全 文 ：·加工炮制与养护 ·
广西莪术不同炮制品姜黄素含量比较
及体内抗肿瘤作用研究
覃　葆 ,谢金鲜 ,杨海玲 ,熊　萍
(广西中医学院药学院 ,广西 南宁 530001)
　　摘要　目的:探讨不同炮制方法对广西莪术姜黄素含量及体内抗肿瘤作用的影响。方法:用 HPLC法测定广
西莪术生品 、醋煮品 、醋炙品姜黄素的含量;比较炮制品对 S180肉瘤小鼠抑瘤作用的影响。结果:广西莪术各炮制品
姜黄素的含量为:生品 >醋炙品 >醋煮品;各炮制品对体内移植性肿瘤小鼠有一定的抑制作用 , 醋煮品 、醋炙品抗
肿瘤作用稍强。结论:不同炮制方法对广西莪术质量有一定的影响。
关键词　广西莪术;炮制;姜黄素;抗肿瘤
中图分类号:R283.3　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)09-1379-04
StudyontheContentofCurcuminbyHPLCandtheAnti-tumorEffectinvivo
fromDiferentProcessedProductsofCurumakwangsiensis
QINBao, XIEJin-xian, YANGHai-ling, XIONGPing
(FacultyofPharmacy, GuangXiTraditionalChineseMedicalUnivercity, Nanning530001, China)
Abstract　Objective:TodeterminecurcumincontentbyHPLCandobservetheantitumoreffectsinvivofromdifferentprocessed
productsofCurumakwangsiensis.Methods:WedeterminedthecontentofcurcuminbyHPLCfromdiferentprocessedproductsofCu-
rumakwangsiensisandstudiedtheanti-tumoreffectsinvivobyestablishingS180 transplantedtumorsmodelinmice.Results:Thecon-
tentofcurcuminindiferentprocessedproductsofCurumakwangsiensisasfolows:primitive>vinegar-fried>vinegar-cooked.Dif-
ferentprocessedproductshadanti-tumorefectsinthetumor-bearingmice.Thevinegar-friedgroupandvinegar-cookedgroupshowed
obviousefectofinhibitingtumorgrowththantheprimitivegroup.Conclusions:Diferentprocessedmethodsmayhavesomeafectionto
thequalityofCurumakwangsiensis.
Keywords　CurumakwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang;Processed;Curcumin;Anti-tumor
收稿日期:2010-01-08基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻 0718002-4-3)作者简介:覃葆(1956-),男 ,副教授 ,主要从事中药炮制研究;E-mail:bbythemoon@yahoo.com.cn。
　　莪术为姜科植物蓬莪术 (Crcumaphaeocaulis
Val.)、广西莪术 (CurumakwangsiensisS.G.Leeet
C.F.Liang)或 者 温 郁 金 (Curcuma wenyujin
Y.H.ChenetC.Ling)的干燥块茎。广西莪术是广
西的地道药材 。 《本草纲目》记载 “多以醋炒或煮熟
入药 ,取其引入血分也。”现代炮制方法主要以醋
煮 、醋炙为主 ,莪术是治疗肿瘤的常用中药。莪术挥
发油主要用于病毒性感染 、抗菌及抗肿瘤等 ,广西莪
