全 文 ：antifatigue actions of spirulina compound tablet.Chinese Traditional
Patent Medicine ,1996 , 18(6)∶31.
2 Zuo Shaoyuan ,Qian Jingfu.Effect of spi rulina compound tablet on blood
glucose in normal and experimental diabetic mice.Journal of DaLi Medical
College ,2000 , 9(2)∶6.
收稿日期:2000-05-09
铁筷子多糖抑制小鼠体内 S180生长作用及其机制的实验研究＊
刘　昕　杨林西1　潘兴斌　王晶宇(兰州 730000 兰州医学院病理生理教研室;1 兰州医学院生化教研室)
摘要　目的:研究铁筷子多糖(HFPS)的体内抑瘤效应 ,探讨其作用机制。方法:在动物模型上对比观察HFPS 对S180 生长的抑
制作用 ,同时对动物免疫器官指数 、脾淋巴细胞转化率和 IL-2 的水平 、腹腔巨噬细胞 I(PM )内酸性磷酸酶(ACP)和精氨酸酶
(ARG)的活性及巨噬细胞的吞噬功能进行了检测。结果:用 HFPS持续灌胃两周 ,可明显抑制 S180的生长 , 动物免疫器官重量
增加 、细胞免疫功能增强 , PM 内酶活性增加 、吞噬能力增强。结论:HFPS对体内生长的肿瘤 S180 具有良好的抑制作用 ,其机
制与促进机体免疫功能有关。
关键词　铁筷子多糖;肿瘤;细胞免疫;腹腔巨噬细胞;酶
Experiment investigation of inhibitory mechanism on growth of S180 in mice by Tiekuaizi polysaccharide
Liu Xin(Liu X),Yang Linxi(Yang LX),Pan Xingbin(Pan XB), et al(Department of Pathophysiology , Lanzhou Medical Collage
Lanzhou 730000)
ABSTRACT　OBJECTIVE:Study the inhibitory effect and the mechanism of helleborus thibetanus france.Polysaccharide(HFPS)on tumor
growth.METHOD:The inhibitory function of HFPS to S180 was observed on animal model、The indexes of immunity organs , the rate of HFPS
to S180 was observed on animal model.The indexes of immunity organs , the rate of splenic lymphocytes transformation , the level of IL-2 , the
ACP andarginase(ARG)vitality in PM and the swallowing fuction of M were all determined at same time.RESULTS:When HFPS was given
for two weeks , the growth of S180 was restricted , while immunity organs weight , the cellular immunity function , the vitality of ACP and arginase
in PM and the swallowing ability of M were heightened.CONCLUSION:HFPS could inhibit tumor S180 growth effectively in vivo , this
mechanism was related to the affect that HFPS had promoted the immunity function.
