全 文 ：灯盏乙素在大鼠体内药代动力学
及组织分布的研究
尤海生１，董亚琳１，邢建峰２，张春玲３，王茂义１
（１．西安交通大学 医学院 第一附属医院，陕西 西安 ７１００６１；
２．西安交通大学 医学院，陕西 西安 ７１００６１；３．西安市红十字会医院，陕西 西安 ７１００６１）
［摘要］ 目的：研究灯盏乙素在大鼠体内药代动力学和组织分布特性，为临床合理用药提供科学依据。方法：
灌胃给予８０ｍｇ·ｋｇ－１的灯盏乙素，ＨＰＬＣ测定大鼠体内灯盏乙素的血药浓度及组织中的浓度，血浆样品用固相萃
取的方法处理，其他生物样品用液液萃取法处理。结果：灯盏乙素在血浆和组织匀浆中线性范围分别为１０～１２８０
ｎｇ·ｍＬ－１（Ｒ２＞０９９）和４０～１２８０ｎｇ·ｇ－１（Ｒ２＞０９９），最低检测限分别为１０ｎｇ·ｍＬ－１和４０ｎｇ·ｇ－１，日内、日间
精密度均小于８％。主要药代动力学参数：达峰时间ｔｍａｘ为（７７±１０）ｈ，峰浓度Ｃｍａｘ为（２８８０±７５２）ｎｇ·ｍＬ
－１，
药时曲线下面积ＡＵＣ０～ｔ为（５６±１６）μｇ·ｍＬ
－１·ｈ，ＭＲＴ０～ｔ为 （１７５±１４）ｈ。结论：灯盏乙素口服后在体内呈
非房室模型，药时曲线有双峰现象。
［关键词］ 灯盏乙素；ＨＰＬＣ；药代动力学；组织分布
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１６１６８８０５
［收稿日期］ ２００６０８１０
［通讯作者］ 董亚琳，Ｔｅｌ：（０２９）８５３２３２４３，Ｅｍａｉｌ：ｄｏｎｇｙａｌｉｎ
＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｃｏｍ．ｃｎ
灯盏花素（ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ）是从菊科短莛属灯盏
花全株植物中提取分离的黄酮类有效成分，主要成
分为灯盏乙素（ｓｃｕｔｅｌａｒｉｎ，ＳＣＵ），具有扩张微血管，
增加动脉流量，降低血液黏度，减少外周阻力，抑制
血小板聚集等作用，临床用于治疗冠心病、心绞痛、
心肌缺血损伤及脑血栓形成等［１］。关于口服灯盏
乙素的体内药动学研究报道较少［２４］，其组织分布研
究未见报道。本研究拟建立ＨＰＬＣ测定大鼠血浆及
组织中灯盏乙素浓度的方法，研究灯盏乙素在大鼠
体内的动力学和组织分布。
１ 材料
１．１ 仪器与试剂
美国 Ｗａｔｅｒｓ公司高效液相色谱仪，包括 Ｗａ
ｔｅｒｓ２９９６二极管阵列检测器（ＤＡＤ），５１５型高压
泵，Ｗａｔｅｒｓ７１７自动进样器，ＥｍｐｏｗｅｒＰｒｏ色谱工作
站。贝克曼的ＡｌｅｇｒａＴＭＸ－ＺＺＲＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ低温离
心机。灯盏乙素对照品（中国药品生物制品检定
所，批号８４２２００１０２，纯度９６４％）；灯盏乙素（云
南个旧生物药业有限公司提供，批号 Ｄ２００５０４０１，
纯度９７５％），甲醇（色谱纯，美国 Ｆｉｓｈｅｒｓ公司生
产），醋酸乙酯（分析纯，西安化学试剂厂），水为超
纯水。
１．２ 动物
３５只ＳＤ大鼠，雌雄兼用，雄性 ２０只，雌性 １５
只，体重２５０～２８０ｇ，由西安交通大学实验动物中心
提供（二级动物合格证号：陕医动字０８００５）。
２ 方法
２．１ 色谱条件
色谱柱ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘＲＣ１８柱（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５
μｍ）；柱温３０℃；流动相甲醇水（１∶１）（１ｍｏｌ·Ｌ－１
磷酸调 ｐＨ２５）；流速 ０８ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长
３３５ｎｍ；进样量５０μＬ。
２．２ 对照品溶液的配制
精密称取灯盏乙素对照品８ｍｇ，置于 １００ｍＬ
量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，得灯盏乙素对
照贮备液（８０μｇ·ｍＬ－１），避光４℃冰箱保存。临
用时将贮备液用流动相稀释至所需浓度，即得灯盏
乙素工作液。
２．３ 生物样品的采集制备与测定
２．３．１ 血浆样品采集处理 １０只ＳＤ大鼠，雌雄各
