全 文 ：甘草与芫花对 Ｐ糖蛋白底物罗丹明１２３经
空肠黏膜透过性的影响
黄蓓蓓１，李国锋１，任 非１，唐中昆２，马华飞１，孙亚彬１，
陈莉婧１，杨 凌１
（１．南方医科大学 南方医院 药学部，广东 广州 ５１０５１５；
２．南方医科大学 药学院 药物化学系，广东 广州 ５１０５１５）
［摘要］ 目的：观察甘草与芫花合用前后对Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的调控作用，探讨甘草、芫花及其合用影响药物经
胃肠道渗透的可能作用机制。方法：将２５只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为５组，分别给大鼠口服甘草液、芫花液、甘草芫花合煎
液、合并液以及生理盐水，１周后用体外扩散池法（ｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ）评价各种药液对罗丹明１２３（Ｒ１２３）和荧光素钠
（ＣＦ）经空肠黏膜透过性的影响，用荧光分光光度法测定Ｒ１２３和ＣＦ的浓度，并分析各组表观渗透系数（Ｐａｐｐ）差异。
结果：４种药液均具有增加Ｒ１２３经吸收方向的透过性，与生理盐水组比较，Ｐ＜００５，且芫花液、合煎液以及合并液
还可减少分泌方向的透过（Ｐ＜００５，与生理盐水组比较），甘草对分泌方向透过影响无统计学意义。甘草对 ＣＦ透
过无影响，而其他３组药液则可减少ＣＦ吸收和分泌方向的透过性。结论：甘草和芫花对Ｐｇｐ均有抑制作用，但后
者作用较强。芫花某些化学成分抑制Ｐｇｐ，而另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强，引起旁细胞途径药物ＣＦ
渗透的降低。甘草与芫花合用后对Ｐｇｐ抑制作用增强，可能是甘草对芫花有协同作用，使一些毒性成分吸收增加，
这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。
［关键词］ 甘草；芫花；Ｐ糖蛋白；扩散池；透过性
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２１２５２１０６
［收稿日期］ ２００８０３１５
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（Ｃ０３０５０２０５）；广东省科
技计划项目（２００５Ｂ３０１０１００７）；２００６年
%
川医学奖学金同学会科研
启动基金（１０１号）
［通讯作者］ 李国锋，Ｅｍａｉｌ：ｌｇｆｎｆ＠ｆｉｍｍｕ．ｃｏｍ
［作者简介］ 李国锋，博士，教授，主要从事生物药剂学方面研
究
Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）是由多药耐药蛋白１（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ１，ＭＤＲ１）基因编码的能量依赖性膜蛋白，
可发挥外排泵作用，将细胞内的化合物逆浓度梯度
转运至胞外，从而降低细胞内的药物浓度。Ｐｇｐ是
最早研究的通过ＡＴＰ供能的药物外排泵，是一个相
对分子质量约１７０×１０３的膜蛋白，其中蛋白质部分
为１４０×１０３，属于 ＡＢＣ（ＡＴＰｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｅ）转运
体超家族。近年的研究发现，存在于肠上皮细胞刷
状缘膜中的Ｐｇｐ能将药物从浆膜侧泵回至黏膜侧
而进入肠腔排出，导致药物透膜吸收减少，血药浓度
降低，因此这是受Ｐｇｐ调控作用药物生物利用度降
低的主要原因之一［１２］。
中药十八反是中医界沿袭数千年的用药禁
忌［３４］，多年来医者都以此为禁区。特别是近几年来
“十八反”成为现代药性理论争议最多的问题，其焦
点集中在其作为配伍禁忌的合理性。甘草与芫花是
其中一对典型的反药对，很多学者对这两味药合用
后药理及毒理作用等进行过研究。黄文权等［５］证
实甘草与芫花合用后对大鼠心、肝、肾脏组织有不同
程度损害。肖成荣等［６］研究了甘草、芫花合用对大
鼠肝脏细胞色素Ｐ４５０酶的影响，表明两药合用对药
物代谢酶的影响可能会使某些药物毒性成分在体内
代谢特征发生改变，对药物的疗效或毒性产生影响。
由于 Ｐｇｐ的底物特异性很大程度上与细胞色
素Ｐ４５０相似［７］，二者有很多重叠的底物，如维拉帕
米、耐非地平、紫杉醇以及环孢菌素等。有报道，
