全 文 ：·¬²± k³‹  tulo ·«¨ ¬µµ¬·¤·¬²± ¦²°³²± ±¨·¶¬± µ¤º Π1 τερνατα ¦²∏¯§¥¨ µ∏¶·¨§¤±§§¬¶¶²¯√ §¨o ·«¨ ±¨¨ §¯¨³²¬±·²©µ¤³«¬§¨ ¶º¤¶¥µ²®¨ ±o
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¤¯¤·¨ ¦µ¼¶·¤¯¶¬± §¬©©¨µ¨±·° §¨¬¦¬±¨³¯¤±·¶º µ¨¨ ±²·¶¤° q¨ ׫¨ ¶¨ ³µ²³¨ µ·¬¨¶²©¦¤¯¦¬∏° ²¬¤¯¤·¨ ¦µ¼¶·¤¯ ¬± Œ±§¬¤ ¤§§¨ µ• ²²·¤±§¼¤° ·¨
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[ Κεψ ωορδσ] Πινελλια τερνατα~ ³µ²¦¨¶¶¬±ª° ¦¨«¤±¬¶°~ ·«¨ ¶«¤³¨ ¤±§¦²±·¨±·²©¦¤¯¦¬∏° ²¬¤¯¤·¨ ¦µ¼¶·¤¯¶
≈责任编辑 鲍 雷  
高效液相色谱法测定安宫牛黄丸中栀子苷 !
黄芩苷和盐酸小檗碱的含量
韩凤梅 o李 宇 o李路军 o陈 勇 3
k湖北大学 中药生物技术省重点实验室 o湖北 武汉 wvssyul
≈摘要   目的 }建立同时测定安宫牛黄丸中栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱含量的反相液相色谱法 ∀方法 }采用
„ª¬¯¨ ±·’• …„÷ ≥… p ≤t{柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°lo乙腈 2y °°²¯# pt Ž‹u °’w水溶液 k³‹ w1yl梯度洗脱 o检测
波长 uws ±°∀结果 }栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱的线性范围分别为 w1xs ∗ tts1ssox1ss ∗ txv1ssoy1ws ∗ t|t1ss
°ª# pt ~质量检测下限分别为 s1zzot1xvot1wv ±ª~栀子苷的回收率为 tsw1wwh o• ≥⁄为 t1z|h ~黄芩苷的回收率
为 |y1|{h o• ≥⁄为 t1zyh ~盐酸小檗碱的回收率为 tst1s{h o• ≥⁄为 v1th ∀结论 }采用该方法同时测定安宫牛黄
丸中栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱含量具有简便 l快速 l准确等优点 ∀
≈关键词   ‹ °≤~安宫牛黄丸 ~栀子苷 ~黄芩苷 ~盐酸小檗碱
≈中图分类号   • u{wqt ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszltw2twsy2sv
≈收稿日期   ussy2sw2sy
≈基金项目   湖北省青年杰出人才科学基金 kussu„≤sswl
≈通讯作者   3 陈勇 oר¯}ksuzl{{yyvx|soƒ¤¬}ksuzl{{yy
vx|so∞2°¤¬¯}¦¼tstytsƒ ±³¦qª²√q¦±
安宫牛黄丸处方来源于清代名医吴鞠通撰写的
5温病条辩 6卷一 o善能清解高热神昏 o而无寒凉泄
下之弊 ∀该药是由牛黄 !水牛角浓缩粉 !麝香 !珍珠 !
