全 文 ：草乌药材 ‹°≤指纹图谱研究
赵英永t ou o崔秀明t ov 3 o戴 云u o苗 华w
kt1文山州三七科学技术研究所 o云南 文山 yyvsss ~u1云南民族大学 化学与生物技术学院 o云南
昆明 yxssvt ~v1文山三七科技创新中心 o云南 文山 yyvsss ~w1南阳师范学院 o河南 南阳 wzvsytl
≈摘要  目的 }采用 ‹°≤建立草乌药材的指纹图谱 ∀方法 }Žµ²°¤¶¬¯ ≤t{色谱柱kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l ~乙腈
2醋酸铵缓冲溶液ku1x ϕ冰醋酸2浓氨水 o³‹ ts1xlkysΒwsl为流动相 ~流速 t1s °#°¬±p t ~检测波长 uws ±° ~柱温 vs
ε ∀结果 }精密度和重复性试验中各共有峰相对峰面积的 • ≥⁄均小于 u h o所得的色谱图各色谱峰分离较好 o基线
平整 o符合指纹图谱有关规定 ∀结论 }本方法快速 !简便 !准确 !重复性好 o结果可靠 o可为草乌药材的质量评价提供
有效手段 ∀
≈关键词  草乌 ~‹°≤ ~指纹图谱 ~质量控制
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltv2tsxy2sv
≈收稿日期  ussx2sz2ut
≈通讯作者  3 崔秀明 oר¯ }ks{zyl{{{txvz o∞2°¤¬¯}¶¤±´ ¬vz ƒ
√¬³q¶¬±¤q¦²°
草乌为毛茛科植物北乌头 Αχονιτυµ κυσνεζοφφιι
的干燥块根 o具有祛风除湿 o温经止痛的功能 o用于
风寒湿痹 o心腹冷痛 o麻醉止痛等≈t  ∀主要成分为生
物碱 o其中中乌头碱 !乌头碱 !次乌头碱既是其有效
活性成分 o也是其毒性成分 ∀目前对草乌药材的鉴
别和质量控制仍然采用传统的物理和化学方
法≈t ou  ∀本研究参照5中药注射液指纹图谱技术要
求6和有关文献方法≈v ow  o研究不同产地草乌的
‹°≤指纹图谱 o为评价草乌资源和制定草乌药材质
量标准提供可靠的科学依据 ∀
1 仪器与试药
≥«¬°¤§½∏≤ p ts„ 高效液相色谱仪k日本l o包
括 ≤ p ts„×√³溶剂输送泵 o≥≤p ts„√³系统控制
器 o≥°⁄ p ts„√³rts„∂√³紫外2可见检测器 o≤ג p
ts„√³柱温箱 o⁄Š˜ p tu„在线真空脱气机 o¦¯¤¶¶2∏³
工作站 oŽp ss|袖珍数显笔式酸度计 ~乙腈k美国
©¬¶«¨µ公司l o三重蒸馏水k自制l o其他试剂为分析
纯 ∀对照品中乌头碱 !乌头碱 !次乌头碱由中国科学
院昆明植物研究所提供 ∀
样品来源及编号 }河北承德ktl !安徽亳州kul !
安徽亳州kvl !贵州kwl !河南南召kx o采集l !辽宁千
山ky o采集l !云南文山kz o采集l !河南确山k{ o采
集l !四川k| o采集l !内蒙古ktsl ∀
2 方法与结果
211 色谱条件 Žµ²°¤¶¬¯ ≤t{色谱柱kw1y °° ≅ uxs
°° ox Λ°l ~流动相乙腈2醋酸铵缓冲溶液ku1x ϕ冰醋
酸 o用浓氨水调 ³‹ ts1x左右lkysΒwsl ~流速 t1s °
#°¬±pt ~检测波长 uws ±° ~柱温 vs ε ~进样量 ts ˏ∀
212 对照品溶液的制备 精密称取对照品用乙腈
配制成含中乌头碱 !乌头碱 !次乌头碱分别为 s1tw o
s1sy{ os1tuw °ª#°pt的混合标准溶液 o冷藏备用 ∀
213 供试样品溶液的制备 精密称样品粉末 u1sss
ªo置于磨口的三角瓶中 o加入 ts h 的氨溶液 u1s
°o搅拌均匀 o加入 xs °乙醚 o超声 vs °¬±后再补
加 us °乙醚 o放置过夜 o过滤 o分别用 x °的乙醚
洗涤 v次滤渣 o合并醚液 o挥干 o用乙腈洗涤残渣定
容为 x °o冷藏备用 ∀
214 对照试验 吸取对照品溶液 ts ˏo按 211 项
下进样 o记录色谱图 o见图 t o理论塔板数按中乌头
碱计算分别不低于 w uss ∀
图 t 对照品 ‹°≤ 图
≥t1 中乌头碱 ~≥u1 乌头碱 ~≥v1 次乌头碱k图 u同l
#yxst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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∏¯¼ oussy
215 指纹图谱测定时间的确定及测定 吸取样品
溶液 ts ˏo按 211项下进样 o记录 ys °¬±色谱图 o结
果表明 vs °¬±后无有意义的峰出现 ∀另外 o在 vs
°¬±以后增大乙腈的比例分别为 zsΒvs o{sΒus o|sΒts
均没有峰出现 o故确定色谱图记录时间为 vs °¬±∀
色谱图见图 u ∀
图 u 草乌样品 ‹°≤ 指纹图谱
216 精密度试验 取同一份供试样品溶液 o按 211
项下连续进样 y次 o测得其各共有峰相对保留时间 !
