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Effects of Jianwei Yuyang granule on inflammatory reaction and .F-κB expression in rat gastric mucosa of ulcer healing and recurrence

健胃愈疡颗粒对愈合和复发胃溃疡大鼠胃黏膜炎症反应及.F-κB表达的影响



全 文 :健胃愈疡颗粒对愈合和复发胃溃疡大鼠胃黏膜
炎症反应及 ‘ƒ2ϑ…表达的影响
凌江红 t3 o陈业强 t o李家邦 u o潘宇政 t o曹 阳 v o申定珠 u
kt1广西医科大学 第一附属医院 中医科 o广西 南宁 xvssut~ u1中南大学 湘雅医院 中西医结合研究所 o
湖南 长沙 wtsss{~ v1广西医科大学 附属口腔医院 病理科 o广西 南宁 xvssutl
≈摘要   目的 }观察健胃愈疡颗粒 k• ≠ ≠ l对愈合和复发胃溃疡大鼠胃黏膜炎症反应及核因子 2ϑ…k‘ƒ2ϑ…l蛋
白及 °• ‘„表达的影响 ∀方法 }采用改良 ’®¤¥¨醋酸涂抹法复制大鼠胃溃疡模型 o腹腔注射 Œ2tΒ致溃疡复发 o观
察愈合和复发胃溃疡的病理组织学改变 o测定再生黏膜炎症细胞密度及 ‘ƒ2ϑ…蛋白及 °• ‘„的表达 ∀结果 }• ≠ ≠
能改善溃疡愈合质量 o显著降低溃疡复发率 !减低再生黏膜炎症细胞密度 o抑制 ‘ƒ2ϑ…蛋白及 °• ‘„的活化和表达
量 ∀结论 }• ≠ ≠可能通过抑制 ‘ƒ2ϑ…的活化减轻炎症反应发挥其促溃疡愈合及抗溃疡复发的活性 ∀
≈关键词   胃溃疡 ~核因子 2ϑ…~炎症反应 ~健胃愈疡颗粒
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussyltz2twxw2sw
≈收稿日期   ussx2s{2ts
≈基金项目   广西壮族自治区教育厅科研项目 k桂教科研
≈ussw us号 l~湖南省科技计划重点项目 k su≥≥≠tssx2wl
≈通讯作者   3 凌江红 oר¯}kszztlxvxyxtxo ∞2°¤¬¯} ¬¯±ª
­¬¤±ª«²±ªƒ ¶¬±¤1¦²°
近年来 o消化性溃疡复发的炎症机制受到学者
们的关注 ≈t  ∀核因子 2ϑ… k‘ƒ2ϑ…l是一种重要的多
功能核转录因子 o参与许多基因特别是炎症反应相
关基因的表达及调控 ∀健胃愈疡颗粒 k• ≠ ≠ l是治
疗消化性溃疡的有效中成药 o其能抑制炎症细胞因
子如肿瘤坏死因子 2Αkבƒ2Αlo白介素 2tΒkŒ2tΒl
表达 o降低 t年复发率 ≈u2w  o本研究在此基础上 o探讨
• ≠ ≠是否可以通过降低 ‘ƒ2ϑ…表达 o抑制炎症反
应 o以发挥抗溃疡复发作用 ∀
1 材料
111 动物
清洁级 ≥⁄大鼠 {s只 o雌雄各半 o体重 txs ∗
uss ªo由广西医科大学实验动物中心提供 o并饲养
在该中心动物实验室 ∀
112 药物
• ≠ ≠是湖南湘雅制药有限公司产品 o主要药
物有柴胡 !党参 !白芍 !延胡索 !白及 !珍珠粉 !青黛 !
