全 文 ：#研究论文 #
三七不定根的离体诱导与培养
高先富 o徐朝晖 o刘佳健 o马丽萍 o尹龙萍 o贾 伟 3
k上海交通大学 药学院 o上海 ussuwsl
≈摘要   目的 }探讨三七不定根的诱导与体外培养方法 ∀方法 }通过从大田栽培三七外植体 !再生苗外植体和愈
伤组织诱导 v种途径获得不定根 o考察 uow2二氯苯氧乙酸 kuow2⁄l!吲哚 2v2丁酸 kŒ…„l!萘乙酸 k‘„„l等植物生长物
质对不定根诱导的影响 o比较 w种不定根与其母体分离方式对其体外液体培养的影响 ∀结果 }v种方法均获得不定
根 o幼嫩花蕾愈伤组织是诱导不定根的理想材料 ~Œ…„诱导不定根的能力最强 ~采用将不定根连其母体组织一起在液
体培养系统中连续培养后再分离的方法建立了液体培养体系 ∀结论 }成功诱导三七不定根并建立了液体培养体系 ∀
≈关键词   三七 ~不定根 ~诱导
≈中图分类号   ≥ xyz ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt{2tw{x2sw
≈收稿日期   ussx2tt2sw
≈通讯作者   3 贾伟 o ר¯ k ƒ¤¬l} ksutl yu|vuu|uo ∞2°¤¬¯}
º ¬¨­¬¤ƒ ¶­·∏q §¨∏q¦±
三七 Παναξ νοτογινσενγ ƒ1‹1 ≤«¨ ±为五加科人
参属植物 o有止血 !补血 !强身 !治疗冠心病和脑血管
疾病等作用 ≈to u  ∀主要生长在云南文山和毗邻的广
西左右江地区 ∀近年来 o虽然云南省文山州大力发展
三七的 Š„°栽培基地 o但是由于三七生长周期长 !病
虫害严重以及 /老七地 0问题的存在 o导致三七资源与
需求矛盾不断扩大 o限制了三七产业的可持续发展 ∀
t|z{年 o首次报道了三七的组织培养研究 ≈v  o并
于 t|{|年建立了悬浮细胞培养体系 ≈w  ∀此后虽然开
展了三七悬浮细胞培养生产次生代谢产物的系列研
究 ≈xo y  o但是迄今未见工业化应用 ∀与此同时 o国际
上掀起了对人参的不定根培养研究热潮 o目前人参不
定根的培养已实现了工业化 ≈zo {  o显示了应用不定根
培养体系生产次生代谢产物的巨大优越性 ∀本试验
首次对三七不定根的诱导方法 !外源植物生长物质的
作用进行了研究 o进一步建立了体外液体培养体系 ∀
1 材料与方法
111 材料 三年生栽培三七 o云南省文山州三七科
学研究所惠赠 ∀
112 愈伤组织诱导与继代培养 大田栽培三七 o自
来水冲洗 o洗衣粉水中浸泡 u ∗ v «o再用自来水冲净 o
滤纸吸去植物表面多余水分 ∀分别切出花蕾 !叶 !叶
柄 !茎 !块根和须根 ozxh乙醇消毒 vs ¶o无菌水冲洗 u
次 o在 th ‘¤≤ ’¯溶液 k加入 u ∗ v滴 ׺¨¨ ±2usl中消
毒 x ∗ us °¬±∀消毒终止后用无菌水冲洗 x ∗ ts次 o
滤纸吸干水 o切割成不同大小的外植体 o置于含 u °ª
# pt uow2二氯苯氧乙酸 kuow2⁄l和 s1z °ª# pt激
动素 kŽ×l的  ≥琼脂培养基上诱导 x周得愈伤组织 ∀
取愈伤组织 o置于同样的培养基上进行继代培养 y个
月 ∀选取生长速度快 !色白至淡黄的愈伤组织供进一
步研究 ∀
113 再生苗 取上述幼嫩花蕾愈伤组织按文献 ≈| 
方法获得 ∀
114 不定根的诱导
11411 从大田栽培三七的外植体直接诱导不定根
取 112所述方法消毒的叶 !叶柄 !茎 !块根和须根外植
体 o分别放在  ≥固体培养基 k琼脂含量为 s1wxh l上
诱导 ys §∀培养基中添加 v °ª# pt Œ…„和 s1t °ª
# pt Ž×∀
11412 从愈伤组织诱导不定根 取继代培养 y个月
以上的不同部位愈伤组织置于添加 v °ª# pt Œ…„
