全 文 ：亮菌多糖 ＩＰＳＢ２对小鼠腹腔巨噬细胞活性
及其相关基因转录的影响
罗 霞１，余梦瑶１，３，许晓燕１，曾 瑾１，江 南１，郑林用２，３
（１．四川省中医药科学院 中药细胞与分子生物学实验室，四川 成都 ６１００４１；
２．四川省农业科学院，四川 成都 ６１００６６；３．四川大学 生命科学学院，四川 成都 ６１００６４）
［摘要］ 目的：观察亮菌多糖ＩＰＳＢ２对巨噬细胞分泌细胞因子、一氧化氮（ＮＯ）生成以及巨噬细胞中白介素
１β（ＩＬ１β），白介素６（ＩＬ６），肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和 ＮＯ合成关键酶诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转录的
影响。方法：采用ＥＬＩＳＡ和Ｇｒｉｅｓｓ法检测ＩＰＳＢ２对小鼠腹腔巨噬细胞生成细胞因子ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα和细胞毒效
应分子ＮＯ的影响；采用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎⅠ指示的ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ技术研究 ＩＰＳＢ２对小鼠腹腔巨噬细胞中 ＩＬ１β，
ＩＬ６，ＴＮＦα和ＮＯ合成关键酶ｉＮＯＳ基因在ｍＲＮＡ转录水平上的作用。结果：ＩＰＳＢ２能显著提高小鼠腹腔巨噬细
胞培养上清液中ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα和ＮＯ的含量，增强 ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα和 ＮＯ合成关键酶 ｉＮＯＳ基因的转录水
平。结论：ＩＰＳＢ２可能是通过提高巨噬细胞分泌生物活性物质，并促进此类生物活性物质的基因转录，从而实现其
抗肿瘤的重要作用。
［关键词］ 亮菌多糖；腹腔巨噬细胞；细胞因子；一氧化氮；荧光定量ＰＣＲ
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１１１３０５０５
［收稿日期］ ２００７０７２５
［通讯作者］ 郑林用，Ｔｅｌ：（０２８）８４５０４００５，Ｅｍａｉｌ：ｚｌｙ６５５９＠
ｔｏｍｃｏｍ
假蜜环菌［１］Ａｒｍｉｌａｒｉｅｌａｔａｂｅｓｃｅｎｓ（Ｓｃｏｐ．ｅｘ
Ｆｒ．）Ｓｉｎｇ是层菌纲口蘑科假蜜环菌属真菌，在我国
最初是从发光柳树朽木中分离而得，所以又被称为
“亮菌”。现代研究表明，亮菌具有显著的抗肿瘤作
用［１］，而其中的多糖成分是其抗肿瘤的主要物质基
础，但目前对亮菌多糖抗肿瘤的作用机制尚未见国
内外文献报道。本研究将发酵得到的亮菌胞内多糖
进行分离纯化，首次得到具有抗肿瘤活性的单一多
糖成分（命名为ＩＰＳＢ２），研究了该成分体外对小鼠
腹腔巨噬细胞活性及其相关基因转录的影响，探讨
ＩＰＳＢ２抗肿瘤的作用机制。
１ 材料
１．１ 动物
昆明种小鼠，体重（２１±２）ｇ，由四川省中医药
科学研究院提供，合格证号川实质第２００２３３号。
１．２ 药物与试剂
亮菌多糖ＩＰＳＢ２，系本实验室从液体深层发酵
培养的亮菌菌丝体中提取。ＲＮＡｉｓｏ（Ｔａｋａｒａ公司）；
反转录酶ＲｅｖｅｒＴｒａＡｃｅ（Ｔｏｙｏｂｏ公司）、ＲｎａｓｅＩｎｈｉｂｉ
ｔｏｒ（Ｔｏｙｏｂｏ公司）；Ｔａｑ酶（Ｔｉａｎｇｅｎ公司）；琼脂糖
（Ｂｉｏｗｅｓｔ公司）；琼脂糖凝胶 ＤＮＡ回收试剂盒、
ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ（Ｇｅｎｅｒａｙ公司）；白介素１β，白介素
６，肿瘤坏死因子αＥＬＩＳＡ试剂盒（深圳晶美生物工
程有限公司）；脂多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ公司）。
１．３ 仪器
倒置显微镜 ＴＳ１００（Ｎｉｋｏｎ）；二氧化碳培养箱
ＢＢ５０６０ＵＶ（Ｈｅｒａｅｕｓ）；电泳仪 Ｍｉｎｉ－ｓｕｂｃｅｌＧＴ＋
ＰｏｗｅｒＰａｃ（Ｂｉｏ－ｒａｄ）；凝胶成像系统 ＧｅｌＤｏｃＸＲ
