全 文 ：冷冻丙酮法提纯 α亚麻酸
杨 倩，王四旺，王剑波，谢艳华，苗 青
（第四军医大学 药学系 药物研究所，陕西 西安 ７１００３３）
［收稿日期］ ２００６０７１２
［基金项目］ 陕西省中医药管理局资助项目（２００５０７９）
［通讯作者］ 王四旺，Ｔｅｌ：（０２９）８４７７４７４８，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｓｉｗ＠
ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
椒目为芸香科植物青椒Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍｓｃｈｉｎｉｆｏｌｉｕｍ
Ｓｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ或花椒Ｚ．ｂｕｎｇｅａｎｕｍＭａｘｉｍ的干燥
成熟种子［１］。９０年代对花椒籽的研究发现其仁油中
含α亚麻酸１７％～２４％，成为α亚麻酸开发的新资
源［２，３］。α亚麻酸在体内参与磷脂的合成，并代谢转
化为人体必需的ＥＰＡ（二十碳五烯酸）和ＤＨＡ（二十
二碳六烯酸）。α亚麻酸及其代谢物具有益智、保护
视力、降血脂、降血压、抑制血小板凝聚、抗血栓形成、
延缓衰老、抗过敏及抑制癌症的发生和转移等作用。
所以，在医药和保健品等领域有广阔的应用前景［４］。
椒目中提纯α亚麻酸的完整工艺至少包括皂化酸解、
冬化、尿素包合等四步过程；α亚麻酸为９，１２，１５十
八碳三烯酸，为不饱和脂肪酸，使用冷冻法能较好地
将饱和脂肪酸除去，提高不饱和脂肪酸的含量及其尿
素包合的产率及产量。尿素包合是提纯α亚麻酸一
个十分重要的步骤，它是多烯脂肪酸的常用富集方
法，工艺简便，可有效地保护双键不被氧化，从而有效
地保证其营养与生理活性［５，６］。冷冻作为尿素包合的
前步骤，有着重要的意义。作者对椒目中提取α亚麻
酸工艺中的冷冻步骤进行优选。
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司）；
２９９６型二极管阵列检测器（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司）；低
温率冷却液循环泵（上海东玺制冷仪器设备有限公
司）。
椒目购自陕西省韩城市，经陕西省药品检验所
鉴定符合《山东省中药材标准》１９９５年版第１８１页
椒目项下有关规定。α亚麻酸标准品（美国 Ｓｉｇｍａ
公司，批号１１１６３１２００５０２）；乙腈，色谱纯（ＴＥＤＩＡ）；
硫酸、氢氧化钠、丙酮等均为分析纯。
２ 方法
２．１ 正交设计 以椒目为原料，皂化酸解得到混合
脂肪酸后，进行冷冻试验。以 α亚麻酸含量、尿素
包合后出油率的综合评分为指标（综合评分 ＝
含量×８０％＋出油率 ×２０％），根据预试结果，选择
丙酮与混合脂肪酸的比、温度和时间为因素，按
Ｌ９（３
４）正交设计安排试验，因素水平见表１。
表１ 因素水平
水平
Ａ
混合脂肪酸∶丙酮
Ｂ
温度／℃
Ｃ
ｔ／ｈ
Ｄ
空白
１ １∶０５ －２０ １２
２ １∶１ －３０ ２４
３ １∶２ －４０ ３６
注：时间为冷冻时间；混合脂肪酸均取１００ｍＬ
２．２ 混合脂肪酸的制备 取５００ｇ椒目粉碎，加入
５％的氢氧化钠水溶液，６５℃加热，过滤出煎煮液，
同法操作２次，合并煎煮液，缓缓滴入硫酸，使溶液
ｐＨ为２～４，分离出上层油液，用水冲洗至中性即得
椒目仁油混合脂肪酸。混合脂肪酸中再加入等体积
的石油醚，混匀后取石油醚层，回收石油醚得精制混
合脂肪酸。
２．３ 冷冻试验 按表１试验，取精制混合脂肪酸与
丙酮按表中的比例分别混合，并在相应的温度下冷
冻至规定的时间后，迅速过滤，适量丙酮冲洗，取滤
液，回收丙酮，加适量无水硫酸镁，过滤得到除去大
部分饱和脂肪酸的混合不饱和脂肪酸。
２．４ 含量测定 采用高效液相色谱法测定 α亚麻
酸含量。色谱条件：固定相 Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２００
ｍｍ，５μｍ，ＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒＣ１８，Ｈａｎｂｏｎｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｏｌ
ｏｇｙＣｏ，Ｌｔｄ）；流动相乙腈１％醋酸溶液（９０∶１０）；
检测波长１９５ｎｍ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温２５℃；