朱砂 !雄黄 !黄连 !黄芩 !栀子 !郁金和冰片制成的复
方制剂 o清热解毒 o镇惊开窍 ∀用于热病 o邪入心包 o
高热惊厥 o神昏谵语 o中风昏迷及脑炎 o脑出血等症 o
收载于 ussx年版药典一部 ≈t  ∀方中主药栀子有泻
火除烦 !清热利尿 !凉血解毒等功效 o主要成分为栀
子苷 ~黄芩有清热燥湿 !泻火解毒 !止血 !安胎等功
效 o其主要成分为黄芩苷 ~黄连具有清热燥湿 o泻火
解毒等作用 o其主要成分为小檗碱 ∀国内外关于安
宫牛黄丸的质量控制研究 o仅有单独测定本品中盐
酸小檗碱含量及胆红素的报道 ≈uov  o目前药典对此
药含量测定也无规定 ∀本实验采用反相液相色谱法
建立了同时测定安宫牛黄丸中栀子苷 !黄芩苷和盐
酸小檗碱含量的新方法 ∀
1 仪器与试药
„ª¬¯¨ ±·ttss型 ‹°≤仪 k⁄„⁄检测器 o„ª¬¯¨ ±·
≤«¨ °¶·¤·¬²±数据处理系统 o手动进样器 lo³‹¶p v≤
型 ³‹计 k上海雷磁仪器厂 lo…°utt⁄电子天平
k≥¤µ·µ¬∏¶公司 lo≠|u p µ超声波细胞粉碎机 k宁波
新芝生物科技股份有限公司 l∀
栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱对照品 k购于中
国药品生物制品检定所 o批号分别为 szw|2ussszo
ttsztx2usswtvottsztv2ussus{lo安宫牛黄丸 k每丸
重 t1x ªo佛山冯了性药业有限公司 o批号 Š…ssstlo
磷酸二氢钾为分析纯 o乙腈和甲醇为色谱纯 o水为二
次蒸馏水 ∀
2 方法与结果
2q1 色谱分析条件
„ª¬¯¨ ±·’• …„÷ ≥… p ≤t{柱 kw1y °° ≅ uxs
°°ox Λ°lo流动相乙腈 2水 ky °°²¯ # pt Ž‹u °’w
#yswt#
第 vu卷第 tw期
ussz年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tw
∏¯¼o ussz
溶液 o³‹ w1ylo梯度洗脱见表 to流速 t °# °¬±pt o
柱温 us ε o检测波长 uws ±°o进样量 x ˏo流动相
进样前超声脱气 vs °¬±∀
表 t 梯度洗脱条件 h
τ
r°¬±
水
k含 Ž‹u °’w y °°²¯# pt l
乙腈
s |v z
y z| ut
tu z| ut
uz w{ xu
2q2 供试品溶液的制备 将安宫牛黄丸剪碎 o精密
称取 s1ys ª置 ws °塑料离心管中 o加甲醇 ts °
于冰水浴中超声提取 tx °¬±o离心取上清液 o残渣同
法再提取 u次 ∀合并上清液并用甲醇定容至 xs °
量瓶中得供试液 ∀供试液进样前先过 s1wx Λ°超
滤膜 o且滤液于 tu sss µ# °¬±pt离心 ts °¬±∀取上
清即得 o见图 t∀
图 t 安宫牛黄丸 ‹ °≤图
„q对照品 ~…q样品 ~tq栀子苷 ~uq黄芩苷 ~vq盐酸小檗碱
2q3 线性范围和最低检测限 精密称取对照品栀
子苷 z1ux °ªo黄芩苷 v1zy °ª和盐酸小檗碱 w1v{
°ªo分别用甲醇定容至 ts °o然后配制一系列浓度
梯度的栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱的混合溶液 o在
上述优化色谱条件下 o各分析物峰面积 kΨl与其含
量 kΞl进行线性回归 o得到各自回归方程 }栀子苷
Ψ €z1tvΞ n w1|skρ€ s1||| zlo线性范围 w1xs ∗
tts1ss °ª# pt ~黄芩苷 Ψ € x1xwΞ p w1wy kρ €
s1||| {lo线性范围 x1ss ∗ txv1ss °ª# pt ~盐酸小
檗碱 Ψ € tx1zvΞ n tu1uskρ€ s1||| {lo线性范围
y1ws ∗ t|t1ss °ª# pt ∀
配制不同质量浓度梯度的栀子苷 !黄芩苷和盐
酸小檗碱对照品甲醇溶液 o在上述色谱分析条件下
按色谱响应信噪比 k≥r‘l∴ v计算 ov种物质的最低
检测量分别为 s1zzot1xvot1wv ±ª∀
2q4 精密度试验 取同一份安宫牛黄丸供试品溶
液 x ˏ连续进样 x次 o根据峰面积计算 o栀子苷的
• ≥⁄为 u1t{h o黄芩苷 • ≥⁄为 s1|yh o盐酸小檗碱
• ≥⁄为 t1vsh ∀
2q5 稳定性试验 取同一份安宫牛黄丸供试品溶
液 o分别在 souowoyo{ «进样 x ˏo按 2q1项色谱条
