全 文 ：血竭聚乳酸缓释微球的制备及体外释药研究
丁里玉，夏鹏飞，杨彩琴，林玉龙，王 静
（河北医科大学 药学院 无机物化教研室，河北 石家庄 ０５００１７）
［摘要］ 目的：制备血竭聚乳酸缓释微球，并对其体外释药特性进行考察。方法：以聚乳酸为载体，采用乳化
溶剂挥发法制备血竭聚乳酸Ｏ／Ｗ型缓释微球，考察了微球的粉粒学特征，并进行了体外溶出研究。结果：所制备
的血竭聚乳酸微球外形圆整，载药量为２１９７％，包封率为５５７６％，１６ｈ体外累积释药量为７６７１％。结论：血竭
聚乳酸微球具有很好的缓释能力，使用前景广阔。
［关键词］ 血竭；聚乳酸；缓释微球；体外释放
［中图分类号］Ｒ２８３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０５０３８８０３
［收稿日期］ ２００５１００１
［通讯作者］ 丁里玉，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６５６２２，Ｅｍａｉｌ：ｄｉｎｇ５６２２
＠１６３．ｃｏｍ
血竭具有抗炎、镇痛、抗细菌、真菌、止血和活血
化瘀、消肿止痛、祛腐生肌、止溃敛疮、加速微循环、
促进细胞新陈代谢等多种功能，为中医常用的活血
散瘀和止血药，临床上用于治疗外科、妇科、内科、五
官科、皮肤科的多种适应症。我国血竭资源匮乏且
市售血竭制剂品种单一。本实验采用乳化溶剂挥发
法制得血竭聚乳酸微球，以期达到缓释作用，为新剂
型的研究和资源的合理利用提供参考。
１ 仪器与试剂
ＤＦ－１０１Ｓ集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义
市英峪华仪器厂）；ＬＤＺ４－０８Ａ离心机（北京医用
离心机厂）；６０型无极调速电动搅拌机（江苏江阴科
研器械厂）；ＵＶ－２２００紫外分光光度仪（日本岛
津）；ＫＮＡＵＥＲ色谱仪；Ｋ－１００１泵；Ｋ－２５０１检测
器；Ｋ－１５００溶剂组合器（德国）；ＨＥＴＡＣＨＩＳ－
３５００Ｎ扫描电镜（日本）。
血竭（河北安国药材市场，经河北医科大学药
学院生药教研室聂凤?教授鉴定）；血竭素高氯酸
盐对照品（中国药品生物制品检定所，批号 ０８１１
２００２０３）；聚乳酸（山东医疗器械研究所，相对分子
质量２万，批号９３１０１３）；药用明胶（青岛四方区化
学试剂厂，批号８４０５２８）；甲醇、乙腈（色谱纯）、二氯
甲烷、无水乙醇等试剂均是分析纯。
２ 方法
２．１ 血竭聚乳酸微球的制备
采用乳化溶剂挥发法［１，２］制备血竭聚乳酸微
球，将适量的聚乳酸溶于有机溶媒中，并将一定比例
的血竭分散其中，超声使其溶解，在一定的搅拌速度
下，用注射器缓慢注入到分散介质（明胶溶液）中，
乳化一定时间后继续搅拌以挥发有机溶媒，然后离
心、过滤、干燥，即得血竭聚乳酸微球。
在单因素考察的基础上，选择影响微球性质较
显著的４个因素作为考察对象，即投药比（血竭∶聚
乳酸）、搅拌速度、分散介质（明胶）的浓度和有机相
中聚乳酸浓度，通过 Ｌ９（３
４）正交设计试验，优选最
佳工艺条件，见表１。
表１ 因素水平
水平
Ａ
投药比
Ｂ
搅拌速度
／ｒ·ｍｉｎ－１
Ｃ
明胶浓度
／％
Ｄ
ＰＬＡ浓度
／％
１ １∶１ ６００ １ ２
２ １∶２ ８００ ３ ５
３ １∶１５ １０００ ５ ８
２．２ 制备工艺重现性的考察
按正交试验结果得出的优化生产工艺条件，重
复实验５次，通过对各指标的测定，考察微球制备工
艺的重现性。
２．３ 微球的大小、分布
本实验用光学显微镜观察血竭微球，微球圆整
光滑，呈鲜红色，不粘连，粒径均匀。用扫描电镜观
察微球形貌，微球呈球形实体，彼此疏松分布，不粘
连，表面有褶皱、纤维状突起和小孔，是溶剂挥发过
程中形成的，粒径在７～４０μｍ，如图１。
２．４ 微球载药量和包封率的测定
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第３２卷第５期
２００７年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ５
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图１ 血竭聚乳酸微球
扫描电镜Ａ．×１５００；Ｂ．×３００
２．４．１ 检测波长的选择 在４００～６００ｎｍ对对照