和 s1t °ª# pt Ž×的 tru  ≥琼脂培养基上诱导不
定根 o于 kux ? tl ε 暗培养 x周 ∀
11413 从再生苗外植体诱导不定根 分别取再生苗
的根 !带根茎段 !茎段和幼叶共 w个部位的外植体置
于添加 v °ª# pt Œ…„和 s1t °ª# pt Ž×的 tru  ≥
琼脂培养基上诱导不定根 o于 kux ? tl ε 暗培养 x
周 ∀
2 结果
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211 外植体直接诱导不定根 为了研究不定根的形
成与外植体类型的关系 o分别取三七的须根 !块根 !茎
段 !叶柄和叶片进行不定根诱导 ∀ ts §后明显可见黄
色粒状愈伤组织产生 ovx §左右从须根愈伤组织上伸
出白色至黄色不定根 ∀ tw §可见叶柄外植体表面产
生白色 !紧密 !半透明状愈伤组织 o此后部分愈伤组织
产生白色球状突起 owx §左右在白色突起旁伸出白色
半透明状不定根 ∀此后随着不定根的伸长 o其上逐渐
密布大量白色短毛 o具有不定根的典型特征 ∀须根外
植体的不定根诱导率 kwv1yh l高于叶柄外植体
kvzh l∀块根和茎段未能诱导出不定根 o但是均形成
愈伤组织 o其中块根形成大量疏松且含水量极高的愈
伤组织 ∀叶片无不定根的形成 o叶片颜色暗黄 o推断
可能为消毒过度引起组织死亡 ∀
212 植物生长物质对外植体不定根诱导的影响 不
定根的形态建成是植物生长物质调控的结果 ∀本研
究以须根为外植体 o考察了 uow2⁄oŒ…„oŽ×及其组合
对不定根诱导的影响 o结果见表 touow2⁄oŒ…„和 Ž×
这 v种植物生长物质单独使用时只有 Œ…„具有诱导
外植体形成不定根的能力 ∀ Ž×的添加对不定根形成
率和愈伤化率基本上没有影响 ∀ uow2⁄对不定根的
诱导具有阻遏作用 o此时无论是否添加 Œ…„均不能诱
导出不定根 ∀因此 Œ…„是最适于从三七须根外植体
直接诱导不定根的植物生长物质 ∀
表 t 外源植物生长物质对外植体不
定根诱导的影响 kcξ ? σ, ν € vl
植物生长物质
r°ª# pt
诱导率 rh
不定根 愈伤组织
uow2⁄ t p tuqx ? uqt
Œ…„ v w{qz ? vqt {uqz ? wqu
Ž× sqt p p
Œ…„ v nŽ× sqt wyqw ? vqv zyq{ ? wqx
uow2⁄ t n Œ…„ v nŽ× sqt p yxqt ? uq{
注 }/ p 0代表没有从外植体诱导出不定根或愈伤组织
213 再生苗诱导不定根 对三七再生苗不同部位外
植体进行不定根诱导的结果表明 k表 ulo再生苗的各
个部位外植体均能形成不定根 ∀其中再生苗的带根
茎段外植体 k|w1th l比茎段外植体 kww1wh l获得更
好的不定根诱导率 o且不定根主要从根部诱导出 ∀不
连茎段的根外植体无论在不定根诱导率还是平均不
定根数方面均显著低于其他部位外植体 ∀
214 植物生长物质对愈伤组织诱导不定根的影响
植物生长物质种类及其质量浓度对不定根诱导率
表 u 再生苗各部位外植体的不定根诱导
外植体 诱导率 rh 不定根数
幼叶 zsqy zqvv ? tq{v
茎段 |tqv yqvv ? sqzz
带根茎段 |wqt xqzx ? sqzz
根 wwqw uqss ? squz
的影响实验表明 o低质量浓度的 Œ…„即可表现出对不
定根具有强烈的诱导能力 o其中 v °ª# pt Œ…„对于
三七不定根的诱导效果最好 k图 t„l~而 ‘„„在较高
质量浓度 k大于 t °ª# pt l时才具有明显的诱导不
定根能力 o‘„„随质量浓度增加不定根的诱导率逐
渐增加 ox °ª# pt时不定根的诱导率最高 k图 t≤l∀