相对峰面积的 • ≥⁄均小于 u h o说明精密度良好 o

符合指纹图谱要求 ∀
217 重复性试验 取 t号样品 y份 o按 213 项下操
作 o按 211项下分别进样 o测得其各共有峰相对保留
时间 !相对峰面积的 • ≥⁄均小于 u h o表明重复性较
好 o符合指纹图谱要求 ∀
218 稳定性试验 取同一份供试样品溶液 o按 211
项下分别在 s ou ow o{ otu ouw ovy ow{ «进样测定 o其各
共有峰相对保留时间 !相对峰面积的 • ≥⁄均小于
u h o表明样品溶液在 w{ «内稳定 o符合指纹图谱要
求 ∀
219 指纹图谱及各项技术参数
21911 峰相对保留时间 !相对峰面积的确定 通
过对草乌药材 ts个供试样品溶液 ‹°≤ 的分析 o≥t
号峰为中乌头碱 o含量最高 o且比较稳定 ∀因此 o以
其 ≥t号作为参照峰 o计算峰相对保留时间 Α~以 x
号样品的总峰面积为参照 o计算相对峰面积 Σµo得
到相对保留值指纹谱 o结果见表 t ∀
表 t ts个草乌样品的 ‹°≤相对峰面积 h
峰号 Α Σµt u v w x y z { | ts 平均值
t s qxu w qyx x qsw | qtz z qt| | qt| y qv| tz qz s qx y qyt uv qy | qss
u s qyv s qwz v qty s qzt u qsz u qsw t qzy t qvw s s v qzu t qxv
v s q{w s qww s q{w s q|s t qwv s q|x t qtx v qx| u qwz s qww { qz{ u qts
w s q{| s qvs s qu| s qws s q|t s qz| s qy| s qvu t qsz s qt t qy{ s qyy
≥t t qss ts qu tv qz tz qv v| qt uz qz tx qt tu qy vx qx v qsw | qw| t{ qw
y t qu| s qtw s qts s qt{ s qwx s quy t quz s s qxt s qus s qwx s qvy
≥u t qwy u qwx w q{{ v qxy v quu u qt| v qw{ t q{s y qyu s qyy t qwu v qsv
{ t q{w s qw| s qwv t qsv s q{z s qzz s q{u s q{| s qsy t qwu s q{t s qzy
≥v u qvy u q|u t| qt v qzz uw qv xu qu vt qx x q{w v qx| s qvt t qx{ tw qx
ts u qyy s qyt s qzs t qtz s q{x s qt| s qxw t quw s s q|| t qyy s q{s
tt v qz| s qvw u qxt s qxu t q|y t qvs t qyt s qxy s s s qvx s q|u
相对总面积 uv qs xs q{ v{ qz {u qv |z qy yw qv wx q{ xs qv tv q{ xv qx
21912 特征指纹峰 结合各个峰在 ts个样品中出
现的频率 o选出 α 值为 s1xu os1yv os1{w ot ot1wy o
t1{w ou1vy ou1yy ov1z|共 |个色谱峰为草乌的特征
指纹峰k在图 u中峰编号为 t ou ov o≥t o≥u o{ o≥v ots o
ttl ∀
21913 相似度的计算 相似度是从量的角度讨论
样品之间的相关性 ∀本实验以 ts批样品相对峰面
积的平均值为对照样品 o各样品与其比较 o利用计算
机辅助软件 o采用不同的计算方法 o计算出各个样品
的相似度 o结果见表 u ∀
3 讨论
311 检测波长的选择 对 uvs ∗ uys ±°扫描的各
波长下的色谱图进行分析比较 o在 uws ±°波长色谱
表 u ts批样品的相似度
样品 夹角余弦 相关系数 相似性比 指数相似系数
t s q|vt s q{|x s qxxx s qz|{
u s q|xt s q|tu s q{|y s qzv{
v s q|ts s q{yu s qz|z s q{zt
w s q|zs s q|yu s qy{x s q{u|
x s q{|x s q{yv s qwzw s q{tu
y s q{|s s q{ws s qzuw s qz{|
z s q{wx s qzxv s qzuw s qz|u
{ s qz|v s qzw| s qx|w s qx||
| s qyxt s qwzw s qvtx s qywx
ts s qyvx s qwux s qwyv s qxvt
图包含的信息量较大 o峰信号强 o各色谱峰分离较
好 o并且各峰的比例基本于实际情况吻合 o同时结合
v种乌头碱主要成分的吸收波长 o确定检测波长为
#zxst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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uws ±°∀
312 在色谱条件的选择过程中 o流动相的选择 o考