半，禁食１２ｈ，自由饮水，尾静脉取血０５ｍＬ后以
８０ｍｇ·ｋｇ－１的灯盏乙素灌胃，于给药后０１７，０５，
１，２，３，５，８，１２，２４，３６，４８ｈ从大鼠尾静脉取血０５
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ｍＬ，置肝素化离心管中，离心，３０００ｒ·ｍｉｎ－１，１５
ｍｉｎ分取血浆，于－２０℃保存待测。
固相柱（ＯａｓｉｓＣ１８）先以１ｍＬ甲醇和１ｍＬ水活
化；取血浆样品０２ｍＬ加入０５％磷酸０４ｍＬ，上
柱，依次用水１ｍＬ、甲醇０２ｍＬ清洗小柱；再以ｐＨ
３０甲醇１５ｍＬ洗脱，收集洗脱液，于３５℃氮气流
吹干，残渣以１００μＬ流动相涡旋溶解，取５０μＬ进
样，在上述色谱条件下分离测定，记录色谱峰面积，
按标准曲线方程，计算血浆药物浓度。
２．３．２ 组织样品的处理 ２５只 ＳＤ大鼠，雄性１５
只，雌性１０只，１０只（雌、雄各半）用于方法学研究，
１５只随机分为 ３组，分别给予灯盏乙素 ８０ｍｇ·
ｋｇ－１，于给药后４，８，１２ｈ处死，取心、肝、脾、肺、肾、
脑等脏器，生理盐水冲洗表面血迹，滤纸吸干，冻存，
待测。
定量称取各脏器组织０３ｇ，加生理盐水制成组
织匀浆液１ｍＬ。精密吸取匀浆液０５ｍＬ，加１ｍｏｌ
·Ｌ－１的磷酸０２５ｍＬ，醋酸乙酯３０ｍＬ，涡旋振荡
５ｍｉｎ，２５００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，连续萃取２次。
合并萃取液，３５℃氮气流吹干，流动相１００μＬ充分
溶解，取５０μＬ进样。
２．４ 统计方法
数据用 珋ｘ±ｓ表示，采用非房室模型法用 ＤＡＳ
２０经统计矩计算，ＳＰＳＳ１００软件对给药后不同时
间取样点进行ｔ检验。
３ 结果
３．１ 专属性考察
按选定的色谱条件，测定灯盏乙素对照溶液、服
药前大鼠空白血浆、服药后大鼠血浆；服药前大鼠空
白组织、服药后大鼠组织中灯盏乙素含量，按生物样
品处理后进行色谱分析，见图１。大鼠血浆中的内
源性杂质不干扰灯盏乙素的测定，灯盏乙素的保留
时间为８５ｍｉｎ。大鼠组织中的内源性杂质不干扰
灯盏乙素的测定，色谱图略。
图１ 大鼠血浆中灯盏乙素的ＨＰＬＣ图
Ａ．未服药前空白血浆；Ｂ．灌胃灯盏乙素后的血浆
３．２ 标准曲线的制备
ＳＤ大鼠空白血浆０２ｍＬ若干份，制备含灯盏
乙素浓度为１２８０，６４０，３２０，１６０，８０，４０，２０，１０ｎｇ·
ｍＬ－１的系列标准血浆样品，按血浆样品处理方法制
备。以灯盏乙素峰面积（Ｙ）对浓度（Ｘ）进行线性回
归，得血浆标准曲线方程。
ＳＤ大鼠空白组织匀浆０５ｍＬ若干份，制备含
灯盏乙素为２５６０，１２８０，６４０，３２０，１６０，８０，４０ｎｇ·
ｇ－１的系列标准组织样品，按组织样品处理方法制
备。以灯盏乙素峰面积（Ｙ）对浓度（Ｘ）进行线性回
归，得各组织标准曲线方程，结果见表１。
表１ 灯盏乙素在大鼠血浆和各组织中的标准曲线（ｎ＝６）
样品 标准曲线
线性范围
／ｎｇ·ｍＬ－１（ｎｇ·ｇ－１）
Ｒ２
ＬＬＯＱ
／ｎｇ·ｍＬ－１（ｎｇ·ｇ－１）
血浆 Ｙ＝１６３３４Ｘ＋１０６４５ １０～１２８０ ０９９９９ １０
心 Ｙ＝３５７５Ｘ＋３２８８８ ４０～１２８０ ０９９９７ ４０
肝 Ｙ＝３０６１Ｘ－２９０８ ４０～２５６０ ０９９８５ ４０
肾 Ｙ＝３３５４Ｘ＋４５８７３ ４０～１２８０ ０９９８９ ４０
脑 Ｙ＝３６５５Ｘ＋１２９２２ ４０～１２８０ ０９９９８ ４０
注：Ｒ２均＞０９９，满足生物样品的测定要求。信噪比Ｓ／Ｎ＝３时，血浆和组织中样品最低检测限分别为１０ｎｇ·ｍＬ－１和４０ｎｇ·ｇ－１
３．３ 精密度与回收率实验
３．３．１ 血浆样品精密度与回收率试验 取大鼠空
白血浆溶液配制成高、中、低３个剂量（３２０，８０，２０
ｎｇ·ｍＬ－１）若干份样品，按血浆样品处理方法制备，
进样５０μＬ，以３个剂量对应相同的进样量的对照
品进行分析，计算血浆样品的绝对回收率［绝对回
收率（％）＝血浆样品处理后进样所得峰面积／对应
浓度的对照品的峰面积×１００％］。结果见表２。
３．３．２ 血浆样品稳定性试验 大鼠空白血浆溶液
０２ｍＬ加灯盏乙素的对照品，配制成高、中、低３个
浓度（３２０，８０，２０ｎｇ·ｍＬ－１）若干份样品，分别０ｈ、
室温放置１０ｈ、样品处理后流动相复溶室温放置１０
