全 文 ：天麻素对大鼠皮层缺氧神经细胞 ＮＲ１亚基
ｍＲＮＡ表达的影响
付 蕾１，毛艳华１，高 远２，刘 蕾１，王志平１，李良辰２
（１．郑州大学 药学院，河南 郑州 ４５０００１；２．郑州大学 基础医学院，河南 郑州 ４５０００１）
［摘要］ 目的：观察天麻素对体外培养大鼠皮层缺氧神经细胞 Ｎ甲基Ｄ天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体 ＮＲ１亚基
ｍＲＮＡ表达的影响，探讨天麻素在神经保护方面的可能作用机制。方法：体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞，以缺氧
无糖培养建立神经细胞损伤模型，采用不同质量浓度的天麻素 （１３，２６，５２ｍｇ·Ｌ－１）处理细胞，用反转录聚合酶链
式反应（ＲＴＰＣＲ）法检测神经细胞ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达。结果：神经细胞缺氧损伤后，ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达显著增高；
加入不同质量浓度的天麻素后均能显著降低神经细胞 ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达。其中以２６，５２ｍｇ·Ｌ－１的抑制作用最
佳。结论：天麻素可能通过拮抗由缺氧引起的神经细胞ＮＭＤＡ受体ＮＲ１亚基ｍＲＮＡ表达的增加，发挥其神经保护
作用。
［关键词］ 天麻素；神经细胞；缺氧；ＮＲ１ｍＲＮＡ；反转录聚合酶链式反应
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０９１０４９０４
［收稿日期］ ２００７０６１５
［基金项目］ 河南省医学科技攻关项目（２００５００１４）
［通讯作者］ 付蕾，Ｔｅｌ：１３５０３８６３８５５，Ｅｍａｉｌ：ｏｌｄｆｕ１２３＠ｚｚｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ
天麻素ｇａｓｔｒｏｄｉｎｅ是兰科植物天麻Ｇａｓｔｒｏｄｉａｅｌａ
ｔａＢｌｕｍｅ的有效单体成分之一。化学名为 ４羟甲基
苯βＤ吡喃葡萄糖苷，用于神经衰弱、神经衰弱综合
征及血管神经性头痛等症的治疗。近年来的研究表
明天麻素具有一定的脑保护作用［１］，但对其在缺氧损
伤神经细胞的保护机制方面的研究尚未见报道。现
认为脑缺血缺氧损伤后引起谷氨酸（Ｇｌｕ）大量释
放［２，３］，脑内Ｇｌｕ浓度的急剧升高，过度激活其特异
性受体Ｎ甲基Ｄ天冬氨酸受体（ＮＭＤＡＲ）引起脑组
织病理性损害［４］。目前认为ＮＭＤＡＲ是介导神经毒
性损伤最主要的受体［５］，它由 ＮＲ１，ＮＲ２ＡＤ等亚基
组成［６］，其中ＮＲ１是其最基本的功能亚单位。
本实验通过对体外培养缺氧缺糖大鼠脑皮层神
经细胞ＮＲ１亚基ｍＲＮＡ表达的观察，以及天麻素干
预后ＮＲ１ｍＲＮＡ表达的变化，探讨天麻素在神经细
胞保护方面的可能作用机制，以期为临床用药提供
实验依据。
１ 材料
１．１ 药物
天麻素由昆明制药集团股份有限公司药物研究
所惠赠（纯度≥９９５％，批号２００４１００３）。
１．２ 动物
怀孕１６～１９ｄ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，由河南省实验动
物中心提供（合格证号４１０１１６）。
１．３ 试剂
总ＲＮＡ抽提试剂盒为 Ｑｉａｇｅｎ公司产品；ＲＴ
ＰＣＲ试剂盒、琼脂糖为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品；ＤＭＥＭ高
糖培养基为 Ｈｙｃｌｏｎｅ公司产品；胎牛血清为杭州四
季青公司产品；马血清（特级）为北京元亨圣马生物
技术研究所产品；多聚赖氨酸、阿糖胞苷均为 Ｓｉｇｍａ
公司产品。
１．４ 仪器
超净工作台（ＷＪ－８０Ａ－Ⅱ型，苏净集团安泰公
司）；二氧化碳培养箱（ＨＥＲＡｃｅｌ，德国 ＧｍｂＨ公