件测定栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱的峰面积 o其
• ≥⁄分别为 u1yzh os1xth和 t1twh ∀
2q6 重复性试验 平行精密称取安宫牛黄丸 x份
k每份 s1ys ªlo按供试品溶液制备法制备 x份供试
液并进样分析 ∀栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱峰面
积的 • ≥⁄分别为 t1{th ou1sxh和 t1y{h ∀
2q7 回收率试验 分别精密称取安宫牛黄丸样品
s1vs ª共 x份 o每份准确加入栀子苷 !黄芩苷和盐酸
小檗碱 o按供试品溶液制备法制备 o并按 2q1项色谱
条件测定栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱的含量 o分别
计算两者的加样回收率及 • ≥⁄o结果满意 o见表 u∀
表 u v种成分加样回收率 kν € xl
对照品
样品中含量
rΛª# °pt
加入量
rΛª# °pt
测得量
rΛª# °pt
平均回收率
rh
• ≥⁄
rh
栀子苷 tx1|{ tx1|x vu1uzovu1yzovu1xyovu1x|ovv1s| tsw1ww t1z|
黄芩苷 xs1zz w{1{{ |y1{yo||1s{o|{1yto|z1|zo|{1vw |z1vu t1zy
盐酸小檗碱 uv1tx uv1yx |y1uvotst1tuotst1{zotst1vtotsw1{x tst1s{ v1ts
2q8 样品分析 平行取同一批号的安宫牛黄丸样
品 s1ys ª共 x份 o按供试品溶液制备法制备供试品
溶液并进样分析 o按外标法计算栀子苷 !黄芩苷和盐
酸小檗碱的含量 ∀经换算 o安宫牛黄丸中栀子苷 !黄
芩苷和盐酸小檗碱含量分别为 v1||otu1y|ox1z|
°ªr丸 ∀
3 讨论
3q1 检测波长的选择 由栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小
檗碱的吸收光谱图可知 o栀子苷最大吸收波长为
uws ±°~黄芩苷较大吸收峰波长为 utsou{s ±°~盐
酸小檗碱较大吸收峰波长为 uvsouysovwv ±°∀同
时测定这 v种物质的含量 o可选多波长或改变波长
检测模式 ∀当采用 uws ±°波长检测时 ov种化合物
的检测灵敏度仍较高 o故本实验采用 uws ±°为检测
波长 ∀
3q2 提取时间的影响 比较了甲醇超声提取时间
对栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱的提取率的影响 o经
tx °¬±提取 v次 o栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱已提
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第 vu卷第 tw期
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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∏¯¼o ussz
取完全 k第 w次提取液中已检测不到 l∀考虑到提
取时间过长 o提取液中杂质较多 o故选择 tx °¬±提
取 v次 ∀
3q3 流动相的影响 考察了甲醇 2水 o乙腈 2水 o乙
腈 2≥⁄≥ktx °°²¯# pt l水溶液 o乙腈 2磷酸二氢钾水
溶液 o对栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱分离的影响 ∀
栀子苷和黄芩苷在较低洗脱强度的流动相时就易于
洗脱 o而盐酸小檗碱为季铵碱 k³Κα tt1xlo在流动
相中主要以阳离子形式存在 o易与固定相中酸性硅
羟基结合而较难洗脱 o形成拖尾 ∀当在流动相中加
入适量离子对试剂 ≥⁄≥后 o盐酸小檗碱的保留时间
不仅明显缩短 o且峰形改善 ≈w  o但是由于采用 ≥⁄≥
梯度洗脱后平衡色谱柱时间长 o且与固定相结合较
强难以完全洗出 o分析物保留时间不稳定 ∀本实验
考察了体系中加入不同浓度磷酸二氢钾对分离的影
响 o发现不仅具有以上优点 o而且保留时间更稳定 ∀
由于药中组分较多 o要使栀子苷 !黄芩苷和盐酸小檗
碱达到基线分离并在较短时间洗脱 o须采用二元梯
度洗脱 ∀因此 o采用 „k乙腈 l2… ky °°²¯# pt磷酸
二氢钾水溶液 o³‹ w1yl二元梯度洗脱 o洗脱模式