ｈ、冻融２次、冰冻１个月后，按血浆样品处理方法
制备，进样５０μＬ，测定灯盏乙素的浓度无明显降
低（ＲＳＤ＜１０％），结果稳定。
３．３．３ 组织样品精密度与回收率试验 取大鼠空
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表２ 大鼠血浆中灯盏乙素的精密度与回收率实验（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
加入量
／ｎｇ·ｍＬ－１
日内
测得量／ｎｇ·ｍＬ－１ ＲＳＤ／％
日间
测得量／ｎｇ·ｍＬ－１ ＲＳＤ／％
相对回收率
／％
绝对回收率
／％
３２０ ３３０８±１５２ ２１ ３１７８±２０８ ６６ ９９３±７８ ６６５±４４
８０ ８６５±２８ ３２ ８４８±２８ ３３ １０５９±８４ ６９８±２７
２０ ２０４±１３ ４６ ２０２±１０ ４８ １０１２±５１ ７３８±３６
白组织匀浆液０５ｍＬ，加灯盏乙素对照品，组织处
理方法制备，进样５０μＬ，以３个剂量对应相同的进
样量的对照品进行分析，计算组织样品的绝对回收
率，结果见表３。
表３ 组织匀浆液中灯盏乙素的精密度与回收率实验（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
样品
加入量
／ｎｇ·ｇ－１
日内
测得量／ｎｇ·ｇ－１ ＲＳＤ／％
日间
测得量／ｎｇ·ｇ－１ ＲＳＤ／％
相对回收率
／％
绝对回收率
／％
心 １２８０ １２５７６±９８９ ７９ １２６５１±５７４ ４５ ９８８±４５ ７７１±３５
３２０ ３４０５±２６０ ７６ ３２０６±２４２ ７６ １００２±７６ ７９８±５９
８０ ７８３±２５ ３２ ７７３±１９ ２４ ９６９±２３ ８３７±１８
肝 １２８０ １３２３２±６０９ ４６ １２７１３±８３３ ６６ ９９３±６５ ６５８±４３
３２０ ３４５９±１１２ ３２ ３３９０±１１２ ３３ １０５９±３５ ７００±２３
８０ ８１６±５１ ６２ ８０９±３９ ４０ １０２０±６４ ６６２±３２
肾 １２８０ １２６８４±３４４ ２７ １２１８１±８３０ ６８ ９５２±６５ ６９９±４７
３２０ ３２３２±２５４ ７８ ３２１３±１５３ ４８ １００１±４８ ７６０±３５
８０ ７６７±１６ ２１ ７３８±３６ ４９ ９０６±４５ ７０４±３３
脑 １２８０ １３４０５±２６９ ２０ １３６６５±３２７ ２４ １０６１±２４ ８４２±１９
３２０ ３２９８±２１０ ６４ ３１７５±２３２ ７３ ９９８±７２ ７９４±５７
８０ ８０６±０８ １０ ７９８±１９ ２４ １０２６±２３ ８２４±１７
３．３．４ 组织样品稳定性试验 大鼠空白组织匀浆
液０５ｍＬ，加灯盏乙素对照品，配制成高、中、低３
个剂量（１２８０，３２０，８０ｎｇ·ｇ－１）若干份样品，分别０
ｈ、室温放置１０ｈ、样品处理后流动相复溶室温放置
１０ｈ、冻融２次、冰冻１个月，按组织样品处理方法
制备，进样５０μＬ，结果表明样品稳定性良好，ＲＳＤ＜
８％。
３．４ 药动学研究
血药浓度测定结果表明：大鼠灌胃给予灯盏乙素
８０ｍｇ·ｋｇ－１后血浆中灯盏乙素的平均浓度时间曲
线（见图２）。灯盏乙素口服后，受试动物的药时曲线
有双峰现象，故采用非参数法计算药动学参数，１０只
大鼠灌胃给予灯盏乙素８０ｍｇ·ｋｇ－１后主要药动学参
数见表４，灯盏乙素在大鼠各组织中的分布见表５。
图２ 灌胃８０ｍｇ·ｋｇ－１灯盏乙素在
大鼠体内平均血药浓度时间曲线
表４ 灯盏乙素在大鼠体内的药动学参数（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
样品 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ ＡＵＣ０ｔ／ｈ·μｇ·ｍＬ－１ ＡＵＣ０∞／ｈ·μｇ·ｍＬ
－１ ＭＲＴ０ｔ／ｈ ＭＲＴ０∞／ｈ
灯盏乙素 ８０ ５６±１６ ５９±１７ １７５±１４ １９９±１６
样品 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ Ｔ１／２／ｈ Ｔｍａｘ／ｈ ＣＬｓ／Ｆ／Ｌ·ｈ－１·ｋｇ－１ Ｖｃ／Ｆ／Ｌ·ｋｇ－１ Ｃｍａｘ／μｇ·Ｌ－１
灯盏乙素 ８０ ９７±１４ ７７±０９ ７２±２１ １０１４±３４１ ２８８０±７５２