（Ｂｉｏ－ｒａｄ）；核酸蛋白测定仪 ＳｍａｒｔｓｐｅｃＰｌｕｓ（Ｂｉｏ－
ｒａｄ）；ＰＣＲ仪Ｍｙｃｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏ－ｒａｄ）；荧光定量ＰＣＲ仪
ｉｃｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏｒａｄ）。
２ 方法
２．１ 亮菌多糖ＩＰＳＢ２的提取与纯化
３５Ｌ培养基发酵得到亮菌菌丝体１１ｋｇ，经水
提、脱蛋白、醇沉后得到浅棕色粉末状亮菌粗多糖
４９ｇ，该粗多糖经 ＤＥＡＥＣｅｌｕｌｏｓｅ５２离子交换柱色
谱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤色谱，得到４７４ｍｇ
白色粉末状亮菌多糖 ＩＰＳＢ２。ＩＰＳＢ２琼脂糖电泳
后经甲苯胺蓝染色显示为单一染色条带，经 ＵＶ检
测不含蛋白质和核酸。对其糖含量测定表明，ＩＰＳ
Ｂ２纯度＞９８％。通过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００凝胶过滤色
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谱分析，ＩＰＳＢ２的表观相对分子质量约为５０×１０３。
２．２ 腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定［２］
小鼠腹腔注射１ｍＬ含 ＣｏｎＡ１００μｇ的生理盐
水，４ｄ后用灌洗法收集巨噬细胞，接种于培养皿
中，在３７℃，５％ＣＯ２条件下培养１ｈ后，去除未贴壁
的细胞。贴壁细胞为巨噬细胞，培养２ｄ后，镜下观
察。
２．３ 对腹腔巨噬细胞细胞因子生成的影响
２４孔板每孔加入５００μＬ巨噬细胞（２×１０６个／
ｍＬ），并加入不同体积的 ＩＰＳＢ２浓缩液，以含１０％
小牛 血 清 的 ＲＰＭＩ１６４０培 养 液 补 充 至 每 孔
１０００μＬ，使终浓度为 ５，１０，５０，１００，２００μｇ·
ｍＬ－１。每个终浓度设 ３个复孔，并设阴性对照孔
（只含细胞）和阳性对照孔（ＬＰＳ，１０μｇ·ｍＬ－１）。
在３７℃ ５％ＣＯ２条件下培养２ｄ后，分别吸取上清
液，按照ＥＬＩＳＡ试剂盒要求操作，进行各细胞因子
（ＩＬ１β，ＩＬ６，ＩＬ１２，ＴＮＦα）的ＥＬＩＳＡ检测。
２．４ 对腹腔巨噬细胞ＮＯ生成的影响
９６孔板中每孔加入巨噬细胞１００μＬ（１５×１０６
个／ｍＬ），并加入不同体积的 ＩＰＳＢ２浓缩液，以含
１０％小牛血清的 ＲＰＭＩ１６４０培养液补充至每孔２００
μＬ，使终浓度为５，１０，５０，１００，２００μｇ·ｍＬ－１。每个
质量浓度设置３个复孔，并设阴性对照孔（只含细胞）
和阳性对照孔（ＬＰＳ，１０μｇ·ｍＬ－１）。在３７℃ ５％
ＣＯ２条件下培养２ｄ后，分别吸取上清液，按Ｇｒｉｅｓｓ法
测定样品中的Ｎ０２－／ＮＯ３－，用以反映ＮＯ的水平［３５］。
２．５ 逆转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）检测 ＩＬ
１β，ＩＬ６，ＴＮＦα，ｉＮＯＳ基因ｍＲＮＡ表达
２．５．１ 腹腔巨噬细胞的诱导 ２４孔板中每孔加入
５００μＬ巨噬细胞（２×１０６个／ｍＬ），并加入不同体积
的ＩＰＳＢ２浓缩液，以含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０
培养液补充至每孔 １０００μＬ，使终浓度为 １０，５０，
１００μｇ·ｍＬ－１。每个质量浓度设置３个复孔，并设
阴性对照孔（只含细胞）和阳性对照孔（ＬＰＳ，１０μｇ
·ｍＬ－１）。在３７℃ ５％ＣＯ２饱和湿度空气条件下培
养４ｈ。
２．５．２ ＤＮＡ样品制备 细胞计数，取１×１０６～１×
１０７个细胞加入１ｍＬＴｒｉｚｏｌ试剂，按说明书方法提取
ＲＮＡ。紫外分光光度仪测定吸光度（Ａ２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ），
检测总ＲＮＡ的质量和浓度。按试剂说明书逆转录
为ｃＤＮＡ，－４℃保存。
２．５．３ 引物设计与合成 登录 ＮＣＢＩ网站，检索小