司）；倒置相差显微镜（日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）；电泳仪
（ＤＹＹ－６Ｃ，北京六一仪器厂）；ＰＣＲ仪（ＵＮＩ型，德
国Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司）；高速冷冻离心机（ＧＲ２２Ｇ型，日
本日立公司）；超低温冰箱（日本 ＳＡＮＹＯ公司）；凝
胶自动成像系统（德国 Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司）。
２ 方法
２．１ 胎鼠大脑皮层神经细胞原代培养
培养板预先用００１％多聚赖氨酸处理，自然晾
干备用。取孕１６～１９ｄ的大鼠腹腔注射水合氯醛
３５０ｍｇ·ｋｇ－１麻醉，无菌条件下剖腹取出胎鼠，开颅
·９４０１·
第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
取出大脑皮层放入预冷的ＤＭＥＭ培养基中，剔除软
脑膜和血管，将脑组织移入另一含１０％胎牛血清和
１０％马血清的ＤＭＥＭ培养基中，用细口吸管反复吹
打分散细胞，将细胞悬液经２００目金属网过滤，以
１×１０９个／Ｌ细胞密度接种，置 ３７℃，体积分数５％
的ＣＯ２培养箱中培养２ｄ，待细胞贴壁后换液１次去
除死细胞，以后每３～４ｄ半量换液１次，细胞培养
至７～８ｄ后，加入终浓度为１０μｍｏｌ·Ｌ－１阿糖胞苷
培养２４ｈ，以抑制非神经细胞过度增殖。继续培养
至１０～１２ｄ后开始实验。
２．２ 体外培养缺氧神经细胞损伤模型的制备
培养的神经细胞随机分为５组，即对照组、模型
组及天麻素高、中、低剂量组。对照组吸去原培养液
后，用含葡萄糖 １０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的 Ｅａｒｌｅ’ｓ液于 ３７
℃，５％ＣＯ２培养箱中培养。模型组和天麻素高、中、
低剂量组细胞在吸去原培养液后，用无糖的 Ｅａｒｌｅ’ｓ
液（ＮａＣｌ１４３，ＫＣｌ５４，ＣａＣｌ２ １８，ＭｇＳＯ４ １０，
ＮａＨ２ＰＯ４１０，ＨＥＰＥＳ２４，ｐＨ７４）替代原培养液 ，
然后将培养板放入缺氧盒内，于３７℃培养箱中持续
缓慢通入含有９５％Ｎ２，５％ＣＯ２的混合气体４ｈ。取
出并吸弃平衡盐缓冲液，换以无血清培养液于 ３７
℃、体积分数 ５％的 ＣＯ２培养箱中继续培养 ２４ｈ。
天麻素高、中、低剂量组于缺氧处理前即刻分别给予
１３，２６，５２ｍｇ·Ｌ－１的天麻素处理。
２．３ ＲＴＰＣＲ法检测ＮＲ１亚基ｍＲＮＡ的表达
２．３．１ 引物 根据 ＧｅｎＢａｎｋ设计 ＮＲ１与 βａｃｔｉｎ
引 物 如 下：ＮＲ１ 上 游 引 物 ５′ＴＣＣＴＧＣＴＧＧＴ
ＣＡＧＣＧＡＣＧＡＣ３′（第 ７５６～７７５位），下游引物 ５′
ＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＣＡＧＡＧ３′（第 １０１０～９９１
位），产物 ２５４ｂｐ。内参照 βａｃｔｉｎ上游引物 ５′
ＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣ３′（第２６０～２７９位），
下游引物 ５′ＧＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＴＣ３′（第
７７０～７５１位），产物５１０ｂｐ。由上海生物工程公司
合成，聚丙酰胺凝胶电泳纯化。
２．３．２ ＲＴＰＣＲ ①总 ＲＮＡ提取：收集细胞离心，
用ＱＩＡＧＥＮ公司总 ＲＮＡ提取试剂盒提取细胞总
ＲＮＡ。②逆转录合成 ｃＤＮＡ：所采用的逆转录体系
为５×Ｂｕｆｅｒ６μＬ，４×ｄＮＴＰ（２５ｍｍｏｌ· Ｌ－１）２
μＬ，ＲＮａｓｉｎ１μＬ，ＡＭＶ（２００Ｕ·μＬ－１）１μＬ，通用引
物１μＬ，提取总ＲＮＡ５μＬ，ＤＥＰＣ水补足３０μＬ，４２
℃ 水浴逆转录１ｈ。③ＰＣＲ扩增：分别以ＮＲ１，βａｃ
