全 文 ：维肝力对骨髓抑制小鼠骨髓及血清 ＦＬ
分泌水平的影响
陈永锋１，祝彼得２，张 莉３
（１．四川大学 华西基础医学院 组胚教研室，四川 成都 ６１００４１；
２．成都中医药大学 组胚教研室，四川 成都 ６１００７２；３．宜宾市长宁人民医院，四川 宜宾 ６４４３００）
［摘要］ 目的：研究维肝力对骨髓抑制贫血小鼠骨髓及血清Ｆｌｔ３配体（ＦＬ）分泌水平的影响，探讨维肝力在骨
髓造血调控方面的作用。方法：制作骨髓抑制贫血小鼠模型，小鼠随机分为正常组、骨髓抑制贫血模型组、维肝力
组（高、中、低剂量１００，５０，２５ｇ·Ｌ－１）；观察维肝力对骨髓抑制贫血小鼠外周血象、骨髓有核细胞（ＢＭＣ）数的影响；
通过酶联免疫吸附技术（ＥＬＩＳＡ）检测了骨髓抑制贫血小鼠骨髓及血清Ｆｌｔ３配体（Ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ，ＦＬ）的水平。结果：高
剂量维肝力对粒细胞系、红细胞系、血红蛋白（Ｈｂ）及ＢＭＣ均有显著的提高作用，中、低剂量维肝力对血小板促进作
用更明显；维肝力组骨髓及血清ＦＬ水平均低于贫血组，其中高、中剂量组 ＦＬ水平下降最为显著。结论：维肝力对
放、化疗所引起的小鼠骨髓抑制能起到一定的缓解作用。
［关键词］ 小鼠；骨髓抑制；维肝力；骨髓；血清；Ｆｌｔ３配体
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１３１５８７０４
［收稿日期］ ２００７０２１０
［通讯作者］ 陈永锋，Ｔｅｌ：（０７７９）７２９２５６１，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｙｏｎｇ
ｆｅｎｇ２００６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
骨髓抑制是肿瘤病人经放、化疗治疗后，常见的
造血损伤并发症，表现为外周血白细胞、红细胞、血
小板减少。中医理论认为“肾主骨生髓”，放、化疗
所引起的白细胞减少属虚证范畴，其主要病机与脾
肾关系密切，脾肾两虚是发生骨髓抑制的主要原因。
维肝力是香港维康力公司与成都中医药大学共同研
发的复方制剂，由鹿茸、人参等多种动、植物中药提
炼而成，具有补肾健脾，扶正固本，增强机体免疫力
的作用［１，２］。为探讨维肝力对骨髓造血的影响，在
本实验中，笔者采用６０Ｃｏγ射线及化疗药物制作骨
髓抑制贫血小鼠模型，经腹腔给予维肝力后，观察分
析小鼠外周血象及骨髓有核细胞（ＢＭＣ）数量的变
化，采用酶联免疫吸附技术（ＥＬＩＳＡ）检测小鼠骨髓
及血清中ＦＬ的表达水平，以评价维肝力对放、化疗
所致骨髓抑制小鼠造血功能的恢复作用。
１ 材料
１．１ 动物
正常ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，体重１８～２２ｇ，鼠龄６～８
周，雄性，成都中医药大学实验动物中心提供，合格
证号ＳＣＸＫ（川）２００４１２。
１．２ 试剂和药物
维肝力，粉剂，纯度１００％，由香港维康力公司
提供的上市产品，用生理盐水配制成１００，５０，２５ｇ·
Ｌ－１３种质量浓度，置４℃冰箱中贮藏备用；６０Ｃｏγ源，
四川省农业科学院辐照场提供；注射用环磷酰胺，上
海华联制药有限公司产品，批号０５０１０７；氯霉素注
射液，西南药业股份有限公司产品，批号６６０４００２５；
Ｆｌｔ３Ｌｉｇａｎｔ定量 ＥＩＡ试剂盒（上海森雄公司，批号
０４０１０３）。
１．３ 仪器
全自动血细胞分析仪（意大利 ＨＳ－１８型）；超
净工作台（北京半导体设备厂，ＪＪＴ－９００／１３００型）；
电子分析天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ，ＢＰ６１型）；ＨＴＳ７０００ｐｌｕｓ多
孔板（紫外荧光可见光）高效分析仪（美国ＰＥ）；微
量反应板自动洗板机（美国 ＢＩＯ－ＴＥＫ）；低温高速
离心机（德国 Ｈｅｒａｅｕｓ）；自动降温恒温循环仪（丹
麦 ＨＥＴＯＦＲＩＧ）；高速匀浆搅拌仪（自制）；恒温振
荡器（中国ＴＨＺ－Ｃ）；六头超声波清洗器（深圳 ＰＯ