鼠βａｃｔｉｎ，ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα和ｉＮＯＳ基因的 ｍＲＮＡ
序列。运行ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５软件，设计 ＰＣＲ引物。
βａｃｔｉｎ，反向引物：５′ＧＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＡＴＧＣＣＴＣＴ３′，
正向引物：５′ＴＴＧＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴ３′；ＩＬ１β，
反向引物：５′ＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣ３′，正向引
物：５′ＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＧＧＴＧＣＴＧＡ３′；ＩＬ６，反向引物：
５′ＧＣＣＴＴＣＴＴＧＧＧＡＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧ３′，正向引物：５′
ＣＴＣＴＧＧＣＴＴＴＧＴＣＴＴＴＣＴＴＧＴＴ３′；ＴＮＦα，反向引物：
５′ＧＣＣＴＡＴＧＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴ３′，正向引物：５′ＧＧＴＴ
ＧＡＣＴＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＴ３′；ｉＮＯＳ，反 向 引 物：５′
ＧＡＧＣＧＡＧＴＴＧＴＧＧＡＴＴＧＴＣ３′，正向引物：５′ＧＧ
ＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＴＧＧＡＧＴ３′。
２．５．４ 标准品的制备 在普通 ＰＣＲ仪上进行 ＩＬ
１β，ＩＬ６，ＴＮＦα，ｉＮＯＳ以及 βａｃｔｉｎ扩增，分别获得
４３４，３８５，４２３，３７６，２２２ｂｐ的产物。胶回收纯化ＰＣＲ
产物。对胶回收 ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα，ｉＮＯＳ和 βａｃｔｉｎ
扩增子，紫外定量，计算分子数。按 １０－３，１０－４，
１０－５，１０－６，１０－７稀释标准品。
２．５．５ ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ法进行 ＰＣＲ检测 在０２ｍＬ
的ＰＣＲ薄壁管中建立 ＰＣＲ反应。反应体系为 ５０
μＬ，包含 １×ＰＣＲＢｕｆｅｒ，引物各 ０１μｍｏｌ·Ｌ－１，
ｄＮＴＰ０２ｍｍｏｌ·Ｌ－１，Ｔａｑ酶 ２５Ｕ，Ｍｇ２＋ １８７５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１，０５×ＳＹＢＲＧｒｅｅｎⅠ。ＰＣＲ反应条件：
９４℃预变性５ｍｉｎ后９４℃４５ｓ，分别５５４℃（βａｃ
ｔｉｎ），５２０℃（ＩＬ１β），５１７℃（ＩＬ６），５３４℃（ＴＮＦ
α），５５２℃（ｉＮＯＳ）４５ｓ共４５个循环，每个循环后
升温到８２℃采集荧光生成扩增曲线，循环完成后从
５５℃到９４℃缓慢升温，生成熔点曲线。
在同一次反应中，均设置标准品（５个质量浓
度）反应组，空白对照组，不同 ＩＰＳＢ２剂量组和 ＬＰＳ
阳性对照组，各组都设３个平行重复。琼脂糖电泳
ＰＣＲ产物，鉴定扩增产物。
２．６ 统计方法
数据分析采用 ｉｃｙｃｌｅｒ荧光定量 ＰＣＲ仪配套的
ｉｃｙｃｌｅｒｏｐｔｉｃａｌｓｙｓｔｅｍｓｏｆｔｗａｒｅｖ３１进行分析。数据
以 珋ｘ±ｓ表示，采用ｔ检验比较组间差异。
３ 结果
３．１ 对腹腔巨噬细胞生成ＩＬ１β的影响
培养上清液中 ＩＬ１β含量明显增加，比不加任
何药物的阴性组高出至少 ２倍。对巨噬细胞产生
ＩＬ１β的诱生作用呈明显的剂量依赖关系，随着浓度
的增大，其诱生作用逐渐增强。见表１。
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表１ ＩＰＳＢ２对腹腔巨噬细胞生成细胞因子和ＮＯ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