ｔｉｎ上、下游引物同管扩增目的基因及内参对照，进
行ＰＣＲ反应。扩增反应体系为３０μＬ：１０×Ｂｕｆｅｒ３
μＬ，４×ｄＮＴＰ（５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）２μＬ，ＮＲ１上、下游引
物各 ０５μＬ，βａｃｔｉｎ上、下游引物各 ０５μＬ，Ｔａｑ
ＤＮＡ聚合酶０５μＬ，逆转录产物５μＬ，去离子水补
足３０μＬ。扩增条件：９４℃ 预变性５ｍｉｎ；９４℃ 变
性３０ｓ，５７℃ 退火 ３０ｓ，７２℃ 延伸 ４０ｓ，循环 ３５
次；７２℃ 末端延伸５ｍｉｎ至４℃。④扩增产物琼脂
糖凝胶电泳：取８μＬ扩增产物与 ２μＬ溴酚蓝加样
缓冲液混合，点样于１５％琼脂糖凝胶（含 ＥＢ０５
ｍｇ·Ｌ－１），８０Ｖ电泳４５ｍｉｎ。
２．３．３ 半定量结果分析 使用凝胶成像分析系统，
对扩增产物的电泳条带进行灰度扫描，分析扩增条
带吸光度（Ａ）。以 ＮＲ１与 βａｃｔｉｎ电泳条带 Ａ的比
值作为ＮＲ１ｍＲＮＡ的相对表达量。
２．４ 统计学处理
所有数据均以 珋ｘ±ｓ表示，利用 ＳＰＳＳ１３０统计
软件，采用单因素方差分析，组间比较采用 ｑ检验。
Ｐ＜００５为有显著性意义。
３ 结果
采用 ＲＴＰＣＲ法对各组神经细胞 ＮＲ１ｍＲＮＡ
的表达进行检测及半定量分析，ＮＲ１扩增片段为
２５４ｂｐ，βａｃｔｉｎ为５１０ｂｐ，经琼脂糖凝胶电泳分析，
扩增片段见图１。
图１ 各组神经细胞ＮＲ１ｍＲＮＡＲＴＰＣＲ电泳图
Ａ．天麻素５２ｍｇ·Ｌ－１组；Ｂ．天麻素２６ｍｇ·Ｌ－１组；Ｃ．天麻素
１３ｍｇ·Ｌ－１组；Ｄ．模型组；Ｅ．对照组；Ｍ．分子量Ｍａｒｋｅｒ
各组神经细胞 ＮＲ１ｍＲＮＡ表达的半定量分析
见表１。结果显示：模型组细胞 ＮＲ１ｍＲＮＡ的相对
表达量与对照组相比显著升高（Ｐ＜００１）；天麻素
高、中、低剂量组与模型组相比均能显著抑制神经细
胞ＮＲ１ｍＲＮＡ的表达（Ｐ均 ＜００１），其中以天麻
素高、中剂量组抑制作用最强，但高、中剂量组之间
无显著性差异。
４ 讨论
·０５０１·
第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
表１ 各组间细胞ＮＲ１ｍＲＮＡ的相对表达量
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ａ
对照 － ０１４６±００４６
模型 － ０９０１±０１０６１）
天麻素 １３ ０６５９±０１３４２）
２６ ０２９７±００４６２，３）
５２ ０３３４±００５６２，３，４）
注：与对照组相比１）Ｐ＜００１；与模型组相比较２）Ｐ＜００１；与低
剂量组相比３）Ｐ＜００１
ＮＭＤＡＲ是目前研究最为深入的兴奋性氨基酸
受体之一。目前已证实ＮＭＤＡＲ是由ＮＲ１，ＮＲ２ＡＤ
５种亚基组成的异聚体，其中 ＮＲ１亚基是 ＮＭＤＡ受
体最重要的功能亚基，是钙离子通道的主要调节
者［７］，离开ＮＲ１亚基，ＮＭＤＡ受体就丧失活性。缺
血缺氧时ＮＭＤＡ受体介导的钙离子通道开放，大量
钙离子内流，介导了细胞内一系列钙依赖的酶的激
活，最终导致神经元的死亡［８，９］。因此，对ＮＲ１亚基
ｍＲＮＡ表达的测定可作为检测脑缺血缺氧损伤严重
程度的一个指标。
原位杂交结果显示，大鼠脑内几乎所有神经元
都有ＮＲ１的表达，以海马区、大脑皮质和小脑表达
最丰富。本实验结果表明，模型组大鼠大脑皮层神
经细胞ＮＲ１ｍＲＮＡ表达显著性提高，说明脑皮层神
经细胞缺氧培养４ｈ后即可通过激活ＮＭＤＡ受体引
起神经细胞的损伤；加入不同剂量天麻素后，ＮＲ１
亚基 ｍＲＮＡ的表达均下调，ＮＭＤＡＲ数量的下调可
减轻神经细胞缺血缺氧性损伤引起的神经元坏死，
表现出明显的保护作用，这可能是天麻素对脑缺血
缺氧保护作用的机制之一。
实验结果还显示，天麻素高、中、低剂量均有较
好的神经保护作用，但以高、中剂量组保护作用最为
显著。至于天麻素对神经细胞内游离钙及神经细胞
凋亡的影响等其他作用机制，还有待于进一步研究
探讨。
［参考文献］