甘草等 o批号 usswsvsx∀奥美拉唑肠溶片 }山东鲁
南制药有限公司产品 o批号 swstsu∀
113 试剂与主要仪器
合成人 Œ2tΒ为英国 ° ³¨µ²·¨¦«公司产品 ~‘ƒ2
ϑ…³yx k• ¨¯ „ l„¥2t兔多克隆抗体为美国 ¤¥ ∂ ¬2
¶¬²±公司产品 ~即用型快速免疫组化  ¤¬ ∂ ¬¶¬²±试
剂盒 o辣根过氧化物酶标记的多聚羊抗兔 ŒªŠo• 2二
联氨苯胺 k⁄„…l显色试剂盒购自福建迈新公司 ∀
‘ƒ2ϑ… ³yx °• ‘„原位杂交试剂盒 k地高辛标记的
寡核苷酸探针 l武汉博士德生物工程公司产品 ∀病
理图像分析仪 }德国莱卡 ⁄ • n ±xxs∀
2 方法
211 分组与造模
将 {s只大鼠随机分为 x组 o即正常组 ktu只 l!
假手术组 ktu只 l!模型组 kuw只 l! • ≠ ≠ 组 kty
只 l!奥美拉唑组 kty只 l∀采用改良 ’®¤¥¨醋酸涂
抹法制作大鼠实验性胃溃疡模型 ≈u  o假手术组用生
理盐水代替醋酸 ∀术后 uw «开始灌胃 o正常组 !假
手术组 !模型组予灌服蒸馏水 o• ≠ ≠ !奥美拉唑组
分别给予 • ≠ ≠ !奥美拉唑药液 k均以蒸馏水配制 o
剂量分别为 tyuos1vy °ª# °pt lo量均为 ts °#
®ªpt o每天 t次 ∀各组于造模后 ty §颈椎脱臼法处
死半数 k模型组为 trvl大鼠 o取胃 ∀ |s §后 o将模型
组剩余大鼠随机分为模型组与模型复发组 o据文献
≈x 采用 Œ2tΒ复制胃溃疡复发模型 o正常组 !假手
术组 !模型复发组 !• ≠ ≠组 !奥美拉唑组大鼠腹腔
注射 k¬³l Œ2tΒ t Λª# ®ªpt o模型组大鼠 ¬³等量生
理盐水 ∀ w{ «后 k即造模后 |u §l处死所有大鼠 o取
#wxwt#
第 vt卷第 tz期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ tz
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
胃 ∀
212 观察指标
21211 胃窦表面观察 取胃后沿胃大弯剪开 o肉眼
观察胃黏膜面色泽 !有无糜烂 !溃疡等 ∀
21212 胃窦光镜观察 在造模处即胃前壁胃小弯
角切迹下 o剪取含溃疡部位约 t ¦° ≅ t ¦°胃组织
k无溃疡者在相应部位取材 lowh多聚甲醛固定 o常
规脱水 !石蜡包埋 o切片 o‹∞染色 o光镜观察 ∀在愈
合部位或溃疡边缘随机选取 x个高倍视野 o病理图
像分析仪下计数每个高倍视野 k面积 vx{ zzu Λ°u l
中再生黏膜慢性炎症细胞和中性粒细胞个数 o分别
取其均值为慢性炎症细胞和中性粒细胞密度 ∀
21213 ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白的免疫组化 kŒ‹ l检测 按
快速免疫组化  ¤¬ ∂ ¬¶¬²±试剂盒说明书操作 o
‘ƒ2ϑ… ³yx的工作浓度为 tΒtxs∀
21214 ‘ƒ2ϑ… ³yx°• ‘„的原位杂交 kŒ≥‹ l检测
针对 ³yx靶基因的 °• ‘„序列为 }xχ2 „ŠjŠ ŠŠ≤„×
Š≤Š≤× ×≤≤Š≤ ׄ≤„„ Š×Š≤Š2vχ~xχ2Š≤≤„Š „ׄ2
≤„ Š„≤Š„ ×≤Š×≤ „≤≤ŠŠ „×׊„ 2 vχ~xχ2 Š≤׊„
׊Š„Š ׄ≤≤≤ ׊„ŠŠ ≤ׄׄ „≤×≤Š 2 vχ∀杂交
液按 tΒv稀释 ∀操作按说明书 ∀
213 结果判断及统计学方法
以胞核出现棕黄或棕褐色颗粒为 ‘ƒ2ϑ…阳性
表达 ∀以医学图像分析系统测量阳性细胞密度即阳
性反应细胞面积 r测量框面积 o所测数据以 cξ ? σ表
示 ∀采用 ≥°≥≥ tv1s统计软件对数据进行处理 o多组
间比较用 ’± 2¨• ¤¼ „‘’∂ „进行分析 o方差齐采用
≥⁄方法 o方差不齐采用 פ°«¤± π¨¶×u∀相关性分
析用 ≥³¨ ¤µ°¤±等级相关分析 ∀
3 结果