Ｐｇｐ与 ＣＹＰ３Ａ４［８９］还可相互诱导，并且都分布在
肠、肝、肾等器官。所以作者推测甘草与芫花药对合
用后有可能对肠黏膜Ｐｇｐ产生影响，从而产生毒性
反应。因此，在本研究中，笔者采用 ｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ
实验技术来分析甘草与芫花合用前后对 Ｐｇｐ的底
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物———罗丹明（Ｒ１２３）经肠黏膜透过的影响，探讨甘
草与芫花合用后在肠中转运是如何对 Ｐｇｐ的调控
产生影响，此外还选择荧光素钠（ＣＦ）作为对照药物
进行试验。因为两者转运机制不同，Ｒ１２３是主动转
运，是ＡＴＰ结合盒转运蛋白的一种外排转运蛋白Ｐ
ｇｐ的底物，而ＣＦ是被动转运（细胞旁路途径），而且
这２种药物都是作为各自转运机制的典型药物而被
广泛用于各种药理实验中，从而试图找出甘草与芫
花合用产生毒性反应的可能作用机制之一。
１ 材料
１．１ 动物
Ｗｉｓｔａｒ大鼠，雄性，体重（２５０±２０）ｇ，由南方医
科大学实验动物中心提供，合格证号 ＳＣ×Ｋ（粤）
２００６００１５。动物实验的方法符合南方医科大学实
验动物伦理委员会的有关规定和要求。
１．２ 药物
甘草、芫花购自广东广弘药材有限公司 ，经南
方医科大学中医药学院张宏伟副教授鉴定，甘草为
豆科植物 Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａ的干燥根及根茎，产自
内蒙古，芫花为瑞香科植物 Ｆｌｏｓｇｅｎｋｗａ的干燥花
蕾，产自安徽。
１．３ 试剂
罗丹明１２３（批号０４６Ｋ３６８８），荧光素钠（批号
０４７Ｋ０６７６），Ｈｅｐｅｓ２［４（２ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）１ｐｉｐｅｒａｚｉ
ｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ，批号 ０１６Ｋ５４３３１），Ｔｒｉｚｍａ
ｂａｓｅ［Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ），批 号
１０３Ｋ５４１１］均购自美国 Ｓｉｇｍａ公司；戊巴比妥钠购
自中国医药 （集团）上海化学试剂厂 （批号
ＷＳ２００５１１２９），其余试剂为国产分析纯。
１．４ 仪器
ＲＦ－５３０１荧光分光光度计（ＳＨＩＭＡＤＺＵ，日
本）；ＴＧＬ－１６Ｂ台式离心机（上海安亭科学仪器
厂）；台式 ｐＨ１０００型酸度计（ＥＵＴＥＣＨ，新加坡）；
７ｍＬｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ装置（Ｈａｒｖａｒｄ，美国）。
２ 方法
２．１ 药液制备
２．１．１ 中药提取液 甘草称重后加入１５倍量的蒸
馏水，浸泡９０ｍｉｎ后煎煮，以煮沸后６０ｍｉｎ作为提取
时间，煮好药液冷却后用布氏漏斗过滤，再将提取液
用蒸发皿浓缩至１Ｌ相当于原生药５００ｇ，即为甘草
水煎液，芫花水煎液制备同上，质量浓度也为５００ｇ·
Ｌ－１，甘草、芫花合煎液按１∶１称重混合后制备方法同
上，药物生药含量为１ｋｇ·Ｌ－１，甘草、芫花合并液则
先分别制备１ｋｇ·Ｌ－１甘草提取液和芫花提取液，再
将两提取液１∶１混合，得到甘草、芫花合并液，合煎液
与合并液中甘草、芫花的剂量均为５００ｇ·Ｌ－１。
２．１．２ ＨＥＰＥＳ缓冲液 取 Ｈｅｐｅｓ约０６ｇ，精密称
定，溶于８０ｍＬ蒸馏水中，使之完全溶解。通入混合
气体（９５％Ｏ２５％ＣＯ２）１０ｍｉｎ后，加入０１８ｍＬＫＣｌ
（３ｍｏｌ·Ｌ－１），０１８ｍＬＣａＣｌ２（１ｍｏｌ·Ｌ
－１），００８
ｍＬＭｇＳＯ４（１ｍｏｌ·Ｌ
－１），０８１８ｇＮａＣｌ，完全溶解后
用Ｔｒｉｓ溶液（１ｍｏｌ·Ｌ－１）调节 ｐＨ至 ７４，再加入
０５ｍＬ葡萄糖溶液（１ｍｏｌ·Ｌ－１），用蒸馏水稀释至
１００ｍＬ，混匀即得。
２．１．３ 试验用药物溶液 分别将Ｒ１２３或 ＣＦ溶解
在ｐＨ７４的Ｏ２／ＣＯ２气体饱和的ＨＥＰＥＳ缓冲液中，
这种 ＨＥＰＥＳ溶液每天制备，实验用 Ｒ１２３或 ＣＦ的
最终浓度均为４ｍｇ·Ｌ－１。
２．２ 罗丹明１２３和荧光素钠的测定方法学考察
罗丹明的激发波长为４８５ｎｍ，发射波长为５３５
ｎｍ，可在此波长下测定罗丹明的荧光强度。罗丹明
１２３在１０～２００μｇ·Ｌ－１，荧光强度对浓度进行回