为 }s ∗ y °¬±ozh ∗ uth „~y ∗ tu °¬±outh „~tu ∗
uz °¬±outh ∗ xuh „o流速 t °# °¬±pt ∀
4 结论
本研究建立了一种新的 • °2‹°≤方法同时测
定安宫牛黄丸中 v种主要活性成分 o结果满意 ∀与
单指标测定相比 o本法简便高效 o准确可靠 o可完善
药典对安宫牛黄丸的含量测定规定 o用于日常生产
及质检中能简便 !快速 !准确控制该药的质量 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 qussx}wuxq
≈u  林似兰 o赵陆化 q安宫牛黄丸中小檗碱的 ‹°≤法测定 ≈ q药
学学报 ot|{|ouwktl}w{q
≈v  李发美 o宋 敏 q高效液相色谱法测定安宫牛黄丸中胆红素含
量 ≈ q沈阳药学院学报 ot||sozkul}{vq
≈w  韩凤梅 o李 宇 o陈 勇 o等 q反相离子对色谱法同时测定左金
丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的含量 ≈ q分析化学 oussxovv
kttl}tyyzq
Σιµ υλτανεουσ δετερµ ινατιον οφ γενιποσιδε, βαιχαλιν ανδ βερβερινε ηψδροχηλοριδε
ιν Ανγονγ Νιυηυανγ πιλλβψ Ρ Π2ΗΠΛΧ
‹„‘ƒ ±¨ª2° ¬¨o Œ≠∏o Œ∏2­∏±o ≤‹∞‘≠²±ª
(Ηυβει Προϖινχε Κεψ Λαβορατορψ οφ Βιοτεχηνολογψ οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Ηυβει Υνιϖερσιτψ, Ωυηαν wvssyu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: „ ± º¨ ° ·¨«²§ ©²µ·«¨ ¶¬°∏¯·¤± ²¨∏¶ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©ª¨ ±¬³²¶¬§¨ o ¥¤¬¦¤¯¬± ¤±§ ¥¨ µ¥¨ µ¬±¨
«¼§µ²¦«¯²µ¬§¨ ¬± „±ª²±ª‘¬∏«∏¤±ª ³¬¯¯ ∏¶¬±ª µ¨√ µ¨¶¨§ ³«¤¶¨ «¬ª« ³¨ µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦° ·¨«²§ «¤§ ¥¨ ±¨ §¨ √¨¯²³¨ §q
Μετηοδ : ׫¨ ²³·¬°∏° ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¦²±§¬·¬²±¶º µ¨¨ ¤¶©²¯ ²¯º¶} „ª¬¯¨ ±·²µ¥¤¬≥… p ≤t{ ¦²¯∏°± kw1y °° uxs °°o x °lo ¤¦¨·²2
±¬·µ¬¯¨ 2‹u ’ k¦²±·¤¬±¬±ªy °°²¯# pt Ž‹u °’w o ³‹ w1yl ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²±~ ¤¶¤§¨ ·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«²©vwv ±°q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¦¤¯¬¥µ¤2
·¬²± ¦∏µ√ ¶¨²©ª¨ ±¬³²¶¬§¨ o ¥¤¬¦¤¯¬± ¤±§¥¨ µ¥¨ µ¬±¨º µ¨¨ ¬¯± ¤¨µ¤··«¨ µ¤±ª¨ ¶²©w1xs2tts1ssox1ss2txv1sso y1ws2t|t1ss °ª# pt o µ¨2
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²©ª¨ ±¬³²¶¬§¨ o ¥¤¬¦¤¯¬± ¤±§¥¨ µ¥¨ µ¬±¨«¼§µ²¦«¯²µ¬§¨ ¬± „±ª²±ª‘¬∏«∏¤±ª³¬¯¯q
[ Κεψ ωορδσ] ‹ °≤~ „±ª²±ª‘¬∏«∏¤±ª³¬¯¯~ ª¨ ±¬³²¶¬§¨ ~ ¥¤¬¦¤¯¬±~¥¨ µ¥¨ µ¬±¨«¼§µ²¦«¯²µ¬§¨
≈责任编辑 鲍 雷  
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