样品 质量浓度／μｇ·ｍＬ－１ ＩＬ－１β／ｐｇ·ｍＬ－１ ＩＬ６／ｐｇ·ｍＬ－１ ＴＮＦα／ｐｇ·ｍＬ－１ ＮＯ／μｍｏｌ·Ｌ－１
阴性对照 － ６３８±４７ ２１５０±２２ １２００±１００ ２３±０２
ＬＰＳ １０ １８８１±４３１） ８９２８±１１４１） １９００±１１０１） ９６±０６１）
５ １８６１±２２１） ７５９５±４１２１） １８１５±６６１） ７９±０６１）
１０ ２０７２±８８１） ８７７６±１０１） １９３０±１３２１） ８３±０３１）
ＩＰＳＢ２ ５０ ２２９７±２７６１） ８１４６±３１０１） １９０５±２５１） １１８±０３１）
１００ ２２６７±２４１） ８１５８±１６４１） １７０９±１２２１） １３１±１４１）
２００ ２４２２±２５４１） ２４２２±２５４１） １７５８±２０１） １３０±０６１）
注：与阴性组比较１）Ｐ＜００１（表２同）
３．２ 对腹腔巨噬细胞生成ＩＬ６的影响
添加 ＩＰＳＢ２能使巨噬细胞培养上清液中 ＩＬ６
的浓度显著增加，与阴性对照组相比，增长约３倍。
见表１。
３．３ 对腹腔巨噬细胞生成ＴＮＦα的影响
ＩＰＳＢ２对巨噬细胞生成 ＴＮＦα有显著的促进
作用，５μｇ·ｍＬ－１的ＩＰＳＢ２即可促进ＴＮＦα浓度增
加５０％。随着 ＩＰＳＢ２浓度的增加，其对 ＴＮＦα的
促进作用变化不大，提示较低浓度的ＩＰＳＢ２就可产
生较强的促进效应。见表１。
３．４ 对腹腔巨噬细胞生成ＮＯ的影响
腹腔巨噬细胞未经刺激时产生的 ＮＯ很少，而
经ＩＰＳＢ２诱导后，其产生的 ＮＯ大大增加，且呈现
剂量依赖关系。在５～１００μｇ·ｍＬ－１增加较快，而
在１００μｇ·ｍＬ－１后基本保持平稳。见表１。
３．５ 逆转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）检测
３．５．１ 标准曲线的绘制 以标准品分子数对数值
为横坐标，ＣＴ值为纵坐标，绘制标准曲线。分别得
到 βａｃｔｉｎ，ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα，ｉＮＯＳ标准曲线方程
Ｙβａｃｔｉｎ＝－３３４４Ｘ＋４２６７２（Ｒ
２ ＝０９９９），ＹＩＬ１β＝
－３８２０Ｘ＋４４７７４（Ｒ２＝０９９４），ＹＩＬ６＝－３０８９Ｘ＋
３５０６７（Ｒ２ ＝０９９９），ＹＴＮＦα＝－３９１３Ｘ＋４６５６５
（Ｒ２＝０９９５），ＹｉＮＯＳ ＝ －３６８７Ｘ＋４５５０２（Ｒ
２ ＝
０９８５）。
３．５．２ ＰＣＲ产物的确定分析 熔解曲线分析显
示，βａｃｔｉｎ，ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα，ｉＮＯＳ基因 ＰＣＲ产物
的熔解曲线峰值分别在９０，９０，８５５，９０，９０℃，熔解
温度均一，峰的形状也较锐利。这充分说明βａｃｔｉｎ，
ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα，ＮＯＳ的ＰＣＲ产物均比较特异，无
杂带。
３．５．３ 对 ＩＬ１βｍＲＮＡ表达的影响 不同浓度的
ＩＰＳＢ２均能够极大程度的提升ＩＬ１βｍＲＮＡ的相对
表达丰度，且呈明显的剂量依赖关系，对巨噬细胞中
的ＩＬ１β转录水平有显著的促进作用。见表２。
表２ ＩＰＳＢ２对细胞因子和ｉＮＯＳｍＲＮＡ转录的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
样品 质量浓度／μｇ·ｍＬ－１ ＩＬ１β ＩＬ６ ＴＮＦα ｉＮＯＳ
阴性对照 － ００１９±０００４ ００００±００００ ００１９±０００５ ００８４±００３１
ＬＰＳ １０ ０１４４±００２６１） ０１００±００５５１） ０１２６±００３８１） １３９４±０４４３１）
１０ ０１４９±００７３１） ０２３４±００７３１） ０１６１±００７７１） ０７６８±０２０３１）
ＩＰＳＢ２ ５０ ０２７５±００２２１） ０５７７±０２０６１） ０３１５±００１５１） １４９２±０４０８１）
１００ ０４６５±０３３３１） １０９９±０３００１） ０４９０±０３４３１） １８４６±０２２５１）