术炮制前后均有较强的抗菌作用〔1〕。姜黄素类成
分是莪术镇痛抗炎的主要活性成分〔2〕。本文比较
不同炮制方法对广西莪术姜黄素成分的影响及采用
S180细胞制备移植性肿瘤模型 ,观察体内抗肿瘤作
用。探讨传统炮制方法对广西莪术质量的影响。
1　材料
1.1　样品　莪术采自广西灵山县 ,经广西中医学
院韦松基教授鉴定为姜科植物广西莪术 (Curuma
kwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang)的根茎。昆明
种小鼠 ,由广西中医学院实验动物中心提供 ,使用许
可证号:SYXK<桂 >2003-0001。小鼠 S180肉瘤鼠 ,
购自广西中医药研究所 ,由广西中医学院药理实验
室接种保存 。
1.2　仪器与试药　姜黄素对照品(中国药品生物
制品检定所 ,批号 110823-200603)。注射用环磷酰
胺 (CTX)(上海 华联 制 药有 限公 司 , 批号:
08072421)。甲醇(色谱纯 ,天津四友生物医学技术
有限公司 ,批号 041230101),乙腈(色谱纯 , Fisher,
批号 07410),分析纯冰醋酸 。 LC-20AT型高效液相
色谱仪 ,包括二元泵 ,高压梯度 UV检测系统 , Shi-
madzu-LCSolution化学工作站 ,赛多利斯 BP211D电
子天平 。
2　方法与结果
2.1　广西莪术炮制品制备
2.1.1　生品:取原药材 ,大小分档 ,洗净 ,水浸润
透 ,切薄片 ,干燥 ,筛去碎屑作为生品(饮片)。粉碎
·1379·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 9期 2010年 9月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.09.010
过 60目筛备用 。
2.1.2　醋煮品:取原药材置煮制容器内 ,加米醋及
适量水浸没 ,用文火煮至醋汁被吸尽 ,内无白心时 ,
取出 ,稍晾 ,切薄片 ,干燥 。粉碎过 60目筛备用。莪
术每 100kg,用米醋 20kg。
2.1.3　醋炙品:取生品(饮片),加定量米醋拌匀 ,
稍闷润 ,待醋被吸尽后 ,置炒制容器内 ,用文火加热 ,
炒至微黄色 ,略带焦斑时 ,取出 ,放凉。粉碎及辅料
用量同醋煮品 。
2.2　姜黄素的含量测定
2.2.1　色谱条件:SHIMADZUVP-ODSC18 (150
mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:乙腈-0.1%冰醋酸
(45∶55);流速 1.0 mL/min;紫外检测波长为 420
nm;柱温 40℃;进样量 20 μL。
2.2.2　对照品溶液的制备:精密称取姜黄素对照
品适量 ,加甲醇制成 0.16 g/L姜黄素对照品溶液。
2.2.3　供试品溶液的制备:分别精密称取样品
2.5 g,精密加入甲醇 100 mL,索氏回流提取 1 h,残
渣再精密加入甲醇 100 mL,索氏回流提取 1h,合并
滤液 ,减压回收甲醇 ,用甲醇定容至 5 mL,离心冷藏
备用 。
2.2.4　线性关系的考察:分别精密吸取姜黄素对
照品溶液 1、2、3、4、5 μL,按 “2.2.1”项下色谱条件
测定峰面积 ,以峰面积 Y(mAU)对应姜黄素对照品
进样量 X(μg)进行线性回归 , 得回归方程:Y=
3363435X+2858.8, R2 =0.9997(n=5),姜黄素在
0.016 ～ 0.08 g/L线性关系良好 。
2.2.5　精密度试验:精密吸取姜黄素对照品溶液
5 μL,连续进样 6次 ,计算姜黄素峰面积的 RSD为
0.086%。
2.2.6　重复性试验:按 “ 2.2.3”项下供试样品溶
液制备方法及 “2.2.1”项下色谱条件 ,对同一样品
(醋煮品)平行制备 6份 ,测定结果 RSD为 1.71%,
表明方法重复性良好 。
2.2.7　稳定性试验:精密吸取醋煮品溶液 20 μL,
分别在 0、2、4、6、8、10 h按 “2.2.1”项下色谱条件测
定峰面积 ,结果 RSD为 1.77%(n=6),表明供试品
溶液至少在 10 h内稳定 。
2.2.8　加样回收率试验:精密称取 6份已知含量
的同一批样品(生品)1.25 g,采用加样回收试验 ,加