归，Ｙ＝０２６０５Ｘ＋０３２１２（ｒ＝０９９９８），线性关系
良好，回收率和日间精密度分别为９９３％和０４％。
荧光素钠的激发波长４８０ｎｍ，发射波长５２０ｎｍ，
试验浓度２００～２０００μｇ·Ｌ－１，线性关系良好，回归
方程为Ｙ＝０２６３５Ｘ＋１６５４１（ｒ＝０９９９７），回收率
和日间精密度分别为９９４％和０６％。
２．３ Ｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ实验［１０］
将２５只Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠随机分为 甘草组、芫
花组、合煎组、合并组以及对照组（灌胃生理盐水），
每组５只，分别灌胃已配好的相应药液（２０ｍＬ·
ｋｇ－１），每日２次，连续７ｄ。观察各组大鼠一般情
况，记录大鼠每天体重变化。实验大鼠给予样品１
周后，禁食 １６～１８ｈ，３
&
戊巴比妥钠（３２ｍｇ·
ｋｇ－１）腹腔注射麻醉，延腹中线将腹部切开２５ｃｍ
左右，胃下５ｃｍ处为空肠（空肠约１０ｃｍ），在空肠
前端插入塑料管（内径２ｍｍ）结扎，空肠末端剪开
一小口后，轻缓地用０９％生理盐水冲洗干净，分离
空肠置ＨＥＰＥＳ缓冲液中，冰浴培养５ｍｉｎ，剪取３～
４ｃｍ长的肠段，迅速分离筋膜层，将肠黏膜固定于
扩散池上。吸收方向实验时（从黏膜侧到浆膜侧的
转运，ＭＳ），黏膜侧加入３７５℃试验用药物溶液７
ｍＬ，浆膜侧加入等体积同温度的 ＨＥＰＥＳ缓冲液；分
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泌方向实验时（从浆膜侧到黏膜侧的转运，ＳＭ），黏
膜侧加入缓冲液，浆膜侧加入试验用药物溶液。在
混合气体的作用以及３７５℃水浴保温下，分别于
１５，３０，４５，６０，７５，９０和１２０ｍｉｎ在底物的接收侧取
样０５ｍＬ，同时补充０５ｍＬ缓冲液。各份取样后
的样品离心后于冰箱中保存直到进行荧光分析。
２．４ 表观渗透系数（Ｐａｐｐ）计算方法
计算公式为：Ｐａｐｐ＝ｄＱ／ｄｔ×（１／Ａ·Ｃ０），单位：
ｃｍ·ｓ－１，其中ｄＱ／ｄｔ表示稳态时时间累计透过量线
性回归所得的斜率，Ａ为有效渗透面积（１７８ｃｍ２），
Ｃ０为加入药液侧初始药物浓度。
２．５ 统计方法
实验结果用 珋ｘ±ｓ表示，所有实验数据均采用
ＳＰＳＳ１３０统计软件进行显著性检验（双样本 ｔ检
验），显著性标准为Ｐ＜００５。
３ 结果
３．１ 甘草对罗丹明１２３经空肠转运的影响
甘草对Ｒ１２３经空肠ＭＳ方向和ＳＭ方向转运
的影响（图１，表１），５００ｇ·Ｌ－１的甘草可显著提高
Ｒ１２３吸收方向的转运，而 Ｒ１２３分泌方向虽有增加
趋势，但无统计学意义。
图１ 灌胃甘草后Ｒ１２３经大鼠空肠黏膜的经时
透过曲线图（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
表１ 各种药液对Ｒ１２３经空肠黏膜转运的Ｐａｐｐ
的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别
Ｐａｐｐ／×１０－５ｃｍ·ｓ－１
Ｍ→Ｓ Ｓ→Ｍ
ＰａｐｐＳ→Ｍ
／ＰａｐｐＭ→Ｓ
对照 １１４±０５７ ４３８±１１８ ３８４
甘草 ２３７±０６４ ５２４±３９８１） ２２１３）
芫花 ２１２±０９６２） ２９８±０５９１） １４０４）
合煎 １６９±１７２２） １９９±１３４１） １１７４）
合并 １５５±０３８２） ２４６±１１６１） １５９４）
注：与 ＳＭ对照组比较１）Ｐ＜００５；与 ＭＳ对照组比较２）Ｐ＜
００５；与对照组比较３）Ｐ＜００５，４）Ｐ＜００１
３．２ 芫花对罗丹明１２３经空肠转运的影响
芫花对Ｒ１２３经空肠ＭＳ方向和ＳＭ方向转运
的影响（图２，表１），５００ｇ·Ｌ－１的芫花对罗丹明１２３
的转运有积极影响，降低了分泌方向的转运，同时提
高了吸收方向的转运。
图２ 灌胃芫花后Ｒ１２３经大鼠空肠黏膜的经时
透过曲线图（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
３．３ 甘草芫花合用对罗丹明１２３经空肠转运的影响
甘草芫花合用后对Ｒ１２３经空肠ＭＳ方向和Ｓ
Ｍ方向转运的影响（图３，表１），灌胃甘草芫花合煎
液和合并液后，Ｒ１２３经空肠黏膜的分泌方向减少和
吸收方向增加均有统计学意义，尤其是合煎组对
Ｒ１２３分泌方向转运的影响比芫花组和合并组更加
明显，Ｐａｐｐ为 １９９×１０