察了流动相为两相的 ‹°≤ 条件 ∀甲醇2磷酸盐缓
冲溶液k³‹ y1{l !乙腈2u ϕ冰醋酸水溶液及乙腈2醋
酸铵缓冲溶液ku1x ϕ冰醋酸 o用浓氨水调 ³‹ ts1x
左右lkysΒwsl的 v种条件 ∀经过比较分析 o第 v种
流动相及配比的条件下 o峰具有峰窄 o峰型对称 o基
线稳定的特点 o得到完整的 ‹°≤图 ∀
313 由表 u可以看出 o使用不同的相似度评价计
算公式 o在相同数学模型的基础上计算同样的数据
结果也不尽相同 o可能是考虑的因素重点不同 o因此
根据不同的相似度计算方法 o应制定合适的相似度
评价标准 o使结果具有一定的统一性 ∀由此可知 o相
关性研究的结果与实际产地的差异是一致的 ∀不同
产地的草乌药材指纹图谱有一定差异 o|个共有峰
相对保留时间符合程度较好 ∀但相对峰面积相差较
大 o表明各成分含量的相对比值有所不同 o即使是同
一产地k安徽亳州 u与 v号样品l o峰面积比值也有
差别 ∀
314 本方法稳定 !可靠 !重复性好 ∀研究结果进一
步证实 o从药材整体色谱图入手 o选取特征峰 o并大
致判断其峰位和比例关系 o构成该药材特有的色谱
指纹图谱全貌 o可以为药材质量的分析与控制提供
可靠的依据 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 q一部 qusss }t{| q
≈u  李家实 q中药鉴定学 q上海 }上海科学技术出版社 ot||y }z{ q
≈v  屠鹏飞 q中药指纹图谱制度的方法学讨论 q国际色谱指纹图
谱评价中药质量研讨会论文集 q广州 qusst q
≈w  屠鹏飞 q中药材及中药注射剂指纹图谱研究的体会 q中药指
纹图谱学术研讨会论文集 q上海 qusss q
Στυδιεσ ον ΗΠΛΧ φινγερπριντ οφ Ραδιξ Αχονιτι Κυσνεζοφφιι
‹„’ ≠¬±ª2¼²±ªtou o ≤˜Œ ÷¬∏2°¬±ªtov o⁄„Œ ≠∏±u o Œ„’ ‹∏¤w
(t . Ωενσηαν Πρεφεχτυρε Σανθι Σχιενχε ανδ Τεχηνολογψ Ρεσεαρχη Ινστιτυτε , Ωενσηαν yyvsss , Χηινα ;
u . Ψυνναν Νατιοναλιτιεσ Υνιϖερσιτψ, Κυνµινγ yxssvt , Χηινα ;
v . Ωενσηαν Σανθι Σχιενχε & ΤεχηνολογψΙννοϖατιον Χεντερ, Ωενσηαν yyvsss , Χηινα ;
w . Νανψανγ Νορµαλ Υνιϖερσιτψ, Νανψανγ wzvsyt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«·«¨ ‹°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·²© •¤§¬¬ „¦²±¬·¬Ž∏¶±¨ ½²©©¬¬q Μετηοδ : ׫¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¶¨³¤µ¤·¬²± º¤¶
³¨µ©²µ° §¨²± ¤ Žµ²°¤¶¬¯ ≤t{kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l ¨¯∏·¨§ º¬·«¤ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ²©¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2¤°°²±¬∏° ¤¦¨·¤·¨ ¥∏©©¨µku qx ϕ ¤¦¨·¬¦
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Ž∏¶±¨ ½²©©¬¬º µ¨¨ ²¥·¤¬±¨ §q Χονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§º¤¶¶¬°³¯¨o¤¦¦∏µ¤·¨ ¤±§µ¨³¨ ¤·¤¥¯¨qŒ·¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²© •¤§¬¬ „2
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[ Κεψ ωορδσ] • ¤§¬¬ „¦²±¬·¬Ž∏¶±¨ ½²©©¬¬~©¬±ª¨µ³µ¬±·~ ‹°≤ ~ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯
≈责任编辑 张宁宁 
本刊启事
本刊自 t||x年 t月 t日开始对来稿收取处理费k每篇 xs元 o有发票l o请作者在寄发稿件的同时将处理
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北京市东直门内南小街 ty号5中国中药杂志6社 o邮编 tsszss ∀
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