dendrobiumgratiosisimum的化学成分进行研究。方法:采用工业乙醇冷浸提取,硅
胶,SephadexLH-20,ODS反相柱色谱等方法进行分离,根椐理化常数和光谱数据鉴定结构。结果:从杯鞘石斛中
共分离得到9个化合物,分别为:3,5,4′三羟基联苄(1),3,4′二羟基5甲氧基联苄(2),3,4二羟基4′,5二甲氧
基联苄(3),芹菜素(4),对羟基苯甲醛(5),对羟基反式肉桂酸三十烷基酯(6),反式阿魏酸二十八烷基酯(7),β谷
甾醇(8)和胡萝卜苷(9)。结论:以上化合物均为首次从该种植物中得到,化合物2,4和5为属内首次分离得到。
[关键词] 兰科;杯鞘石斛;化学成分
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)08070103
[收稿日期] 20060420
[通讯作者] 张朝凤,Tel:(025)85391245,Fax:(025)8530
9639,Email:chaofengZhang@hotmail.com
  石斛为名贵药材,药用历史悠久,具有滋阴清
热、生津益胃、润肺止咳等功能。杯鞘石斛 Den
drobiumgratiosisimumRchb.f为兰科石斛属植物,
为中药石斛的来源之一。为了深入研究石斛药材的
药用基础,阐明其有效成分,作者对杯鞘石斛醋酸乙
酯萃取部位的化学成分进行了研究,共分离鉴定9
个化合物:3,5,4′三羟基联苄(1),3,4′二羟基5
甲氧基联苄(2),3,4二羟基4′,5二甲氧基联苄
(3),芹菜素(4),对羟基苯甲醛(5),对羟基反式肉
桂酸三十烷基酯(6),反式阿魏酸二十八烷基酯
(7),β谷甾醇(8),胡萝卜苷(9)。以上化合物均为
首次从该种植物中分离得到,化合物2,4和5为首
次从石斛属内分离得到。
1 仪器与材料
Kofle微量熔点测定仪(温度未校正);Bruker
ACF300和500MHz核磁共振仪,TMS为内标;Agi
lent1100seriesLC-MSDTrap质谱仪。柱色谱用
硅胶及高效薄层硅胶板均为青岛海洋化工厂出品。
SephadexLH-20为Pharmacis公司生产。化学试剂
为分析纯。
杯鞘石斛药材采自云南勐连,经本室徐珞珊教
授鉴定为杯鞘石斛D.gratiosisimum,凭证标本存放
于中国药科大学生药研究室(标本号BQ200405)。
2 提取分离
杯鞘石斛新鲜茎50kg,切碎,干燥,用工业乙醇
冷浸提取3次,减压回收乙醇,得浸膏,加水混悬,依
次用醋酸乙酯和正丁醇萃取,回收溶剂得醋酸乙酯
提取物(A)260g。浸膏(A)260g经过反复硅胶柱
色谱(以石油醚

醋酸乙酯、石油醚

丙酮、氯仿

甲醇梯度洗脱),重结晶,SephadexLH-20,ODS反
相柱色谱等手段分离纯化得到化合物1~9。
3 结构鉴定
化合物1 红色片状晶体(氯仿丙酮),薄层色
谱紫外灯254nm下显暗斑,365nm下显蓝紫色荧
光,10%硫酸乙醇溶液显鲜红色。mp185~186℃,
ESIMSm/z:229[M-H]-。1HNMR(Acetoned6,
500MHz)示联苄类化合物的aa′位的质子特征信号
为275(4H,m);677(2H,d,J=65Hz),710
(2H,d,J=65Hz)为苯环上邻位偶合的质子信号;
631(2H,d,J=21Hz),618(1H,t,J=21Hz)为
间位偶合的质子信号;13CNMR(Acetoned6,125
MHz)δ:367(aC),382(a′C),1006(C4),1078
(C2,6),1154(C3′,5′),1296(C2′,6′),1336
(C1′),1450(C1),1546(C4′),1576(C3,5)。
以上数据与文献[1]一致,确定为3,5,4′三羟基联
苄(3,5,4′trihydroxybibenzyl)。
化合物2 无色针状晶体(氯仿醋酸乙酯),薄
层色谱紫外灯254nm下显暗斑,365nm下显红色
荧光,10%硫酸乙醇溶液显鲜红色。1HNMR(Ace
toned6,300MHz)示联苄类化合物的 aa′位的质子
特征信号为275(4H,m);677(2H,d,J=84Hz),
710(2H,d,J=84Hz)为苯环上邻位偶合的质子
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第32卷第8期
2007年4月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 8
April,2007
信号;627(2H,dd,J=22Hz),为苯环上间位偶合
的质子信号;370(3H,s)为甲氧基上质子信号;
795(1H,s),812(1H,s)羟基上质子信号;故推测
该化合物为具有3个取代基的联苄类化合物。ESI
MSm/z:243[M-H]-。结合 HMBC对其13CNMR
(Acetoned6,75MHz)进行归属 δ:1452(C1),
1082(C2),1595(C3),989(C4),1614(C5),
1067(C6),1338(C1′),1294(C2′,6′),1151
(C3′,5′),1542(C4′),381(a′CH2),366(a
CH2),552(OMe);以上数据与文献[2,3]一致,
确定为3,4′二羟基5甲氧基联苄(3,4′dihydroxy
5methoxybibenzyl)。
化合物3 淡黄色油状物(氯仿丙酮),薄层色
谱紫外灯254nm下显暗斑,10%硫酸乙醇溶液显紫
红色。ESIMSm/z:274[M-H]-;1HNMR(Ace
toned6,500MHz)δ:279(4H,m)为典型的苄基质
子信号;644(1H,d,J=16Hz),622(1H,d,J=
16Hz)为苯环上间位偶合的质子信号;706(2H,
d,J=85Hz),680(2H,d,J=85Hz)为苯环上邻
位偶合的质子信号,而且是对称结构;373(6H,s,
OCH3)为2个甲氧基信号。根据以上数据并与文
献[4]对照,确定为3,4二羟基4′,5二甲氧基联苄
(3,4dihydroxy4′,5dimethoxybibenzyl)。
化合物4 橙黄色粉末(甲醇),盐酸镁粉反应
阳性,ZroCl2反应阳性,加入诊断试剂,呈典型的5,7,
4′三羟基取代黄酮类结构;EIMSm/z:269[M]+。1H
NMR(Acetoned6,500Hz)δ:1295(1H,s,C5OH),
950(1H,s,C7OH),915(1H,s,C4′OH),798(2H,
d,J=87Hz,C2′,6′H),700(2H,d,J=87Hz,C3′,5′
H),660(1H,s,C3H),650(1H,d,J=19Hz,C8
H),625(1H,d,J=19Hz,C6H),根据以上数据并
与文献[5]对照,确定为芹菜素。
化合物5 淡黄色细针状结晶(石油醚醋酸乙
酯),mp137~138℃,EIMSm/z:121[M]+。1H
NMR(Acetoned6,500Hz)δ:985(1H,s),935
(1H,s),780(2H,dd,J=87,24Hz),700(2H,
dd,J=87,24Hz)。根据以上数据与文献[6]对
照,确定为对羟基苯甲醛。
化合物6 白色粉末(石油醚醋酸乙酯),mp
75~77℃。1HNMR(CDCl3,500Hz)δ:762(1H,d,
J=159Hz,βH),630(1H,d,J=159Hz,αH),
742(2H,d,J=88Hz,2,6H),684(2H,d,J=88
Hz,3,5H),418(2H,t,J=66Hz,OCH2),088
(3H,t,J=69Hz,CH3)。EIMSm/z:584[M]
+(9),
438(5),420(3)。根据以上数据并结合文献[7],推
断为对羟基反式肉桂酸三十烷基酯(defusine)。
化合物7 白色粉末(石油醚醋酸乙酯),mp
70~72℃。1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:761(1H,d,
J=159Hz,),707(1H,dd,J=82,18Hz),703
(1H,d,J=18Hz),691(1H,d,J=82Hz),626
(1H,d,J=159Hz),590(1H,s),419(2H,t,J=66
Hz),392(3H,s),168(2H,m),125(50H,br),088
(3H,t,J=64Hz);EIMSm/z:586[M]+,194(100)。
根据以上数据与文献[8]对照,确定为反式阿魏酸二
十八烷基酯(noctacostylferulate)。
化合物8 无色细针状结晶(石油醚醋酸乙
酯),mp137~138℃,10%浓硫酸乙醇液显色为紫
红色,与β谷甾醇交叉点样共薄层,Rf值基本一致,
混合熔点不下降,确定为β谷甾醇。
化合物9 白色粉末(氯仿甲醇),mp290~292
℃,10%浓硫酸乙醇液显色为紫红色。Liebermann
Burchard和Molish反应均为阳性。其1H和13CNMR
数据和文献[9]报道的一致,确定为胡萝卜苷。
[参考文献]
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    中 国 中 药 杂 志
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April,2007
StudiesonconstituentsofDendrobiumgratiosissimum
WANGMin,ZHANGChaofeng,WANGZhengtao,ZHANGMian
(DepartmentofPharmacognosy,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsofDendrobiumgratiosisimum.Method:Theconstituentswereiso
latedandpurifiedbysilicagel,SephadexLH-20columchromatography,andthestructureswereidentifiedbyphysicochemicalprop
ertiesandspectraldata.Result:Ninecompoundswereobtainedas:3,5,4′trihydroxybibenzyl(1),3,4′dihydroxy5methoxy
bibenzyl(2),3,4-dihydroxy4′,5dimethoxybibenzyl(3),apigenin(4),phydroxybenzaldehyde(5),defuscin(6),noctaco
stylferulate(7),βsitosterol(8)anddaucosterol(9).Conclusion:Althesecompoundswereobtainedfromthisplantforthefirst
time,andcompounds2,4and5wereisolatedfirstlyfromthisgenus.
[Keywords] Orchidaceae;Dendrobiumgratiosisimum;chemicalcomponents
[责任编辑 戴 畅]
HPLCECD检测猕猴血清中单胺类递质
李 芳,张惠云
(山东中医药大学,山东 济南 250014)
[摘要] 目的:通过应用HPLCECD分离测定猕猴血清中单胺类递质,验证其与经前期综合征(PMS)肝气逆证
的内在关系,筛选科学有效的检测方法。方法:采用ZORBA×SBC18色谱柱(46mm×250mm,5μm),流动相:乙酸钠
100mmol·L-1,柠檬酸85mmol·L-1,正二丁胺04mmol·L-1,辛烷基磺酸钠15mmol·L-1,乙二胺四乙酸(ED
TA)02mmol·L-1,甲醇18%,抽滤。流速09mL·min-1,量程1μA。结果:猕猴血清中去甲肾上腺素(NE),肾上
腺素(E),多巴胺(DA)和5羟色胺(5HT)回收率依次为970%,978%,995%,1003%,RSD022%~093%,重复
性较好。结论:该方法操作简便、快速、准确,是检测猕猴血清中单胺类递质检测的一种理想方法。
[关键词] 高效液相色谱法;电化学检测;单胺类递质;血清
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)08070303
[收稿日期] 20060209
[基金项目] 国家自然科学基金资助项目(30572291)
[通讯作者] 张惠云,Tel:053182962849,Email:zhhuiyun@
163.com
  经前期综合征(PMS)肝气逆证为临床常见证候并
为医学界所广泛关注,但其发病机理不清。研究表明,
经前期综合征(PMS)肝气逆证与肝主疏泄、调畅情致
有关,肝疏泄失常与血清中单胺类递质的含量变化有
着内在的联系[1,2]。基于正常雌性实验猕猴的月经周
期与人的月经周期相似,因此利用PMS肝气逆证猕猴
模型进行研究[3],以探索猕猴宏观表现的变化和体内
单胺类神经递质的微观变化规律。单胺类神经递质包
括:去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E),多巴胺(DA),
5羟色胺(5HT)及其有关化合物[4]。这四种神经递质
具有重要的生理作用[5]:均可参与人及动物的行为及
精神情绪活动。因此准确测定猕猴血清中这几类神经
递质的含量变化对研究经前期综合征(PMS)肝气逆证
具有重要意义。本试验即对高地位猕猴外周血中单胺
类神经递质进行检测及分析。
1 仪器与材料
Agilent1100高效液相色谱仪,(二元泵,自动进
样器,柱温箱,ECD检测器);LGR16-W高速冷冻
离心机(北京医用离心机厂)。
标准品:去甲肾上腺素(norepinephrine,NE),肾上
腺素(epinephrine,E),多巴胺(dopamine,DA),5羟色
胺(5hydroxytryptamine,5HT)均为 SIGMA公司产品
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