全 文 ：姜黄素长循环脂质体的制备及评价
宏 伟，陈大为，赵秀丽，乔明曦，胡海洋
（１．沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］ 目的：研制姜黄素长循环脂质体。方法：采用乙醇注入法制备姜黄素长循环脂质体，应用微柱离心法
测定包封率，以包封率为指标，分别考察缓冲液种类、药脂比、胆固醇用量、不同相对分子质量的 ＰＥＧ胆固醇、不同
ｐＨ、离子强度等对脂质体的影响，在此基础上用正交设计［Ｌ９（４
３）］对处方进行优化。结果：经乙醇注入法制得的
脂质体的包封率为（８８２７±２１６）％，平均粒径为（１３６±１８）ｎｍ，粒度分布均匀，呈单峰分布，４℃放置３０ｄ包封率
无明显变化。结论：姜黄素长循环脂质体制备工艺简单可行，姜黄素长循环脂质体制剂学性质稳定。
［关键词］ 姜黄素；长循环脂质体；乙醇注入法；粒度分布；包封率
［中图分类号］Ｒ２８３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０８０８８９０４
［收稿日期］ ２００７０８１６
［通讯作者］ 陈大为，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６３０６，Ｅｍａｉｌ：ｃｄｗ２００２ｙｄ
＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
姜黄色素是从姜科植物姜黄 ＣｕｒｃｕｍａｌｏｎｇａＬ．
中提取的一种酚类化合物，被认为是中药姜黄的主
要活性成分，包括姜黄素Ⅰ（姜黄素）、姜黄素Ⅱ（脱
甲氧基姜黄素）和姜黄素Ⅲ（双脱甲氧基姜黄素）３
种单体，而姜黄素是其中最重要的活性成分［１］。近
年研究表明，姜黄素可影响肿瘤发生、发展的各个阶
段（始发、促进和演进），并可通过抑制血管生成达
到抗肿瘤侵袭和转移的目的。作为一种有良好发展
前景的抗癌药物，姜黄素在肿瘤预防和治疗方面已
经引起人们的重视，成为研究热点，美国国立肿瘤研
究所已将其列为第三代癌化学预防药［２］。
但是，姜黄素难溶于水，在体外也容易被氧化，
难以进行静脉给药，目前也没有稳定性较好的药物
剂型，口服姜黄素大部分在胃肠道内被代谢失活，被
吸收到血液循环中的量很少，因此给姜黄素的临床
应用，尤其在肿瘤治疗中的应用带来了一定的难度。
长循环脂质体是近几年来研究较多的一种药物载
体，具有较多的优点，其在体内能阻止巨噬细胞对脂
质体的识别和摄取，而极大延长脂质体在血液中循
环时间，从而提高药物的治疗指数和疗效，减轻了不
良反应，同时将药物包裹于脂质体中有利于提高其
稳定性，具有极好的产业化前景［３］。
本实验应用乙醇注入法制备了姜黄素长循环脂
质体，并以包封率为指标，对各处方因素进行了考察，
并应用正交设计进行包封率优化，确定了姜黄素长循
环脂质体的最优处方，按此处方制备了３批样品，测
定了其粒度分布并对其稳定性进行了初步考察。
１ 材料
姜黄素（购自美国 Ｓｉｇｍａ公司）；大豆卵磷脂
（药用，ＰＣ＞９５％ 购自上海泰伟药业）；胆固醇（天
津市博迪化工有限公司）；磷酸二氢钠、磷酸二氢钾
（天津市博迪化工有限公司）；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０（生化
试剂，购自瑞典 ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ公司）；其余试剂
均为分析纯。
ＵＶ－９１００型紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器
厂）；ＲＥ－５３Ａ型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；
ＤＦ－１０１Ｓ集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市英峪华
仪器厂）；ＬＳ型激光粒度仪（美国贝克曼公司）。
２ 方法
２．１ 姜黄素长循环脂质体的制备
应用乙醇注入法制备姜黄素长循环脂质体，按
处方量精密称取卵磷脂、胆固醇及聚乙二醇胆固醇
（ＰＥＧＣｈｏｌ）于西林瓶中，加入姜黄素无水乙醇溶液
１ｍＬ，超声使之溶解；匀速注入水浴５０℃ １０ｍＬ磷
酸缓冲盐溶液中，快速搅拌 ３０ｍｉｎ，静止 １２ｈ，过
０４５μｍ滤膜，４℃保存。
２．２ 微柱离心法测定姜黄素长循环脂质体的包封率
２．２．１ 洗脱曲线的考察 精密吸取姜黄素脂质体
混悬液０２ｍＬ，缓缓加于柱顶部，注意勿滴入柱床
边缘，２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心３ｍｉｎ，收集滤过液，由柱
顶部加入 ０５ｍＬ蒸馏水，２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心 ３
ｍｉｎ，收集滤过液，再于柱顶部加入相同体积的蒸馏
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水，重复以上操作；从第６管开始更换洗脱液，用乙
醇水（３０∶７０）混合溶剂代替蒸馏水作为洗脱液，操
作同上。滤过液破乳后定容至５ｍＬ，采用紫外可
见分光光度计，以相应洗脱液为对照，于４３０ｎｍ处
测定每１份滤过液的吸收度（Ａ），结果如图１。
图１ 微柱离心法测定姜黄素脂质体洗脱曲线（ｎ＝３）
结果表明，脂质体与游离姜黄素组分之间分离
度较好，重复测定的结果偏差较小ＲＳＤ＜５％。所以
可以应用此法测定姜黄素脂质体的包封率。
２．２．２ 包封率的测定 精密吸取姜黄素脂质体混
悬液０２ｍＬ，缓缓加于柱顶部，注意勿滴入柱床边
缘，２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心３ｍｉｎ；由柱顶部加入０５ｍＬ
毫升蒸馏水，２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心 ３ｍｉｎ，收集滤过
液，再于柱顶部加入相同体积的蒸馏水，重复以上操
作。合并１～３管滤过液，破乳后加入混合溶剂定容
至５ｍＬ，摇匀，测定吸光度值定为 Ａｌｉｐ，另取姜黄素
脂质体混悬液０２ｍＬ，用破乳后用混合溶剂定容至
５ｍＬ，测定其吸光度值定为Ａｔｏｔ，按下式计算包封率：
包封率Ｅｎ（％）＝（Ａｌｉｐ／Ａｔｏｔ）×１００％
其中Ａｌｉｐ为脂质体所包封姜黄素的量；Ａｔｏｔ为脂
质体混悬液中所含姜黄素的总量。
２．３ 姜黄素长循环脂质体的粒度分布
将制备的姜黄素长循环脂质体溶液５ｍＬ，４０００
ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上清液滴入激光粒度仪样
品池中，测定姜黄素长循环脂质体的粒度分布。
２．４ 姜黄素长循环脂质体的处方优化
分别选用不同的缓冲液种类、药脂比、胆固醇用
量、不同相对分子质量的 ＰＥＧＣｈｏｌ（聚乙二醇胆固
醇）、不同ｐＨ、离子强度，按２．１下方法制备姜黄素
长循环脂质体，以包封率为指标考察各处方因素对
脂质体的影响。选用药脂比、胆固醇用量、ＰＥＧＣｈｏｌ
的用量、离子强度为因素，采用正交设计 Ｌ９（４
３）对
处方进行优化，见表１。
２．５ 姜黄素长循环脂质体初步稳定性的考察
按最优处方制备 ３批姜黄素长循环脂质体，
表１ 正交试验因素水平
水平
Ａ
药脂比
Ｂ
磷脂∶胆固醇
Ｃ
ＰＥＧＣｈｏｌ
Ｄ
ＮａＣｌ
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
１ １∶１０ ３∶１ ２ １０
２ １∶１３ ４∶１ ５ ２０
３ １∶１５ ５∶１ ８ ３０
４℃下放置３０ｄ，测定其包封率。
３ 结果
３．１ 处方考察结果
３．１．１ 缓冲液种类对包封率的影响 固定处方中
磷脂的量，药脂比，大豆磷脂∶胆固醇为 ４∶１，ＰＥＧ
Ｃｈｏｌ为磷脂的５％，分别依药典配置ｐＨ４５的磷酸
盐缓冲液、醋酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液１０ｍＬ，
乙醇注入法制备脂质体。所得脂质体包封率结果见
表２。结果表明，在实验条件范围内，缓冲盐的种类
对包封率的影响不是很明显，相比较磷酸盐缓冲液
有较高的包封率且较为常用，所以选定磷酸盐缓冲
液。
表２ 缓冲盐种类对包封率的影响（ｎ＝３）
缓冲盐 包封率／％
ＰＢＳ（磷酸盐缓冲液） ８５１１±１０９
醋酸醋酸钠 ８１５５±２２７
柠檬酸柠檬酸钠 ８１８９±２３６
３．１．２ 磷脂与胆固醇的比例对包封率的影响 固
定处方中磷脂的用量，药脂比，ＰＥＧＣｈｏｌ为磷脂的
５％，改变胆固醇用量，分别以大豆磷脂：胆固醇为
２∶１，３∶１，４∶１，５∶１，无胆固醇，乙醇注入法制备脂质
体。所得脂质体包封率结果见表３。结果表明，在
实验条件范围内，随着胆固醇比例的减少，包封率先
增大后减少，有最大值。
表３ 胆固醇用量对包封率的影响（ｎ＝３）
磷脂∶胆固醇 包封率／％
２∶１ ７４３７±２４８
３∶１ ７９２１±３５４
４∶１ ８７７４±１３５
５∶１ ８８９２±４２７
无胆固醇 ５３９３±１２６
３．１．３ 不同 ｐＨ对包封率的影响 固定处方中磷
脂的用量，药脂比，大豆磷脂胆固醇为 ４∶１，ＰＥＧ
Ｃｈｏｌ为磷脂的５％，分别用 ＰＢＳ缓冲液（ｐＨ为４０，
５０，６０，６５，７０）１０ｍＬ，，乙醇注入法制备脂质
体。所得脂质体包封率结果见表４。结果表明在实
验条件范围内，随着水相 ｐＨ的升高，包封率增加。
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姜黄素在中性和碱性条件下不稳定。
表４ 缓冲盐ｐＨ对包封率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ｐＨ 包封率／％
４０ ８０８５±２４５
５０ ８６３５±３９８
６０ ８７１８±２４２
６５ ８７７４±１３５
７０ 变性
３．１．４ 不同药脂比对包封率的影响 分别以药脂
比为１∶５，１∶１０，１∶１５，１∶２０，１∶２５，大豆磷脂∶胆固醇
为４∶１，ＰＢＳ缓冲液１０ｍＬ，ＰＥＧＣｈｏｌ为磷脂的５％，
乙醇注入法制备脂质体。结果表明，在实验条件范
围内，磷脂的量增加包封率随之增加，但虽然药脂比
在１∶１０～１∶１５时包封率稍低，但载药量较高，故在
１∶１０～１∶１５再次进行实验，结果见表５。当药脂比
大于１∶５时，可以清晰看到药物沉淀，此时大多数药
物未被包入。
表５ 药脂比对包封率的影响（ｎ＝３）
药脂比 包封率／％
１∶５ ８０８５±２４５
１∶１０ ８３９７±３６８
１∶１５ ８１３２±２１３
１∶２０ ８４６９±４２１
１∶２５ ８７７４±１３５
１∶１１ ８１６０±１３８
１∶１２ ８２９９±２７４
１∶１３ ８３７９±３４２
１∶１４ ８２１７±１９７
３．１．５ 不同ＮａＣｌ浓度对包封率的影响 固定处方
中磷脂的用量，药脂比，大豆磷脂：胆固醇为４∶１，
ＰＥＧＣｈｏｌ为磷脂的５％，ＰＢＳ６５１０ｍＬ制备，ＮａＣｌ的
浓度分别为１０，２０，４０，８０，１６０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，乙醇注入
法制备脂质体。所得脂质体包封率结果见表６。结
果表明，在实验范围内，当ＮａＣｌ的浓度大于２０ｍｍｏｌ
·Ｌ－１时，脂质体的包封率显著减小。
表６ 不同离子强度对包封率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ＮａＣｌ／ｍｍｏｌ·Ｌ－１ 包封率／％
１０ ７５４３±２７９
２０ ７７９４±２９５
４０ ７０４１±１４７
８０ ６３５２±３０１
１６０ ４７２６±１５８
３．１．６ 不同相对分子质量的ＰＥＧ对包封率的影响
本实验考察相同摩尔量的ＰＥＧ１０００，２０００，５０００
的ＰＥＧＣｈｏｌ，对脂质体包封率的影响，所得脂质体
的包封率结果见表７。结果表明，在实验范围内，不
同长度的ＰＥＧ链在脂质体的形成过程中，对包封率
有影响，当ＰＥＧ链长为２０００时，包封率最大。
表７ 不同相对分子质量的ＰＥＧ对包封率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ＰＥＧＣｈｏｌ 包封率／％
ＰＥＧ１０００Ｃｈｏｌ ７５４２±１７７
ＰＥＧ２０００Ｃｈｏｌ ９１７３±２１３
ＰＥＧ５０００Ｃｈｏｌ ８６５３±２８４
３．１．７ ＰＥＧ２０００Ｃｈｏｌ用量对包封率的影响 本
实验考察ＰＥＧＣｈｏｌ用量对包封率的影响。所得脂
质体的包封率结果见表８。实验结果表明，在实验
范围内，ＰＥＧＣｈｏｌ的用量为磷脂的５％时，脂质体的
包封率最大。
表８ ＰＥＧ２０００Ｃｈｏｌ用量对包封率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ＰＥＧ２０００Ｃｈｏｌ／％ 包封率／％
２ ８５５５±３１３
４ ８７９７±２７５
５ ９１７３±３０９
６ ８３６３±１８４
８ ８３２５±１３２
３．２ 正交试验优化处方
正交试验结果见表９。结果表明，各因素对包
封率的影响大小次序为Ａ＞Ｄ＞Ｃ＞Ｂ。在实验所选
范围内，药物与脂质的质量比是主要影响因素，且药
物与磷脂的质量比为１∶１３（Ａ２）时包封率最高。对
包封率影响较大的是 ＮａＣｌ的用量，ＮａＣｌ用量为２０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１（Ｄ２），对增加脂质体包封率影响最大，而
ＰＥＧＣｈｏｌ用量的影响最小。
表９ 正交试验结果（ｎ＝３）
Ｎｏ． Ｅｎ／％ Ｎｏ． Ｅｎ／％
１ ７０７６ ６ ８５３８
２ ８０９３ ７ ７２３７
３ ７７５７ ８ ６８９８
４ ８２１８ ９ ７３６１
５ ８１０８
综合以上实验结果，可以确定乙醇注入法制备的
姜黄素长循环脂质体的最优处方为：磷脂的量为５０
ｍｇ，磷脂与胆固醇的比例为５∶１，药脂比为１∶１３，选用
相对分子质量为２０００的 ＰＥＧＣｈｏｌ用量为磷脂的
５％，选用 ｐＨ６５的磷酸盐缓冲液／２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＣｌ。用以上处方制备姜黄素长循环脂质体，所得脂
质体的包封率为（８８２７±２１６）％。
３．３ 姜黄素长循环脂质体的粒度分布
姜黄素长循环脂质体的粒度测定结果如图２，
姜黄素长循环脂质体经整粒后，其粒度分布呈单峰，
粒度分布为（１３６±１８）ｎｍ。
３．４ 姜黄素长循环脂质体的初步稳定性研究
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图２ 姜黄素长循环脂质体粒度分布
将姜黄素长循环脂质体溶液，密封４℃放置３０
ｄ，包封率变化见表１０。４℃放置１个月后，姜黄素
长循环脂质体未出现分层、沉淀现象。药物包封率
没有显著变化。
表１０ 姜黄素长循环脂质体初步稳定性
实验结果（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ｔ／ｄ 包封率／％
０ ８８２７±２１６
５ ８８１２±１４２
１０ ８７９２±３２７
１５ ８７７５±１４３
２０ ８７８３±２９７
２５ ８７５６±３１２
３０ ８７２１±１８５
４ 讨论
姜黄素是一种吸附性较强的酚性色素，其与透
析袋有较强的作用，所以无法用透析袋法测定姜黄
素长循环脂质体的包封率；凝胶过滤法是利用分子
筛原理，依据被分离组分地分子大小不同而被分离，
该法操作简便，减少了误差传递，但被分离组分有较
大的稀释；微柱离心法是一种快速、简便地分离脂质
体内外相中小分子药物的方法，其优点是脂质体混
悬液几乎没有被稀释，可以避免脂质体地渗漏。在
本实验中脂质体组分与游离姜黄素组分间分离效果
较好，重复测定，结果偏差较小，ＲＳＤ＜５％。
脂质体是由磷脂为主要膜材加赋形剂组成，与
生物膜的成分相似，组织相容性好，毒性较小，适合
静脉使用，特别是对于水溶性差和易氧化、不稳定的
药物，可明显增加溶解性和体外稳定性［４，５］。由于
姜黄素脂溶性好，脂质体包封率高，因此，以脂质体
作为姜黄素的载体，具有明显的优势。
本实验采用乙醇注入法制备姜黄素长循环脂质
体，其制备工艺简单，制得的纳米脂质体包封率较
高，接近９０％，粒径分布均匀，且重现性好；４℃放置
３０ｄ包封率没有明显变化，说明该脂质体初步稳定
性良好，达到了制剂设计的目的。
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ＨＯＮＧＷｅｉ，ＣＨＥＮＤａｗｅｉ，ＺＨＡＯＸｉｕｌｉ，ＱＩＡＯＭｉｎｇｘｉ，ＨＵＨａｉｙａｎｇ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
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Ｃｈｏｌ，ｔｈｅｐＨｏｆｂｕｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｏｎｓｔｒｅｎｇｔｈｏｆｗａｔｅｒｐｈａｓｅ，ｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｎｔｈｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙ
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｅｃｕｒｃｕｍｉｎｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗａｓ（８８２７±２１６）％，ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆ
ｔｈｅｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗａｓ（１３６±１８）ｎｍ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｃｈａｎｇｅｏｎｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｉｃｅｎｃｙｗｉｔｈｉｎ３０ｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｃｕｒｃｕ
ｍｉｎｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗａｓｅａｓｙａｎｄｐｒａｃｔｉｃａｂｌｅａｎｄｔｈｅｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｕｒｃｕｍｉｎｌｉｐｏｓｏｍｅｓａｒｅｓｔａｂｌｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃｕｒｃｕｍｉｎ；ｌｏｎｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；ｅｔｈａｎｏｌｉｎｆｕｓｉｏｎ；ｐａｒｔｉｃａｌｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｔｉｏｎ；ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｉｃｉｅｎｃｙ
［责任编辑 鲍 雷］
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