［１］ ＺｅｎｇＸ，ＺｈａｎｇＳ，ＺｈａｎｇＬ，ｅｔａｌ．Ａｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ
ｅｆｅｃｔｏｆｔｈｅｐｈｅｎｏｌｉｃｇｌｕｃｏｓｉｄｅｇａｓｔｒｏｄｉｎｄｕｒｉｎｇｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ
ｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＰｌａｎｔａＭｅｄ，２００６，７２（１５）：１３５９．
［２］ 李 敏，黎海蒂，汪 涛，等．谷氨酸及其 Ｎ甲基Ｄ天冬氨酸
受体１在大鼠前额叶执行控制中的作用机制［Ｊ］．中国临床康
复，２００３，７（３１）：４２０２．
［３］ 郝玉曼，罗祖明，周 东．脑缺血耐受中亲代谢型谷氨酸受体
１α下调的意义［Ｊ］．中国临床康复，２００３，７（２５）：３４１６．
［４］ ＫｕｍａｒＡ，ＺｏｕＬ，ＹｕａｎＸ，ｅｔａｌ．ＮｍｅｔｈｙｌＤａｓｐａｒｔａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：
ＴｒａｎｓｉｅｎｔｌｏｓｓｏｆＮＲ１／ＮＲ２Ａ／ＮＲ２Ｂｓｕｂｕｎｉｔｓａｆｔｅｒｔｒａｕｍａｔｉｃｂｒａｉｎ
ｉｎｊｕｒｙｉｎａｒｏｄｅｎｔｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，２００２，６７（６）：７８１．
［５］ ＳｕｚｕｋｉＹ，ＴａｋａｇｉＹ，ＮａｋａｍｕｒａＲ，ｅｔａｌ．ＡｂｉｌｉｔｙｏｆＮＭＤＡａｎｄ
ｎｏｎＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓｔｏｉｎｈｉｂｉｔｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｄａｍ
ａｇｅｉｎａｇｅｄｒａｔｓ［Ｊ］．ＢａｉｎＲｅｓ，２００３，９６４（１）：１１６．
［６］ 徐铁军，樊红彬，张凤真，等．ＮＭＤＡ受体亚单位 ＮＲ１，ＮＲ２Ａ
和ＮＲ２Ｂ在大鼠海马的免疫组织化学表达［Ｊ］．解剖学杂志，
２００２，２５（２）：１２８．
［７］ ＤｉｎｇｌｅｄｉｎｅＲ，ＢｏｒｇｅｓＫ，ＢｏｗｉｅＤ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｇｌｕｔａｍａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｉｏｎｃｈａｎｎｅｌｓ［Ｊ］．ＰｈａｒｍａｃｏｌＲｅｖ，１９９９，５１（１）：７．
［８］ ＢｅｃｋＪ，ＬｅｎａｒｔＢ，ＫｉｎｔｎｅｒＤＢ，ｅｔａｌ．ＮａＫＣｌｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｃｏｎ
ｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｇｌｕｔａｍａｔｅｍｅｄｉａｔｅｄｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ，
２００３，２３（１２）：５０６１．
［９］ ＧｕｏＪ，ＭｅｎｇＦ，ＦｕＸ，ｅｔａｌ．ＮｍｅｔｈｙｌＤａｓｐａｒｔａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄ
ＬｔｙｐｅｖｏｌｔａｇｅｇａｔｅｄＣａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｍｅｄｉａｔｅｐｒｏｌｉｎｅｒｉｃｈ
ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ２ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｒａｔｓ
［Ｊ］．ＮｅｕｒｏｓｃｉＬｅｔ，２００４，３５５（３）：１７７．
