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Research on quality of Epimedium extract in market

淫羊藿提取物的质量研究



全 文 :淫羊藿提取物的质量研究
彭玉德1,2,黄文华1,郭宝林1
(1中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所,北京100094;
2广西药用植物园,广西 南宁530023)
[摘要] 目的:考察目前市场上淫羊藿提取物的质量。方法:采用HPLC测定市售的淫羊藿提取物中朝藿定C、
淫羊藿苷、箭藿苷B的含量和指纹图谱,紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果:大部分提取物中淫羊藿苷含量与公
司提供的标示量一致,全部测定样品的指纹图谱分为3类,分别对应于不同的来源药材,淫羊藿苷标示含量相同的样
品中朝藿定C、箭藿苷B以及总黄酮的含量存在差异。结论:将提取物指纹图谱与药材指纹图谱进行比对,可以初步
确定其来源的药材,药材的不同是造成提取物质量差异的主要因素,建议淫羊藿提取物应该标示药材来源,并进行多
项的含量检测,以便实现提取物质量的稳定。
[关键词] 淫羊藿;提取物;淫羊藿苷;朝藿定C;箭藿苷B;总黄酮;HPLC指纹图谱;质量
[中图分类号]R2841 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)18185804
[收稿日期] 20070405
[通讯作者] 郭宝林,Tel:(010)62895049,Email:guoba
olin010@yahoocomcn
  中药提取物已经成为我国中药出口的主流,我国
的中成药生产也在逐渐使用有效成分含量准确、质量
稳定的提取物作原料。我国2005年版药典仅收载了
少数几种提取物,大多数提取物的质量指标(或等级)
依据国外的需求标准和/或实际生产可行的提取工艺
来制定,以某个或几个指标成分含量(和)为主,如缬
草提取物以缬草酸为含量标准;或者以总成分含量为
标准,如灵芝提取物为总多糖;或者二者兼用,如淫羊
藿提取物以总黄酮含量,淫羊藿苷含量(俗称单苷含
量)或在 HPLC图谱中淫羊藿苷和前面几个色谱峰
(主要是朝藿定C,B和A)的面积总和以淫羊藿苷为
准计算的含量(俗称双苷含量)为指标,国外对于提取
物质量标示一般还要求提供色谱指纹图谱。然而提
取物质量差异仍然是比较复杂的问题,药材不同来源
的质量差别和药材提取工艺的差别是引起各提取物
质量差异的根本原因,其中以前者为主,后者只能部
分地校正前者差别产生的影响。
淫羊藿提取物为我国主要出口的植物提取物之
一,国内厂家生产的中成药中使用的情况还极少。主
要原因是淫羊藿提取物多使用醇提工艺,醇提物水溶
解后用大孔吸附树脂纯化,提取物的生产成本较高。
以淫羊藿苷含量为指标的工艺考察研究表明,水提取
与醇提取的效率相当[1],因此中成药生产多选取成本
比较低的水提取工艺(或辅以醇沉)。淫羊藿提取物
的原料除了药典规定的箭叶淫羊藿Epimediumsagit
tatum(Sieb&Zucc)Maxim、朝鲜淫羊藿Ekorea
numNakai、淫羊藿EbrevicornuMaxim(又称心叶淫
羊藿)、柔毛淫羊藿EpubescensMaxim和巫山淫羊
藿EwushanenseTSYing外,初步调查还有天平山
淫羊藿EmyrianthumStearn和粗毛淫羊藿 Eacu
minatumFranch,不同药材的各成分含量及其比例构
成有很大不同,本研究从测定构成淫羊藿双苷的2个
主成分淫羊藿苷(icarin)、朝藿定 C(epimedinC)的
含量,另一个重要成分箭藿苷B的含量和总黄酮的含
量,以及HPLC指纹图谱的角度考察现今市场上的淫
羊藿提取物的质量状况。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(Waters486DualAbsor
bonceDetector检测器,Empower色谱工作站);UV-
2550紫外可见光分光光度计(SHIMADZU);MET
TLERTOLEDO-XS105型电子分析天平。
乙腈为色谱纯(B&JBrand);水为蒸馏水;其余
试剂均为分析纯。
淫羊藿苷、朝藿定 C和箭藿苷 B由本研究组分
离所得,用光谱方法鉴定结构,并用HPLC面积归一
法测定其纯度为≥99%[2]。
提取物来源于全国生产淫羊藿提取物的几个代