３．５．４ 对ＩＬ６ｍＲＮＡ转录的影响 在没有外界诱
导的条件下，巨噬细胞中几乎检测不到有 ＩＬ６ｍＲ
ＮＡ的转录。但在 ＬＰＳ或 ＩＰＳＢ２的刺激下，其转录
水平得到极大提高。不同剂量的 ＩＰＳＢ２均能大幅
度提升ＩＬ６基因的转录水平，且这一作用呈明显的
剂量依赖关系。结果说明，ＩＰＳＢ２显著提升巨噬细
胞中ＩＬ６基因的转录水平。见表２。
３．５．５ 对 ＴＮＦαｍＲＮＡ转录的影响 以未加任何
刺激物的培养液培养的巨噬细胞中 ＴＮＦα基因的
转录水平极低，其相对表达丰度小于 ００２。但在
ＬＰＳ或ＩＰＳＢ２的作用下，巨噬细胞中ＴＮＦα基因的
转录水平得到大大提升，随着 ＩＰＳＢ２浓度的增加，
巨噬细胞中ＴＮＦα的表达也随之增强。见表２。
３．５．６ 对ｉＮＯＳｍＲＮＡ转录的影响 ｉＮＯＳ基因在未
受刺激的巨噬细胞中转录水平极低，但在ＬＰＳ或ＩＰＳ
Ｂ２的作用下，其转录水平大幅提高，增加数倍至数十
倍。ｉＮＯＳ基因转录水平的提高与 ＩＰＳＢ２浓度之间
具有明显的剂量依赖关系。见表２。
４ 讨论
巨噬细胞是机体免疫系统的重要组成成分，在体
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液免疫和细胞免疫中发挥中心作用。其可以通过分泌
ＴＮＦα，ＩＬ１，ＩＬ６和产生一氧化氮来杀伤肿瘤细胞。
ＴＮＦα［６］是巨噬细胞中重要的肿瘤杀伤效应分
子，其参与杀伤肿瘤细胞主要表现为：对肿瘤细胞的
直接细胞毒作用；作为巨噬细胞的激活因子，ＴＮＦα
可引起体内肿瘤的缺血性坏死。ＩＬ１是巨噬细胞抗
肿瘤的另一重要分泌因子，其与 ＴＮＦ相比，其细胞
毒作用较弱，但对特异性免疫系统的作用较强。ＩＬ
６也是与巨噬细胞杀伤肿瘤细胞作用相关的主要效
应分子。
ＮＯ是巨噬细胞重要的效应分子。目前已知，
巨噬细胞主要由诱导型 ＮＯＳ通过 Ｌ精氨酸途径合
成ＮＯ。ＮＯ可以通过以下途径来抑制多种肿瘤的
生长［７］：与瘤细胞代谢关键酶活性部位 ＦｅＳ基结
合，形成铁亚硝基复合物，从而使这些酶失活，如三
羧酸循环中的乌头酸酶等；可灭活ＤＮＡ合成的限速
酶核糖核酸酶，进而抑制肿瘤细胞的增生；可使核酸
亚基化，导致ＤＮＡ断裂，最终诱导细胞凋亡。
ＩＰＳＢ２为本实验室首次从亮菌胞内多糖中分
离纯化得到的具有抗肿瘤活性的单一多糖成分。本
研究结果显示，ＩＰＳＢ２能够激活巨噬细胞，使其分
泌的抗肿瘤相关细胞因子ＩＬ１β，ＩＬ６和ＴＮＦα得以
成倍增加，同时它还能够使巨噬细胞产生大量抗肿
瘤的细胞毒效应分子 ＮＯ，且呈作用剂量依赖关系；
而且这种刺激作用表现为巨噬细胞中 ＩＬ１β，ＩＬ６，
ＴＮＦα和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达增加。提示 ＩＰＳＢ２的抗
肿瘤作用机制可能是通过反应性氮代谢机制（促进
巨噬细胞合成 ＮＯ），刺激巨噬细胞 ｉＮＯＳ从头合成
增加ＮＯ，和氧、氮非依赖机制（促进巨噬细胞分泌
细胞因子ＩＬ１β，Ｌ６和ＴＮＦα），促进ＩＬ１β，Ｌ６，ＮＦ
α的基因表达，使其合成增加，发挥抗肿瘤作用。
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ｌａｔｅｄｆｒｏｍＪｕｎｉｐｅｒｕｓｓｃｏｐｏｌｏｒｕｍ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００５，
５：１７８３．
ＥｆｅｃｔｓｏｆＡｒｍｉｌａｒｉｅｌａｔａｂｅｓｃｅｎｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＩＰＳＢ２ｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ
ｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅ
ＬＵＯＸｉａ１，ＹＵＭｅｎｇｙａｏ１，３，ＸＵＸｉａｏｙａｎ１，ＺＥＮＧＪｉｎ１，ＪＩＡＮＧＮａｎ１，ＺＨＥＮＧＬｉｎｙｏｎｇ２，３