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＲ１ｍＲＮＡｏｆＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒｂｙＧａｓｔｒｏｄｉｎｅ
ｏｎｈｙｐｏｘｉａｉｎｊｕｒｙｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓ
ＦＵＬｅｉ１，ＭＡＯＹａｎｈｕａ１，ＧＡＯＹｕａｎ２，ＬＩＵＬｅｉ１，ＷＡＮＧＺｈｉｐｉｎｇ１，ＬＩＬｉａｎｇｃｈｅｎ２
（１．ＰｈａｒｍａｃｙＣｏｌｅｇｅ，ＺｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅｏｆＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｇａｓｔｒｏｄｉｎｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＲ１ｍＲＮＡｏｆＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔ
ｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓｗａｓｍａｄｅｂｙ
ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｈｙｐｏｇｌｕｃｏｓｅ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ１３，２６，５２ｍｇ·Ｌ－１ｏｆｇａｓｔｒｏｄｉｎｅｗａｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｄｄｅｄｔｏｔｈｅｉｎｊｕｒｅｄｃｅｌｓ．ＴｈｅＲ
ＰＣＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＲ１ｍＲＮＡｏｆＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＲ１ｍＲＮＡｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｈｙｐｏｘｉａａｎｄｈｙｐｏｇｌｕｃｏｓｅｉｎｊｕｒｅｄｃｅｌｓ，ｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃａｎｂｅｗｅａｋｅｎｅｄｂｙｇａｓｔｒｏｄｉｎｅ，ｍｏｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｅｃｔｗａｓ
·１５０１·
第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
ｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ２６ｍｇ·Ｌ－１和 ５２ｍｇ·Ｌ－１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｇａｓｔｒｏｄｉｎｅｍａｙａｃｔａｓａｎｅｕｒｏ－ｐｒｏｔｅｃｔｏｒｂｙｗｅａｋｅｎｉｎｇｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＲ１ｍＲＮＡｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａａｎｄｈｙｐｏｇｌｕｃｏｓｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇａｓｔｒｏｄｉｎｅ；ｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓ；ｈｙｐｏｘｉａ；ＮＲ１ｍＲＮＡ；ＲＴＰＣＲ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７１１０８
［基金项目］ 黑龙江省科技厅攻关项目（ＧＣ０５Ｃ３１６０１）；黑龙
江省教育厅振兴老工业基地项目（１１５１ｇｚｄ２５）
［通讯作者］ 李文兰，Ｔｅｌ：１３９３６１６９１５３，Ｅｍａｉｌ：ｌｗｌｄｚｄ＠１６３．
ｃｏｍ
马钱苷肠吸收机制的研究
李文兰１，２，扈正婷１，季宇彬１，王晓冬１，徐 栋１
（１哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心，黑龙江 哈尔滨 １５００７６；
２国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江 哈尔滨 １５００７５）
［摘要］ 目的：考察药物浓度、肠段、ｐＨ及Ｐｇｐ对马钱苷肠吸收机制的影响规律。方法：将大鼠分为１０组：马
钱苷高、中、低剂量组（０１，００２５，００１２５ｍｇ·ｍＬ－１）；十二指肠、空肠及回肠组（００１３ｍｇ·ｍＬ－１）；ｐＨ６，７，８组
（００１３ｍｇ·ｍＬ－１）；诱导剂利福平组（００１２５ｍｇ·ｍＬ－１）。采用大鼠在体循环灌流法，应用 ＨＰＬＣ测定肠吸收循
环液中马钱苷的浓度，ＵＶ法测定肠吸收循环液中即时酚红浓度。结果：马钱苷在００１２５～０１ｍｇ·ｍＬ－１，其吸收
量与药物浓度呈线性关系，且各浓度吸收速率基本不变；ｐＨ对马钱苷吸收没有显著影响；各个肠段的吸收速率及
吸收量顺序为回肠＞十二指肠＞空肠；此外，Ｐｇｐ诱导剂利福平对马钱苷的吸收有明显的抑制作用。结论：马钱苷
在肠道的吸收呈一级动力学过程，吸收机制推断为被动扩散；具有特定的吸收部位，宜制成胃肠道滞留型定位释药
系统；马钱苷为Ｐｇｐ底物，可以通过与Ｐｇｐ抑制剂合用提高其生物利用度。
［关键词］ 马钱苷；吸收机制；ＨＰＬＣ
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０９１０５２０４
马钱苷（ｌｏｇａｎｉｎ）又名马钱素，是中药山茱萸及
许多复方的主要活性成分，具有明显的抗炎、调节免
疫、强心的作用［１，２］，在低浓度时有促进淋巴细胞转
化作用，而高浓度时则有抑制作用，提示马钱苷对免
疫反应有双向调节作用［３］。
在口服药物占主导地位的今天，决定其药用价
值的首要环节就是药物吸收的程度和速度。因此，
研究药物的吸收具有重要意义。目前，考察药物吸
收特性的模型有体内、在体和体外３种，各方法都有
其优缺点。综合考察发现，体内及体外２种方法操
作均较为繁琐［４］，且实验条件要求高［５，６］，比较难以
达到良好的效果。而在体循环灌流法既克服了体内
及体外实验取样困难、洁净度要求高的难点，又接近
正常的生理条件［７］，最重要的是实验对象为活体动
物，实验结果与体内结果接近，有较高的实验价值。
鉴于马钱苷较强的药理活性和药用价值，本实
验采用在体循环灌流法对马钱苷的吸收动力学进行
考察，确定影响其吸收的因素及其规律，揭示马钱苷
在肠道内的吸收机制，从而指导临床用药，并为马钱
苷及含马钱苷的中药新剂型的研制提供科学依据。
１ 材料
１．１ 仪器
ＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ（Ｗ２６９５泵、Ｗ２９９６ＤＡＤ检测器、
自动进样器、Ｅｍｐｏｗｅｒ化学工作站）；７５１型紫外分
析仪（上海光谱仪器有限公司）；水浴锅型号（上海
一恒仪器有限公司）；ＨＬ－２型恒流泵（上海嘉鹏科
技有限公司）；ｐＨ酸度计（北京赛多利斯仪器系统
有限公司）；电子天平（美国奥好斯科技有限公司）。
１．２ 试剂
水合氯醛；酚红；双蒸水；ＫＢ缓冲液（ＮａＣｌ６８７ｇ
·Ｌ－１，ＫＣｌ０４ｇ·Ｌ－１，ＮａＨＣＯ３２２ｇ·Ｌ
－１，ＮａＨ２ＰＯ４
０１３ｇ·Ｌ－１，ＭｇＳＯ４０１２２ｇ·Ｌ
－１，ＣａＣｌ２０２５ｇ·Ｌ
－１，
葡萄糖５ｇ·Ｌ－１）；甲醇（色谱纯）；冰醋酸（色谱纯）。
·２５０１·
第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８