全 文 ：·研究报告·
中药含原粉制剂微生物限度检查方法的研究
张光华，代 红，余 立
（北京市药品检验所，北京 １０００３５）
［收稿日期］ ２００７０３１９
［通讯作者］ 张光华，Ｅｍａｉｌ：ｗｂｊ９８６６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
中国药典２００５年版［１］微生物限度检查增加了
方法学验证，并以最低稀释级供试液进行验证，中药
含原粉的制剂由于其细菌数限度为１万、３万、１０万
ｃｆｕ·ｇ－１，仅对最低稀释级供试液进行检验不能对
其检验结果下结论，在检验中仍然需要对稀释１００
倍、１０００倍的供试液进行检验。如果利用最低稀释
级供试液的常规法或培养基稀释法检验细菌的回收
率能够达到７０％，对稀释１００倍，１０００倍的供试液
检验可以直接进行。但如果利用最低稀释级供试液
的培养基稀释法检验细菌的回收率不能够达７０％，
需进行离心集菌法或薄膜过滤法检验才可以消除其
抑菌性，这样对稀释１００，１０００倍的供试液进行同
法检验增加了工作量，而实际上稀释１００，１０００倍
的供试液其检验量抑菌作用已经减少，并不需要采
用离心或薄膜过滤法检验。从理论上讲，对稀释
１００倍的供试液进行微生物限度检查方法学验证，
可得出小于１００ｃｆｕｇ－１或１００以上的结果，可直接
对中药含原粉制剂的微生物限度检查下结论。在欧
洲药典［２］中，检验稀释级的选择是依据产品的特性
及微生物限度来决定的，并非以最低稀释级进行。
拟以实验证明对于药典中细菌数限度为１万、３
万、１０万 ｃｆｕｇ－１的检品稀释１００倍进行细菌计数方
法学验证减少了工作量且结论科学有效。
１ 材料与仪器
调经养颜片、复方石斛片、通迪片、消乳癖片、妇
炎舒丸、脑心安片、乳安浓缩丸、大活络片、五虎散、丹
七片、加味七厘胶囊、痛风舒片。枯草芽孢杆菌［ＣＭ
ＣＣ（Ｂ）６３５０１］、金黄色葡萄球菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３］、
大肠埃希菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２］来自中国药品生物制
品检定所。营养琼脂培养基，营养肉汤培养基。低速
离心机ＡｎｋｅＴＤＬ－４０Ｂ、层流洁净工作台。
２ 方法
由于中药制剂对细菌、霉菌和酵母菌的抑菌性
不一，而霉菌和酵母菌的限度为１００ｃｆｕ·ｇ－１，这里
仅对以最低稀释级进行细菌计数验证和以１∶１００稀
释级进行细菌计数验证进行对比（就作者的经验来
看，中药制剂对霉菌和酵母菌抑菌性较弱，一般用培
养基稀释法即能消除）。由于中药含原粉制剂的供
试液都有沉淀，采用离心集菌或薄膜过滤法检验都
必须先用低速离心去除沉淀，而这一过程对细菌数
而言损失率很高，细菌的回收率低于４０％［３］，检验
结果的真实性降低。
２．１ 菌液制备 按照《中国药典》［１］２００５年版微生
物限度检查制备。
２．２ 供试液制备 取供试品１０ｇ，加入 ｐＨ７０无
菌氯化钠蛋白胨缓冲液至１００ｍＬ，振摇，制成１∶１０
的供试液。取１∶１０供试液１０ｍＬ，５００ｒ·ｍｉｎ－１５
ｍｉｎ，取出上清液，加入 ｐＨ７０无菌氯化钠蛋白胨
缓冲液补足１０ｍＬ，即为供试液①（用作薄膜过滤法
检验）。将供试液①３０００ｒ·ｍｉｎ－１２０ｍｉｎ，留底部
集菌液２ｍＬ，加入ｐＨ７０无菌氯化钠蛋白胨缓冲
液补足１０ｍＬ，即为供试液②。取 １∶１０供试液 １
ｍＬ，加入ｐＨ７０无菌氯化钠蛋白胨缓冲液９ｍＬ，
即为１∶１００的供试液。
２．３ 按照《中国药典》２００５年版微生物限度检查法
中常规法及培养基稀释法采用１∶１０的供试液对１２
种样品进行细菌计数方法学验证，结果金黄色葡萄
球菌、枯草芽孢杆菌回收率小于７０％。见表１。
２．４ 按照《中国药典》２００５年版微生物限度检查法
中离心与薄膜过滤法联用采用供试液①对６种样品
进行细菌计数方法学验证，冲洗液为ｐＨ７０无菌氯
化钠蛋白胨缓冲液，冲洗４次，每次１００ｍＬ。结果
大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率
均大于７０％。见表２。
２．５ 按照《中国药典》２００５年版微生物限度检查法
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
表１ 培养基稀释法（０２ｍＬ／皿）金黄色
葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率 ％