311 胃窦表面观察
正常和假手术组大鼠胃黏膜皱襞有序 o黏膜色
淡红 o表面无溃疡 !糜烂 !充血 !水肿 ∀ ty §除模型
组中 v例见浅小溃疡外 o余大鼠黏膜面未见溃疡 o但
见原造模处或稍凹陷或稍凹凸不平 o色稍苍白 o黏膜
皱襞结构紊乱 o胃壁局部增厚 ∀ |u §o溃疡在原造模
部位复发 o模型复发组 !奥美拉唑组 !• ≠ ≠组复发
率分别为 {z1xsh oux1ssh otu1xsh o• ≠ ≠组与模
型复发组比较 Π  s1sto与奥美拉唑组比无统计学
差异 ∀
312 光镜观察
31211 组织学改变 正常和假手术组大鼠胃组织
结构正常 o黏膜腺体排列有序 o仅于黏膜固有层见少
量淋巴细胞 ∀ ty §模型组再生黏膜较周围黏膜薄 !
腺体稀疏 o呈不同程度扩张 o排列紊乱 o间质有较多
淋巴细胞 !浆细胞和中性粒细胞等急慢性炎症细胞
浸润 o再生黏膜下依次为慢性炎性肉芽组织 !疤痕组
织 o疤痕组织内可见较多炎症细胞 ∀与模型组相比 o
• ≠ ≠ !奥美拉唑组再生黏膜层较厚 o腺体扩张程度
较轻 o排列较整齐 o炎症细胞浸润较少 ∀ |u §o模型
复发组复发溃疡边缘可见残留的再生黏膜 o其中大
量中性粒细胞浸润 o• ≠ ≠组 !奥美拉唑组再生黏膜
较厚 o修复较完全 o腺体排列较整齐 o炎症细胞浸润
较少 ∀
31212 炎症细胞密度比较 • ≠ ≠能显著减低愈
合和复发胃溃疡大鼠胃黏膜炎症细胞浸润的密
度 kΠ s1st或 s1sxlo与奥美拉唑组比较无显著差
别 k表 tl∀
表 t 各组 ty §和 |u §炎症细胞密度比较 kcξ ? σl 个
组别
剂量
r°ª# °pt
ν ty § |u §慢性炎症细胞 中性粒细胞 慢性炎症细胞 中性粒细胞
正常 p y wqyw ? tquw squw ? sqtv xqwt ? uqvw sqvy ? sqtw
假手术 p y xqtu ? tqtw squ| ? sqt{ yqwz ? uqvs sqvs ? sqtt
模型 p { yzq|u ? twqzwtoul uzqv{ ? xqsstoul uzqvt ? xqwytoul tsqtx ? tqwutoul
模型复发 p { p p xxqts ? tsqwwtouowl t|{qsv ? ysq|ttouovl
• ≠ ≠ tyu { uzqyu ? {q|utouovl tsqux ? vqwvtouo vl vtqzy ? ttquvtouoyl w|qyu ? twq|wtouoxl
奥美拉唑 s1vy { u|qzx ? {qw|touovl |qtt ? vqwutouovl vuqwy ? wqwvtouoyl yvquv ? usqx|touoxl
注 }与正常组比较 tl Π  sqst~与假手术组比较 ul Π  sqst~与模型组比较 vl Π  sqstowl Π  sqsx~与模型复发组比较 xl Π  sqstoyl Π  sqsx
k表 u同 l
313 ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„表达的比较
31311 ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„表达的细胞定位
‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„在胞浆和胞核均有棕黄
染色 o与其具有的失活和活化两种状态一致 ∀正常
和假手术组主要在胃黏膜层上皮细胞胞浆表达 ∀ ty
§o愈合溃疡再生黏膜胞浆 !胞核均有表达 o胞核表达
主要位于固有层间质炎症细胞和部分腺上皮细胞 o
胞核染色强于胞浆 o°• ‘„阳性表达呈棕褐色颗粒
#xxwt#
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状 o经 • ≠ ≠治疗后胞核表达减少 o胞浆表达增多 ∀
|u §o模型复发组溃疡边缘黏膜胞核表达明显增多 !