KEY WORDS　HFPS , tumor , cellular immunity , PM , ACP , ARG
　　中药铁筷子(Helleborus thibetanus Franch.)具有活血散
瘀 ,消肿止痛 , 清热解毒的功效 , 临床用于治疗疮疖肿痛 、泌
尿道炎症等。国外曾报道在铁筷子根中存在抑制人上皮癌
KB细胞体外生长的成分[ 1] ,但对体内生长的肿瘤作用如何 ,
以及它的抑瘤机制是什么 ,尚未见到有关报道。我们从铁筷
子根中提取出了多糖成分 ,观察了该多糖对体内生长的实体
型小鼠肉瘤 S180 的抑制效应 , 并对荷瘤鼠体内与肿瘤生长
密切相关的细胞免疫功能 、免疫器官指数 、腹腔巨噬细胞中
酸性磷酸酶和精氨酸酶活性及巨噬细胞的吞噬指数和吞噬
百分率进行了检测。 结果初步显示 , 铁筷子多糖对 S180 的
生长有很好的抑制作用 ,并能影响机体细胞免疫功能和腹腔
巨噬细胞的活性。
1　材料与方法
1.1　药品
铁筷子选自我院药圃培植的优质药材 ,由本院药学系药
用植物教研室提取的多糖为棕黄色结晶 , 临用前以生理盐水
配制成 10%浓度的溶液。
1.2　动物
实验选用 LIBP种小鼠 , ♂,体重 18 ～ 22g(兰州生物制品
研究所动物室提供)。
1.3　瘤源
肿瘤细胞株 S180(本院血液病研究所)。接种前复苏瘤
细胞 ,在动物腹腔内保种传代 3 次后使用。
1.4　方法
1.4.1　动物分组及肿瘤模型建立　将动物随机分为 4 组 ,
Ⅰ组为正常对照组;Ⅱ组为肿瘤对照组;Ⅲ组为多糖对照组;
Ⅳ组为多糖+肿瘤组。其中 Ⅲ 、Ⅳ组每日用 10% HFPS 溶液
灌胃 ,剂量为 0.2ml/d/ 10g 体重 , Ⅰ 、Ⅱ组则灌以等量的生理
盐水 ,均持续 12d。给药当天 , 取接种 7d 的腹水型 S180 肿瘤
小鼠之腹水 , 用胎盼兰排除法计数 , 以生理盐水稀释至 1×
106/ml ,置无菌容器内冰块中保存 , Ⅱ 、Ⅳ组动物右腋下常规
　＊本课题为 1997年甘肃省自然科学基金资助项目 ,编号 ZR-97-
069
·94· Chin JMAP ,2001 Apri l ,Vol.18 No.2　　　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2001年 4月第 18卷第 2期
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2001.02.004
消毒 , 皮下接种瘤细胞 0.2ml/鼠。实验结束时 , 分批处死动
物 ,作如下指标的测定。
1.4.2　对肿瘤生长抑制效应的观察　对比观察各组动物一
般情况 、肿瘤生长速度 、局部破溃情况等。第 13 天处死动
物 ,剥离肿块 , 称取各组肿瘤重量和体重 ,计算抑瘤率。
1.4.3　免疫器官指数的测定　实验第 13 天处死动物 , 取胸
腺和脾脏称重 ,同时称取体重 , 计算胸腺指数和脾指数。
1.4.4　脾淋巴细胞转化率的测定[ 2 , 3] 　实验第 13 天常规无
菌取脾制成 5×105/ml单细胞悬液 , Con A 刺激浓度为 10μg/
孔 , CO2 培养箱中 37℃培养68h , 加入MTT 溶液 10μl/孔 ,继续
培养 4h后在酶标仪上测定各组OD值。
1.4.5　IL-2 的测定[ 3] 　取 5×105/ ml浓度的脾单细胞悬液
置入16 孔培养板内 , 加入 ConA 10μg/ml , CO2 箱中培养 24h ,
离心取上清液待用。另收集培养 48h 的脾细胞仍以 5×105/
ml浓度重悬于 1640 完全培养液中制成 IL-2 反应细胞 , 将上