在不定根的生根数方面 o随着 Œ…„质量浓度的增加不
定根的生根数迅速增加 ot °ª# pt Œ…„对不定根数
促进作用最显著 kx1u|个 r愈伤组织块 o图 t…l~而
‘„„在 v °ª# pt处诱导的不定根数才最多 kx1ux
个 r愈伤组织块 o图 t⁄l∀由此可见 oŒ…„无论是在不
定根的诱导率还是生根数方面均优于 ‘„„∀
图 t Œ…„和 ‘„„对三七不定根诱导的影响
实验材料均为相同的花蕾愈伤组织系 ~„o…1分别代表 Œ…„对不
定根诱导率 kh l和不定根生根数的影响 ~ ≤o⁄1分别代表 ‘„„
对不定根诱导率 kh l和不定根生根数的影响
215 不同部位来源的愈伤组织的不定根诱导之间的
差别 不同部位来源的愈伤组织其不定根诱导能力
之间具有显著差异 ∀结果表明 k见表 vlo幼嫩花蕾和
须根愈伤组织生成不定根的能力最强 k诱导率分别为
|x1yh和 |t1th lo且每块愈伤组织的不定根生根数
也最多 o其中花蕾愈伤组织的不定根生根数 ktu1tr愈
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第 vt卷第 t{期
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伤组织块 l!不定根长度 kts ∗ us °°l均高于其他部
位的愈伤组织 ∀虽然叶柄外植体具有较高的愈伤组
织诱导能力 o但是其愈伤组织再次分化形成不定根的
能力非常弱 ∀因而花蕾愈伤组织是不定根诱导的最
佳愈伤组织 ∀
表 v 不同部位来源愈伤组织对不定根诱导的影响
愈伤组织
不定根诱导
率 rh
生根数 r
块愈伤组织
根长
r°°
花蕾 |xqy tuqt ? u1|w ts ∗ us
叶片 wyqz uqy ? s1|{ y ∗ ts
叶柄 yqz t ? s1vt 约 x
茎段 tvqv tqx ? s1zt { ∗ t{
须根 |tqt xqt ? v1ys u ∗ y
注 }不定根诱导率 kh l € 生不定根的愈伤组织块数 r接种的愈伤
组织块数 ≅ tssh
216 不定根液体培养体系的建立 不定根从其母体
愈伤组织上脱离并在液体培养体系中繁殖是不定根
体外大规模培养的一个关键环节 ∀分别采用以下几
种方式将不定根从固体培养基上转入液体培养基中
培养 }≠切取不定根尖 k长度约 ts °°l~连根基的
不定根 ~≈连少部分愈伤组织的不定根 ~…不从母体
愈伤组织上切下直接进行液体培养 ∀结果发现前 v
种方式的不定根在液体中培养后不生长 o颜色逐渐发
暗并死亡 o而第 w种方式培养的不定根不断出现白色
侧根 o此后侧根不断伸长 ∀此种方式在液体培养基中
连续培养 u ∗ v次后即从愈伤组织上将不定根切下进
行扩大培养 o建立了液体培养体系 ∀另外 o作者在实
验中发现 ‘„„对于不定根继代培养过程中侧根的发
育却具有显著的促进作用 ∀
3 讨论
离体条件下不定根的形成受许多因素的影响 o如
外植体类型 !培养基种类 !植物生长物质的种类及浓
度等因素 ∀本试验分别从三年生大田栽培三七 !再生
苗和愈伤组织 v类不同形态和生理活性的诱导材料
在同样的培养基上获得了不定根 ∀比较 v类材料诱
导不定根的研究结果发现 o花蕾愈伤组织无论在不定
根的诱导率还是生根数方面均最好 ∀这可能是因为
从幼嫩花蕾诱导的愈伤组织其脱分化程度更彻底 ∀
植物生长物质是影响三七不定根诱导的关键因
素 ∀实验表明 Œ…„对三七不定根的诱导能力比 ‘„„
更强 o较低质量浓度的 Œ…„k如 t °ª# pt l即能获得
较高的诱导率 kyy1yzh l和不定根的生根数 kx1u|
个 r愈伤组织块 lo这与 ≥ ²¨对无梗五加 Ελευτηεροχοχ2
χυσσεσσιλιφλορυσ的研究结果正好相反 ≈{  o说明植物生