染色增强 o炎症细胞胞核呈强阳性 ∀而 • ≠ ≠组表
达则以胞浆为主 o奥美拉唑组表达与 • ≠ ≠组相似 ∀
31312 ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„阳性细胞密度的
比较 • ≠ ≠能显著减低愈合和复发胃溃疡大鼠胃
黏膜 ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„的阳性细胞密度
kΠ s1st或 s1sxlo与奥美拉唑无显著差别 k表 ul∀
表 u 各组 ty §和 |u §‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„阳性细胞密度的比较 kcξ ? σl h
组别
剂量
r°ª# °pt
ν ty § |u §‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白 ‘ƒ2ϑ… ³yx °• ‘„ ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白 ‘ƒ2ϑ… ³yx °• ‘„
正常 p y squz ? sqs| sqw| ? sqt{ sqwx ? sqt{ sqwx ? sqtz
假手术 p y sqv| ? sqtu sqxu ? sqtv sqxy ? sqts sqw{ ? squt
模型 p { wqst ? tqsxtoul uqvw ? sqxvtoul tqzy ? sqzwtoul tqsv ? squttoul
模型复发 p { p p {qyx ? tqtutouovl xqv{ ? tquttouovl
• ≠ ≠ tyu { uq|y ? sqwytouowl tqy| ? sqtttouo wl wqz| ? sq|wtouoxl vqty ? sq|ytouoxl
奥美拉唑 s1vy { uq{| ? sqxztouowl tqzx ? sqtztouowl wqtw ? sq{ztouoxl vqsx ? sqx{touoxl
314 ‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及 °• ‘„阳性细胞密度与炎
症细胞密度的相关性分析
≥³¨ ¤µ°¤±相关分析显示 o‘ƒ2ϑ… ³yx蛋白及
°• ‘„阳性细胞密度均与慢性炎症细胞密度呈显著
正相关 kρ€ s1yzv~s1ywvoΠ s1sx lo与中性粒细胞
密度呈显著正相关 kρ€ s1{s|~s1{uyoΠ  s1stl∀
4 讨论
‘ƒ2ϑ…是一种作用广泛的转录因子 o通常以非
活性状态存在于胞浆中 o当细胞受到 בƒ!弗波脂
k° „l等刺激时 o从细胞质易位到细胞核 o与特定
基因启动区域上针对 ‘ƒ2ϑ…的特定序列结合 o调控
特定基因如前炎症介质 k如 בƒ2ΑoŒ2t和 Œ2y l!