入等量姜黄素对照品。按 “2.2.3”项下方法制备样
品 ,按 “ 2.2.1”项下色谱条件测定 , 计算回收率为
99.97%, RSD=0.03%。
2.2.9　样品含量测定:按 “2.3”项下方法制备供
试品溶液 ,分别吸取各样品 20 μL,按 “ 2.2.1”项下
色谱条件测定 ,结果见表 1,图 1。广西莪术不同炮
制品姜黄素的含量高低为:生品 >醋炙品 >醋煮品 ,
生品明显高于其他炮制品 ,醋炙品与醋煮品之间似
乎相差不大 。
　表 1　广西莪术不同炮制品姜黄素的质量分数(n=3)
样品 含量 /(mg/g) RSD/%
生品 0.0280 0.52
醋煮品 0.0180 1.54
醋炙品 0.0204 1.83
图 1　各炮制样品色谱图
2.3　广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠抑瘤作用
2.3.1　样品制备:炮制品饮片各取 1 000 g,用水
浸润 30min,加水煎煮 3次 ,过滤 ,滤液浓缩至 500
mL,每 1 mL浓缩液含 2g药材(2g药材 /mL)。
2.3.2　广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠抑瘤作
用和对肝重 、脾重系数的影响:取转种 S180瘤株第 8
天并产生足够腹水的小鼠 ,处死后用无菌注射器抽
取腹水 ,用无菌生理盐水按体积比 1∶5稀释 。取昆
明种小鼠 55只 ,雌雄兼用 ,每只小鼠右腋下接种
(i.h)S180细胞悬液 0.2 mL,造成实体瘤模型 〔3, 4〕。
接种 24 h后随机分为 5组 ,每组 11只 ,即模型对照
组(i.g生理盐水)、阳性对照组(i.pCTX15 mg/kg)、
·1380· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 9期 2010年 9月
广西莪术各炮制品 3个组(均按 20 g生药 /kg灌胃
给药),给药容积为 20 mL/kg体重 ,每天给药 1次 ,
连续 11d。末次给药后次日称体重 ,脱颈椎处死小
鼠后剥取皮下实体瘤 ,精密称量瘤块重量 ,计算抑瘤
率。并且分离肝脏和脾脏 ,精密称重 ,计算肝脏和脾
脏指数。结果见表 2、3。结果显示 ,广西莪术 3种
炮制品对 S180肉瘤小鼠具有一定的抑制作用 ,醋煮
品 、醋炙品 、CTX的瘤重系数分别与模型组比较有
显著性差异(P<0.05),生品 、醋煮品 、醋炙品 、CTX
抑瘤率分别为 37.9%、51.9%、41.4%、54.2%,说
明灌胃给药对移植性 S180肉瘤有一定的抑制作用。
各组对肝重系数均无明显的影响 ,醋煮品 、醋炙
品 、生品对脾脏系数有一定降低 ,其中醋煮品与模型
组比较有非常显著性差异(P<0.01),醋炙品 、生品
有显著性差异(P<0.05)。
抑瘤率(%)=(模型组平均瘤重 -用药组平均瘤重)/
模型组平均瘤重 ×100%
肝(脾)重系数 =肝(脾)重 /体重
　　表 2 　广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠抑瘤作用的影响( x±s)
组别 剂量 /(g生药 /kg)
体重 /g
始 末 瘤重 /g 瘤重系数 /(g/g)
抑瘤率 /%
模型组 - 20.39±1.15 25.48±4.03 1.3112±0.6851 0.0517±0.0279 -
CTX 0.015 20.85±1.85 23.00±2.45 0.6007±0.5714 0.0256±0.0222＊ 54.2
醋煮品 20 20.65±1.26 24.73±3.42 0.6309±0.4366 0.0251±0.0175＊ 51.9
醋炙品 20 21.12±1.74 25.07±3.26 0.7686±0.3854 0.0307±0.0153＊ 41.4
生品 20 20.60±1.58 25.85±2.08 0.8147±0.5122 0.0313±0.0200 37.9
　　注:与模型对照组比较 , ＊P<0.05
　　表 3 　广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠肝重 、脾重系数的影响( x±s, n=11)