ＴＥＮＴ）。
２ 方法
２．１ 动物模型制备
按本实验室常规方法制作骨髓抑制贫血小鼠模
型［３５］，即经２０Ｇｙ６０Ｃｏγ射线照射，并于照射后第
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２，３，４日连续腹腔注射环磷酰胺（４０ｍｇ·ｋｇ－１·
ｄ－１）、氯霉素（５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）。
２．２ 分组及给药
小鼠随机分为正常组、骨髓抑制贫血模型组、维
肝力组（高、中、低剂量１００，５０，２５ｇ·Ｌ－１），每组４０
只。维肝力有效剂量通过预试验确定，选用３个剂
量，剂量间隔２倍。维肝力组小鼠经腹腔注射给药，
每只小鼠腹腔注射０２ｍＬ·ｄ－１（分别含维肝力２０，
１０，５ｍｇ），连续注射１０ｄ。正常组及贫血模型组则
给予等体积生理盐水，腹腔注射。
２．３ 检测指标
２．３．１ 外周血及骨髓有核细胞的检测 最后１次给
药后２４ｈ，经小鼠眼球球后静脉丛采血２０μＬ，稀释后
用全自动血细胞分析仪检测血常规。每组随机选取
８只小鼠，颈椎脱臼处死，取股骨，常规制备骨髓有核
细胞悬液，经血细胞分析仪检测骨髓有核细胞数。
２．３．２ ＦＬ的酶联免疫吸附ＥＬＩＳＡ检测 分别于给
药的第４，７，１０天，每组随机选取６只小鼠，摘眼球
取血，收集血清，－７０℃冻存；小鼠颈椎脱臼处死，
取双侧股骨，ＰＢＳ冲出骨髓，离心后取上清，－７０℃
冻存。标本全部收集完后用 ＥＬＩＳＡ分别检测骨髓
及血清中ＦＬ水平。标准曲线用对照品制作，对照
品用１０ｍＬ双蒸水溶解至２５０ｎｇ·Ｌ－１，慢慢颠倒
混匀，用ＰＢＳ倍比稀释至以下不同剂量：１２５，６２５，
３１２５，１５６２５，０ｎｇ·Ｌ－１。操作步骤：①实验微板
用荧光（４８５／５３５ｎｍ）进行板扫描、参数储存，以确
定该板孔的中心位置。浓缩洗液１∶２０稀释。②双
波长６３５／４９２ｎｍ动态监测，４６５／６３５ｎｍ读数，每孔
读取４个点，原始数据即为４个点的均值，作盘图设
计。③每孔加标品／样本１００μＬ，封板，置３７℃恒
温振荡孵育１５～２ｈ（１２０ｒ·ｍｉｎ－１）。④自动洗板
４次。加生物素化抗体（１∶１００）１００μＬ／孔，封板，３７
℃恒温振荡孵育１～１５ｈ（１２０ｒ·ｍｉｎ－１）。⑤同上
洗板，加酶结合物（１∶１００）工作液１００μＬ／孔，封板，
３７℃恒温振荡孵育０５～１ｈ（１２０ｒ·ｍｉｎ－１），自动
洗板４次。⑥加底物显色剂１００μＬ／孔，避光３７℃
孵育 １５～２０ｍｉｎ，适时加终止液 １００μＬ终止。
ＨＴＳ７０００ｐｌｕｓ低频弧型振荡５ｓ，用４６５／６３５ｎｍ双波
长读数，得出小鼠ＦＬ标准曲线，并自动换算出样本
ＦＬ含量。
２．４ 统计学方法 采用 ＳＰＳＳ软件进行统计，所有
数据均用 珋ｘ±ｓ表示。多组间采用单因素方差分析
（ＡＮＯＶＡ），方差分析有显著差异时，用 Ｓｔｕｄｅｎｔ
Ｎｅｗｍａｎ．Ｋｅｕｌｓ法作两两比较，Ｐ＜００５为差异有统
计学意义。
３ 结果
３．１ 维肝力对骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓有
核细胞的影响
外周血及骨髓有核细胞检测结果显示，贫血组
外周血细胞、Ｈｂ及ＢＭＣ均较正常组明显降低，表明
动物造模成功；除血小板外，高剂量维肝力对粒细胞
系、红细胞系、Ｈｂ及 ＢＭＣ均有显著的提高作用。
中、低剂量维肝力对各系外周血细胞虽然都有提升
倾向，但对血小板促进作用更明显，见表１。
表１ 维肝力对骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓有核细胞的影响 （珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
分组
剂量
／ｇ·Ｌ－１
ＷＢＣ
／×１０９个／Ｌ
ＲＢＣ
／×１０１２个／Ｌ
Ｈｂ
／ｇ·Ｌ－１
Ｐｌｔ
／×１０９个／Ｌ
ＢＭＣ
／×１０６个／Ｌ
正常 － ９９３±１３７ １０２２±１２３ １６１３７±１２４７ ５４０４５±７３２２ ５１３±１３７
