全 文 ：·研究报告·
竹节人参中总皂苷提取工艺研究
向东山１，翟 琨２
（１．湖北民族学院 生物技术研究所 生物资源保护与利用湖北省重点实验室，湖北 恩施 ４４５０００；
２．湖北民族学院 化学与环境工程学院，湖北 恩施 ４４５０００）
［收稿日期］ ２００８０１１２
［基金项目］ 生物资源保护与利用湖北省重点实验室开放基
金（２００７０２０）
［通讯作者］ 向东山，Ｔｅｌ：１３４７７２１２５０１，Ｅｍａｉｌ：ｚｋ３１００＠ｓｉ
ｎａ．ｃｏｍ
竹节人参属五加科植物［１２］，兼具我国北药人参
和南药三七之功效，在民间有“草药之王”的美誉。
常用于治疗病后虚弱，肺结核咯血，产后血瘀腹痛，
寒湿脾痛，跌打损伤等症［３］，属我国特有珍贵中药
材资源。现代药理学研究表明，竹节人参主要活性
物质为皂苷类、多糖、氨基酸及少量的挥发性油
等［４］。在这些活性物质中，研究最多、功效最多的
为皂苷类化合物。它具有抑制肿瘤、抗炎、镇痛、镇
静、抗病毒、免疫调节、提高学习记忆能力、保护脑损
伤及心肌缺血损伤、抗衰老及抗疲劳等多方面的功
能［２，５７］。因此，加强对竹节人参皂苷的开发与利用
具有十分重要的现实意义。到目前为止，对竹节人
参皂苷类的研究主要集中在其临床应用方面，对其
提取工艺的研究还未见报道。为此，作者从竹节人
参总皂苷提取方法、提取溶剂以及影响总皂苷提取
各因素等方面，通过单因素和正交试验，探讨竹节人
参总皂苷的最佳提取工艺，为竹节人参的进一步开
发利用提供理论指导。
１ 材料
试验材料由湖北省中药材研究所提供，为家种
三年生的竹节人参根；人参皂苷对照品（批号
０７０８１１，含量９９５％），蒸馏水为双蒸水，其他试剂
均为分析纯。ＡＳＥ３００快速溶剂萃取系统；索氏提取
器；超声波提取仪；ＵＶ－２５５０型紫外可见分光光度
计。竹节人参置鼓风干燥箱中６０℃烘干，粉碎至全
部通过６０目筛孔，用适量的丙酮脱酯后热风吹干，
密封于干燥器中备用。
２ 方法
２．１ 试验设计
２．１．１ 提取方法选择 采用索氏提取、快速萃取、
超声提取３种提取方法，分别对竹节人参中皂苷进
行提取，以皂苷得率为指标，选择最佳提取方法。
２．１．２ 溶剂的选择 分别用甲醇、乙醇和水饱和的
正丁醇作为溶剂对竹节人参中皂苷进行提取，以皂
苷得率为指标，选择最佳溶剂。
２．１．３ 单因素试验 以料液比、提取时间、提取次数
及提取温度作为影响竹节人参皂苷得率的单因素，设
置各因素不同的水平，找出不同因素的适宜范围。
２．１．４ 正交试验 以单因素试验的结果为参考，对
料液比、提取时间、提取次数及提取温度进行４因素
３水平正交试验（表１）。以皂苷的得率为指标，通
过Ｌ９（３
４）正交试验确定最佳提取条件。
表１ 因素水平
水平
Ａ
料液比／ｇ·ｍＬ－１
Ｂ
提取时间／ｍｉｎ
Ｃ
提取次数
Ｄ
提取温度／℃
１ １∶１５ ２０ ２ ３０
２ １∶２０ ３０ ３ ４０
３ １∶２５ ４０ ４ ５０
２．２ 皂苷的提取方法
２．２．１ 索氏提取法 精密称取脱酯样品粉末２０
ｇ，用滤纸包好，置索氏提取器中，加入乙醚８０ｍＬ，
加热回流２ｈ，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，置于索氏
提取器中，加甲醇８０ｍＬ，加热提取２ｈ，取甲醇提取
液，挥干，残渣加水１５ｍＬ溶解，水溶液置分液漏斗
中，用水饱和的正丁醇萃取５次，每次１５ｍＬ，合并
正丁醇萃取液，用１％的氢氧化钠溶液洗涤３次，每
次１５ｍＬ，碱液弃去，用正丁醇饱和的水洗涤３次，