黏附分子 !趋化因子 ≈如单核细胞趋化蛋白 2tk ≤°2
tl和 Œ2{ 和一些炎性相关酶类的过度或持续表
达 o使大量的炎性细胞浸润于炎症部位 ≈y  ∀本实验
结果显示 o愈合溃疡存在组织学的异常 o炎症细胞密
度增加 o‘ƒ2ϑ…存在失活和活化 u种状态 o‘ƒ2ϑ…活
化表达与炎症细胞密度呈正相关 o提示由 ‘ƒ2ϑ…激
发的黏膜炎症反应 o可能是影响溃疡愈合质量的关
键 ∀而经 • ≠ ≠治疗 o愈合溃疡 ‘ƒ2ϑ…表达 !炎症
细胞密度均显著减低 o组织学改善 o说明 • ≠ ≠ 能
抑制 ‘ƒ2ϑ…的活化和表达 o从而抑制炎症细胞的浸
润 o改善溃疡愈合质量 ∀
作者首次证实 o在 Œ2tΒ诱导的复发胃溃疡
‘ƒ2ϑ…是激活的 o同时 o炎症细胞密度显著增加 ∀已
有研究 ≈to xo zo { 证实 oŒ2tΒ诱导的复发胃溃疡是一
炎症相关过程 o疤痕黏膜中性粒细胞的浸润是由细
胞间黏附分子 2tkŒ≤„ 2tl r淋巴细胞功能相关抗原 2
tkƒ„2tl和 Œ≤„ 2tr巨噬细胞分子 2tk „≤ 2tl途径
及 בƒ2Αo ≤°2t等细胞因子介导的 ∀而 Œ2tΒo
Œ≤„ 2toבƒ2Α等黏附分子或细胞因子的调控区都
含有 ϑ…位点 o推测外源性 Œ2tΒ可能直接或通过
升高内源性 Œ2tΒ激活 ‘ƒ2ϑ…o ‘ƒ2ϑ…可激活它们
的转录 ≈|  o后者趋化炎症细胞 o由此导致放大的炎
症反应致溃疡复发 ∀• ≠ ≠组 ‘ƒ2ϑ…表达及炎症细
胞密度均显著低于模型复发组 o结合既往研究发现
• ≠ ≠能抑制 בƒ2ΑoŒ2tΒ的表达 ≈uo v  o提示 o • 2
≠ ≠可能通过抑制 Œ2tΒ诱导的 ‘ƒ2ϑ…激活 o抑制
炎症级联反应 o从而抗 Œ2tΒ诱导的胃溃疡复发 ∀
现代药理研究表明 o• ≠ ≠方中柴胡对渗出 !毛
细血管通透性 !炎症介质释放 !白细胞游走及结缔组
织增生等许多炎症过程都有影响 o其抗炎作用与强
的松龙相似 ≈ts  ~党参增强免疫 o白芍对 בƒ2ΑoŒ2
tΒ均有抑制 ≈tto tu  o甘草具有糖皮质激素样的抗炎
作用 o青黛清热解毒凉血 o对多种细菌具有抑菌作
用 o这些药物直接或间接的抗炎作用可能是本方改
善胃黏膜炎症的基础 ∀本实验表明 o抑制 ‘ƒ2ϑ…的
激活可能是 • ≠ ≠在消化性溃疡及其复发的防治中
发挥抗炎作用的机制之一 ∀
≈参考文献  
≈t  • ¤·¤±¤¥¨ ×o ‹¬ª∏¦«¬Žo פ±¬ª¤º¤×o ·¨¤¯q  ¦¨«¤±¬¶°¶²©³¨ ³2
·¬¦∏¯¦¨µµ¨¦∏µµ¨±¦¨} µ²¯¨²©¬±©¯¤°°¤·¬²±≈ q Œ±©¯¤°°²³«¤µ°¤2
¦²¯²ª¼o ussuotsktul}u|tq
≈u  陈文红 o李家邦 q健胃愈疡颗粒剂对胃溃疡大鼠胃黏膜 בƒ2
Α °• ‘„表达的影响 ≈ q中成药 o usssouukyl}wvvq
≈v  廖书胜 o李家邦 o周勇杰 o等 q健胃愈疡颗粒对胃溃疡大鼠
胃组织白细胞介素 tΒ °• ‘„表达的影响 ≈ q湖南中医学
院学报 o usswouwkwl}uvq
≈w  李家邦 o金益强 o陈国林 o等 q健胃愈疡片治疗消化性溃疡
的临床研究 ≈ q中西医结合杂志 o t||tottkvl}twtq
≈x  • ¤·¤±¤¥¨ ×o „µ¤®¤º¤×o ƒ∏®∏§¤×o ·¨¤¯q • ²¯¨²©± ∏¨·µ²³«¬¯¶¬±
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≈ q „° °¤·«²¯o t||zo txskvl}|ztq