模型 － ３２８±０８４１） ６２１±０７２１） １１５０８±１３６７１） １０８７９±２１４５１） ２３３±０５６１）
维肝力 １００ ４９６±１０４２） ８５６±０８５２） １４９６７±１５６８２） １２２２０±１２７０ ３９２±０９９２）
５０ ４０５±０６１ ６９９±０７３ １２７１１±１５０２ １４４６９±２３８４２） ４６８±１０２２）
２５ ４３８±０７４２） ６７６±０７２ １２１９２±１４３３ １６７２５±２１１０２） ２６４±１５５
注：与正常组比较１）Ｐ＜００５；与模型组比较２）Ｐ＜００５（表２，３同）
３．２ 维肝力对骨髓抑制贫血小鼠骨髓及血清 ＦＬ
水平的影响
结果显示，维肝力组及模型组骨髓及血清 ＦＬ
水平显著高于正常组，显示造模导致骨髓及血清 ＦＬ
水平上升。维肝力组骨髓及血清 ＦＬ分泌水平均低
于模型组，第７天，维肝力组ＦＬ水平下降到最低点，
其中以高、中剂量组 ＦＬ水平下降最为明显。第１０
天，维肝力组骨髓及血清 ＦＬ水平均有所上升。模
型组ＦＬ水平则始终维持于较高水平。见图１，表２，
３。
４ 讨论
骨髓抑制是肿瘤放、化疗最常见的副作用，以白
细胞下降为主，红细胞、血小板均可有不同程度的下
降。严重的骨髓抑制和外周血细胞下降往往使化疗
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图１ 小鼠 Ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ定量标准曲线
难以继续进行，甚至可引起感染、发烧、出血等严重
并发症，因而成为提高肿瘤疗效、减少术后复发的主
要障碍。
从中医角度来看，骨髓抑制的基本病机为脾肾
两虚。脾虚则气血生化无源，肾阳虚则机体失于温
煦，气血推动无力，肾阴虚则虚热内生，扰血妄行。
因此，目前中医治疗放、化疗所致骨髓造血障碍，多
着重于脾、肾，采用补益之法。维肝力是补肾益气的
复方制剂，主要由鹿茸、淫羊藿、仙茅、蛇床子温阳补
表２ 维肝力对骨髓抑制贫血小鼠骨髓ＦＬ（Ｆｌｔ３Ｌ）分泌水平的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
分组
剂量
／ｇ·Ｌ－１
ＦＬ／ｎｇ·Ｌ－１
４ｄ ７ｄ １０ｄ
正常 － ４７８±０４３ ５０２±０６４ ４４９±０５３
模型 － １７０５±２５１１） １３１３±１３２１） １４１１±１１２１）
维肝力 １００ ９６３±０８４２） ４４０±０５９２） ５１８±０５７２）
５０ １０８６±１０８２） ４２５±０４４２） ５５５±０６６２）
２５ ８３７±０５９２） ５６９±０５３２） ５６４±０６８２）
表３ 维肝力对骨髓抑制贫血小鼠血清ＦＬ（Ｆｌｔ３Ｌ）分泌水平的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
分组
剂量
／ｇ·Ｌ－１
ＦＬ／ｎｇ·Ｌ－１
４ｄ ７ｄ １０ｄ
正常 － ７９１±０５８ ８３５±０５５ ７９５±０７８
模型 － １８１８±１９５１） １５３１±１４４１） １９２２±１６１１）
维肝力 １００ １１４９±０５２２） ６５７±０４６２） ８３０±０６３２）
５０ １３８６±１１４２） ６７５±０４２２） ９５２±０７０２）
２５ １２３８±０８２２） ７５２±０５６２） ９６７±０５２２）
肾，人参、黄芪、灵芝健脾益气。已经有大量资料证
明，以上中药具有诱生内源性细胞因子，增强机体免
疫力等诸多作用［１，２］。维肝力在造血调控方面的作
用如何，是本研究的关注所在。本研究用６０Ｃｏγ射
线、环磷酰胺（ＣＴＸ）和氯霉素（辐射和化学损伤结
合）处理小鼠，明显降低了外周血 ＷＢＣ，ＲＢＣ，Ｈｂ以
及ＢＭＣ数，造成小鼠骨髓抑制。实验结果表明，高
剂量维肝力对粒系、红系、Ｈｂ及ＢＭＣ均有显著的提
高作用，中、低剂量维肝力对各系外周血细胞也有一
定提升倾向，对血小板的促进作用更为明显，说明维
肝力能够减轻骨髓抑制的程度，有利于骨髓造血功
能的恢复。
Ｆｌｔ３配体（Ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ，ＦＬ）是新近发现的、具有
