全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1695·
制首乌总多糖对贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响
冯雪梅1，吕 艳2，祝彼得1，刘 啸1
(1．成都中医药大学基础医学院，四川成都610075；2．四川大学华西基础与法医学院，四川成都610041)
摘要：目的观察制首乌总多糖(PPS)对放化疗所致骨髓抑制贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响。方法建立骨
髓抑制贫血小鼠模型，采用造血祖细胞培养技术，观察PPS体内ip给药和细胞培养直接用药对造血祖细胞增殖和
骨髓有核细胞(BMC)数目的影响。结果体内用药能显著增加BMC数目，提高BFU-E、CFU—E和CFU—Meg集
落数产率(尸集落数产率(P巨核系祖细胞的增殖。
关键词：制首乌总多糖；骨髓抑制；贫血小鼠；造血祖细胞增殖
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)11—1695～03
EffectofPolignummultiflorump lysaccharideonp oliferation
ofhematopoieticprogenitorsnanemicmice
FENGXue—meil，LUYan2，ZHUBi—del，LIUXia01
(1．SchoolofBasicMedicalSciences，ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610075，China；
2．SchoolfBasicandForensicMedicalSciences，SichuanUniversity，Chengdu610041，China)
Keywords：PolignummultiflorumThunb．polysaccharide；myelosuppression；anemicmice；
proliferationofhematopoieticprogenitors
何首乌为蓼科多年生草本植物何首乌
FogygonummultiflorumThunb．的块根，经加工炮
制为黑色，称制首乌。制首乌具有补肝肾、益精血的
作用。既往对制首乌的研究多集中在抗衰老方面，对
其补血作用的研究少有报道。本实验提取制首乌总
多糖(PolygnummultiflorumThunb．polysaccha-
ride，PPS)，采用造血细胞培养技术，通过体内ip
给药和体外培养细胞直接用药，观察PPS对骨髓抑
制贫血小鼠骨髓有核细胞(BMC)和造血祖细胞增
殖的影响。
1材料与方法
1．1 主要试剂：2一巯基乙醇、￡一谷氨酰胺(Sigma公
司)，TRIZOI一马血清、IMDM培养基(Gibco公
司)、mGM—CSF(Roche公司)，rhEPO(成都地奥公
司)，mTPO(R&D公司)，琼脂粉(Agar，日本进口
分装)，环磷酰胺、氯霉素(上海第十二制药厂)。
1．2体内用药
1．2．1PPS注射液：制首乌经成都中医药大学中
药鉴定教研室鉴定后，参照文献方法[11提取总多糖
成分，真空干燥，经成都中医药大学基础化学与中药
化学教研室测定其含制首乌总多糖64．4％。经除菌
处理，用生理盐水配置成2．5mg／mL注射液，用于
体内ip给药。
1．2．2实验设计与分组：将BALB／C纯系小鼠，雄
性，体重(20土2)g，8～12周龄(由华西医科大学
实验动物中心提供)24只，随机分成3组，分别为正
常组、贫血组、PPS组，每组8只。贫血组和PPS组
小鼠经80Co一72．0Gy全身照射后，于照射的第4天
开始ip环磷酰胺(40mg／kg)及氯霉素(50rag／
kg)，每日1次，连续注射3d后造模完成，形成贫血
小鼠模型。于造模完成后第1天，贫血组ip生理盐
水0．2mL，PPS组ipPPS25mg／kg(用药剂量参
照文献方法[2]，并选择12．5、25、50mg／kg剂量组
进行预试验后确定)，每日1次，连续6d，于造模完
成第7天，颈椎脱臼处死所有小鼠，无菌条件下取出
股骨，用生理盐水冲出骨髓细胞并反复吹打，过4号
针头制成单细胞悬液，分别计数骨髓有核细胞
(BMC)数目，做三系造血祖细胞培养，观察体内用
收稿日期：2006—03—07
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30271661)
作者简介：冯雪梅(1964一)，女，四川省成都市人，成都中医药大学基础医学院生物化学教研室副教授，在职博士，主要从事中西医结合
基础研究。Tel：(028)88046486E—mail：fxmcd@yahoo．corn．cn
万方数据
·1696· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
药对BMC数目和骨髓造血祖细胞增殖的影响。
1．3体外用药
1．3．1PPS工作液：将按上述方法提取的PPS用
IMDM培养基配制成1mg／rnI，工作液，滤菌处理，
用于体外直接用药细胞培养。
1．3．2实验设计与分组：将BALB／C纯系小鼠10
只，按上述方法造模，造模完成后颈椎脱臼处死所有
贫血小鼠，制备骨髓单细胞悬液，混合所有单细胞悬
液，做三系造血祖细胞培养，分别设贫血对照组及4
个给药组，给药组加入PPS，终质量浓度分别为25、
50、100、200弘g／mL，观察体外直接用药对骨髓抑制
贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响。
1．4造血祖细胞培养：培养体系参照文献方法[33进
行改良。粒单系祖细胞培养体系：1×10_4mol／mL
2一巯基乙醇0．2mL，3％L一谷氨酰胺0．03rnL，马
血清0．5mI。，50ng／mLmGM—CSF0．3mL，BMC
1×105／mI．，IMDM培养基补足体积至1，8mL，3％
Agar0．2mL，混匀。红系祖细胞培养体系：1×101
mol／rnL2一巯基乙醇0．2rnL，3％L一谷氨酰胺0．03
mL，马血清0．5mL，20U／rot。rhEPO0．1mI。，20
ng／mI。II，一30．1mL，BMC1×10s／mL，IMDM培
养基补足体积至1．8rnL，3％Agar0．2mL，混匀。
巨核系祖细胞培养体系：1×10“mol／mL2一巯基乙
rnL，2．5ng／mLTPO0．2mL，BMC1×105／mL，
IMDM培养基补足体积至1．8rnL，3％Agar0．2
mL，混匀。各培养体系总体积为2mL，于24孔板中
培养，每孔1mL，平行做两孑L。参照文献方法[31于培
养第3天于倒置显微镜下计数CFU—E细胞集落
数，培养第7天分别计数BFU—E、CFU—GM、CFU—
Meg(含3个以上的细胞团为一个CFU—Meg集
落)细胞集落数，取两孔的平均值。
1．5统计学分析：实验数据用SPSS11．5软件包
进行统计学分析，组间比较采用t检验。
2结果
2．1 体内用药：表1显示，贫血组与正常组比较，
BMC和CFU—E、BFU—E、CFU—GM、CFU—Meg集
落数均明显降低(P均显著增加，其中BMC、CFU—E、BFU—E和CFU—
Meg集落数，差异非常显著(P<0．01)，CFU—GM
集落数差异显著(P<0．05)。表明造模后，小鼠骨髓
BMC数和造血祖细胞的增殖能力均明显降低。用药
后可使BMC数明显增加，造血祖细胞的增殖能力
有所恢复。
2．2体外用药：表2显示，各给药组与贫血对照组
比较，CFU—E、BFU—E、CFU—GM集落产率均无明
显变化(P>0．05)，说明PPS无直接刺激作用，
醇0．2mL，3％L一谷氨酰胺0．03mL，马血清0．8CFU—Meg集落产率在PPS25ptg／rnL时未表现出
mI一，20U／mI。rhEPO0．1mI。，20ng／mI。IL一30．1 明显的刺激作用，但是随着PPS质量浓度的增加，
表1 PPS体内给药对贫血小鼠BMC数目和造血祖细胞集落数的影响(i士s，n=8)
Table1 EffectofPPSonnumbersofBMCandcolonyformingunitofhematopoietic
progenitorsinanemicmiceinvivo6±s，n=8)
与正常组比较：一尸。。P裹2 PPS体外直接用药对贫血小鼠造血祖细胞集落数的影响G+s，n=6)
Table2 EffectofPPSOOnumbersofcolonyformingunitofhematopoietic
progenitorsofanemicmiceinvitro(-irks，n=6)
与贫血组比较：一P’。P<0．01Wanemicgroup
万方数据
中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1697·
50、100、200／19／mI。组均表现出明显的刺激作用
(．P3讨论
制首乌具有补肝肾、益精血的作用。据《本草纲
目》记载，该药有“养血益肝，固精益肾，健筋骨，乌髭
发，为滋补良药。不寒不燥，功在地黄、天门冬诸药之
上”。周志文等发现，何首乌提取物(水煎醇沉粗提
物)能增加CFU—S、BFU—E、CFU—E和CFU—GM
集落产率[2]。表明何首乌有促进造血作用，但是对于
巨核系祖细胞的影响及对骨髓抑制贫血小鼠造血恢
复的作用却未见报道。
本研究结果显示，PPS体内用药后能明显增加
骨髓抑制贫血小鼠BMC数，促进骨髓抑制贫血小
鼠红系、巨核系、粒系造血祖细胞的增殖；体外用药
后对红系和粒系祖细胞的增殖均无明显的直接刺激
作用，但对巨核系祖细胞的增殖仍表现出刺激作用。
提示PPS的对红系和粒系祖细胞的增殖似乎是一
种间接作用，而对巨核系则表现出直接／间接的刺激
作用。目前还不能解释PPS对巨核系祖细胞增殖的
直接刺激作用机制，其间接作用可能与刺激造血生
长因子分泌，促进生长因子受体、转录因子、抗凋亡
蛋白等的表达有关，有待进一步的研究。
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[3]Liuxz．ExperimentalHa dbookfTechnologiesnCell
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实验手册)[M]．Beijing：BeijingPubl shingHouse，1993．
脑舒宁胶囊对培养皮层神经细胞自由基损伤的保护作用及其机制研究
彭 伟
(山东中医药大学附属医院，山东济南250011)
缺血性中风是临床常见的疑难病，其发病率、病
残率居高不下，对人类健康危害极大，因此，对脑缺
血神经元损伤机制进行研究并寻找有效的药物进行
治疗具有重要意义。本实验采用血清药理学方法，通
过离体神经细胞培养，制备自由基损伤模型，以神经
细胞存活率，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶
(SOD)水平测定和细胞凋亡率检测探讨脑舒宁胶
囊对神经细胞损伤的保护作用及其机制。为临床防
治提供实验依据。
1材料与方法
1．1 主要试剂：MTT购自美国Sigma公司，
DMSO购自北京化学试剂三厂，MDA、SOD测试盒
购自南京建成生物工程研究所，原位凋亡检测试剂
盒购自北京医科大学病理系。
1．2神经细胞培养：无菌条件下分离新生大鼠(出
生o～1d)大脑皮层，置于预冷的D—Hank
7
S液中，
仔细剔除软脑膜及血管，0．25％胰酶37℃消化30
min，终止消化，1000r／min离心10min，沉淀用接
种液悬浮，机械吹打制成单细胞悬液，调细胞计数约
为1×106／mL，接种到经0．1％多聚赖氨酸过夜处
理的12孔培养板和培养瓶中。置37。C、5％CO。孵
箱中培养。24h后全量换液1次以去除死细胞，以
后每3天换液1次，第5天加阿糖胞苷以抑制非神
经细胞的增殖。接种液成分：85％DMEM／Fml5％
小牛血清、100U／mL青霉素，100U／mL链霉素。
维持液为含10％小牛血清的DMEM／F，。培养液。
l。3神经细胞自由基损伤模型的建立
1．3．10。7损伤模型：生物体内自由基生成途径之
一是酶促催化产生自由基，黄嘌呤氧化酶催化产生
自由基通常称为X(黄嘌呤)／X0(黄嘌呤氧化酶)
模式。参照文献方法[1]，采用X／X0体系，将培养细
胞用D—Hank7S液洗2次，加入含有0．08U／mL黄
瞟呤氧化酶和1mmol／L黄嘌呤的无血清培养液作
用1h，然后吸除培养液，加入无血清的DMEM培
养液，37℃、5％CO。孵箱中继续培养。
1．3．2H：O。损伤模型：取培养8d的神经细胞，吸
除原培养液，D—Hank
7
S液洗2次，加入终浓度为
100p．mol／LH。0。作用1h，换以无血清的DMEM
收稿日期：2006—02—21
作者简介：彭伟(1970一)，女，山东济南人，副主任医师，副教授，硕士，主要研究方向为中西医结合治疗神经内科系统疾病。
Tel；(0531)82613190E—mail：pengwei0625@163．eom
万方数据
制首乌总多糖对贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响
作者： 冯雪梅， 吕艳， 祝彼得， 刘啸， FENG Xue-mei， L(U) Yan， ZHU Bi-de， LIU Xiao
作者单位： 冯雪梅,祝彼得,刘啸,FENG Xue-mei,ZHU Bi-de,LIU Xiao(成都中医药大学基础医学院,四川
,成都,610075)， 吕艳,L(U) Yan(四川大学华西基础与法医学院,四川,成都,610041)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 8次

参考文献(3条)
1.Shang P;Yang T H;Jia M Purification and analysis of polysaccharides of Angelica sinensisi (Oliv.)
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2.Zhou Z W;Zhou J H;Xing S T Effects of Polygonum multiflorum extract on murine hematopoietic
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3.Liu X Z 造血祖细胞培养技术实验手册 1993

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