品名 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
调经养颜片 ８７ ４１
复方石斛片 ９２ ５７
通迪片 ９４ １０
消乳癖片 ７８ ５４
妇炎舒丸 ７７ ３９
脑心安片 ９１ ５２
乳安浓缩丸 ８０ ５９
大活络片 ６５ ２７
五虎散 ９３ ９
丹七片 ０ １７
加味七厘胶囊 ０ ０
痛风舒片 ０ ４
表２ 离心与薄膜过滤法联用细菌回收率 ％
品名
回收率／％
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌
大活络片 ９２ ８７ ８９
五虎散 ９５ ９３ ９４
丹七片 ９２ ９３ ９２
加味七厘胶囊 １００ ８９ ９２
痛风舒片 ８７ ９５ ９１
乳安浓缩丸 ９３ ８６ ９６
中离心集菌法和培养基稀释法联用采用供试液②对
６种样品进行细菌计数方法学验证，结果大肠埃希
菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均大于
７０％。见表３。
表３ 离心集菌法和培养基稀释法联用细菌回收率
％
品名
回收率／％
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌
调经养颜片 ９６ ９０ ９２
复方石斛片 １００ ９１ ８９
通迪片 ９７ ９４ １０２
消乳癖片 ９４ ９３ ９７
妇炎舒丸 １０７ ９６ １１２
脑心安片 ９９ ９１ １０１
２．６ 按照《中国药典》２００５年版微生物限度检查法
中常规法或培养基稀释法采用１∶１００供试液对１２
种样品进行细菌计数方法学验证，结果大肠埃希菌、
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均大于
７０％。见表４。
３ 结果与讨论
由表２～４可见离心与薄膜过滤法联用检验、离
心集菌法和培养基稀释法联用检验，大肠埃希菌、金
黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均大于７０％，
表４ １∶１００供试液常规法或培养基
稀释法细菌回收率 ％
品名及每平皿
加样量（ｍＬ）
回收率／％
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌
调经养颜片 ９３ ８４ ９２
复方石斛片 ９６ ９２ ９５
通迪片 ９３ ９５ ９３
消乳癖片 １０９ ９１ ９７
妇炎舒丸 ８７ １０２ ９３
脑心安片 １０７ ８９ ９６
乳安浓缩丸 ９７ ９６ １０４
大活络片 ９３ ８７ １０１
五虎散 ９９ ９５ ９１
丹七片 ９７ ８４ １００
加味七厘胶囊 ９８ ９４ ９５
痛风舒片 １０５ ８９ ９２
采用１∶１００供试液用常规法或培养基稀释法检验大
肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均
大于７０％。３种方法细菌回收率无差别。
中药含原粉的制剂如果被微生物污染，由于其
细菌数限度１万、３万、１０万 ｃｆｕ·ｇ－１，仅对１∶１０的
供试液进行检验不能对其结果下结论，仍然要对稀
释１００倍，１０００倍的供试液进行检验。如果对最低
稀释级供试液进行验证需采用离心与薄膜过滤法联
用检验或离心集菌法与培养基稀释法联用检验，对
稀释１００倍、１０００倍的供试液进行检验也需同法进
行，方法复杂，工作量巨大。由于离心弃沉淀的过程
会造成细菌数不同程度的损失，细菌的回收率低于
４０％，检验结果的真实性大打折扣。
采用１∶１００的供试液用常规法或培养基稀释法
进行验证，对稀释１０００倍的样品进行检验可直接
进行，方法简单易行。由于未对其进行前处理，不会
造成细菌数的损失，数据真实可靠。可得出小于
１００ｃｆｕ·ｇ－１或１００以上的结果，可直接对其检验结
果下结论。实际工作中，已经采用１∶１００的供试液
用常规法或培养基稀释法对护肝宁片、京制牛黄解
毒片、四季三黄片、冠脉宁颗粒、回春如意胶囊、消炎
片、活血通脉片进行微生物限度检查细菌计数方法
学验证其回收率均大于７０％。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：附录ⅩⅢＣ．
［２］ 欧洲药典５．０Ｐ１５４．
［３］ 张光华，余 立．离心弃沉淀处理对药品微生物限度检查结果
影响的考察［Ｊ］．中国药物应用于监测２００７（２）．
［责任编辑 鲍 雷］
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