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第32卷第18期
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
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September,2007
表地区的生产公司(赠送或购买),分别为:江苏南通
四海植物精华有限公司(批号B061107);辽宁抚顺鑫
泰药业有限公司(批号020218,031028);山东曲阜天
然绿色工程有限公司(批号20060801);广西桂林莱
茵生物科技股份有限公司 (批号EGE03060601);陕
西西安华腾生物技术有限公司;陕西西安慧科植物开
发有限公司;四川成都天源天然产物有限公司;四川
名山昊柏生物科技有限公司。
2 方法与结果
21 3种单体化合物的含量测定
211 色谱条件 VenusilASB-C18色谱柱(46
mm×250mm,5μm),保护柱:SecurityGuardCartrid
gesC18(4mm×30mm)(美国Phenomenex公司)。
流动相:0min乙腈(A)水(B)(25∶75),24minA
27%,43minA48%,63minA80%,69minA100%,
流速10mL·min-1,检测波长272nm,柱温20℃。3
个对照品HPLC图见图1。
图1 3个对照品的HPLC图谱
1朝藿定C;2淫羊藿苷;3箭藿苷B
212 对照品溶液的制备 分别精密称取朝藿定C
对照品102mg、淫羊藿苷对照品104mg、箭藿苷B
对照品147mg,置于10mL量瓶中,甲醇溶解,并定
  
容至刻度,摇匀,其质量浓度分别为 0102,0104,
0147mg·mL-1,作为对照品溶液。
213 供试品溶液的制备 精密称取提取物100
mg,置于10mL量瓶,甲醇水(6∶4)溶解,并定容至刻
度,摇匀,用微孔滤膜(045μm)滤过,取续滤液作为
供试品溶液。
214 线性关系考察 朝藿定 C回归方程为 Y=
167×106X+472×104,r=09985,在0204~204
μg呈现良好的线性关系。淫羊藿苷回归方程为Y=
254×107X+305×103,r=09995,在0208~208
μg呈现良好的线性关系。箭藿苷B回归方程为Y=
188×106X-175×104,r=09999,在0147~235
μg呈现良好的线性关系。
215 精密度试验 取同一对照品溶液,重复进样5
次,测定朝藿定C、淫羊藿苷和箭藿苷B峰面积,RSD
分别为16%,31%,21%。
216 稳定性试验 取同一供试品溶液,在1,2,4,
6,8h分别测定朝藿定C、淫羊藿苷和箭藿苷B含量,
RSD分别为067%,045%,082%。
217 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批
次样品5份(南通四海批号B061107),分别精密加入淫
羊藿苷、朝藿定C、箭藿苷B对照品适量。按213项
下方法制备供试品溶液5份,按上述方法测定。计算
回收率,平均回收率分别为1015%,1031%,1026%,
其RSD分别为10%,11%,13%。
218 含量测定 按211项下色谱条件进行各
提取物样品中朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷B的含量
测定,结果见表1。
表1 不同来源和不同批号淫羊藿提取物中朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷B及总黄酮的含量 %
No 来源
标示淫羊
藿苷含量
测定值
淫羊藿苷 朝藿定C 箭藿苷B 总黄酮
1 抚顺鑫泰1(020218) 16 16.2 1.32 0.480 63.5
2 抚顺鑫泰2(031028) 16 17.7 1.30 0.603 63.2
3 南通四海 5.12 6.20 3.72 0.826 30.3
4 曲阜天然 3 2.83 3.93 1.05 24.6
5 桂林莱茵 11.49 11.3 7.68 1.94 59.7
6 西安华腾 10 11.5 5.10 2.35 47.2
7 西安慧科 20 22.6 12.7 2.42 73.4
8 名山昊柏1 10 16.3 9.36 1.68 63.3
9 名山昊柏2 20 19.5 11.2 3.09 78.0
10 成都天源天然1 10 11.9 5.20 2.48 46.5