述上清液和 IL-2 反应细胞各 100μl加入 40 孔培养板中培养
48h ,以 MTT比色法在酶标仪上测定OD值。
1.4.6　腹腔巨噬细胞(PM )酸性磷酸酶和精氨酸酶活性测
定[ 4 , 5]
1.4.6.1　PM 悬液的制作　动物腹腔内注射无菌生理盐水
5ml ,轻轻按揉腹部 3min , 抽回腹腔液 4ml , 1500/ min 离心
15min , 取沉淀细胞用Hanks液洗涤 3 次后用含 10%小牛血清
的 RPMI1640培养液调节 M 浓度至 2×106/ml , 以 2ml/瓶分
装并置 37℃培养箱内培养 2h。将贴壁的 M 用 Hanks 液轻
轻洗涤一次 , 每瓶中加入双蒸水 2ml , 经-30℃、+30℃反复
冻融制成破碎的M 悬液。
1.4.6.2　酸性磷酸酶活性测定　取上述悬液 0.5ml , 采用磷
酸苯二钠法 , 以磷酸苯二钠为底物 , 4-氨基安替比林及铁氰
化钾为显色剂作比色测定。
1.4.6.3　精氨酸酶活性测定　取上述悬液 0.5ml , 采用茚三
酮法 , 以精氨酸为底物 , 茚三酮冰醋酸溶液为显色剂作比色
测定。
1.4.7　腹腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率的测定　参考
文献[ 6]进行检测。
2　结　果
2.1　HFPS 对S180 生长的影响
实验显示肿瘤对照组局部肿块生长迅速 ,与周围组织粘
连不易剥离 ,大部分动物表皮破溃出血 ,精神萎靡 , 食欲差。
与之相比HFSP组肿块生长速度慢 , 剥离出的瘤体相对完整 ,
肿瘤周围无出血水肿现象 ,动物精神状态和食欲均好于肿瘤
对照组 ,证明 HFPS 能调节荷瘤机体的整体状况 , 抑制肿瘤的
生长。抑瘤率为 53.14%。
2.2　HFPS 对免疫器官的影响
肿瘤对照组胸腺较正常对照组者体积小 , 重量轻 , 有一
定程度的萎缩 ,胸腺指数小于正常对照组(P<0.01), 而使用
HFPS 的两个组胸腺显著增生肥大 ,指数增加 , 其中尤以Ⅲ组
更为明显 ,表明 HFPS 对胸腺组织有保护作用;但对脾脏未发
现有明显影响。见表 1。
表 1　HFPS 对免疫器官指数的影响/ n=10
组　别 胸腺指数/mg·g -1 P值
脾脏指数
/mg·g-1 P值
正常对照组　 2.27±0.78 30.23±5.47
肿瘤对照组　 1.44±0.55 <0.01 28.33±5.14 >0.05
多糖对照组　 3.06±0.89 <0.001 29.89±7.47 >0.05
多糖+肿瘤组 2.79±0.93 <0.001 32.15±4.96 >0.05
注:表中 P值均为与正常对照组相比 ,下表同
2.3　HFPS 对脾淋巴细胞转化率和 IL-2 水平的影响
表 2显示 , 与Ⅰ 、Ⅱ组相比 , Ⅲ 、Ⅳ组脾细胞对 ConA反应
性增强 , 淋巴细胞分化增殖 , 并诱生较多 IL-2 , 即使用 HFSP
的动物 ,无论是否荷瘤 , 其脾淋巴细胞转化率和 IL-2 水平均
明显高于不用 HFPS 者 , 证明 HFPS对细胞免疫功能有促进作
用。见表 2。
表 2　HFPS 对脾淋巴细胞转化率和 IL-2 水平的影响/ n=10
组　别 腺淋巴细胞转化率/ % P值
IL-2水
平/O.D P值
正常对照组　 1.24±0.08 0.432±0.098
肿瘤对照组　 1.17±0.04 <0.05 0.174±0.039 <0.01
多糖对照组　 2.00±0.11 <0.01 0.661±0.093 <0.01
多糖+肿瘤组 1.88±0.07 <0.01 0.549±0.113 <0.05
2.4　HFPS 对 PM 内酶活性的影响