长物质对不定根诱导的效应可能与植物的种属差异
有关 ∀另外 o高质量浓度的植物生长物质 k如 v °ª#
pt Œ…„或 x °ª# pt ‘„„l促进不定根的诱导 o而较
低质量浓度的植物生长物质 k如 t °ª# pt Œ…„或 v
°ª# pt‘„„l提高了不定根的生根数 o暗示不定根
的诱导和大量繁殖对植物生长物质的浓度需求可能
是不同的 ∀
作者首次对我国特有的贵重药材三七进行了不
定根的诱导研究 o并建立了不定根的液体培养体系 ∀
不定根的培养属于分化水平高的植物器官培养 o一般
认为分化水平高的植物器官其次生代谢产物更易于
产生和大量积累 o而关于不定根有效成分的含量及其
与药材和悬浮细胞培养体系的比较则有待于今后进
一步研究 ∀如果进一步应用生物反应器和代谢工程
技术 o那么三七不定根培养体系将有可能成为生产三
七次生代谢产物的较为理想的体外培养系统 o从而为
三七活性成分的生产提供一条新的途径 ∀
≈参考文献  
≈t  肖培根 q新编中药志 ≈  q北京 }化学工业出版社 oussuq
≈u  ¬¤ • o Š¤² • ≠ q ׫¨ µ¤³¨ ∏·¬¦·µ¤±¶§¨µ°¤¯ ¤ª¨ ±·¶©²µ³¤¬± ¦²±·¤¬2
±¬±ª≤«¬± ¶¨¨ ° §¨¬¦¬±¤¯ «¨ µ¥¶≈ q ° ¤¯±·…¬²·¨¦«±²¯o ussvo xktl}
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≈v  郑光植 o梁 峥 q三七的组织培养 ≈ q植物学报 o t|z{o us
kwl} vzvq
≈w  郑光植 o王世林 o何静波 q三七 !人参和西洋参细胞悬浮培养的
比较研究 ≈ q云南植物研究 o t|{|o ttktl} |zq
≈x  «¤±ª ≠ o «²±ªq ≥¦¤¯ 2¨∏³ ²©¦¨±·µ¬©∏ª¤¯ ¬°³¨ ¯¯ µ¨¥¬²µ¨¤¦·²µ
©²µ«¼³¨ µ³µ²§∏¦·¬²± ²©ª¬±¶¨±ª¶¤³²±¬± ¤±§³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¥¼ «¬ª«2
§¨ ±¶¬·¼ ¦∏¯·¬√¤·¬²± ²©Παναξ νοτογινσενγ ¦¨¯¯¶≈ q …¬²·¨¦«±²¯ °µ²ªo
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≈y  • ¤±ª• o «¤±ª ≠ o «²±ªq ∞±«¤±¦¨° ±¨·²©ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ¥¬²2
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…¬²¯o ussxo yzkyl} zxuq
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Παναξ γινσενγ ≤q „q  ¼¨¨ µ¤±§ ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ³µ²§∏¦·¬²± ·«µ²∏ª«
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µ²²·¶²© Ελευτηεροχοχχυσ σεσσιλιφλορυσ ·«µ²∏ª« ·«¨ ¥¬²µ¨¤¦·²µ¦∏¯·∏µ¨
≈ q ° ¤¯±·…¬²·¨¦«±²¯o ussvo xkvl} t{zq
≈|  ≥«²¼¤°¤≠ o «∏÷ ÷ o ‘¤®¤¬• o ·¨¤¯q  ¬¦µ²³µ²³¤ª¤·¬²± ²©Παναξ