－５ ｃｍ·ｓ－１，对照组则为
４３８×１０－５ｃｍ·ｓ－１。
图３ 甘草芫花合用后Ｒ１２３经大鼠空肠黏膜的经时
透过曲线图（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
３．４ 甘草、芫花对荧光素钠经空肠转运的影响
考察甘草、芫花及其合用后对ＣＦ经空肠ＭＳ方
向和ＳＭ方向的影响（图４，表２）。甘草对ＣＦ经空
肠黏膜吸收和分泌方向的透过性均无显著影响；而给
大鼠灌胃芫花后，ＣＦ分泌和吸收方向透过率都呈显
著降低趋势，说明芫花可以显著降低ＣＦ的透过性；当
甘草与芫花合用后对 ＣＦ的影响与单独灌胃芫花相
似，而且其分泌和吸收方向透过比芫花组更少。
４ 讨论
体外Ｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ实验在研究药物的肠吸收
和代谢方面已有一定的应用［１０１１］，药物可以在肠段
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图４ 各种药液对ＣＦ经大鼠空肠黏膜吸收方向的经时
透过曲线图（Ａ）和分泌方向的经时透过曲线图（Ｂ）
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
表２ 各种药液对ＣＦ经空肠黏膜转运的Ｐａｐｐ
的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别
Ｐａｐｐ／×１０－５ｃｍ·ｓ－１
Ｍ→Ｓ Ｓ→Ｍ
ＰａｐｐＳ→Ｍ
／ＰａｐｐＭ→Ｓ
对照 ７８７±１２１ ９３２±１１７ １１８
甘草 ６８３±１０５ ７６８±１８３ １１２
芫花 ２３８±０８６１） ３５４±０５９２） １４９
合煎 １７６±０６９１） ２６９±０４２２） １５３
合并 ２２７±０６２１） ３６７±０３２２） １６２
注：与Ｍ→Ｓ对照组比较１）Ｐ＜００１；与 Ｓ→Ｍ对照组比较２）Ｐ＜
００１
特定的位置吸收和通过，通过 ＨＰＬＣ方法或分光光
度法测定特定肠段的药物量，然后根据药物的有效
渗透系数来评价药物吸收的动力学变化。该技术模
拟胃肠道生理环境、操作简单，而且现今大多数药物
为口服给药方式，因此 Ｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ实验在将来
会有越来越广泛的应用（在药物吸收研究中有实用
价值）。由于药物首先是从肠腔吸收至黏膜层的上
皮细胞到固有层，固有层存在很多微血管和淋巴细
胞，药物就在此被吸收入血液循环中，但是药物会有
小部分透过黏膜肌层，因此需要分离除去肠黏膜上
的肌层组织，减少药物与肌细胞的结合等因素对实
验结果带来的影响。
Ｒ１２３是Ｐｇｐ的典型底物，由于其检测方便，在
细胞模型中评价Ｐｇｐ中已有广泛应用，现在国际上
也已用于口服药物吸收利用度研究中，特别是在评
价Ｐｇｐ对口服药物的吸收和分泌的影响［１２１３］。本
实验对照组测得 Ｒ１２３在空肠中的转运渗透系数分
泌方向大于吸收方向，泵出比（ｅｆｌｕｘｒａｔｉｏｓ，即 ＥＲ＝
Ｐａｐｐｓｍ／Ｐａｐｐｍｓ）约为３８４，表明其在小肠中的转运是
以分泌为主，说明泵出系统的存在。ＣＦ则为旁细胞
途径转运药物，其转运不受 Ｐｇｐ介导，分泌与吸收
方向Ｐａｐｐ近似相等，本实验中 ＥＲ＝１１８，因此常作
为Ｒ１２３的对照药物被广泛用于各种生物药剂学实
验中。而且这２种化合物容易分析，都具有可见光
范围的荧光，检测灵敏度高。因此本研究选择Ｒ１２３
和ＣＦ作为模型药物来评价甘草与芫花对Ｐｇｐ的调
控作用。
近年来，人们发现了一些中草药的成分具有抑
制Ｐｇｐ活性的作用，例如姜黄色素、绿茶中的儿茶
酚、胡椒碱等。中药十八反中的甘草与芫花合用后
毒性增加，是否由于两者合用对肠黏膜中 Ｐｇｐ产生
影响，抑制了 Ｐｇｐ的表达，从而使有毒成分的分泌
减少，吸收增加而导致其产生毒性作用，并不清楚；
目前国际上探讨肠黏膜 Ｐｇｐ的表达同中药配伍合
理性之间的研究也尚未见，文献仅报道了日本学者
曾做过小柴胡汤对 Ｐｇｐ表达影响的研究［１４］，因此
探讨中药相反药对合用后毒性增加是否与 Ｐｇｐ表
达的改变有关对揭示中药十八反的科学内涵具有理
论意义。
本研究发现５００ｇ·Ｌ－１的甘草可以增加 Ｒ１２３
经空肠黏膜的吸收，而对其分泌的影响则无统计学
意义，可以推断甘草可能是ｐｇｐ的轻度抑制剂。日
本研究者渡边由香［１５］曾使用人 Ｐｇｐ膜，探讨在 Ｐ
ｇｐ基质维拉帕米存在下芍药甘草汤对 ＡＴＰａｓｅ活性