品溶液进行扫描，结果血竭素在４４０ｎｍ附近有最大
吸收，聚乳酸和二氯甲烷在此波长处没有吸收，因此
将测定波长确定为４４０ｎｍ。
２．４．２ 标准曲线的建立［３］ 精密称取干燥至恒重
的血竭素高氯酸盐对照品４５ｍｇ，置２５ｍＬ棕色量
瓶中，加３％磷酸甲醇溶液，使溶解并稀释至刻度，
摇匀得０１３０７ｍｇ·ｍＬ－１（血竭素计算）对照品储
备液。分别精密吸取对照品储备溶液 １，１５，２，
２５，３，３５ｍＬ，置１０ｍＬ棕色量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，摇匀，即得血竭素对照品稀释溶液。按血竭素
质量＝血竭素高氯酸盐质量／１３７７７，转换成血竭
素质量浓度，吸取上述血竭素对照品稀释溶液各２０
μＬ，在上述色谱条件下测定峰面积。
２．４．３ 微球的载药量和包封率的测定 精密称取
血竭微球样品２０ｍｇ置具塞试管中，加入１ｍＬ二氯
甲烷，超声５ｍｉｎ使微球溶解，过滤至５ｍＬ棕色量
瓶中，加入３％磷酸甲醇溶液２ｍＬ，加甲醇至刻度，
摇匀，即得。取样品溶液２０μＬ，在上述色谱条件下
重复进样２次，测定峰面积值。
２．５ 微球的体外释放
２．５．１ 检测波长的确定 在４００～６００ｎｍ对对照
品含０８％山梨酸甲酯的４０％乙醇溶液进行扫描，
血竭素在４７５ｎｍ附近有最大吸收，空白辅料在此无
干扰吸收，因此将测定波长确定为４７５ｎｍ。
２．５．２ 标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的
血竭素高氯酸盐对照品２０ｍｇ，置５０ｍＬ棕色量瓶
内，加含０８％山梨酸甲酯的４０％乙醇超声使溶解，
加含０８％山梨酸甲酯的４０％乙醇至刻度，配制成
对照品溶液储备液（血竭素２９０３μｇ·ｍＬ－１），分别
精密吸取对照品储备溶液０５，１，２，３，４，５ｍＬ，置１０
ｍＬ棕色量瓶中，用含０８％山梨酸甲酯的４０％乙醇
稀释至刻度，摇匀，即得血竭素对照品稀释溶液，转
换成血竭素质量浓度，于４７５ｎｍ处测定吸光度。
２．５．３ 体外累积释放度的测定 精密称取血竭微
球９０ｍｇ，置透析袋内，同时加入５ｍＬ含０８％山梨
酸甲酯的４０％乙醇溶液，扎紧，将其置于（３７±１）
℃恒温磁力搅拌，转速为１００ｒ·ｍｉｎ－１，加入１００ｍＬ
含０８％山梨酸甲酯的４０％乙醇作为释放介质，定
时吸取释放液５ｍＬ，并立即补充介质５ｍＬ保持“漏
槽状态”，于４７５ｎｍ测定释放液的吸收度。
３ 结果
３．１ 正交试验结果
以（载药量 ＋包封率 －跨距）为指标对微球进
行综合评价，见表２。直观分析：由极差Ｒ确定主次
因素顺序 Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ，如表３，其中 Ａ因素：Ｋ１＞
Ｋ３＞Ｋ２；Ｂ因素Ｋ１＞Ｋ２＞Ｋ３；Ｃ因素：Ｋ１＞Ｋ３＞Ｋ２；Ｄ
因素：Ｋ２＞Ｋ１＞Ｋ３；由表４可知，影响微球形成的主
要因素是血竭和聚乳酸的投药比，其次为明胶质量
浓度、聚乳酸浓度和搅拌速度。因此确定 Ａ１Ｂ１Ｃ１Ｄ２
为较优处方，即投药比为 １∶１，明胶的质量浓度为
１％，聚乳酸浓度为５％，搅拌速度本着方便、安全选
择６００ｒ·ｍｉｎ－１。
表２ 正交试验结果
Ｎｏ． 综合指标 Ｎｏ． 综合指标
１ ９２６２ ６ ６０４１
２ ８８１６ ７ ７９９６
３ ８４９０ ８ ７４８６
４ ５０１５ ９ ６８２５
５ ５３０２
表３ 直观分析
水平 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
Ｋ１ ８８５６ ７４２４ ７５９６ ７１３０
Ｋ２ ５４５２ ７２０１ ６８８５ ７６１７
Ｋ３ ７４３６ ７１１８ ７２６２ ６９９７
Ｒ ３４０３ ３０６ ７１１ ６２１
表４ 方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 Ｆ比 Ｐ
Ａ １７５３１７８ ２ １１６８０１ ＜００５
Ｃ ７５９３３ ２ ５０５９
Ｄ ６４０３９ ２ ４２６６
Ｂ（误差） １５０１ ２
注：Ｆ００５（２，２）＝１９０００
３．２ 重现性实验
按照优化工艺制备的微球平均载药量为
２１９７％，ＲＳＤ为 ２０２％，平均包封率为 ５５７６％，
ＲＳＤ为２６４％，微球制备工艺重现性良好。
３．３ 微球载药量和包封率的测定