促进早期造血功能的细胞因子［６，７］，其水平与造血
功能变化密切相关。在再生障碍性贫血、骨髓抑制
等一系列造血功能障碍病变时，ＦＬ分泌水平显著升
高，从 ＦＬ水平的升高可以推测骨髓造血障碍的严
重程度，治疗有效者 ＦＬ水平下降，因此，ＦＬ是评价
造血功能的可靠指标之一［８１１］。在本实验中观察
到，与正常组相比，模型组与维肝力组骨髓及血清
ＦＬ水平均显著升高，表明射线和化疗药物对骨髓造
血组织造成的损伤较为严重，尤其是模型组，其 ＦＬ
水平明显高于维肝力组，其差异在各时间点均具有
显著性。维肝力组骨髓及血清 ＦＬ水平均明显低于
模型组，表明经腹腔给予维肝力注射后，放化疗所造
成的骨髓抑制可能得到了一定程度的缓解，并表现
为外周血像的改善和骨髓有核细胞数量的增加。实
验中还观察到，骨髓和外周血ＦＬ水平在第７天下降
到最低点后，在第１０天又有所反弹，其中的原因如
何，尚有待进一步研究。
骨髓造血障碍时 ＦＬ的水平显著升高，其机制
目前尚未完全阐明。有学者认为骨髓造血障碍时骨
髓及血清高水平的 ＦＬ也许是一种造血代偿性反
应，用以保护或促进残留干／祖细胞增殖。此外，机
体免疫功能异常，异常活化的淋巴细胞分泌大量的
ＦＬ，可能是造成骨髓及外周血中 ＦＬ显著上升的原
因之一，但过度升高的 ＦＬ并不能增加骨髓的造血
功能，而是导致淋巴细胞、ＤＣ或 ＮＫ细胞的进一步
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活化，加重骨髓造血功能的损伤［１１］。本研究结果显
示，维肝力能有效调节骨髓或外周血ＦＬ水平，使其
保持在适当的浓度，对骨髓造血功能的恢复可能起
到一定的促进作用。
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ＥｆｅｃｔｏｆＷｅｉｇａｎｌｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＦＬｉｎｂｏｎｅｍａｒｒｏｗａｎｄｓｅｒｕｍｏｆ
ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄａｎｅｍｉｃｍｉｃｅ
ＣＨＥＮＹｏｎｇｆｅｎｇ１，ＺＨＵＢｉｄｅ２，ＺＨＡＮＧＬｉ３
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄＥｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ，６１００４１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄＥｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７２，Ｃｈｉｎａ；
３．ＲａｄｉｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｈａｎｇｎｉｎＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｙｉｂｉｎ６４４３００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＷｅｉｇａｎｌｉｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＦＬｉｎｂｏｎｅｍａｒｏｗａｎｄｓｅｒｕｍｏｆｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄａｎｅｍｉｃ
ｍｉｃｅ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｉｔ＇ｓｆｕｎｃｔｉｏｎｏｎｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｍｏｄｅｌｓｏｆｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄａｎｅｍｉｃｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｒａｄｉ
ａｔｉｏｎａｎｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｄｒｕｇ，ａｎｄｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄａｎｅｍｉｃｇｒｏｕｐ，ａｎｄＷｅｉｇａｎｌｉ
ｇｒｏｕｐ（ｈｉｇｈｄｏｓｅ１００ｇ·Ｌ－１，ｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅ５０ｇ·Ｌ－１，ｌｏｗｄｏｓｅ２５ｇ·Ｌ－１）．ＥｆｅｃｔｏｆＷｅｉｇａｎｌｉｏｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ
ｂｌｏｏｄｃｅｌｓａｎｄｂｏｎｅｍａｒｏｗｎｕｃｌｅａｔｅｄｃｅｌｓ（ＢＭＣ）ｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄ．ＥｆｅｃｔｏｆＷｅｉｇａｎｌｉｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＦＬ（Ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ）ｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａ
ｔｅｄｂｙＥＬＩＳＡｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＨｉｇｈｄｏｓｅｏｆＷｅｉｇａｎｌｉｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ，ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ，ＨｂａｎｄＢＭＣ，ｗｈｉｌｅ
ｂｏｔｈｔｈｅｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅａｎｄｔｈｅｌｏｗｄｏｓｅｈａｄｍｏｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｃｔｉｏｎｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｐｌａｔｅｌｅｔ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＦＬｉｎｂｏｎｅｍａｒｏｗａｎｄｓｅｒｕｍ
ｗｅｒｅｌｏｗｅｒｉｎＷｅｉｇａｎｌｉｇｒｏｕｐｔｈａｎｔｈａｔｉｎｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄａｎｅｍｉｃｇｒｏｕｐ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙｉｎｈｉｇｈａｎｄｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ
ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｉｏｎｏｆｍｉｃｅｗｈｉｃｈｉｎｄｕｃｅｄｂｙｒａｄｉａｔｉｏｎａｎｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｄｒｕｇｃｏｕｌｄｂｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｉｅｖｅｄｂｙＷｅｉｇａｎｌｉ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍｏｕｓｅ；ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ；Ｗｅｉｇａｎｌｉ；ｂｏｎｅｍａｒｏｗ；ｓｅｒｕｍ；Ｆｌｔ３ｌｉｇａｎｄ
［责任编辑 古云侠］
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