νοτογινσενγ ¥¼ ¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ± ¶¨¬¶¤±§• „°⁄ ¤±¤¯¼¶¬¶²©µ¨ª¨ ±2
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第 vt卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
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Αδϖεντιτιουσροοτ ινδυχτιον ανδ ιν ϖιτρο χυλτυρε οφΠαναξ νοτογινσενγ
Š„’ ÷¬¤±2©∏o ÷ ˜ «¤²2«∏¬o Œ˜ ¬¤2­¬¤±o  „ ¬2³¬±ªo ≠ Œ‘²±ª2³¬±ªo Œ„ • ¬¨
(Σχηοολοφ Πηαρµ αχψ, Σηανγηαι ϑιαο Τονγ Υνιϖερσιτψ, Σηανγηαι ussuws, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ¬±§∏¦·¬²± ¤±§ ¦∏¯·∏µ¨ ²©¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·²©Παναξ νοτογινσενγq Μετηοδ : ׫µ¨¨
º¤¼¶o ¬±§∏¦·¬²± ©µ²° ·«¨ ¬¨³¯¤±·¶²©·«µ¨ 2¨¼¨ ¤µ2²¯§Π. νοτογινσενγ1 ׫¨ ¬¨³¯¤±·¶²©µ¨ª¨ ± µ¨¤·¨§¶«²²·¶¤±§¦¤¯ ∏¯¶¨¶o º µ¨¨ ∏¶¨§·²¬±2
§∏¦¨ ¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·¶1׫¨ ©¨©¨¦·¶²©uo w2§¬¦«¯²µ²³«¨ ±²¬¼¤¦¨·¬¦¤¦¬§o ¬±§²¯ 2¨v2¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§¤±§ ±¤³«·«¼¯ ¤¦¨·¬¦¤¦¬§ ²± ¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶
µ²²·¬±§∏¦·¬²± º µ¨¨ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼1׫¨ ©¨©¨¦·¶²©©²∏µ°²§¨ ¶²©¶¨³¤µ¤·¬±ª¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·¶©µ²° ·«¨ ³¤µ¨±··¬¶¶∏¨ ¶²± ¦∏¯·∏µ¨
ιν ϖιτρο º µ¨¨ ¦²°³¤µ¨§q Ρ εσυλτ: „§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·¶º µ¨¨ ¶∏¦¦¨¶¶©∏¯ ¼¯ ¬±§∏¦¨§¥¼ ·«µ¨¨° ·¨«²§¶o ²©º«¬¦«·«¨ ¼²∏±ª ©¯²º µ¨¥∏§¦¤¯ ∏¯¶
º¤¶·«¨ ¥¨ ¶·°¤·¨µ¬¤¯ ©²µ·«¨ ¬±§∏¦·¬²± ²©¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·1Œ±§²¯ 2¨v2¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§³²¶¶¨¶¶¨§·«¨ ¶·µ²±ª¨ ¶·³²·¨±¦¼ ©²µ¬±§∏¦·¬²±1׫¨ ¬¯´2