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以平均峰面积积分值Ｙ为纵坐标，以质量浓度为
横坐标，得回归方程 Ｙ＝２８２８４×１０６Ｘ＋３７８５１，ｒ＝
０９９９９，血竭素在１３０７～４５７５μｇ·ｍＬ－１线性关系良
好。平均回收率为１０２４％，ＲＳＤ２７２％（ｎ＝９）。计算
出微球的载药量为２１９７％，包封率为５５７６％。
３．４ 微球体外释放研究
标准曲线方程为 Ａ＝０１１０４＋００２８４Ｃ，ｒ＝
０９９９８，血竭素在１４５２～１４５２μｇ·ｍＬ－１线性关
系良好，平均回收率９９４３％，ＲＳＤ２７２％（ｎ＝９）。
计算微球累积释药量，对时间作图，同时以血竭粉末
作对照，如图２。
图２ 血竭微球体外释放曲线
４ 讨论
４．１ 制备工艺的影响因素
聚乳酸是一种无毒、无刺激性并具有很好的生
物相容性的生物可降解的药用高分子材料，在体内
降解为乳酸。载体的相对分子质量越大，微球的粒
径也越大，这可能与聚乳酸的黏度随相对分子质量
增大而增加有关。相对分子质量越低，聚乳酸在二
氯甲烷中的溶解度越大，而且进入体内降解时间短。
聚乳酸质量浓度高时得到较大的微球，微球黏连，质
量浓度过低导致载药量降低，甚至形成空白微球。
用聚乙烯醇作水相分散介质，形成微球粘连严
重，选择明胶作水相分散介质，由于其水溶性好，所
制得的微球圆整均匀，球径和分散性较好。明胶浓
度高时得到较小的微球，通过调节聚乳酸和明胶浓
度，微球大小可被控制在一定的范围。
二氯甲烷有相对较高的水溶性和较低的挥发
热，是溶剂挥发法制备聚乳酸微球最好的溶剂，故选
用二氯甲烷作有机溶媒。
搅拌速度快有利于溶剂挥发，固化微球，但载药
量会降低并出现空白微球，适宜的搅拌速度易于挥
发溶剂，也能得到球径分布范围窄的微球。
４．２ 体外释药研究
在体外释放实验中，选择适当的表面活性剂对
药物释放很重要，本实验曾选择用十二烷基硫酸钠
作表面活性剂，发现溶出很少药物，故选择用山梨酸
甲酯作表面活性剂，１６ｈ微球溶出７６７１％，说明血
竭微球体外具有缓释作用。有关血竭微球的体内吸
收情况尚有待于进一步研究。
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ＳａｎｇｕｉｓＤｒａｃｏｎｉｓｉｎｖｉｔｒｏ
ＤＩＮＧＬｉｙｕ，ＸＩＡＰｅｎｇｆｅｉ，ＹＡＮＧＣａｉｑｉｎ，ＬＩＮＹｕｌｏｎｇ，ＷＡＮＧＪｉｎｇ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｎｏｒｇａｎｉｃａｎｄＰｈｙｓｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｐｒｅｐａｒｅｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｏｆＳａｎｇｕｉｓＤｒａｃｏｎｉｓａｎｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｉｔｓｄｉｓ
ｓｏｌｕｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｗｉｔｈｐｏｌｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄ（ＰＬＡ）ａｓｃａｒｉｅｒｓｕｓｉｎｇｔｈｅｏｉｌｉｎｗａｔｅｒ
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ｓｍｏｏｔｈ，ｄｒｕｇｌｏａｄｉｎｇｒａｔｅｗａｓ２１９７％ ａｎｄｔｈｅｅｎｔｒａｐｍｅｎｔｒａｔｅｗａｓ５５７６％，ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｒｅｌｅａｓｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｗａｓ７６７１％ ｉｎ１６
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［责任编辑 鲍 雷］
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第３２卷第５期
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