每次１５ｍＬ，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇
溶解，定溶于２５ｍＬ的量瓶中，待测。
２．２．２ 快速萃取法 精密称取脱酯样品粉末２０
ｇ，置３４ｍＬ的萃取池中，以甲醇为提取溶剂，提取温
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度８０℃，压力为１０２×１０７，每次提取时间为５ｍｉｎ，
重复提取３次，每次提取完成后，用６０％体积的新
溶液替换提取液，再进行下次提取。提取后的溶液
处理同上。
２．２．３ 超声提取法 精密称取脱酯样品粉末２０ｇ
包入滤纸中，加入提取溶剂，于超声波提取仪中按指
定的条件进行提取，合并提取液。提取后的溶液处
理同上。
２．２．４ 皂苷的测定方法及吸收波长的选择 皂苷
含量测定用香草醛高氯酸比色法。分别取一定量
的标准溶液及提取液，加入到干燥的具塞试管中，水
浴挥干溶剂，各加入新鲜配制的５％香草醛冰醋酸
溶液０２ｍＬ，高氯酸０８ｍＬ，于６０℃恒温水浴加热
１５ｍｉｎ，取出，流水冷却２ｍｉｎ，加冰醋酸５ｍＬ，摇匀，
于紫外可见分光光度计上，在５００～７００ｎｍ进行扫
描。标准样品和样品提取液的最大吸收波长均为
５７１ｎｍ。用总皂苷标准品作标准曲线，以皂苷的质
量为纵坐标，吸光度为横坐标，得曲线回归方程Ｙ＝
０２７６Ｘ＋００１８３，Ｒ２＝０９９０４。
２．２．５ 皂苷得率的计算 皂苷得率 η（％）＝ｍ１／
ｍ×１００％，其中 ｍ１为从竹节人参中所提取出的皂
苷质量，ｍ２为脱酯样品的质量。
３ 结果与分析
３．１ 提取方法的选择
平行称取适量的脱酯竹节人参粉末３份，以甲
醇作为提取溶剂，分别用索氏提取法、快速萃取法及
超声提取法对样品中的皂苷进行提取。超声提取的
条件为，在常温下进行提取，料液比为１∶２０，每次提
取３０ｍｉｎ，共提取３次。然后分别计算出皂苷的得
率（表２）。结果在３种提取方法中，快速萃取法皂
苷的得率略低，索氏提取法和超声提取法皂苷的得
率相差不大，但超声提取法更为简便、快捷，因此本
试验采用超声提取法。
表２ 不同提取方法的皂苷得率 ％
提取方法 ｙ１ ｙ２ ｙ３ 珋ｙ
索氏 ３４１ ３３８ ３２７ ３３５ａ
快速萃取 ３０８ ３１５ ３０６ ３１０ｂ
超声 ３３５ ３３０ ３４５ ３３７ａ
３．２ 溶剂的选择
平行称取适量的脱酯竹节人参粉末３份，分别
加入甲醇、乙醇和水饱和的正丁醇，料液比约为１∶
２０，常温下超声提取３０ｍｉｎ，离心分离。重复提取两
次，合并３次所得提取液。提取液经过上述方法处
理后测出皂苷的含量，然后分别计算出皂苷的得率
（表３）。结果用甲醇作提取溶剂，皂苷得率明显地
高于乙醇和水饱和的正丁醇，因此本试验选择甲醇
作为提取溶剂。
表３ 不同提取溶剂的皂苷得率 ％
提取溶剂 ｙ１ ｙ２ ｙ３ 珋ｙ
甲醇 ３３５ ３３０ ３４５ ３３７ａ
乙醇 ２８８ ２９３ ３０５ ２９５ｂ
水饱和的正丁醇 ２８５ ２８３ ２９５ ２８８ｃ
３．３ 单因素试验（表４）
表４ 单因素试验皂苷得率 ％
因素 水平 ｙ１ ｙ２ ｙ３ 珋ｙ
料液比／ｇ·ｍＬ－１ １∶１０ １９８ ２１５ ２２０ ２１１ｃ
１∶１５ ３２１ ３１１ ３２５ ３１９ｂ
１∶２０ ３３５ ３３０ ３４５ ３３７ａ
１∶２５ ３３６ ３４２ ３５０ ３４３ａ
提取时间／ｍｉｎ ２０ ３０５ ３１８ ３１０ ３１１ｂ
３０ ３３５ ３３０ ３４５ ３３７ａ
４０ ３４１ ３５２ ３３９ ３４４ａ
５０ ３４５ ３５２ ３４８ ３４８ａ
提取次数 １ １５２ １６８ １６２ １６１ｃ
２ ２８２ ２７８ ２６４ ２７５ｂ
３ ３３５ ３３０ ３４５ ３３７ａ
４ ３４２ ３５３ ３５２ ３４９ａ
提取温度／℃ ２０ ３３５ ３３０ ３４５ ３３７ｃ
３０ ３３６ ３３８ ３５０ ３４１ｂｃ
４０ ３５９ ３５６ ３４８ ３５４ａｂ
５０ ３６５ ３５１ ３６８ ３６１ａ
３．３．１ 料液比对皂苷提取效果的影响 为了研究
料液比对竹节人参皂苷提取效果的影响，本试验设
置了４个不同的料液比，分别为１∶１０，１∶１５，１∶２０，
１∶２５。提取条件为常温下超声提取，每个样品提取
３次，每次 ３０ｍｉｎ。按上述方法计算皂苷的得率。
结料液比以１∶２０效果较好。
３．３．２ 提取时间对皂苷提取效果的影响 为了研
究提取时间对竹节人参皂苷提取效果的影响，本试
验设置了 ４个不同的提取时间，分别为每次提取
２０，３０，４０，５０ｍｉｎ。提取条件为常温下超声提取，料
液比为１∶２０，每个样品提取３次。然后计算皂苷的
得率。结果提取时间以每次提取３０ｍｉｎ为宜。
３．３．３ 提取次数对皂苷提取效果的影响 为了研
究提取次数对竹节人参皂苷提取效果的影响，本试
验设置了４个不同的提取次数，分别为提取１，２，３，
４次。提取条件为常温下超声提取，料液比为１∶２０，
每个样品提取３０ｍｉｎ。然后计算皂苷的得率。结果
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提取次数以３次为佳。
３．３．４ 提取温度对皂苷提取效果的影响 为了研
究提取温度对竹节人参皂苷提取效果的影响，本试
验设置了４个不同的提取温度，分别为２０，３０，４０，
５０℃。提取条件为超声提取，料液比为１∶２０，每个
样品提取３０ｍｉｎ，并提取３次。然后计算皂苷的得
率。结果提取温度以４０℃为最佳。
３．４ 正交试验
为了研究不同因素共同作用对竹节人参皂苷提
取效果的影响，参考单因素实验结果，采用Ｌ９（３
４）正
交试验对样品中皂苷进行提取，以皂苷的得率为指
标，进行试验优化，确定最佳的提取条件（表５，６）。
表５ 不同因素对皂苷得率的影响正交试验结果
Ｎｏ．
皂苷得率／％
ｙ１ ｙ２ ｙ３ 珋ｙ
１ ２５１ ２４８ ２５６ ２５２
２ ３２１ ３２８ ３３０ ３２６
３ ３７０ ３６６ ３５９ ３６５
４ ３３８ ３３５ ３４９ ３４１
５ ３５２ ３４９ ３６３ ３５５
６ ２８２ ２７８ ２９３ ２８４
７ ３４４ ３４８ ３５１ ３４８
８ ２８８ ２８６ ３０２ ２９２
９ ３４０ ３３５ ３４８ ３４１
表６ 方差分析
方差来源 平方和 自由度 均方 Ｆ Ｆ００５（２，１６） Ｆ００１（２，１６）
区组 ００３８８ ２ ００１９４
Ａ ００９２１ ２ ００４６１ ２０９４５５１） ３６３ ６２３
Ｂ ０１３０８ ２ ００６５４ ２９７２５１１） ３６３ ６２３
Ｃ ３１０６７ ２ １５５３４ ７０６２１６０２） ３６３ ６２３
Ｄ ０１４０１ ２ ００７００ ３１８３６７１） ３６３ ６２３
误差 ００３５２ １６ ０００２２
注：１）表示有显著差异，２）表示有极显著差异
由表５的极差可知，影响竹节人参皂苷得率的
各因素中，其主次顺序依次为Ｃ＞Ｂ＝Ｄ＞Ａ，即提取
次数对皂苷得率的影响最大，料液比对皂苷得率的
影响最小。表６的方差分析表明，提取次数对竹节
人参皂苷得率具有极显著影响，提取时间、提取温度
及料液比对皂苷得率均具有极显著影响。从试验结
果来看，皂苷得率最高的组合为 Ａ１Ｂ３Ｃ３Ｄ３，但对试
验４个不同因素各水平间差异显著性进行检验可
知，因素Ｂ，Ｃ及 Ｄ分别以第３水平效果最好，且各
水平之间均具有显著差异，因素 Ａ以第３水平效果
最好，但第２水平与第３水平的差异未达到显著水
平，因此Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ３组合应该比Ａ１Ｂ３Ｃ３Ｄ３组合效果更
好。经验证，Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ３组合皂苷得率为３７２％，所
以Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ３组合为最佳组合。
３．５ 加样回收试验
为了评价测定方法的准确性，根据前面的测试
条件，向６份样品溶液中按标准加入法加入对照品，
测定回收率，见表７。结果可知，本实验所用的测定
方法是可靠的。
４ 结论与讨论
竹节人参是我国特有的珍贵的中药材之一，皂
苷是其主要的活性成分之一，作者通过单因素和正
表７ 人参皂苷加样回收率（ｎ＝６）
样品中含量
／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
３５９８ ７５６５ ９９１８
３２２５ ７１７２ ９８６８
２５３２ ６５４３ １００２８
９９５４ ０９３
１９８６ ５９２２ ９８４０
２３４６ ６３８２ １００９０
３１２３ ７１１６ ９９８３
注：加入量均为４０００μｇ
交试验，得到了竹节人参总皂苷提取的最佳工艺条件：
竹节人参皂苷提取的最佳工艺条件为：料液比为１∶２０，
提取４次，每次提取时间４０ｍｉｎ，提取温度为５０℃。
竹节人参皂苷具有不同的类型，对不同类型皂
苷的提取、分离提纯及总皂苷中各种不同类型的组
成还有待进一步的研究。
［参考文献］
［１］ 范崔生．中药采收鉴别应用全书［Ｍ］．南昌：江西科技出版社，
１９９５：３４７．
［２］ 湖北省恩施地区中草药研究组．恩施中草药手册［Ｍ］．１９７０：
３０８，４７０ｌ．
［３］ 刘贤旺，刘 华，赖学文．竹节人参及其栽培技术［Ｊ］．特产研
究，１９９７（２）：５７．
［４］ 左 锐，袁 丁．竹节人参化学成分和药理活性研究进展［Ｊ］．
时珍国医国药，２００５，１６（９）：８３８．
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［５］ 刘家兰．竹节人参提取物对实验性心肌缺血的保护作用［Ｊ］．
湖北民族学院学报：医学版，１９９９，１６（１０）：６．
［６］ 吴 瑕，陈东辉，雷 玲，等．竹节人参抗炎镇痛作用研究［Ｊ］．
中药药理与临床，２００７，２３（１）：４３．
［７］ 肖本见，谭志鑫，朱敏英，等．竹节人参对小鼠低氧／复氧损伤
的保护作用［Ｊ］．中国公共卫生，２００６，２２（４）：４７３．
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００８０７０５
［基金项目］ 浙江科技厅科技攻关计划（２００６Ｃ２１０９１）
［通讯作者］ 虞和永，Ｔｅｌ：（０５７１）８７０８７３７０，Ｅｍａｉｌ：ｙｕｈｙ＠
ｚｊｕｅｄｕｃｎ
胚宝胶囊中赖氨酸的含量测定
金 蕴，叶轶青，虞和永
（浙江大学医学院 附属妇产科医院，浙江 杭州 ３１０００６）
胚宝胶囊为羊胎盘用酶水解后加工制成，具有
补肾温阳，养血填精的作用，经文献查阅主含赖氨
酸。作者采用高效液相法测定其中赖氨酸的含量，
实验表明该方法灵敏度高、专属性强、重复性好、回
收率高，可作为该制剂的含量测定方法。