（１．ＣｅｌｕａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＬａｂ，ＳｉｃｈｕａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａｌＭｅｄｉｃａ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｉｃｈｕａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００６６Ｃｈｉｎａ；３．ＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００６４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＩＰＳＢ２ｏｎｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＩＬ１β，ＩＬ６，
ＴＮＦαａｎｄｉＮＯＳ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄａｎｄＧｒｉｅｓｓｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｐｒｏｄｕｃｅ
ｃｙｔｏｋｉｎｅｓＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦαａｎｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃｅｆｅｃｔｏｒｓＮＯ．ＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦαａｎｄｉＮＯＳｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅａｌ
ｔｉｍｅＲＴＰＣＲｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＩＰＳＢ２ｃｏｕｌｄｎｏｔｐｒｏｍｏｔｅｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｂｕｔｉｔｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅ
ｔｈｅＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦαｃｏｎｔｅｎｔｉｎｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｃｕｌｔｕｒｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ，ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＬ１β，ＩＬ
６，ＴＮＦαａｎｄｉＮＯＳ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＩＰＳＢ２ｃａｎｅｎｈａｎｃｅｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｔｏｅｘｃｒｅｔｅｂｉｏａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓａｎｄｐｒｏ
ｍｏｔｅｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｂｉｏａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｔｏａｎｔｉｔｕｍｏｒ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ａｒｍｉｌａｒｉｅｌａｔａｂｅｓｃｅｎｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ；ｃｙｔｏｋｉｎｅ；ＮＯ；ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ
［责任编辑 古云侠］
·８０３１·
第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８