组别 剂量 /(g生药 /kg) 肝重 /g 脾重 /g 肝重系数 /(g/g) 脾重系数 /(g/g)
模型组 - 1.9923±0.4393 0.2882±0.0629 0.0780±0.0114 0.0113±0.0019
CTX 0.015 1.5490±0.2944 0.2840±0.3363 0.0674±0.0118 0.0120±0.0131
醋煮品 20 1.7707±0.2802 0.2237±0.0340 0.0715±0.0057 0.0090±0.0009＊＊
醋炙品 20 1.8675±0.2983 0.2367±0.0597 0.0743±0.0045 0.0094±0.0016＊
生品 20 1.7915±0.4063 0.2396±0.0567 0.0691±0.0134 0.0092±0.0019＊
　　注:与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
2.3.3　广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠生存期
影响:取昆明种小鼠 55只 ,雌雄兼用 ,每只小鼠右腋
下接种 S180细胞悬液 0.2 mL(接种的 S180细胞悬液
为转种第 8天的 S180瘤源动物腹水用生理盐水按体
积比 1∶3稀释),造成实体瘤模型 。 24 h后随机分
为 5组 ,每组 11只 ,分组和给药方法同 “2.3.2”项下
方法 。接种瘤株 24 h后开始给药 ,每天 1次 ,连续
11 d。在接种之日起观察用药后小鼠肉瘤存活时
间 ,计算生存天数 ,按公式计算生存延长率。结果见
表 4。结果显示 ,广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠
生存期有一定的延长 ,其中醋炙品对小鼠的生命延
长率为 26.2%,但生存时间(d)与模型组比较无显
著性差异(P>0.05)。
生存延长率(%)=(用药组存活天数均数 -模型组存
活天数均数)/模型组存活天数均数 ×100%
3　讨论
3.1　广西莪术不同炮制品姜黄素的含量高低为:
　表 4　　　　广西莪术各炮制品对 S180肉瘤小鼠
生存期的影响( x±s, n=11)
组别 剂量 /(g生药 /kg) 生存时间 /d 生命延长率 /%
模型组 - 14.55±4.82 -
CTX 0.015 14.64±7.30 0.6
醋煮品 20 17.00±6.63 16.8
醋炙品 20 18.36±5.28 26.2
生品 20 14.91±4.74 2.5
生品 >醋炙品 >醋煮品 ,生品明显高于其他炮制品 ,
醋炙品与醋煮品之间似乎相差不大。朱善岚等提出
广西莪术不含姜黄素 ,蓬莪术中姜黄素的含量高低
为:醋制品 >酒制品 >炒制品 >生品〔5〕 ,与本实验
用广西莪术品种的结果似乎不一致。
3.2　罗红霞等〔6〕提出由于姜黄素分子中含有多个
双键 、酚羟基及羰基等 ,故其化学反应较强 。一些金
属离子及强光 、高温等可影响姜黄素的稳定性 。本
·1381·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 9期 2010年 9月
实验提示广西莪术用醋制等加热炮制对姜黄素等有
效成分有一定影响 。
3.3　实验采用 S180细胞制备移植性肿瘤模型 ,以荷
瘤小鼠的实体瘤重 、抑瘤率 、生存延长率为实验指标
评价广西莪术不同炮制品对移植性肿瘤的抑制作
用。研究结果显示 ,广西莪术各炮制品对体内 S180
肉瘤小鼠均具有一定的抑制作用 ,其中莪术生品 、醋
煮品 、醋炙品 、 CTX的抑瘤率分别为 37.9%、
51.9%、41.4%、54.2%。各组对肝重系数均无明显
的影响 ,醋煮品 、醋炙品 、生品对脾脏系数有一定降
低。各炮制品对 S180肉瘤小鼠生存期可有一定的延
长 ,其中醋炙品对小鼠的生命延长率为 26.2%。结
果显示 ,醋煮品 、醋炙品抗肿瘤作用稍强 。
参 考 文 献
[ 1] 覃葆 ,曾春晖 , 荣玲芝 ,等.不同炮制方法对广西莪术的
质量研究 [ J].时珍国医国药 , 2009, 20(9):2247-2248.
[ 2] 陆兔林 .中药莪术有效物质及饮片规范化研究 [ D] .