表５ 灯盏乙素（８０ｍｇ·ｋｇ－１）在大鼠各组织中
不同时间的含量 （珋ｘ±ｓ，ｎ＝５） ｎｇ·ｇ－１
样品
组织含量
４ｈ ８ｈ １２ｈ
心 ６３２±２２７ ５８６±２５６ ５０１±１４７
肝 １２９３±４６４ ５４３±１４４２） ４６１±７８２）
肾 ３９１３±２０２ ２８７９±７９２１） １８５５±５９４３）
脑 ７１７±２７２ ７７７±３３５ ４８１±５５
注：与４ｈ比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与８ｈ比较３）Ｐ＜００５
４ 讨论
本研究采用ＨＰＬＣＤＡＤ法测定大鼠灌胃给予灯
盏乙素后的血和组织中的浓度，结果显示，血浆和组
织杂质峰不干扰分析峰的测定，专属性强，相关系数
和回收率达到了生物样品的测定要求，而且检测限
低（１０ｎｇ·ｍＬ－１或４０ｎｇ·ｇ－１），能够满足灯盏乙素
药代动力学研究的要求。
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预试验结果表明，灯盏乙素在雌性和雄性大鼠
间药代动力学参数无统计学差异。口服灯盏乙素药
时曲线呈双峰现象，与文献［２，５８］报道一致。本试验
结果为０１７～３０ｍｉｎ出现第１个药时曲线峰，７～９
ｈ出现第２个药时曲线峰，对于药物药时曲线的双峰
现象在中草药的单体成分中居多，文献对此现象的
解释不一，有待进一步研究。对于双峰药时曲线的
统计分析目前尚无一种通用的理想方法，国际上较
常规的处理方法多采用非房室模型法，该法分析药
物的体内过程，主要依据药时曲线下面积，不受数学
模型的限制，普遍适用于任何房室状态。在本实验
中采用ＤＡＳ２０软件进行数据处理，所得统计矩参
数符合药代动力学变化趋势。
预试验研究结果发现，灯盏乙素在雌性和雄性
大鼠间组织分布无统计学差异，灯盏乙素在大鼠心、
肝、肾、脑中含量较多；其他组织中含量较少达不到
检测限。因此，选择了心、肝、肾、脑４种脏器进行了
研究，结果表明，在灌胃给药４，８，１２ｈ后灯盏乙素在
肾脏含量最高，其次为心脏、肝脏、脑。大部分体内
的药物可能以原形从肾脏排泄，尿药法药代动力学
试验［９］证实了这一点。在肝组织中８，１２ｈ的药物
含量与４ｈ比较显著降低（Ｐ＜００１），这表明灯盏乙
素在肝药酶的作用下，部分药物发生了代谢转化。
在心脏和脑组织中药物含量变化较小，文献［１０］利用
脑组织进行了灯盏乙素的药代动力学研究，结合本
研究脑组织检测到大量的灯盏乙素。说明灯盏乙素
能通过血脑屏障在脑组织分布。灯盏乙素有抗氧化
和抑制血小板集聚的作用［１１］，因此在血流丰富的
心、脑组织分布的灯盏乙素有利于治疗和预防心脑
血管疾病。
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ＹＯＵＨａｉｓｈｅｎｇ１，ＤＯＮＧＹａｌｉｎ１，ＸＩＮＧＪｉａｎＦｅｎｇ２，ＺＨＡＮＧＣｈｕｎｌｉｎｇ３，ＷＡＮＧＭａｏｙｉ１
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌ，Ｘｉ’ａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００６１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｘｉ’ａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌ，Ｘｉ’ａｎ７１００６１，Ｃｈｉｎａ；３．ＲｅｄＣｒｏｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉ’ａｎ７１００６１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｉｎｐｌａｓｍａａｎｄｔｉｓｓｕｅｓｉｎ
ｒａｔｓ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅｓｏｍｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｆｏｒｒａｔｉｏｎａｌｄｒｕｇｕｓｅｉｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｔｏ
ｒａｔｓ（８０ｍｇ·ｋｇ－１）ｂｙｏｒａｌｇａｖａｇｅ．Ａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｍｅｔｈｏｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅｄｔｈｅｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎ
ｒａｔｐｌａｓｍａａｎｄｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｅｐｌａｓｍａｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｏｔｈｅｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃ
ｔｅｄｂｙｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒａｎｇｅｏｆｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｉｎｐｌａｓｍａａｎｄｔｉｓｓｕｅｉｎｒａｔｓｗｅｒｅ１０～１２８０ｎｇ·ｍＬ－１（Ｒ２＞０９９），４０～
１２８０ｎｇ·ｇ－１（Ｒ２＞０９９），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｌｏｗｅｓｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｗｅｒｅ１０ｎｇ·ｍＬ－１ａｎｄ４０ｎｇ·ｇ－１，ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎｗｅｒｅ
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Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００７
ｌｅｓｓｔｈａｎ８％Ｔｈｅｍａｉｎｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｗｅｒｅａｓｆｏｌｏｗｓ：ｔｍａｘ，Ｃｍａｘ，ＡＵＣａｎｄＭＲＴｂｅｉｎｇ（７７±０９）ｈ，
（２８８０±７５２）μｇ·Ｌ－１，（５６±１６）μｇ·ｍＬ－１·ｈ－１，（１７５±１４）ｈ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｓｅｍｅｔｈｏｄｓａｐｐｌｉｅｄ
ｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｓｃｕｔｅｌａｒｉｎ．Ａｆｔｅｒｏｒａｌｔｈｅｓｃｕｔｅｌａｒｉｎｉｎｒａｔｓ，ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｔｉｍｅｃｏｕｒｓｅｄｏｅｓｎ’ｔｏｂｅｙａｎｙｃｏｍｐａｒｔ
ｍｅｎｔｍｏｄｅｌ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｔｉｍｅｃｕｒｖｅｉｓｔｈｅｄｏｕｂｌｅｐｅａｋｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｓｃｕｔｅｌａｒｉｎ；ＨＰＬＣ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ；ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｉｓｓｕｅ ［责任编辑 古云侠］
桂皮醛对 ＮＩＨ３Ｔ３细胞周期及相关蛋白表达的影响
赵京霞，李 萍，盛 巡，刘 欣，梁代英
（北京市中医研究所 首都医科大学 附属北京中医医院，北京 １０００１０）
［摘要］ 目的：观察肉桂主要成分桂皮醛对小鼠成纤维瘤细胞株 ＮＩＨ３Ｔ３细胞周期及相关蛋白的影响。方
法：采用流式细胞仪检测桂皮醛（５５ｎｇ·ｍＬ－１）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞周期分布的影响；用免疫细胞化学法检测桂皮醛对