11 成都天源天然2 20 23.2 10.8 1.91 67.3
12 成都天源天然3 30 21.9 10.8 1.90 64.6
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22 淫羊藿提取物HPLC指纹图谱比较
淫羊藿提取物样品的HPLC指纹图谱中的主要
色谱峰指定为1~11(图2),其中峰4为朝藿定C,5
为淫羊藿苷,9为箭藿苷 B,另外根据已有的定性分
析[2],峰2为朝藿定A,峰3为朝藿定B,峰10为宝
藿苷I。本次试验分析的12份样品HPLC指纹图谱
可以分为3类,第一类为来自辽宁抚顺鑫泰公司的
2份样品,第二类为山东曲阜天然绿色工程有限公
司的1份样品,第三类为剩余的9份样品。
图2 淫羊藿提取物样品的HPLC指纹图谱
A抚顺鑫泰;B曲阜天然;C西安华腾
23 总黄酮含量测定
依据药典方法进行,结果见表1。
3 讨论
研究的提取物可以用甲醇水(6∶4)直接溶解,
微孔滤膜过滤后直接进样,但是来源山东曲阜的提
取物溶解性稍差,表明提取物中含有较多黄酮化合
物之外的杂质。
提取物使用的是市场约定的一般规格标准:如
淫羊藿苷含量5%,10%,20%,30%等,公司提供的
产品根据含量的接近程度给予相应标示,也有公司
提供产品实际含量,如辽宁鑫泰、桂林莱茵等。本实
  
验测得的淫羊藿苷含量与标示量接近,只有成都天
源的标示为30%的样品与标示为20%的样品的所
有成分含量极其接近,疑样品提供有误(没有从公
司得到回复);名山昊柏的标示为10%的样品实际
含量为16%,原因可能是生产用原料的差异而产
生。
对于提取物的原料来源,已知的是辽宁的2份
样品来自于辽宁产的朝鲜淫羊藿,西安的2份样品
来自于甘肃产的心叶淫羊藿,其他公司的进货渠道
多是药材市场,原料品种不明。而根据提取物的指
纹图谱情况,结合已有的原药材指纹图谱研究经验,
初步判断3种类型图谱中的第一类与朝鲜淫羊藿药
材的图谱吻合,第二类图谱与资源量大的柔毛淫羊
藿或者粗毛淫羊藿药材的图谱吻合,第三类图谱与
甘肃产的心叶淫羊藿药材图谱吻合,表明市场上淫
羊藿提取物的原料来源以心叶淫羊藿药材的情况居
多。
提取物图谱与药材图谱也存在差异,主要体现
在每一类图谱中淫羊藿苷的含量与朝藿定 C含量
比例相对于药材增大了,有可能是在提取过程中的
化合物之间的转化有关,有待进一步研究。依此推
测,以往的淫羊藿提取工艺以淫羊藿苷的含量为指
标来确定提取工艺的合理或提取是否完全,可能是
不合理的。
药材来源的不同,导致同一或相近的淫羊藿苷
含量规格提取物的实际质量差别较大,体现在朝藿
定C、总黄酮的含量上,箭藿苷B也是提取物中不容
忽视的重要成分。因此本研究建议淫羊藿提取物应
该标明药材来源,提取物的质量会因药材的来源品
种不同而产生较大的差异,并且检测更多的含量指
标,以便保证质量的稳定。
[参考文献]
[1] 王昌利,宋小妹,武新华,等.淫羊藿总黄酮提取分离工艺研究
[J].中成药,1996,18(5):1
[2] 郭宝林,余竞光,肖培根.淫羊藿化学成分研究[J].中国中药
杂志,1996,21(5):290
ResearchonqualityofEpimediumextractinmarket
PENGYude1,2,HUANGWenhua1,GUOBaolin1
(1InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedical
SciencesandPekingUnionMedicalColege,Beijing100094,China;
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2GuangxiBotanicalGardenofMedicinalPlant,Nanning530023,China)
[Abstract] Objective:ToreviewthequalityofEpimediumextractinthemarketMethod:Thecontentsoficarin,epimedinC,
sagitatosideBandtotalflavonoidsinEpimediumextractssoldinthemarketwereassayedbythemethodsofHPLCandUVrespective
lyHPLCfingerprintingswereobtainedatthesametimeResult:Thecontentsoficarininmostoftheextractsarecloselysimilarwith