≈y  ≤«¨ ± ƒ ∞o ‹∏¤±ª⁄ …o ≤«¨ ± ≠ ± o ·¨¤¯q ≤µ¼¶·¤¯ ¶·µ∏¦·∏µ¨ ²©
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·¬²± ©¤¦·²µ¬± ¦«µ²±¬¦¬±©¯¤°°¤·²µ¼ §¬¶¨¤¶¨ ≈ q ‘ ∞±ª¯  §¨o
t||zovvyktxl}tsyyq
≈ts  王浴生 o邓文龙 o薛春生 q中药药理与应用 ≈   q u版 q北
京 }人民卫生出版社 o t||{}|swq
≈tt  王 斌 o陈敏珠 o徐叔云 q白芍总甙对大鼠腹腔巨噬细胞产
生肿瘤坏死因子的调节机制 ≈ q中国药理学通报 ot||zotv
kvl}uxxq
≈tu  李 俊 o梁君山 o周爱武 q白芍总甙对 …淋巴细胞增殖和白
介素 t生成的调节作用 ≈  q中国药理学与毒理学杂志 o
t||w o{ktl}xvq
Εφφεχτσ οφ ϑιανωειΨυψανγ γρανυλε ον ινφλαµ µ ατορψ ρεαχτιον ανδ ΝΦ2ϑΒ
εξπρεσσιον ιν ρατ γαστριχ µ υχοσα οφ υλχερ ηεαλινγ ανδ ρεχυρρενχε
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u1 Ινστιτυτε οφ Ιντεγρατεδ ΤραδιτιοναλΧηινεσε ανδ ΩεστΜεδιχινε, Ξιανγψα Ηοσπιταλ, ΧεντραλΣουτη Υνιϖερσιτψ, Χηανγσηα wtsss{, Χηινα;
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¬±ª¤±§³µ¨√ ±¨··«¨ µ¨¦∏µµ¨±¦¨ ²©·«¨ ª¤¶·µ¬¦∏¯¦¨µ¥¼ ¶∏³³µ¨¶¶¬±ª·«¨ ¤¦·¬√¤·¬²± ²©‘ƒ2ϑ… ¤±§·«¨ ©²¯ ²¯º¬±ª¬±©¯¤°°¤·²µ¼ µ¨¤¦·¬²±1
[ Κεψ ωορδσ] ª¤¶·µ¬¦∏¯¦¨µ~ «¨ ¤¯¬±ª~ µ¨¦∏µµ¨±¦¨~ ‘ƒ2ϑ…~ ¬±©¯¤°°¤·²µ¼ µ¨¤¦·¬²±~ ¬¤±º ¬¨≠∏¼¤±ªªµ¤±∏¯¨
≈责任编辑 古云侠  
≈收稿日期   ussx2tt2sw
≈通讯作者   3 陶文沂 oר¯}ksxztl{{vusz|yo∞2°¤¬¯}±¬¨¬¬¤²«∏¤usssƒ tuyq¦²°
胃康复组方对小鼠 ≥t{s实体瘤的抑制
及其凋亡诱导作用
聂小华 t o史宝军 u o陶文沂 v3
kt1浙江工业大学 生物与环境工程学院 o浙江 杭州 vvsstw~
u1广东溢多利生物科技股份有限公司 o广东 珠海 xt|sys~
v1江南大学 生物工程学院 o江苏 无锡 utwsvyl
≈摘要   目的 }研究胃康复组方对小鼠 ≥t{s实体瘤的抑制 o探讨其诱导细胞凋亡作用 ∀方法 }造模 ≥t{s荷瘤
小鼠 o随机分为 x组 o胃康复组方按 xuxovxsotzx °ª# ®ªpt # §pt剂量灌胃给药 o造模对照组采用生理盐水灌胃给
#zxwt#
第 vt卷第 tz期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ tz
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