∏¬§¦∏¯·∏µ¨ ¶¼¶·¨° º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §¥¼ ¦²±·¬±∏²∏¶¦∏¯·∏µ¨ ²©¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·¶·²ª¨·«¨ µº¬·«·«¨ ¬µ³¤µ¨±··¬¶¶∏¨ ¶¥¨ ©²µ¨ ¶¨³¤µ¤·¨§q Χον2
χλυσιον: ׫¨ ¤¦´∏¬¶¬·¬²± ¤±§¦∏¯·∏µ¨ ιν ϖιτρο ¬± ¬¯´∏¬§¦∏¯·∏µ¨ ¶¼¶·¨° ²©¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·¶²©Π. νοτογινσενγ ¤¯¼ ¤©²∏±§¤·¬²± ©²µ·«¨ ± ¬¨·
¬±√ ¶¨·¬ª¤·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] Παναξ νοτογινσενγ ; ¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶µ²²·~ ¬±§∏¦·¬²±
≈责任编辑 张宁宁  
紫花前胡分类位置修订的分子基础研究
刘春生 t3 o王朋义 u o陈自泓 v o王德群 w
kt1北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu~ u1内蒙古伊泰医药科技开发有限责任公司 o
内蒙古 赤峰 suwsss~v1广州中一药业有限公司 o广东 广州 xtstws~
w1安徽中医学院 o安徽 合肥 uvssv{l
≈摘要   目的 }从核 ⁄‘„ Œ×≥序列角度阐明紫花前胡分类位置修订的分子基础 ∀方法 }°≤• 扩增 !⁄‘„序列
测定 !分支分析法进行研究 ∀结果 }得到紫花前胡 !白花前胡 !白芷 !泰山前胡 !骨缘当归的 Œ×≥序列和系统发育树 o
其中紫花前胡和白芷 !骨缘当归聚为一组 o泰山前胡和白花前胡聚为另一组 ∀结论 }紫花前胡应为当归属植物 o紫
花前胡和白花前胡应分别入药 ∀
≈关键词   紫花前胡 ~Œ×≥序列
≈中图分类号   ≥ xyz ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt{2tw{{2sv
≈收稿日期   ussx2sv2s|
≈基金项目   国家自然科学基金资助项目 kvstzttwtl
≈通讯作者   3 刘春生 oר¯}kstsl{wzv{yuw2tzo∞2°¤¬¯}°¤¬
¬¯∏¦¶ƒ uyv1± ·¨
5中国药典 6记载 o中药前胡的基源植物为伞形
科前胡属植物白花前胡 Πευχεδανυµ πραερυπτορυµ
⁄∏±±1和紫花前胡 Π1 δεχυρσιϖυµ k ¬´1l  ¤¬¬°≈t  ∀
而 5中国植物志 6将紫花前胡学名修订为当归属植
物 Ανγελιχα δεχυρσιϖυµ k ¬´1l ƒµ¤±¦«1 ·¨≥¤√1≈u  o导
致紫花前胡的学名不能和国内外植物研究所用学名
接轨 ∀另外 o白花前胡和紫花前胡的化学成分差异
较大 o白花前胡主要含有白花前胡素类化合物 o紫花
前胡主要含有紫花前胡素类化合物 o药材形态差异
也较大 ≈v  ∀由于植物药成分的复杂性 o中药趋向于
采用单一或相近来源可同等入药的原则 o5中国药
典 6仅保留少数亲缘关系非常近 !成分差异较小的
种类同等使用 o如黄芪 !甘草等 ∀如果紫花前胡为当
归属植物 o前胡的基源就应该予以修订 o所以澄清紫
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第 vt卷第 t{期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy