全 文 ：复方人参注射液色谱指纹图谱研究
仇 熙 t o莫世甫 t o贾晓斌 u o陈 廉 u o孔令东 t3
ktq南京大学 生命科学学院 南京大学生物医药国家重点实验室 o江苏 南京 utss|v~
uq江苏省中医药研究院 o江苏 南京 utssu{l
≈收稿日期 ussy2tt2uu
≈基金项目 江苏省现代中药制剂工程技术研究中心开放课
题资助项目 kƒusssstl
≈通讯作者 3 孔令东 oר¯}ksuxl{vx|wy|to∞2°¤¬¯}®²±ª¯§
±∏q §¨∏q¦±
复方人参注射液是由人参 !陈皮经提取 !精制而
成的静脉注射液 o具有行气通脉 !扶正固脱的作用 o
临床上用于治疗休克 k阙脱症 lo取得了良好的效
果 ≈t ∀目前药用人参 !陈皮大多为人工栽培品种 o
由于生长环境差异 o所含成分差异很大 o直接影响相
关产品的质量稳定 o制备过程中的主观及客观因素
也会造成产品质量的不稳定 ∀只选择一两个化学成
分为指标进行质量评价难以达到整体质量控制而保
证产品的稳定 ∀中药色谱 2质谱联用是一种综合的 !
整体的鉴定手段 o其功用在于鉴别真伪 o并还可评价
药材及中成药的质量均一性和稳定性 ≈u ∀作者将
采用液相色谱 2质谱联用技术对人参药材 !中间体和
注射液样品进行检测分析 o获得各自标准指纹图谱
及特征标记峰值 ∀
1 仪器与试剂
ª¬¯¨ ±·ttss ≤ p ⁄⁄r ≥⁄化学工作站 k高压
二元梯度泵 !在线真空脱气机 !柱温箱 !恒温自动进
样器 !二级管阵列检测器 l∀乙腈 k色谱纯 o× ¬¨·¨公
司 l~水 k去离子重蒸水 l~其余试剂均为分析纯 ∀
人参药材购自吉林省长白县宝泉山镇宝泉山参
场 o经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为 Παναξ
γινσενγ人工栽培品 ∀中间体粉末和复方人参注射
液减压干燥粉末均由江苏省中医药研究院制剂研究
室提供 o各 ts个批次 ∀人参皂苷 k¨批号 szxw2
|ys{l购于中国药品生物制品检定所 ∀
2 方法和结果
2q1 色谱条件
²µ¥¤¬⁄≥柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°lo柱温
vs ε o检测波长 usv ±°~流速 t °# °¬±pt ∀以乙
腈 2水为流动相进行梯度洗脱 o梯度见表 t∀
表 t 流动相梯度洗脱条件 h
τr°¬± 乙腈 τr°¬± 乙腈
s s uu us
y s wu vx
us ts zs vx
2q2 质谱条件
扫描范围 µ / ζ tsx ∗ t xss~离子化方式 }k p l
°≤~干燥气 u ~流速 x # °¬±pt ~压力 ys °¤~温度
vxs ε ~碎裂电压 tss ∂ ∀
2q3 参照物溶液的配制
精密取人参皂苷 对¨照品 t1s °ªo置于 t °
量瓶中 o加 ush乙腈溶解定容至刻度 o摇匀 o即得 ∀
2q4 样品制备
2q4q1 人参药材供试品溶液 取人参药材粗粉 u
ªo加 {sh的乙醇 tss °回流提取 u次 o每次 v «~
合并乙醇液 o回收乙醇 o残渣加水溶解 ~以等体积醋
酸乙酯萃取脱脂 v次 o加氨试液调节 ³ z1s~用等
体积水饱和的正丁醇萃取 x次 o合并正丁醇液 o回收
正丁醇 o残渣再用 ush的乙腈 ts °溶解定容至 ts
°o过滤 o取续滤液作为供试品溶液 ∀
2q4q2 人参中间体供试品溶液 取 ws °ª人参中
间体 o加 ush乙腈溶解定容至 x °o过滤 o取续滤液
作为供试品溶液 ∀
2q4q3 注射液样品供试品溶液 取 ts °注射液 o
用等体积水饱和的正丁醇萃取 x次 o合并正丁醇液 o
用等量的氨试液洗涤一次 o弃取氨水层 o减压回收正
丁醇 o残渣加 ush乙腈溶解定容至 x °o过滤 o取续
滤液作为供试品溶液 ∀
2q5 方法学考察
2q5q1 稳定性实验 取同一注射液样品供试品溶
液 o分别于 souowo{ouw «检测 o其相对保留时间稳
定 o主要共有峰相对峰面积的 ≥⁄为 t1wxh ∀结果
表明供试品溶液稳定性较好 ∀
2q5q2 精密度实验 取同一注射液样品供试品溶
#twy#
第 vu卷第 z期
ussz年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ z
³µ¬¯o ussz
液 o连续进样 x次 o其相对保留时间稳定 o主要共有
峰相对峰面积 ≥⁄为 t1tvh o结果表明精密度较
好 ∀
2q5q3 重复性实验 取同一批号注射液样品供试
品溶液 o分别处理测定 o其相对保留时间稳定 o主要
共有峰相对峰面积的 ≥⁄为 s1{yh kν xl∀结果
表明重复性较好 ∀
2q6 样品的测定与结果
取参照物和供试品溶液各 us Λo分别注入液
质联用仪 o进行检测 ∀分别分析了各 ts个批次的人
参药材 !中间体以及注射液供试品溶液进行了液相
色谱 2质谱联用法检测结果 ∀以人参皂苷 为¨参照
物 o依据其保留时间计算其他色谱峰的相对保留时
间 ~依据其峰面积计算其他色谱峰的相对峰面积 ∀
根据 ts批次供试品的 °≤检测结果 o按保留时间
标定了共有指纹峰 ∀
ts批次人参药材指纹图谱标定了 tx个共有指
纹峰 o其相对保留时间 ≥⁄ s1sywh ∗ v1s|h ~其相
对峰面积 ≥⁄ t1tth ∗ x1tvh ~非共有峰面积
u1uvh ∗ |1zyh ~ts个批次间的相似度 |t1vxh ∗
|w1s{h ∀ ts批次人参中间体指纹图谱标定了 tu
个共有指纹峰 o其相对保留时间 ≥⁄ s1suxh ∗
t1vuh ~其相对峰面积 ≥⁄ t1xsh ∗ x1x{h ~非共
有峰面积范围 v1tuh ∗ |1zvh ~ts个批次间的相似
度 {|1sth ∗ |u1|yh ∀ ts批次复方人参注射液指
纹图谱标定了 uz个共有指纹峰 o其相对保留时间
≥⁄ s1s{zh ∗ u1||h ~其 相 对 峰 面 积 ≥⁄
s1xvh ∗ {1uxh ~非共有峰面积 v1w{h ∗ |1|th ~
ts个批次间的相似度 {z1vwh ∗ |w1svh ∀
对人参药材 !中间体及注射液共有峰的 °≤
负离子扫描质谱进行了分析 o发现注射液中的 touo
vottotxotyotzot|ouu号峰及人参皂苷 ¨峰 k≥
峰 l分别与人参药材中的 tovoyo{o|otsottotvotx
号峰及人参皂苷 峰¨ k≥峰 l及中间体中的 touowo
yo{o|otsottotu号峰及人参皂苷 峰¨ k≥峰 l具有
一一对应关系 ∀根据离子碎片呈现信息 o并参考相
关文献 o对一些离子碎片进行了初步归属 ≈w2y ∀ ≥峰
的离子碎片与人参皂苷 对¨照品一致 ∀另外根据
质谱数据初步推测可得 o其中注射液中的 txotzo
t|ouu号峰 o对应在药材中是 |ottotvotx号峰 o对
应在中间体中是 {otsottotu号峰 o分别是人参皂苷
©o ªv o ªu和 «t ∀
3 结论
根据 ts个批次人参药材 o人参中间体及复方人
参注射液的共有特征峰相对保留时间的均值 o制定
了人参药材 !中间体及注射液的标准液相色谱相对
保留时间参数 ∀根据 ts个批次人参药材 !中间体及
注射液共有特征峰相对峰面积的均值 o制定了三者
标准液相色谱相对峰面积参数 ∀从而制定了人参药
材 !中间体及注射液标准液相色谱指纹图谱 ∀
4 讨论
4q1 运用液相色谱 2质谱联用方法分析了 ts个批
次人参药材 !中间体和复方人参注射液 o建立了三者
的指纹图谱 o比较了三者的关系 ∀从而建立一套从
人参药材 o到其提取物 o及其制剂的完整的质量控制
方法 ∀
4q2 本实验中液相色谱 2质谱图谱中的液相色谱图
谱相似度计算公式如下 }
φ uντνt n νu Ε
ηtτ p ηuτ
ηtτ p ηuτ
式中 νt oνu表示 u个色谱图的实际色谱峰数量 o
而 ντ表示 u个色谱图共有峰的数量 oηtτ , ηuτ表示共
有峰的相对强度 ∀式中第 t项 uντ rkνt n νu l表示待
比较的色谱图共有峰的重叠率 o第 u项表示共有峰
强度差异对相似度降低的程度 ∀此计算方法不仅考
虑了色谱指纹图谱的整体性 o且把色谱指纹图谱的
重叠率和共有峰的峰强度有机结合起来 o故不但可
以很好的反映出样品间的相似程度 o并对样品图谱
间的差异比较敏感 ≈v ∀
4q3 拆方分析研究显示 }注射液指纹图谱中 touo
vottotxotyotzot|ouu号峰及人参皂苷 ¨峰 k≥
峰 l来自处方中的人参药材 o其余共有峰来自处方
中另一味中药陈皮 ∀注射液中与陈皮相关的特征峰
有待进一步研究 ∀
4q4 本实验采用液相色谱 2质谱联用技术建立指纹
图谱 o其中质谱信息的引入 o比以单一化学成分为对
照品所获得色谱指纹图谱信息更为全面可靠 ∀使得
该方法作为一种可行有效地分析手段 o可以较好的
控制复方人参注射液原药材 !中间体和最终产品的
质量一致性和稳定性 ∀
≈参考文献
≈t 金妙文 q升压灵治疗阙脱症 k休克 l的临床研究 ≈ q江苏中医 o
t||sottkvl}vuq
≈u 王义明 o张思巨 o罗国安 o等 q用 ≤ r∞≥2 ≥r ≥研究肉苁蓉与代用
品中的苯乙醇苷类化合物 ≈ q药学学报 ousssovxkttl}{v|q
#uwy#
第 vu卷第 z期
ussz年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ z
³µ¬¯o ussz
≈v 孟庆华 o刘永锁 o王健松 o等 q色谱指纹图谱相似度的新算法及其应
用 ≈ q中成药 oussvouxktl}wq
≈w «¤±ª o • ∏≠ o ≤«¨ ±ª≠ ≠ q ±¤¯¼¶¬¶²©−≥∞ . ¬±¨¦·¬²±
¥¼ °≤ r ≥r ≥≈ q °«¤µ°
¬²° §¨±¤¯oussvovtktl}tzxq
≈x 徐智秀 o肖红斌 q高效液相色谱 2质谱 2质谱法分析人参皂甙
≈ q色谱 ousssot{kyl}xutq
≈y • ¤±ª÷ o פ®¨ ²≥¤®∏°¤o ∞¥¨ ± ½¨¨ µ¶¤©∏2§¤¼¨ o ·¨¤¯q ⁄ ·¨¨µ2
°¬±¤·¬²± ²©ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ¶¬± ³¯¤±·¨ ¬·µ¤¦·¶©µ²° Παναξ γινσενγ ¤±§
Παναξ θυινθυεφολιυσq ¥¼≤ r ≥r ≥≈ q ±¤¯ ≤ «¨ °o t|||ozt
k{l}txz|q
≈责任编辑 鲍 雷
具有蛋白酶抑制剂活性成分中药的筛选
刘同祥 t o牛建昭 t o杜旭东 u o张宗申 u o黄能听 t o吴跃传 t o王继峰 t3
ktq北京中医药大学 细胞生物化学实验室 o北京 tsssu|~
uq大连轻工业学院 生物与食品工程学院 o辽宁 大连 ttysvwl
≈收稿日期 ussy2tt2uy
≈基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 k vsvztzzx~
vsxtswsvusu~vsxwswussvul~教育部长江学者和创新团队发展计划
资助项目 k ×swtvl
≈通讯作者 3 王继峰 oר¯}kstslywu{y||xo∞2°¤¬¯}º¤±ª¬©¨±ª
tuyq¦²°或牛建昭 oר¯}kstslywu{zxv{o∞2°¤¬¯}±¬∏½½ uyvq± ·¨
蛋白酶抑制剂 k³µ²·¨¬±¤¶¨ ¬±«¬¥¬·²µo°l泛指具
有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质 o广泛存在于
动 !植物和微生物中 ∀蛋白酶抑制剂在体内能与相
应蛋白酶的活性部位和变构部位结合 o抑制酶的催
化活性或阻止酶原转化为有活性的酶 o使体内蛋白
酶抑制剂 2蛋白水解酶形成一定的动态平衡 o在生物
的生理体系以及一系列的生理病理过程中起着关键
性的调控作用 o是生物体内免疫系统的重要组成部
分 ≈t ∀蛋白酶抑制剂有广泛的生物学活性和作用 o
在临床治疗上也有很多用途 o如抗炎 !抗感染作用 o
抗癌 !抗肿瘤 !抗真菌作用等 ∀最令人瞩目的是在
∂和肿瘤治疗中的应用 ∀在众多抗 ∂药物中 o
蛋白酶抑制剂是重要的一员 ≈u ∀但在临床应用中 o
化学合成的蛋白酶抑制剂生物利用度较低 o在延长
患者生命的同时也不可避免的产生一些副作用 o包
括血脂异常 !脂肪异常分布 !胰岛素抵抗 !使冠心病
的危险性显著增加 !容易产生耐药性 !单独使用效果
不明显 o在治疗艾滋病中需与其他抗艾滋病药物联
合使用即所谓的鸡尾酒疗法 o且生产成本高 o价格昂
贵 o难以推广 ≈v ∀以天然植物活性物质为有效成分
的植物源蛋白酶抑制剂具有环境兼容性好 !安全 !开
发成本低等优点 o符合未来药物发展的趋势与要求 o
有较好的开发和应用前景 o在中草药中找寻天然的
蛋白酶抑制剂的活性成分越来越成为近年来生命科
学研究的一个焦点 ≈w ∀本实验以胰蛋白酶为对象 o
对临床应用较广的 ys种中药免煎颗粒以及 x种中
药的不同提取物的蛋白酶抑制剂的活性进行了研
究 o以期为我国传统药用植物资源的充分利用和新
型植物源蛋白酶抑制剂的研究与开发积累数据 o为
在中药和天然植物中提取出更多具有治病作用的蛋
白酶抑制剂以扩大中药的临床应用 o更好的预防和
控制重大疾病的发生和发展提供依据 ∀
1 材料
中药配方颗粒 }麻黄 !桂枝 !防风 !细辛 !柴胡 !葛
根 !天花粉 !凤尾草 !黄芩 !龙胆草 !金银花 !连翘 !大
青叶 !板蓝根 !青黛 !蒲公英 !紫花地丁 !鱼腥草 !穿心
莲 !山豆根 !大黄 !苍术 !茯苓 !薏苡仁 !赤小豆 !生姜 !
小茴香 !鸡内金 !三七 !川芎 !广郁金 !片姜黄 !丹参 !
莪术 !三棱 !水蛭 !姜半夏 !法半夏 !制天南星 !胆南
星 !白前 !桔梗 !浙贝母 !杏仁 !紫苑 !款冬花 !葶苈子 !
酸枣仁 !天麻 !党参 !黄芪 !大枣 !白芍 !北沙参 !天冬 !
枸杞子 !醋鳖甲 !醋龟甲 !五味子 !莲子 ys种 o为江阴
天江药业有限公司产品 o购自北京中医药大学东直
门医院门诊药房 ∀
麻黄 !大黄 !鱼腥草 !白芍 !瓜蒌皮 x种药材 o购
自北京同仁堂望京药店 o经北京中医药大学中药学
院生药学教研室刘春生教授鉴定 ∀
胰蛋白酶 k·µ¼³¶¬±l!大豆胰蛋白酶抑制剂 k¶²¼2
#vwy#
第 vu卷第 z期
ussz年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ z
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