ＮＩＨ３Ｔ３细胞的细胞周期蛋白Ｄ１（ＣｙｃｌｉｎＤ１）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。结果：流式细胞仪检测
显示，桂皮醛作用２４ｈ后ＮＩＨ３Ｔ３细胞Ｓ期比例上升了３％（Ｐ＜００５），Ｇ２／Ｍ期比例无明显升高，细胞增殖指数
（ＰｒＩ）增加了３５％（Ｐ＜００１）。经桂皮醛刺激后，ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＰＣＮＡ蛋白表达量明显增加，与对照组
比较，有极显著差异（Ｐ＜００１）。结论：桂皮醛可推动 ＮＩＨ３Ｔ３细胞周期向前进展，这种正向调控作用与桂皮醛能
促进ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＰＣＮＡ蛋白表达有关。
［关键词］ 桂皮醛；细胞周期；细胞周期蛋白Ｄ１；增殖细胞核抗原
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１６１６９２０３
［收稿日期］ ２００６０６２０
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０４７２２５８）
［通讯作者］ 李萍，Ｔｅｌ：（０１０）５２１７６６７９，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｐｉｎｇ４１１＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
桂皮醛是中药肉桂的主要成分，肉桂在治疗慢
性皮肤溃疡愈合方面具有重要的作用。成纤维细胞
增殖调控障碍可能是慢性皮肤溃疡难愈合的重要因
素之一。笔者前期研究结果表明，桂皮醛对大鼠慢
性皮肤溃疡疮缘成纤维细胞［１］和ＮＩＨ３Ｔ３细胞具有
促增殖作用［２］。细胞增殖最终取决于增殖细胞在
细胞外信号影响下细胞周期的有序进展，如果细胞
周期本身的调控机制障碍及调节细胞周期的细胞外
信号紊乱都会导致病态的发生。本实验以 ＮＩＨ３Ｔ３
细胞为模型，从细胞周期、细胞周期蛋白 Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ
Ｄ１）以及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达等方面对
桂皮醛的促增殖作用机制进行初步探讨。
１ 材料
１．１ 主要试剂与仪器 ＤＭＥＭ培养基（Ｇｉｂｃｏ公
司）；胎牛血清（ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ，天津ＴＢＤ公
司）；胰蛋白酶，溴化丙锭（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ，Ｂｉｏｔｉ
ｕｍ公司）；倒置显微镜、ＢＸ５１型多功能显微镜（日
本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）；流式细胞仪（美国 ＢＤ公司）；丙
酮、甲醇（分析纯，北京化学试剂公司）；ＴｒｉｔｏｎＸ１００，
ＲＮＡ酶Ａ（ＲＮＡａｓｅＡ）（Ｓｉｇｍａ公司）；细胞周期蛋白
Ｄ１兔单克隆抗体、即用型快速免疫组化 ＭａｘＶｉ
ｓｉｏｎＴＭ试剂盒、ＤＡＢ显色试剂盒（福州迈新生物技术
开发有限公司）；小鼠抗增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单
克隆抗体、即用型ＳＡＢＣ二抗试剂盒（武汉博士德生
物工程公司）；Ｉｍａｇｅｐｒｏｐｌｕｓ５０图像分析软件。
１．２ 药物 桂皮醛（ｃｉｎｎａｍｙｌａｌｄｅｈｙｄｅ，ＣＡ）对照
品，纯度 ＞９８％，由中国药品生物制品检定所提供
（批号１１０７１０２００２１２）。
１．３ 细胞 ＮＩＨ３Ｔ３小鼠成纤维细胞瘤细胞株购于
中国协和医科大学细胞中心。
２ 方法
２．１ 细胞周期检测 将ＮＩＨ３Ｔ３细胞用０１２５％胰
蛋白酶消化后，以相同密度接种于２５ｃｍ２培养瓶中，
培养２４ｈ后，更换为含１％ ＦＢＳ的培养基，２４ｈ血
清饥饿后，加入无血清培养基稀释的药物（增殖检
测筛选的有效浓度）：桂皮醛终浓度为 ５５ｎｇ·
·２９６１·
第３２卷第１６期
２００７年８月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００７