theoneslabeledbythecompanies3typechromatogramswereclassifiedinaltheHPLCfingerprintings,andwerecorespondedwith
theirrawmaterialsThecontentsofepimedinC,sagitatosideBandtotalflavonoidswerediferentinthesampleswiththesamecontent
oficarinConclusion:WecanprimarilyconfirmtheoriginofrawmaterialsbycomparingtheHPLCfingerprintingofextractswiththe
onesofmaterialsThediferenceofextractsqualitymainlycomesfromthediferenceofmaterialsSowesuggestthatEpimediumextract
productshouldbelabeledtheoriginofmaterials,andassayedwithmorecompoundcontents,toensurethequalitystabilization
[Keywords] Epimediumextract;icarin;epimedinC;sagitatosideB;totalflavonoids;HPLCfingerprinting;quality
[责任编辑 张宁宁]
[收稿日期] 20070306
[基金项目]  国家重点基础研究发展计划973计划
(2006CB504700);国家自然科学基金项目(30672616,30672617);国
家科技支撑计划(2006BAI09B03)
[通讯作者]  黄璐琦,Tel:(010)640144112955,Email:
huangluqi@263net
基于 RS和 GIS技术的江苏邳州市
银杏资源动态变化研究
孙宇章1,顾晓鹤2,阳小琼2,朱文泉2,郭兰萍1,黄璐琦1,潘耀忠2
(1中国中医科学院 中药研究所,北京 100700;
2北京师范大学资源学院 地表过程与资源生态国家重点实验室,北京 100875)
[摘要] 目的:利用RS和GIS的空间分析功能,分析2001年到2006年江苏邳州市银杏的动态变化。方法:
运用GIS和RS技术 ,以LANDSAT5TM为数据源,对2001年4月3日,2005年1月16日和2006年7月30日3期
的TM遥感图像进行银杏信息提取分析,在2006年9月的野外实地调查数据的支持下,获取银杏在江苏邳州市的
空间分布及多年动态变化规律。结果:2001年江苏邳州市银杏资源量为161万hm2,2005年为184万 hm2,2006
年为188万hm2。结论:江苏邳州市银杏资源量从2001年到2006年逐步增长。
[关键词] 银杏;RS和GIS技术;动态变化;landsatTM
[中图分类号]S567 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)18186104
  遥感技术已经被广泛应用于很多领域,尤其是
遥感的动态分析功能,对大范围药用中药资源的资
源量和中药长势的动态分析,具有极为重要的意
义[1]。遥感的发展正朝着定性转化为定量,静态观
测转化为动态监测,试验性研究向产业过渡的方向
发展。目前世界上技术先进的国家已开始利用遥感
资料预测作物产量。
传统的中药资源动态变化研究主要采用人工调
查的方法,工作量大,耗资多,并且工作受季节和气候
的影响。利用RS/GIS对中药资源进行动态监测,具
有周期短、快速、准确、及时的特点。传统中药资源的
调查主要集中在中药品种调查、中药资源的种类、分
布、常用药材的蕴藏量和采收量等静态描述上,由于
受生态环境变化和群落演替规律等的影响,中药资源
贮量是一个动态变化的过程。动态监测是遥感应用
的一大特征,因此,利用遥感技术建立动态的银杏资
源量调查对中药资源量的变化研究具有重要意义。
银杏 GinkgobilobaLinn为银杏科银杏属植物,
又名公孙树,主产中国,中国拥有的银杏资源量占世
界总量的70%。江苏邳州是全国五大银杏基地之
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第32卷第18期
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