全 文 ：羧甲基魔芋胶的结肠定位酶降解性能研究
张 瑜 tou o武亚玲 t o侯世祥 u3
ktq河南大学 中药研究所 o河南 开封 wzxssw~ uq四川大学 华西药学院 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要   目的 }通过体外法研究羧甲基魔芋胶的酶降解性能 o评价其作为结肠定位给药系统载体材料使用的
可行性 ∀方法 }分别用含大鼠胃 !肠道内容物或商品酶的溶液模拟体内胃 !肠道酶降解环境 o采用黏度法考察羧甲
基魔芋胶的酶降解性能 o并对材料的酶降解动力学和醚化度与溶液 ³‹对材料降解性能的影响进行研究 ∀结果 }羧
甲基魔芋胶在模拟胃和小肠环境的溶液中不被降解 o在模拟盲 !结肠环境的溶液中可被降解 ~羧甲基魔芋胶和魔芋
胶的酶降解动力学符合米氏方程 o羧甲基魔芋胶的酶降解性能随其醚化度增加而降低 o在 ³‹ y1s ∗ y1{溶液中 o羧
甲基魔芋胶的酶降解性能高 ∀结论 }羧甲基魔芋胶具有结肠定位酶降解性能 o可作为酶降解型结肠定位给药系统
载体材料使用 ∀
≈关键词   羧甲基魔芋胶 ~结肠定位 ~酶降解 ~大鼠盲 !结肠内容物酶 ~Β2甘露聚糖酶
≈中图分类号   • u{v ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszluu2uvys2sw
≈收稿日期   ussz2st2uw
≈通讯作者   3 侯世祥 oר¯}ksu{l{xxsu{s|o∞2°¤¬¯}«²∏¶¬¬ƒ
uyvq± ·¨
酶降解型结肠定位给药系统是依据人体结肠独
特的菌群分布 o利用微生物产生的偶氮还原酶 !糖苷
酶等多种酶 o降解药物载体 o使药物在结肠定位释
放 o释药部位特异性强 o成为目前口服结肠定位给药
系统研究的热点之一 o此类给药系统制备的关键是
载体材料选择 o材料主要有天然和合成两大类 o与合
成材料相比 o天然材料如果胶 !瓜尔多胶及其衍生物
等具有安全性高 o价廉易得等优点 o应用前景广
阔 ≈t  ∀
魔芋 Αµ ορπηοπηαλλυσριϖιερι是天南星科魔芋属的
多年生草本植物 o在我国作为食品和药品使用历史悠
久 ∀目前我国魔芋产量及出口居世界第 t位 o但其深
加工研究缺乏 o产品附加值低 o因此 o加强其相关产品
的应用研究成为我国魔芋产业开发的热点 ∀魔芋胶
k®²±­¤¦ª¯∏¦²°¤±±¤±oŽŠ l作为从魔芋中提纯得到
的多糖 o在胃肠道上端不被消化酶降解 o而被结肠菌
群酶降解 o可作为载体材料用于酶降解型结肠定位给
药系统的制备 o但应用中存在溶胀性过大 !剂型加工
选择性小等不足 ≈uov  ∀羧甲基魔芋胶 k¦¤µ¥²¬¼° ·¨«¼¯
®²±­¤¦ª¯∏¦²°¤±±¤±o≤ ŽŠ l是 ŽŠ 的氯乙酸醚化
改性产物 o可克服 ŽŠ使用中存在的不足 o已被作为
载体材料用于给药系统的研究 ≈w  o但其酶降解性能未
见国内 !外有相关研究报道 ∀作者通过采用含大鼠
胃 !肠道内容物或商品酶的溶液模拟人体胃 !肠道酶
降解环境 o考察 ≤ ŽŠ 的酶降解性能 o并对材料的
酶降解动力学和醚化度与溶液 ³‹对其降解性能的
影响进行研究 o探讨 ≤ ŽŠ作为酶降解型结肠定位
给药系统载体材料使用的可行性 ∀
1 仪器与试药
≥⁄大鼠 k四川大学华西实验动物中心 l~˜∂ p
uust紫外 2可见光分光光度计 k≥‹Œ „⁄˜l~׊p
tyŠ型离心机 k上海市安亭科学仪器厂 l~≥Žxuss‹
型超声仪 k上海科导超声仪器有限公司 l~ŽŠ k成
都科瑞魔芋研究所 l~≤ ŽŠ 自制 o醚化度 k§¨ ªµ¨¨
²© ¶∏¥¶·¬·∏·¬²±o ⁄≥l分别为 s1ts|o s1vvyo s1w{zo
s1yswos1|syk酸化法测定 l~Β2甘露聚糖酶 k上海市
宝丰生化有限公司 l~胃蛋白酶和胰酶 k华懋双汇实
业 k集团 l有限公司生物化学制药厂 l~乌氏黏度计
k江都市银都玻璃仪器厂 l∀
2 方法与结果
2q1 大鼠胃 !肠道内容物对材料的降解研究
2q1q1 不同部位大鼠胃 !肠道内容物溶液的配制
参照文献方法 ≈x  o分别配制含大鼠胃 !小肠上段 k靠
近胃 l!小肠下段 k靠近盲肠 l!盲肠和结肠内容物的
混悬液 k其中胃内容物采用 s1sx °²¯ # pt的 ³‹
v1x醋酸盐缓冲液 o其余采用 s1sx °²¯ # pt的 ³‹
y1{磷酸盐缓冲液 k以下简称 °…≥lo内容物质量浓
度均为 tss ª# pt l∀
#syvu#
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2q1q2 降解过程材料溶液的黏度变化 用相应缓
冲液配制数份 ≤ ŽŠ k⁄≥为 s1w{zl溶液 k体积为
us °o质量浓度 t ª# pt o其中分别含相应内容物
混悬液 s1x °lo置于 kws ? tl ε 水浴中 o降解不同
时间 ksotsovs °¬±otouowoy «l后 o煮沸 x °¬±灭活
酶 o冷却并补加损失水分 o混匀后离心 kv sss µ#
°¬±pt lts °¬±o取上清液 o采用 5中国药典 6ussx年
版 k二部 l附录 √ Š项下第三法测定其黏度 ~并用相
应缓冲液作降解空白对照 o结果见图 t∀
图 t 含不同部位大鼠胃 !肠内容物的 ≤ ŽŠ 溶液
黏度变化曲线 kcξ ? σ, ν € vl
由图 t发现 o降解过程中 o含胃 !小肠上段内容
物的 ≤ ŽŠ溶液黏度变化与对照组相近 o其中含
胃内容物的溶液黏度降低与材料在酸性溶液下发生
酸催化水解有关 ~含小肠下段内容物的 ≤ ŽŠ 溶
液黏度与对照组相比稍有降低 o这与内容物菌群种
类有部分与盲肠菌群相同 o但浓度偏低 o产生的降解
酶量少有关 ~含盲 !结肠内容物的 ≤ ŽŠ溶液黏度
降低明显 o这与盲 !结肠内容物菌群产生的降解酶量
多有关 ∀
2q2 商品酶对材料的降解性能研究
用 °…≥配制数份 ≤ ŽŠ k⁄≥为 s1w{zl溶液
≈u ª# pt o其中分别含相应商品酶 k胰酶浓度 ts ª
# pt oΒ2甘露聚糖酶 s1st ª# pt l ~用 s1sx °²¯#
pt ³‹ v1x醋酸盐缓冲液配制数份 ≤ ŽŠ溶液 ku
ª# pt o其中含胃蛋白酶浓度 v1u ª# pt lo按 2q1q
2项下操作 o结果见图 u∀
图 u 含不同商品酶的 ≤ ŽŠ 溶液黏度变化曲线
kcξ ? σ, ν € vl
由图 u发现 o降解过程中 o含胰酶和胃蛋白酶的
≤ŽŠ溶液黏度变化与相应对照组相近 o说明胰酶和
胃蛋白酶对 ≤ŽŠ无降解作用 ~含 Β2甘露聚糖酶的
≤ŽŠ溶液黏度与对照组相比明显不同 o表现为黏度
急剧降低 o说明 Β2甘露聚糖酶可降解 ≤ŽŠ ∀
2q3 材料酶降解动力学研究
2q3q1 降解酶溶液的配制 用 °…≥配制 s1t ª#
pt的含 Β2甘露聚糖酶 k酶活力为 ys1wz ˜# °ªpt l
溶液 ∀
用 °…≥为介质 o参照文献方法 ≈x  o采用超声破
壁 o离心分离得到蛋白质量浓度 s1x ª# pt和 t1s ª
# pt的含大鼠盲 !结肠内容物酶 k酶活力为 {1sy ˜
# °ªpt l溶液 ∀
2q3q2 初速度法研究材料的酶降解动力学 用
°…≥配制系列浓度的 ŽŠ 和 ≤ ŽŠ k⁄≥为
s1w{zl溶液 k分别为 touowoyo{otsotw ª# pt o体
积为 x °lo各浓度均为 u份 o其中一份加 s1t ª#
pt Β2甘露聚糖酶溶液 k或 s1x ª# pt大鼠盲 !结肠
内容物酶溶液 lu °o另一份加入 u °煮沸灭活 x
°¬±的相同酶液作为对照 o混匀后置于 kws ? tl ε
水浴中并计时 ots °¬±后取出 o置于沸水中煮沸 x
°¬±灭活酶 o采用 vox2二硝基水杨酸显色法 k⁄‘≥
法 l测定酶降解生成还原糖量 ≈y  ∀将酶降解反应速
率 kςoΛ°²¯ # °ªpt # °¬±pt l对材料质量浓度 kΧoª
# pt l进行米氏方程拟合 o结果见表 t∀
表 t ŽŠ 和 ≤ ŽŠ 酶降解动力学的米氏方程拟合结果
底物 降解酶 拟合方程 Ρ ςµ rΛ°²¯# °ªpt # °¬±pt Κµ rª# pt
魔芋胶 Β2甘露聚糖酶 trς € s1syu z ≅ ktrΧl n s1stv v s1||x v zx1su w1zst
大鼠盲 !结肠内容物酶 trς € s1vwt s ≅ ktrΧl n s1s{| u s1||t | tt1uu v1{uw
羧甲基魔芋胶 Β2甘露聚糖酶 trς € s1twy w ≅ ktrΧl n s1suw y s1||{ u ws1yx x1|xt
大鼠盲 !结肠内容物酶 trς € s1yu{ { ≅ ktrΧl n s1tuw s s1||v z {1syw x1szt
由上表数据发现 oŽŠ 和 ≤ ŽŠ 的酶降解动
力学均符合米氏方程 ~比较同种酶对两种材料降解
时的 ςµ值发现 o≤ ŽŠ 的酶降解性能低于 ŽŠ ~
比较同种酶对两种材料降解时的 Κµ值发现 o与
ŽŠ相比 o酶与 ≤ ŽŠ的亲和力小 o这与 ŽŠ 醚
化改性后 o其分子结构发生改变 o影响酶对材料中降
#tyvu#
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解位点的识别和作用有关 o这也是 ≤ ŽŠ 的酶降
解性能低于 ŽŠ的原因之一 ∀
2q4 ≤ ŽŠ醚化程度对材料酶降解性能的影响
用 °…≥配制 x ª# pt的 ŽŠ 和 ≤ ŽŠ k⁄≥
分别为 s1ts|os1vvyos1w{zos1yswos1|syl溶液 o加
入 s1t ª# pt Β2甘露聚糖酶溶液 k或 t1s ª# pt大
鼠盲 !结肠内容物酶溶液 l s1t °o混匀后置于
kws ? tl ε 水浴中并计时 ovs °¬±后取出 o煮沸 x
°¬±灭活酶 o冷却至室温 o同时用灭活酶液平行操作
为对照 o采用 ⁄‘≥法测定酶降解生成还原糖量 o结
果见图 v∀
图 v 醚化度对 ≤ ŽŠ 酶降解性能的影响
kcξ ? σ, ν € vl
由图 v发现 o≤ ŽŠ的酶降解性能低于 ŽŠ o
其酶降解性能随醚化度增加而降低 …≈表现为
≤ ŽŠ酶降解生成的还原糖量 kΑo°ªl与其醚化
度 kΒl呈负相关 o其中 Β2甘露聚糖酶 Α € p u1|ut {
Β n v1w{yo Ρ € s1||v t~大鼠盲 !结肠内容物酶
Α € pw1yuu x Β n x1tyz {o Ρ € s1|{v z … o这与
ŽŠ 醚化改性后 o其分子主链糖残基上引入羧甲
基 o分子结构发生改变 o同时羧甲基的存在可产生空
间位阻效应 o均会影响酶对材料中降解位点的识别
和作用 k这与前面材料的酶降解动力学研究结果一
致 lo导致 ≤ ŽŠ的酶降解性能下降有关 o这与其
他多糖材料改性后酶降解性能的变化情况相一
致 ≈z  ∀
2q5 ³‹对材料酶降解性能的影响
用不同 ³‹ k分别为 w1sox1soy1soy1{o{1sl的
°…≥配制质量浓度均为 x ª# pt的 ≤ ŽŠ 溶液
k⁄≥为 s1w{zlo按 2q4项下操作 o结果见图 w∀
由图 w发现 o在 ³‹ y1s ∗ y1{的溶液中 o
≤ ŽŠ可被 Β2甘露聚糖酶或大鼠盲 !结肠内容物
酶有效降解 o超出此 ³‹范围 o材料的酶降解性能有
所降低 ∀由此提示 o使用含此两种酶的溶液模拟体
内结肠酶降解环境时 o溶液 ³‹应在 y1s ∗ y1{∀
3 讨论
羧甲基魔芋胶具有凝胶成丸性能 o可作为载体
图 w 溶液 ³‹对 ≤ ŽŠ 酶降解性能的影响
kcξ ? σ, ν € vl
材料用于制备剂量分散型剂型如小丸剂等 o与剂量
单一单元型剂型如片剂等相比 o前者具有在胃 !肠道
内的转运 k如胃排空时间等 l不受食物输送节律的
影响 !释药规律重现性好 !流动性好 !便于制剂后续
加工 k如填装胶囊 l等优点 o是目前口服缓 !控释给
药系统制备的常用剂型 ≈{  ∀
目前 o材料降解性能的评价方法可分为两类 }≠
材料本身消失 ~降解产物形成 ∀本研究中 o材料酶
降解性能研究时 o测定溶液黏度变化和还原糖生成
量的方法分别属于这两种 ∀黏度是衡量线性高分子
材料分子大小 k即聚合度 l及其空间伸展程度的重
要指标参数 o作为线性高分子的 ≤ ŽŠ 在溶液中
可充分伸展 o溶液黏度与其分子大小有关 o溶液黏度
变化可反映材料分子大小变化情况 o因此 o在
≤ ŽŠ 酶降解过程中 o通过乌氏黏度计测定材料
溶液黏度变化 o可评价其降解性能 ≈x  ~作为多糖材
料 o≤ ŽŠ酶降解过程中 o可生成还原性低聚糖或
单糖等 o通过测定生成还原糖的量 o也可评价其降解
性能 o另外还原糖测定时 o为消除样品 k包括材料和
酶液 l中已有还原糖对测定的干扰 o采用灭活酶液
平行操作为对照进行校正 ∀
采用体外法考察 ≤ ŽŠ 的酶降解性能时 o分
别用含大鼠胃 !肠道内容物或商品酶的溶液来模拟
体内胃 !肠道酶降解环境 ∀选择大鼠作为实验动物
是根据文献报道啮齿类动物的胃 !肠道内容物菌群
与人类相似 o在以多糖为载体材料的结肠定位给药
系统体外释放研究时 o多采用含大鼠盲 !结肠内容物
的溶液作为释放介质 ≈t  ~商品酶的选择是依据人体
胃 !肠道不同部位所存在酶而定 o其中胃蛋白酶和胰
酶分别为模拟胃和小肠环境的常用酶 oΒ2甘露聚糖
酶是存在于人体盲 !结肠环境的常见多糖降解
酶 ≈{  ∀另外模拟胃部环境的溶液 ³‹选择应兼顾酶
活性和降解性能评价两方面 }³‹偏低 o酶活性高 o但
材料酸水解严重 o可能会掩盖酶降解作用 ~³‹偏高 o
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可避免酸水解 o但会过分抑制酶活性 o无法真实模拟
体内酶对材料的降解 o综合考虑 o选择 ³‹ v1x的醋
酸盐缓冲液 ∀
采用黏度法考察 ≤ ŽŠ 的酶降解性能发现 o
≤ ŽŠ在模拟胃 !小肠环境的溶液中不被降解 o而
在模拟盲 !结肠环境的溶液中可被降解 o具有结肠定
位酶降解特性 ~含大鼠盲 !结肠内容物或 Β2甘露聚
糖酶的溶液能有效模拟体内结肠环境 o可作为释放
介质用于以 ≤ ŽŠ为载体的结肠定位给药系统体
外释放研究 ∀
材料的酶降解动力学 !醚化度和溶液 ³‹ 对
≤ ŽŠ降解性能的影响研究发现 o≤ ŽŠ的酶降
解性能低于 ŽŠ o并且其降解性能随材料醚化度增
加而降低 o两者呈负相在 o提示 ≤ ŽŠ作为结肠定
位给药系统载体材料使用时 o应注意其醚化度控制 ~
使用含 Β2甘露聚糖酶或大鼠盲 !结肠内容物酶的溶
液模拟体内结肠酶降解环境时 o溶液 ³‹范围应在
y1s ∗ y1{∀
4 结论
≤ ŽŠ 不被胃 !肠道上段消化酶降解 o只被
盲 !结肠内容物酶降解 o具有结肠定位酶降解特性 o
材料的酶降解动力学过程符合米氏方程 o并且其降
解性能随材料醚化度增加而降低 ∀因此 o≤ ŽŠ
可作为酶降解型结肠定位给药系统的载体材料使
用 o但应注意其醚化度控制 ∀
≈参考文献  
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≈v  张 瑜 o侯世祥 o卢 懿 o等 q结肠定位魔芋胶 2羟丙甲纤维素包
衣片的制备及体外释药研究 ≈ q中国中药杂志 oussyovtk{l}
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聚糖含量的实验研究 ≈ q中国中药杂志 oussvou{kwl}vuwq
≈z  ⁄¤°¬¤± ƒo  ²²·¨µŠ ∂ ⁄o ≥¤°¼± ≤o ·¨¤¯q Ιν ϖιτρο ¥¬²§¨ ªµ¤§¤·¬²±
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·²·«¨ ¦²¯²±≈ q Œ±·°«¤µ°o ussuouv|ktl}t|zq
Στυδψ ον ιν ϖιτρο χολον 2σπεχιφιχ ενζψµ ατιχ δεγραδατιον περφορµ ανχε
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‹„‘Š ≠∏tou o • ˜ ≠ ¤2¬±ªt o ‹ ’˜ ≥«¬2÷¬¤±ªu
(t. ΣχηοολοφΠηαρµ αχψ, Ηεναν Υνιϖερσιτψ, Καιφενγ wzxssw, Χηινα;
u. Ωεστ Χηινα Σχηοολοφ Πηαρµ αχψ, Σιχηυαν Υνιϖερσιτψ, Χηενγδυ ytsswt, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: Ιν ϖιτρο ±¨½¼°¤·¬¦§¨ ªµ¤§¤·¬²± ²©¦¤µ¥²¬¼° ·¨«¼ ®²±­¤¦ª¯∏¦²°¤±±¤± k≤ ŽŠ l º µ¨¨ ¶·∏§¬¨§·² √¨¤¯∏2
¤·¨·«¨ ©¨¤¶¬¥¬¯¬·¼ ²©≤ ŽŠ ∏¶¨§¤¶¦¤µµ¬¨µ°¤·¨µ¬¤¯¶·²³µ¨³¤µ¨ ¦²¯²±2¶³¨ ¦¬©¬¦§µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼ ¶¼¶·¨°¶q Μετηοδ : ׫¨ ¶²¯∏·¬²±¶º¬·«µ¤·
ª¤¶·µ²¬±·¨¶·¬±¤¯ ·µ¤¦·kŠŒ×l ¦²±·¨±·¶²µº¬·«¦²°° µ¨¦¬¤¯ ±¨½¼° ¶¨º µ¨¨ ¦«²¶¨± ·²¶·¬°∏¯¤·¨ ιν ϖιϖο ŠŒ× ±¨√¬µ²±° ±¨·o µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q ∞±½¼2
°¤·¬¦§¨ ªµ¤§¤·¬²± ²©≤ ŽŠ º µ¨¨ ¶·∏§¬¨§¥¼ √¬¶¦²° ·¨¬¦³µ²¦¨§∏µ¨q ⁄ ª¨µ¤§¤·¬²± ®¬± ·¨¬¦¶²©≤ ŽŠ ¤±§®²±­¤¦ª¯∏¦²°¤±±¤± kŽŠ l
¥¼ ±¨½¼° ¶¨o ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©·«¨ §¨ ªµ¨¨²©¶∏¥¶·¬·∏·¬²± k⁄≥l ²©≤ ŽŠ ¤±§·«¨ ³‹ ²©¶²¯∏·¬²± ²± ¬·¶¶∏¶¦¨³·¬¥¬¯¬·¼ ·² §¨ ªµ¤§¤·¬²± º µ¨¨
¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§q Ρ εσυλτ: ≤ ŽŠ º µ¨¨ §¨ ªµ¤§¨ §°¤¬± ¼¯ ¬± ·«¨ ¶¬°∏¯¤·¨§¦¨¦¤¯ ¤±§¦²¯²±¬¦° §¨¬¤o ¥∏·±²·¬± ·«¨ ¶¬°∏¯¤·¨§ª¤¶·µ¬¦¤±§ ±¨2
·¨µ¬¦° §¨¬¤q ⁄ ª¨µ¤§¤·¬²± ²©ŽŠ ¤±§≤ ŽŠ ¥¼ ±¨½¼° ¶¨²¥¨ ¼¨ § ¬¦«¤¨ ¬¯¶2 ±¨·²± ®¬± ·¨¬¦¶q ≤ ŽŠ º¬·« ²¯º µ¨⁄≥ º µ¨¨ °²µ¨ ¶∏¶2
¦¨³·¬¥¯¨¶∏¥¶·µ¤·¨¶q ≤ ŽŠ º µ¨¨ °²µ¨ ¶∏¶¦¨³·¬¥¯¨¶∏¥¶·µ¤·¨¶¬± ¶²¯∏·¬²± º¬·«³‹ y1s2y1{q Χονχλυσιον: ≤ ŽŠ «¤§¦²¯²±2¶³¨ ¦¬©¬¦
±¨½¼°¤·¬¦§¨ ªµ¤§¤·¬²± ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶¤±§¦²∏¯§¥¨ ∏¶¨§¤¶¦¤µµ¬¨µ°¤·¨µ¬¤¯¶·²³µ¨³¤µ¨ ¦²¯²±2¶³¨ ¦¬©¬¦§µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼ ¶¼¶·¨°¶q
[ Κεψ ωορδσ] ¦¤µ¥²¬¼° ·¨«¼¯ ®²±­¤¦ª¯∏¦²°¤±±¤±~ ¦²¯²±2¶³¨ ¦¬©¬¦~ ±¨½¼°¤·¬¦§¨ ªµ¤§¤·¬²±~ µ¤·¦¨¦¤¯ ¤±§ ¦²¯²±¬¦ ±¨½¼° ¶¨~ Β2
°¤±±¤¶¨ ≈责任编辑 鲍 雷  
#vyvu#
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