的影响，结果表明芍药甘草汤及其组成生药甘草对
维拉帕米的ＡＴＰａｓｅ活性呈剂量依赖性抑制，且作用
主体是甘草，表明甘草可能是 Ｐｇｐ的抑制剂，从而
促进药物吸收，这与笔者的结果相符。大鼠灌胃同
剂量芫花后，Ｒ１２３分泌方向减少和吸收方向增加均
有统计学意义，表明芫花是一种较强的 Ｐｇｐ抑制
剂，而甘草与芫花合用后对 Ｒ１２３透过的影响与单
用芫花相似，但是其Ｐａｐｐ变化值更大，可能是甘草对
芫花有协同作用，使其毒性成分吸收增加，这可能是
是两者配伍产生毒性的机制之一。
在评价甘草与芫花对旁细胞转运药物 ＣＦ影响
的实验中，甘草对ＣＦ转运的影响没有统计学意义，
因此甘草增加底物药 Ｒ１２３物吸收是通过抑制存在
于肠黏膜的Ｐｇｐ活性产生的。而芫花组ＣＦ分泌和
吸收都显著减少，可能与芫花使细胞之间紧密连接
加强，引起旁细胞途径药物渗透的降低有关。合煎
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组与合并组对 ＣＦ作用与芫花组类似，但是３组实
验ＥＲ分别为１４９，１５３和１６２，与对照组无显著
差异，这可能不是甘草与芫花合用产生毒性的原因。
总之，研究发现甘草与芫花均可抑制 Ｐｇｐ的表
达，而且两者合用后对 Ｐｇｐ的抑制作用增强，甘草
与芫花的协同作用使有毒成分吸收增加，这可能是
甘草芫花合用产生毒性的一种机制。但是在本实验
中，只做了１种浓度的药液，而很多药物对 Ｐｇｐ的
影响都具有浓度依赖性和饱和性，因此，在未来的实
验中，应该增加多浓度药液的相关实验；另外，肠道
内空肠、回肠以及结肠药物对它的渗透能力的影响
也往往存在部位差，而本实验只关注了空肠部位的
透过性，这些在未来的研究中都应改进完善，从而阐
明甘草与芫花对Ｐｇｐ影响的确切机制。
［致谢］ 日本京都药科大学药剂系山本昌教授对 ｕｓ
ｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ实验方法和技术给以帮助和指导。
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ｔｅｓｔｉｎａｌＰｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｂｙｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｓａｎｄｔｈｅｉｒ
ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｂｙｉｎｖｉｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄｉｎｓｉｔｕａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．
ＩｎｔＪＰｈａｒｍ，２００６，３１３（１／２）：４９．
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ＥｆｅｃｔｏｆＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａａｎｄＤａｐｈｎｅｇｅｎｋｗａｏｎｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｒｈｏｄａｍｉｎｅ
１２３，ａＰｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓｕｂｓｔｒａｔｅａｃｒｏｓｓｒａｔｊｅｊｕｎｕｍｍｅｍｂｒａｎｅｓｉｎｖｉｔｒｏ
ＨＵＡＮＧＢｅｉｂｅｉ１，ＬＩＧｕｏｆｅｎｇ１，ＲＥＮＦｅｉ１，ＴＡＮＧＺｈｏｎｇｋｕｎ２，ＭＡＨｕａｆｅｉ１，ＳＵＮＹａｂｉｎ１，
ＣＨＥＮＬｉｊｉｎｇ１，ＹＡＮＧＬｉｎｇ１
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＮａｎｆａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＰｈａｒｍａｃｙＣｏｌｅｇｅ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａａｎｄＤａｐｈｎｅｇｅｎｋｗａｏｎｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ
ｔｉｃｓｏｆｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（Ｒ１２３），ｏｎｅＰｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ（Ｐｇｐ）ｓｕｂｓｔｒａｔｅ，ａｃｒｏｓｓｔｈｅｊｅｊｕｎｕｍｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ａｎｄｔｈｅｎａｐｐｒｏａｃｈｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅ
ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｄｒｕｇｓａｆｔｅｒｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＧｉｎｆｌａｔａａｎｄＤｇｅｎｋｗａｉｎｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｐｅｒｍｅ
ａｂｉｌｉｔｙｏｆＲ１２３ｏｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｓｏｄｉｕｍ（ＣＦ）ｖｉａＷｉｓｔａｒｒａｔｊｅｊｕｎｕｍｍｅｍｂｒａｎｅｓｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｉｎｖｉｔｒｏｄｉｆｕｓｉｏｎｃｈａｍｂｅｒｓｙｓｔｅｍａｆｔｅｒ
ｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｄｉｆｅｒｅｎｔｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓａｎｄ０９％ ｓｏｄｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ（２０ｍＬ·ｋｇ－１）ｆｏｒ１ｗｅｅｋ．ＡｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＲ１２３
ｏｒＣＦｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｆｌｕｏｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅａｐｐａｒｅｎｔｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ（Ｐａｐｐ）ｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｂｙｔｈｅｅｑｕａｔｉｏｎ
Ｐａｐｐ＝ｄＱ／ｄｔ×（１／Ａ·Ｃ０），ｗｈｅｒｅＰａｐｐｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｃｍ／ｓ，ｄＱ／ｄＴｗａｓｔｈｅｓｌｏｐｅｏｆｔｈｅｌｉｎｅａｒｐｏｒｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓ，Ａ
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第３３卷第２１期
２００８年１１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２１
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００８
ｗａｓｔｈｅｄｉｆｕｓｉｏｎａｒｅａ，ａｎｄＣ０ｗａｓｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｒｅｂａｍｉｐｉｄｅｉｎｔｈｅｄｏｎｏｒｓｉｄｅ，ａｎｄｔｈｅｎｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｉｒｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅ
ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＡｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＧｉｎｆｌａｔａｄｅｃｏｃｔｉｏｎ，Ｄｇｅｎｋｗａｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄｄｅｃｏｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｍ
ｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｒｅｖｉｏｕｓｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓ，ｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｖｅｄｉｒｅｃｔｅｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｆＲ１２３ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ
ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ）．Ｏｎｔｈｅｏｔｈｅｒｈａｎｄ，Ｄｇｅｎｋｗａｃｏｕｌｄａｌｓｏｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｅｃｒｅｔｏｒｙｄｉｒｅｃｔｅｄｔｒａｎｓｐｏｒｔ（Ｐａｐｐ＝２９８±
０５９），ｗｈｉｌｅｎｏａｃｔｉｏｎｏｆＧｉｎｆｌａｔａｗａｓｆｏｕｎｄｏｎｔｈｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｆＲ１２３（Ｐａｐｐ＝５２４±３９８）ａｃｒｏｓｓｔｈｅｊｅｊｕｎｕｍｔｉｓｓｕｅｓ，
ｗｈｉｌｅＰａｐｐｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓ４３８±１１８．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ＧｉｎｆｌａｔａｈａｄｎｏｅｆｅｃｔｏｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｆＣＦａｃｒｏｓｓｔｈｅｊｅｊｕｎｕｍｔｉｓｓｕｅｓ，ｔｈｏｕｇｈ
ｔｈｅｏｔｈｅｒｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＣＦ，ａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｇｉｎｆｌａｔａｍａｙｓｌｉｇｈｔｌｙｉｎ
ｈｉｂｉｔＰｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｍｂｒａｎｅ，ｗｈｉｌｅＤｇｅｎｋｗａｍａｙｂｅａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｓｔｒｏｎｇｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＰｇｐ．Ｆｏｒａｎｏｔｈｅｒ，
ｓｏｍｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｉｎＤｇｅｎｋｗａｉｎｈｉｂｉｔＰｇｐｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄｓｏｍｅｏｔｈｅｒｓｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｔｈｅｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｅｌｓｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ
ｍｅｍｂｒａｎｅｔｏｄｅｃｒｅａｓｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＣＦ．ＡｓｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｏｎｔｏＰｇｐｗａｓｅｎｈａｎｃｅｄｂｙｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＧｉｎｆｌａｔａａｎｄＤｇｅｎｋｗａ，
ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ，ｉｔｍａｙｂｅｏｎｅｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃｒｅａｔｉｎｇｔｏｘｉｃｉｔｙｏｎｃｅｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＧｉｎｆｌａｔａａｎｄＤｇｅｎｋｗａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａ；Ｄａｐｈｎｅｇｅｎｋｗａ；Ｐｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｕｓｓｉｎｇｃｈａｍｂｅｒ；ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７１１２０
［基金项目］ 湖南省科技厅科技计划项目（０５ＪＴ１０８１）
［通讯作者］ 张赛丹，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｓａｉｄａｎｌｉ＠１２６．ｃｏｍ
甲基莲心碱对 ＬＰＣ诱导内皮细胞损伤的
保护作用及与 ＡＤＭＡ的关系
张赛丹，彭振宇，刘 韶，裴志芳，陈 峰，杨 柳
（中南大学 湘雅医院，湖南 长沙 ４１０００８）
［摘要］ 目的：观察甲基莲心碱对溶血性磷脂酰胆碱（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，ＬＰＣ）诱导血管内皮细胞损伤的
保护作用及其与非对称性二甲基精氨酸（ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃｄｉｍｅｔｈｙｌａｒｇｉｎｉｎｅ，ＡＤＭＡ）的关系。方法：１０ｍｇ·Ｌ－１的ＬＰＣ孵
育人脐静脉内皮细胞株（ＨＵＶＥＣ１２）２４ｈ或０１，１０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１甲基莲心碱预处理ＨＵＶＥＣ１２细胞１ｈ，再予
ＬＰＣ孵育细胞２４ｈ，收集细胞上清液测定一氧化氮（ＮＯ）、丙二醛（ＭＤＡ），ＡＤＭＡ含量和收集细胞测定细胞内活性
氧（ＲＯＳ）水平。结果：ＬＰＣ孵育ＨＵＶＥＣ１２细胞２４ｈ后细胞上清液中ＭＤＡ，ＡＤＭＡ含量及细胞内ＲＯＳ水平显著性
增加（Ｐ＜００５），细胞上清液中ＮＯ含量显著性降低（Ｐ＜００５）；０１，１０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１的甲基莲心碱预处理组
ＲＯＳ水平，ＭＤＡ，ＡＤＭＡ含量显著降低，ＮＯ含量显著性升高（Ｐ＜００５）。结论：甲基莲心碱对ＬＰＣ诱导的血管内皮
细胞损伤有保护作用，该作用可能与其降低ＡＤＭＡ水平有关。
［关键词］ 甲基莲心碱；内皮细胞；溶血性磷脂酰胆碱；非对称性二甲基精氨酸；脂质过氧化
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２１２５２６０４
动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）是危害人类
健康的常见疾病之一，是心、脑血管疾病的病理基
础。血管内皮细胞损伤是 ＡＳ血管早期的一个重要
病变特征，也是 ＡＳ发生的始动环节［１］。血管内皮
细胞合成与分泌的ＮＯ在维持血管结构和功能中起
重要作用。ＡＤＭＡ是一种主要的内源性一氧化氮合
酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）抑制剂，能竞争性抑
制ＮＯ合成，是ＡＳ血管内皮功能不全发生的重要机
制之一［２］。最近研究发现 ＡＤＭＡ水平升高与脂质
过氧化有关［３］。甲基莲心碱是从莲子心中提取的
一种双苄基异喹啉类生物碱，具有多种血管药理作
用［４５］。目前，甲基莲心碱对内皮细胞是否有保护作
用尚未研究。
氧化低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｓｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏ
ｔｅｉｎ，ｏｘＬＤＬ）导致的血管内皮损伤在 ＡＳ的病理过
程中起关键作用［６］。ＬＰＣ是 ｏｘＬＤＬ的主要活性成
分，在ｏｘＬＤＬ致病过程中起重要作用［７］。本实验观
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第３３卷第２１期
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