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪，Ｗ２４８７双通道紫
外可见检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作站。
甲醇、磷酸二氢钾、碳酸钠、２，４二硝基氟苯、磷
酸氢二钾为分析纯，乙腈为色谱纯，重蒸馏水，赖氨
酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号１４０６７３
２００４０５），胚宝胶囊样品３批（浙江大德药业集团有
限公司，批号０５１２０１，０６０３０１，０６０７０１）。
２ 方法与结果
２１ 色谱条件 ＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８色谱柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈００４ｍｏｌ·Ｌ－１磷
酸二氢钾溶液（４０∶６０）；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温
３０℃；检测波长 ３６０ｎｍ。
２２ 对照品溶液的配制 精密称取用五氧化二磷
为干燥剂减压干燥 ２４ｈ的赖氨酸对照品适量，加
１０％甲醇制成每１ｍＬ中含０１４３４ｍｇ赖氨酸的储
备液，精密量取储备液１ｍＬ，置于２５ｍＬ量瓶中，加
入００５ｍｏｌ·Ｌ－１碳酸钠溶液１０ｍＬ和１％２，４二
硝基氟苯的乙腈溶液１０ｍＬ，摇匀，置于６０℃水浴
中加热３０ｍｉｎ，期间应不时振摇，取出，立即冷却，加
００１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，作为
对照品溶液。
供试品溶液的制备：取胶囊内容物，研细，取约
０５ｇ，精密称定，置三角烧瓶中，精密加入１０％甲醇
溶液２５ｍＬ，称重，超声处理 ３０ｍｉｎ（５６ｋＨｚ，３００
Ｗ），冷却，称重，用１０％甲醇溶液补足减失的重量，
离心，精密量取上清液１０ｍＬ，置于２５ｍＬ量瓶中，
自“加入００５ｍｏｌ·Ｌ－１碳酸钠溶液１０ｍＬ”起同对
照品溶液制备方法制备供试品溶液，采用２，４二硝
基氟苯进行衍生化。
空白对照液的制备：取辅料按供试品溶液制备
方法同样制得空白对照液。
２３ 专属性试验 取供试品溶液、对照品溶液和空
白对照液各２０μＬ注入高效液相色谱仪分析，图谱
见图１。结果表明，空白对照对赖氨酸峰无干扰，证
明按本方法测定的赖氨酸成分有专属性。
２４ 线性关系考察 精密吸取赖氨酸对照品溶液
００１２，００２４，００７２，０１４３，０２８７，０４５９，０５７４ｇ·
Ｌ－１各１ｍＬ，分别置２５ｍＬ量瓶中，按２２项下，自
“加入００５ｍｏｌ·Ｌ－１碳酸钠溶液１０ｍＬ”起同对照
品溶液制备方法处理，取上清液２０μＬ，分别注入液
相色谱仪，按色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值
为纵坐标（Ｙ），赖氨酸质量浓度为横坐标（Ｘ，ｇ·
Ｌ－１）作回归方程，Ｙ＝４２２×１０６Ｘ－７７６×１０３，ｒ＝
０９９９９，表明赖氨酸浓度在００１２～０５７４ｇ·Ｌ－１
有良好的线性关系。
２５ 稳定性试验 取对照品溶液和供试品溶液
（批号０５１２０１），按上述条件进行衍生化后，分别于
０，２，７，７２进样，测定峰面积，结果显示经过衍生化
处理后的样品和对照品溶液至少在 ７２ｈ内稳定，
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