全 文 ：制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠纹状体细胞外液
乙酰胆碱和胆碱水平的影响
王 巍t 3 o曹春雨u o王丹巧t o赵德忠t
kt1 中国中医科学院 西苑医院 老年医学研究所 o北京 tsss|t ~
u1 中国中医科学院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }探讨制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠脑保护作用的机制 ∀方法 }大鼠分成 y组 }对照组 !模型组 !
制首乌组 !都可喜组和制首乌 n都可喜组 ∀应用脑内微透析技术 o高效液相色谱2柱后固定化酶反应器2电化学检测
器动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱k„≤«l和胆碱k≤«l水平的变化 ∀结果 }在动态观察期间 o对
照组大鼠纹状体细胞外液 „≤«和 ≤«水平较稳定 ∀模型组的 „≤«水平明显低于对照组 ~v个给药组的 „≤«水平则
分别在一些时间点显著高于模型组 ∀模型组的 ≤«水平则明显高于对照组 ~v个给药组的 ≤«水平在一些时间点显
著低于模型组 ∀制首乌的作用与阳性药都可喜相近 ∀结论 }制首乌通过升高 „≤«水平 !改善 ≤«摄取 o提高受损的
胆碱能神经功能 o来达到脑保护作用 ∀为其作为脑保护剂用于治疗老年人常见的神经退行性疾病所致的痴呆提供
了实验依据 ∀
≈关键词  制首乌 ~叠氮钠 ~乙酰胆碱 ~胆碱 ~脑保护
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyls|2szxt2sv
≈收稿日期  ussx2s|2u|
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kvsvzt{uwl
≈通讯作者  3王巍 oר¯ }kstslyu{zxx||2ywts o∞2°¤¬¯}º­©wv ƒ ¼¤2
«²²q¦²° q¦±
何首乌为传统的补益中药 o具补肝肾 o益精血之
功效 o也是常用的延缓衰老中药 ∀其抗氧化 o抗动脉
粥样硬化 o降血脂 o抑制单胺氧化酶活性 o促进细胞
代谢 o改善学习记忆等药理作用可能对脑有一定的
保护作用 ∀本实验应用脑内微透析技术建立的乙酰
胆碱水平下降的动物模型≈t  o动态观察制首乌水提
液对细胞色素 ≤ 氧化酶抑制剂叠氮钠脑内灌流所
致的大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的影
响 o探讨制首乌脑保护作用的机制 ∀
1 材料
111 动物 ≥⁄大鼠 o≥°ƒ 级 o雄性 o体重 t|s ∗ uts
ªo购于北京维通利华实验动物技术有限公司 ∀许可
证编号 ≥≤÷Žk京lussu2sssv ∀
112 试剂和药品 氯化乙酰胆碱k¤¦¨·¼¯¦«²¯¬±¨ ¦«¯²2
µ¬§¨ o„≤«l !氯化胆碱k¦«²¯¬±¨ ¦«¯²µ¬§¨ o≤«l !甲基硫酸
新斯的明k±¨ ²¶·¬ª°¬±¨ °¨ ·«¼¯ ≥∏¯©¤·¨l均购自 ≥¬ª°¤公
司 ∀叠氮钠k¶²§¬∏° ¤½¬§¨ o ‘¤‘v o µ¨¦«公司l ∀t h
Ž¤·«²±溶液k…„≥公司l ∀其余均为分析纯试剂 ∀
林格氏液k复方氯化钠注射液 o北京双鹤药业股
份有限公司 o批号 sutst{ztul ∀都可喜k§∏¬¬¯o法国
施维雅药厂 o批号 tŠs{v{ o上海福达制药有限公司
分装 o每片含甲磺酸阿米三嗪 vs °ª!萝巴新 ts °ªl ∀
首乌原产地为贵州 o北京神农饮片厂炮制 o批号
swtts|∀制首乌用常水浸泡 tx «后煮沸 vs °¬±o用 w
层纱布过滤 o保存滤液 ~在药渣中加入适量常水 o再次
煮沸 vs °¬±o过滤后得第 u次滤液 ou次滤液合并浓
缩 o即得相当于生药 t1ux ª#°pt的制首乌水提液 ∀
113 仪器 脑内微透析系统包括 ≤ „rtu探针k透
析膜长 w °°l及探针套管 !≤  „rtus清醒动物装置 !
≤ „rtsu微量泵 !≤ „rtts 液体开关 !≤ „rtzs 低
温样品自动收集器及软件k≤ „公司l ∀
高效液相色谱k‹°≤l系统包括 ≤ „ruys除气
装置 !° p {s泵 !• «¨ ²§¼±¨ ztux进样阀 !≤ p w≤ 电
化学检测器k∞⁄l !„≤«分析柱kw °° ≅ tss °° ov
Λ°l及固定化酶反应器 !白金工作电极 !„ªr„ª≤¯ 参
考电极和色谱工作站k…„≥和 ≤ „ 公司l ∀手术使
用设备 }ƒ p xvyw立体定位仪 !≤ „rtxs动物温度
控制器和 ƒ p xvys牙科钻k≤„公司l ∀
2 方法
211 动物处理 大鼠按体重随机分为 x组 o每组 y
#txz#
第 vt卷第 |期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ |
¤¼oussy
只 ∀对照组和模型组分别以蒸馏水¬ª~制首乌组 }以
tx ª#®ªpt#§pt制首乌k生药量l水提液¬ª~都可喜组 }
以 ts °ª#®ªpt#§pt都可喜混悬液¬ª ~制首乌 n都可
喜k首 n都l组 }以 tx ª#®ªpt#§pt制首乌k生药量l水
提液和 ts °ª#®ªpt#§pt都可喜混悬液¬ª∀各组都以
tu °#®ªpt的灌胃量连续¬ªtw §∀
212 微透析≈u  u周后 o大鼠用 u h 戊巴比妥钠麻
醉 o于纹状体内进行探针套管埋植术 k定位坐标 „ }
n s1u °° o}n v °° o∂ }z1x °°l ∀术后 uw «插入探
针进行微透析 ∀对照组大鼠用新斯的明林格液k‘2
•¬±ª¨µo含 ts Λ°²¯ #pt新斯的明的林格溶液l灌流
wxs °¬±~模型组和给药组大鼠用 ‘2•¬±ª¨µ灌流 tus
°¬± k为基础水平l 后 o改用含 ‘¤‘v的 ‘2•¬±ª¨µ液
k‘¤‘v2‘2•¬±ª¨µo含 vs °°²¯#pt ‘¤‘v和 ts Λ°²¯#pt
新斯的明的林格溶液l灌流 tus °¬±o再恢复 ‘2•¬±ª¨µ
灌流 uts °¬±∀灌流速度为 u ˏ# °¬±pt ∀各组用
•¬±ª¨µ灌流平衡 tus °¬± 后开始收集透析液 o每 vs
°¬±收集 t管 ∀
213 色谱分析 流动相 }每升含 {x h 磷酸 v1w °o
t h Ž¤·«²± x °o用 ‘¤’‹ 调 ³‹ 至 {1x ∀流速 t1s
°# °¬±pt ∀工作电压设为 n xss °∂ o滤波 s1t ‹½o
增益 s1u Λ„ ∀用 ‹°≤2Œ∞•2∞⁄测定透析液中 „≤«
和 ≤«含量 ∀所有探针在使用前作回收率的测定 o用
以校正透析液中物质的浓度 ∀标准曲线用 s1tux o
s1ux os1x ot Λ°²¯#pt的 „¦«和 ≤«混合对照液测定 ∀
214 数据统计 实验数据采用 Φ检验 ∀
3 结果
311 制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠纹状体细胞外
液 „≤«水平动态变化的影响 模型组在 ‘¤‘v灌流
期间和停止灌流 ‘¤‘v后恢复期 „≤«水平明显低于
对照组k Π s1sx或 Π s1sstl ∀表明叠氮钠脑内
灌流所致纹状体细胞外液 „≤«水平下降的模型成
功 o而且稳定 o有利于药物作用的观察 ∀制首乌组和
都可喜组的 „≤«水平在 ‘¤‘v灌流的 vs oys °¬±时分
别明显高于模型组k Π均  s1sxl ∀制首乌 n都可喜
合用组 „≤«水平在 ‘¤‘v灌流的 vs oys o|s °¬±以及
在停灌 ‘¤‘v后恢复期的第 ys o|s otus otxs °¬±k总第
t{s outs ouws °¬±l都明显高于模型组k Π  s1st 和
Π s1sxl ∀提示制首乌和阳性药都可喜一样可以
抑制 ‘¤‘v脑内灌流所致的纹状体细胞外液 „≤«水
平的下降 ∀制首乌和都可喜合用的药效作用时间比
单用时增加k表 tl ∀
表 t 制首乌对 ‘¤‘v脑内灌流 tus °¬±大鼠纹状体细胞外液 „≤«水平的影响kcξ ? σ, ν € yl Λ°²¯#pt
组别 s °¬± vs °¬± ys °¬± |s °¬± tus °¬± txs °¬± t{s °¬± uts °¬± uws °¬±
对照 x qv ? u qs x qy ? t q{tl x qw ? t qwvl x qt ? t qvvl x qw ? t qwvl x qv ? t qxvl w q| ? t qwvl w q{ ? t qwvl w qw ? t quvl
模型 u q| ? t qt u qy ? t qs t qx ? s qy s q| ? s qy s q{ ? s qz s qz ? s qz s q{ ? s qz s q| ? s qz s q| ? s qz
制首乌 w qv ? w qx x qx ? v qvtl v qw ? t qytl u qt ? s q{ t qx ? s qy t qw ? s qy t qx ? s qz t qz ? s q{ t q| ? s q|
都可喜 v qz ? t qy x qz ? t q{tl v qu ? t qutl u qs ? s q| t qy ? s q{ t qw ? s q{ t qx ? s q{ t q{ ? t qs t qz ? s q|
首 n都 w qw ? u qx y qw ? u qwul w qs ? t qxul u qx ? t quul t q| ? s q{ t q{ ? s q| u qu ? s qztl u qu ? s q|tl u qw ? s qztl
注 }s °¬±为 ‘¤‘v灌流前的基础水平 ovs ∗ tus °¬±为 ‘¤‘v灌流期 otxs ∗ uws °¬±为停止灌流 ‘¤‘v后恢复期 ~与模型组比较tl Π s1sx ,u) Π
s1st ,v) Π s1sstk表 u同l
312 制首乌对脑内灌流叠氮钠大鼠纹状体细胞外
液 ≤«水平的影响 模型组 ≤«含量在 ‘¤‘v灌流期
间显著高于对照组k Π s1sstl o在停灌 ‘¤‘v后 t «
k总第 t{s °¬±l时仍明显高于对照组k Π s1stl ~制
首乌组在 ‘¤‘v灌流的 |s otus °¬±以及停灌后的 vs
°¬±k总第 txs °¬±l较模型组明显降低 k Π均 
s1sxl ~都可喜组则在 ‘¤‘v灌流的 w个时间点以及停
灌 ‘¤‘v后的 u个时间点较模型组显著降低k Π均 
s1sxl ~制首乌 n都可喜合用组在停灌 ‘¤‘v后 vs °¬±
k总第 txs °¬±l较模型组明显下降k Π s1sxl ∀提示
v个给药组均可不同程度地减轻 ≤«在细胞外液的
堆积k表 ul ∀
4 讨论
‘¤‘v是一种特异性细胞色素 ≤氧化酶k≤’÷l抑
制剂 o≤’÷ 与线粒体氧化代谢有关 o且在老年性痴
呆k„⁄l患者脑细胞中 ≤’÷ 活性明显下降 ∀其造成
神经细胞损伤的可能机制为损伤神经细胞骨架 ~促
进 Β淀粉样蛋白堆积 ~氧化损伤 ~影响神经元离子内
稳态 ~影响细胞膜 ~影响多种神经递质等≈v  ∀本研究
应用 ‘¤‘v脑内灌流造成神经细胞线粒体能量代谢
障碍 o进而导致 „≤«水平下降的动物模型 o以增加
脑供氧 !改善细胞能量代谢的西药都可喜为阳性药 o
探讨制首乌脑保护作用的可能机制 ∀
„≤«是胆碱能神经传导的内源性神经递质 o脑
内水平与学习记忆等脑高级功能正常密切相关 o其
代谢异常又与 „⁄!帕金森病等神经退行性疾病的认
#uxz#
第 vt卷第 |期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 u 制首乌对 ‘¤‘v脑内灌流 tus °¬±大鼠纹状体细胞外液 ≤«水平的影响kcξ ? σ, ν € yl °°²¯#pt
组别 s °¬± vs °¬± ys °¬± |s °¬± tus °¬± txs °¬± t{s °¬± uts °¬± uws °¬±
对照 v q{ ? v qt u qu ? u qwvl u qu ? u qxvl t q{ ? u qxvl u qv ? u qxvl u qu ? u quvl t qw ? u qvul t q{ ? u qt t qz ? u qs
模型 v qz ? v q| t{ q{ ? z qy uw qz ? | qs ux qs ? z q{ uw qv ? y qz us q| ? { qz tu q| ? z q| { qy ? z qt y q| ? y qs
制首乌 y qx ? w qw tv qv ? y qv t{ qv ? z qt t{ qy ? w qztl t{ qz ? u q|tl tw qy ? t qwtl | q{ ? w qw z qz ? w qt w q| ? w qz
都可喜 v qt ? u qt tu q{ ? u qutl ty qy ? u qxtl tz qu ? u q|tl t{ qs ? v qstl tv qv ? u qvtl y qv ? v qztl w qs ? v qw u q| ? v qv
首 n都 v qu ? u qy tx qx ? t qz t| qw ? v qx us qz ? u q{ us q{ ? u qz tv qy ? v qstl y qv ? u q| x qv ? v qs v qy ? u qx
知功能相关 ∀通过测定脑内 „≤«的含量可以反映
脑内胆碱能神经的功能 o其含量水平的高低直接
影响神经冲动的传递质量 o对大脑的认知 !记忆功
能起着重要的作用 ∀
本研究提示制首乌可能通过改善细胞线粒体
功能的障碍 o升高 „≤«水平 !改善 ≤«摄取 o提高受
损的胆碱能神经功能 o来达到脑保护作用 ∀与已
报道的何首乌可改善 „⁄病模型大鼠学习记忆能
力≈w 的作用和对海人藻酸所致的大鼠脑乙酰胆碱
能神经元及投射纤维损伤有保护作用≈x 相吻合 ∀
本研究为制首乌用于治疗老年人常见的神经退行
性疾病所致的痴呆提供了实验依据 ∀
≈参考文献 
≈t  王 巍 o孙晓芳 o王丹巧 o等 q建立脑内灌流叠氮钠所致的大
鼠纹状体细胞外液乙酰胆硷水平下降的模型 q中国药理学和
毒理学杂志 oussw ot{kwl }vtv q
≈u  孙晓芳 o王 巍 o赵德忠 o等 q动态监测清醒自由活动大鼠纹
状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的方法 q中国药理学通报 o
ussw ouskul }uvu q
≈v  孙晓芳 o王 巍 q叠氮钠造成脑线粒体损伤模型的研究现状 q
中国药理学与毒理学杂志 oussw ot{kxl }v|y q
≈w  侯德仁 o杨期东 o周 琳 o等 q何首乌对 „¯ ½«¨¬° µ¨病大鼠学习
记忆的影响及其机制的研究 q中国医师杂志 oussw oykvl }vwz q
≈x  李 o杜小平 o杨期东 o等 q何首乌对海人藻酸致大鼠脑
„≤«能神经元及纤维损伤的保护作用 q卒中与神经疾病 oussu o
|kxl }u|| q
Εφφεχτ οφ πρεπαρεδ Πολψγονυµ µυλτιφλορυµ ον στριατυµ εξτραχελλυλαρ αχετψλχηολινε
ανδ χηολινειν ρατσ οφιντραχερεβραλ περφυσιον ωιτη σοδιυµ αζιδε
• „‘Š • ¬¨t o≤„’ ≤«∏±2¼∏u o • „‘Š ⁄¤±2 ¬´¤²t o‹„’ ⁄¨ 2½«²±ªt
(t1 Γεριατριχσ Ινστιτυτε , Ξιψυαν Ηοσπιταλ, Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Βεϕινγ tsss|t , Χηινα ;
u1 Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Μετεριαλ Μεδιχα , Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Μεδιχιαλ Σχιενχεσ, Βεϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ³µ²·¨¦·¬²± ° ¦¨«¤±¬¶° ²©³µ¨³¤µ¨§ Πολψγονυµ µυλτιφλορυµk°°×l ¬± µ¤·¥µ¤¬± º¬·«¶²§¬∏°
¤½¬§¨ k‘¤‘vl ³¨µ©∏¶¬²±q Μετηοδ : • ¤·¶º µ¨¨ §¬√¬§¨§¬±·²¶¬¬ªµ²∏³¶}¦²±·µ²¯ o°²§¨¯o°°× o⁄∏¬¬¯ ¤±§°°× n ⁄∏¬¬¯ ªµ²∏³¶q׫¨ ¬±·µ¤¦2
µ¨¨¥µ¤¯ °¬¦µ²§¬¤¯¼¶¬¶¤±§«¬ª«³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼2³²¶·¦²¯∏°±Œ°°²¥¬¯¬½¨ § ±¨½¼°¨µ¨¤¦·²µ2¨¯ ¦¨·µ²¦«¨ °¬¦¤¯ §¨·¨¦·¬²± º µ¨¨ ∏¶¨§
·²¦²±·¬±∏²∏¶¯¼ ° ¤¨¶∏µ¨ ¬¨·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ¤¦¨·¼¯¦«²¯¬±¨ k„≤«l ¤±§¦«²¯¬±¨ k≤«l ¯¨ √¨¯¶¬±¶·µ¬¤·∏° ²©©µ¨¨¯¼ °²√¬±ª¤º¤®¨ µ¤·¶qΡεσυλτ : ׫¨ ¬¨·µ¤2
¦¨¯¯∏¯¤µ„¦«o≤«¯¨ √¨¯¶²©¶·µ¬¤·∏° ¶·¤¼¨ §¶·¤¥¯¨¬±·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³§∏µ¬±ª·«¨ º«²¯¨²¥¶¨µ√¬±ª³¨µ¬²§o¥∏··«¨ „≤«¯¨ √¨¯¶¬±·«¨ °²§¨¯ªµ²∏³
º µ¨¨ ²¯º µ¨¶¬ª±¬©¬¦¤±··«¤±·«¤·¬±·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³q׫¨ „¦«¯¨ √¨¯¶²©·«µ¨¨§µ∏ªªµ²∏³¶º µ¨¨ µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ «¬ª«¨µ¶¬ª±¬©¬¦¤±··«¤±·«¤·²©°²§¨¯
ªµ²∏³¤·¶²°¨·¬°¨³²¬±·¶q • «¬¯¨ ·«¨ ¬¨·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ≤«¯¨ √¨¯ ¬± ¶·µ¬¤·∏° ²©·«¨ °²§¨¯ ªµ²∏³¬±¦µ¨¤¶¨§¶¬±ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¦²°³¤µ¨§ º¬·«·«¨ ¦²±·µ²¯
ªµ²∏³q׫¨ ≤«¯¨ √¨¯¶²©·«¨ ·«µ¨¨§µ∏ªªµ²∏³¶º µ¨¨ ²¯º µ¨¶¬ª±¬©¬¦¤±··«¤±·«¤·²©·«¨ °²§¨¯ªµ²∏³µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ ¤·¦¨µ·¤¬±·¬°¨³²¬±·¶q׫¨ ©¨©¨¦·¶
²©°°× º µ¨¨ ¶¬°¬¯¤µº¬·«·«¤·²©⁄∏¬¬¯qΧονχλυτιον : ׫¨ ³µ¨³¤µ¨§ Π. µυλτιφλορυµ ¦¤±¬°³µ²√¨·«¨ ¬°³¤¬µ¨§¦«²¯¬±¨ µª¬¦±¨ µ√¨©∏±¦·¬²±·² ¬¨2
µ¨··«¨ ©¨©¨¦·¶²©¥µ¤¬± ³µ²·¨¦·¬²± ¥¼ ¨¯ √¨¤·¬±ª ¬¨·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ„¦«¯¨ √¨¯ ¤±§¬°³µ²√¬±ª∏³·¤®¨ ²© ¬¨·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ≤«qŒ·°¤¼ ³µ²√¬§¨ ·«¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯
√¨¬§¨ ±¦¨ ·²¶∏³³²µ··«¨ ¬§¨¤·«¤·Π. µυλτιφλορυµ ¦²∏¯§¥¨ ¥µ¤¬± ³µ²·¨¦·¬√¨§µ∏ª·²·µ¨¤·µ¨·µ²ªµ¨¶¶¬√¨§¬¶¨¤¶¨ ¶∏¦«¤¶§¨ ° ±¨·¬¤q
[ Κεψ ωορδσ] ³µ¨³¤µ¨§ Πολψγονυµ Μυλτιφλορυµ ~¶²§¬∏° ¤½¬§¨ ~¤¦¨·¼¯¦«²¯¬±¨ ¤±§¦«²¯¬±¨ ~ ©¨©¨¦·¶²©¥µ¤¬± ³µ²·¨¦·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
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