进样量 ２０μＬ。标准曲线 Ａ＝９５７３７４１Ｃ＋
６４２４１２７，ｒ＝０９９９７。
２．５ 统计方法 采用ＳＰＳＳ软件的 ＡＮＯＶＡ分析方
法。
３ 结果与分析
３．１ α亚麻酸含量及出油率 测定结果见表２。
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
表２ 正交试验结果 ％
Ｎｏ α亚麻酸 出油率 综合评分１）
１ ３７２５ ５６００ ４１０００
２ ３９２９ ８０００ ４７４３２
３ ３７４８ ６０００ ４１９８４
４ ４１３５ ６６００ ４６２８０
５ ４５４４ ６２００ ４８７５２
６ ４８８５ ６０００ ５１０８０
７ ３７１５ ７２００ ４４１２０
８ ３９５７ ６０００ ４３６５６
９ ４６５４ ４６００ ４６４３２
注：１）综合评分＝含量×８０％＋出油率×２０％
由表２可知，最佳工艺为 Ａ２Ｂ３Ｃ２，即混合脂肪
酸与丙酮以１∶２的比例在 －４０℃下冷冻２４ｈ。由
表３可知，混合脂肪酸和丙酮的比例以及温度对实
验结果的影响最大，时间影响次之。
表３ 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 Ｆ
Ａ ４４７１７ ２ ８３５５
Ｂ １５２１１ ２ ２８４２
Ｃ ５３５２ ２ １０００
Ｄ １９３８９ ２ ３６２３
误差 ５３５ ２
注：Ｆ临界值 ＝１９０００
３．２ 工艺验证 依据最佳工艺Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ１做３次验
证，α亚 麻 酸 含 量 分 别 为 ５２６９％，５２０２％，
５１８５％；出油率分别为６５％，６３％，６６％；综合评分
结果分别是 ５５１５３，５４２１８，５４６８１；ＲＳＤ０５８％。
表明该工艺可行，结果稳定。
３．３ 加样回收率 α亚麻酸回收率见表４。
表４ α亚麻酸加样回收率
样品中含量
／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
８２３１５ １１５３４５ ９６９２
８４２０６ １１７８３２ ９８６７
８４２０６ １１７８３２ ９８６７ ９６１４ ２２７
８４２０６ １１７８３２ ９８６７
８４２０６ １１７８３２ ９８６７
注：加入量均为３４０８μｇ
３．４ α亚麻酸 ＨＰＬＣ图 对照品和椒目中混合脂
肪酸冬化后的α亚麻酸色谱图，见图１，２。
图１ α亚麻酸对照品ＨＰＬＣ图谱
图２ 椒目中混合脂肪酸冷冻后样品中
α亚麻酸ＨＰＬＣ图
１α－亚麻酸
４ 讨论
冬化是椒目提纯 α亚麻酸工艺中重要的一个
环节，是除去饱和脂肪酸的关键步骤。因此，冬化工
艺进行正交试验优化具有重要意义。本试验对该步
工艺进行了Ｌ９（３
４）正交试验，确定混合脂肪酸与丙
酮以１∶２的比例在－４０℃下冷冻２４ｈ时，对椒目中
提高α亚麻酸的含量和出油率均较佳。
丙酮冷冻试验诸因素中，混合脂肪酸与油的比
例，以及冬化的温度对椒目中提高 α亚麻酸的含量
和收油率影响较大。故在生产过程中使用混合脂肪
酸，油的比例及温度对椒目中提高 α亚麻酸的含量
及其出油率具有决定性作用。在最佳的正交因素水
平下进行验证试验，所得油中 α亚麻酸含量最高，
出油率有所下降，其含量与出油率成反比，可以根据
实际的需求进行调整。考虑到能源问题，最佳工艺
条件中冬化２４ｈ，耗时耗能大，在工业生产中可考虑
改成１２ｈ。由于时间是诸因素中影响最小的，采用
１２ｈ冬化，对 α亚麻酸的含量和收油率影响较小，
且符合实际工业化生产。实验室研究发现，随着温
度地降低，α亚麻酸的含量呈明显升高趋势，可继续
降低温度，进行试验分析。
［参考文献］
［１］ 山东省卫生厅．山东省中药材标准［Ｓ］．１９９５：１８１．
［２］ 李桂华，付黎敏，薛开发．花椒种籽化学成分分析研究［Ｊ］．郑
州粮食学院学报，１９９４，１５（４）：２１．
［３］ 庄世宏，李孟楼．花椒籽油的成分分析［Ｊ］．西北农业学报，
２００２，１１（２）：４３．
［４］ 范文询．α亚麻酸及其代谢产物［Ｊ］．生理科学进展，１９８８，
（２）：１１２．
［５］ 王淑丽，陈济民．苏资油与 α亚麻酸［Ｊ］．沈阳药科大学学报，
１９９５，１２（３）：２２８．
［６］ 黄惠琴，李孟楼．多价不饱和脂肪酸分离与纯化技术进展［Ｊ］．
中国油脂，１９９９，２４（２）：３２．
［责任编辑 鲍 雷］
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