南京:南京中医药大学 , 2003:9-11.
[ 3] 金莉 .中药复方的抑瘤和免疫调节作用的初步研究
[ J] .现代肿瘤医学 , 1997, 5(1):55-58.
[ 4] 杨镇 .肿瘤免疫学 [ M] .武汉:湖北科学技术出版社 ,
1998:98-100.
[ 5] 朱善岚 ,黄品芳 .HPLC法测定莪术不同炮制品中姜黄
素含量 [ J] .海峡药学 , 2007, 19(3):52-55.
[ 6] 罗红霞 ,方清茂 , 潘晓鸥 .姜黄素的提取及其含量测定
研究进展 [ J] .中国药业 , 2004, 13(6):75-77.
黄连及炮制品 HPLC指纹图谱研究
刘　峰 ,张振秋＊ ,赵金明 ,丁广宇 ,李　力
(辽宁中医药大学药学院 ,辽宁 大连 116600)
　　摘要　目的:应用 HPLC法建立黄连药材及炮制品的指纹图谱。方法:采用 Phenomoil-C18BDS(250 mm×4.6
mm, 5μm)色谱柱;流动相:乙腈(A)-0.3%磷酸三乙胺(B), 进行梯度洗脱;检测波长为:245 nm;流速:1.0 mL/
min;柱温:20 ℃。结果:检测了 10批不同来源黄连药材及 8种炮制品 ,标定了 12个共有峰 , 相似度较高 ,各色谱峰
分离度较好 ,达到了中药指纹图谱研究的技术要求。结论:本法准确 、重复性好 , 建立的 HPLC指纹图谱为黄连及
炮制品的质量控制提供了依据。
关键词　黄连;炮制品;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)09-1382-04
收稿日期:2010-04-12基金项目:辽宁省教育厅项目(2008S145)作者简介:刘峰(1984-),男 ,硕士研究生 ,主要从事中药制剂分析;Tel:0411-87586110, E-mail:davidliufeng08@126.com。＊通讯作者:张振秋 , Tel:0411-87586058, E-mail:zhangzhenqiu@sina.com。
　　黄连为毛茛科植物黄连 (Coptischinensis
Franch.)、三角叶黄连 (CoptisdeltoideaC.Y.Cheng
etHsiao)或云连(CoptisteetaWal.)的干燥根茎 ,主
要分布于我国四川 、云南 、湖北等地 。其味苦 、性寒 ,
归心 、脾 、胃 、肝 、胆 、大肠经。具有清热燥湿 、泻火解
毒功效〔1〕。黄连药材所含的生物碱主要有小檗碱 、
巴马汀 、黄连碱 、药根碱等小檗碱型生物碱 〔2〕。黄
连是常用中药 ,因产地分布较广 ,炮制品种较多 ,质
量不易控制。为有效评价黄连的质量 ,本文建立了
黄连及炮制品的指纹图谱 ,为更好地控制药材内在
质量提供科学依据 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Agilent1100型高效液相色谱仪 ,配置
四元梯度泵 、在线脱气机 、VWD检测器;AS3120A超
声提取器;2140型电子分析天平 、METTLERAB135-
S十万分之一电子天平(瑞士);U-3010型紫外-可见
分光光度计 , HH-4数显恒温水浴锅 。
1.2　试药　盐酸黄连碱对照品 、盐酸巴马汀对照
品由上海顺勃生物工程技术有限公司提供 ,盐酸小
檗碱对照品(批号:110713-200804,中国药品生物制
品检定所)。本研究收集了十批不同来源黄连药
材 ,经辽宁中医药大学李峰教授鉴定均为正品 ,见表
1。黄连炮制品均由四川购进的同一批黄连药材(8
号样品), 参照 2005年版中国药典〔1〕、 《中药炮制
学 》〔3〕、《中药炮制学辞典 》〔4〕中黄连的不同炮制方
法依法自制 ,分别得到酒炙 、醋炙 、萸制 、盐炙 、姜炙 、
·1382· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 9期 2010年 9月