各组动物 PM 内酸性磷酸酶和精氨酸酶活性如表 3 所
示 ,经统计学处理 , Ⅲ 、Ⅳ组与正常对照组的Ⅰ 组相比 , 均有
极显著的差异 ,说明 HFPS 可提高正常与荷瘤动物 PM 内酸
性磷酸酶产精氨酸酶的活性。见表 3。
表 3　HFPS 对 PM 中酸性磷酸酶和精氨酸酶的影响/ n=10
组　别 酸性磷酸酶/μ·L-1 P值
精氨酸
/μ·L-1 P值
正常对照组　 4.2±2.0 2.9±1.4
肿瘤对照组　 5.3±2.7 >0.05 3.7±1.5 >0.05
多糖对照组　 55.5±10.0 <0.01 62.5±14.5 <0.01
多糖+肿瘤组 60.1±15.2 <0.01 57.4±18.2 <0.01
2.5　HFPS 对 PM 功能的影响
从表4 可知 HFPS 有增强 PM 功能的作用 ,三个实验组
PM 吞噬百分率和吞噬指数都有不同程度提高 , 但Ⅱ组与对
照组相比无统计学意义。见表 4。
3　讨　论
从实验中可以看出 ,铁筷子多糖具有理想的抑制实体型
S180在小鼠体内生长的作用 ,我们从免疫药理学的角度对其
作用机理进行初步探讨。机体内细胞免疫功能的强弱直接
影响着肿瘤的发生发展 ,而在肿瘤生长期间往往因为细胞免
疫功能受到抑制 , 使肿瘤得以快速生长。 本实验表明 , 铁筷
子多糖能促进胸腺组织增生。实验显示 , 荷瘤的机体细胞免
疫功能是低下的 ,而铁子多糖不仅可提高正常机体的细胞免
·95·中国现代应用药学杂志 2001年 4月第 18卷第 2期　　　　　　　　　　　　　　　　　Chin JMAP , 2001 April , Vol.18 No.2
表 4　HFPS 对 PM 功能的影响/ n=10
组　别 吞噬百分率/ % P值 吞噬指数 P 值
正常对照组　 41.0±8.1 0.49±0.07
肿瘤对照组　 42.4±6.9 >0.05 0.45±0.09 >0.05
多糖对照组　 60.6±10.3 <0.01 0.64±0.16 <0.01
多糖+肿瘤组 54.2±10.8 <0.01 0.59±0.11 <0.01
疫功能 ,并且可逆转荷瘤机体因肿瘤生长而功能低下的细胞
免疫状态 ,表现为使用多糖的两个组动物脾淋巴细胞转化率
和 IL-2 水平均较高。M 的众多功能已为人们所认识 , 活化
的M 作为抗肿瘤的效应细胞具有较强的杀伤肿瘤细胞 , 抑
制肿瘤细胞繁殖的能力[ 7] ;除了参加机体的非特异性免疫反
应外 , 在特异性免疫反应中巨噬细胞也起了重要作用 , 它们
可将抗原信息传递给 T、B 细胞 , 另外 , 巨噬细胞功能增强后
产生的 IL-1 可与T 淋巴细胞结合 , 促使后者产生较多的 IL-2
并与T 细胞膜上 IL-2 结合部位相互作用 ,促使 T 淋巴细胞分
裂繁殖[ 8] 。我们的实验结果符合这一理论 ,即铁筷子多糖在
使巨噬细胞吞噬功能增强的同时 , IL-2 的产生有所增加 , 由
此促进了脾淋巴细胞的分裂繁殖。巨噬细胞功能的强弱与
其自身酶的活性息息相关 ,酸性磷酸酶被认为是巨噬细胞内
溶酶体酶的标志酶 , 可受免疫激活剂和免疫抑制剂的调
节[ 9 , 10] ;精氨酸酶则可分解体内肿瘤组织微环境中的精氨
酸 ,从而干扰肿瘤细胞内多肽和蛋白质的生物合成 , 因此与
巨噬细胞的抗肿瘤效应有关。用铁筷子多糖灌胃 2周后 , 动
物腹腔巨噬细胞内这两种酶的活性被大大提高 , 这在肿瘤细
胞自身遗传信息的传递和表达受影响的同时 , 增进了巨噬细
胞的吞噬消化能力 ,限制了肿瘤组织的生长。
总之 , 通过实验 ,我们认为铁筷子多糖抑制实体型 S180
体内生长的机制 ,可能是作为免疫增强剂促进了巨噬细胞内
酶的活性 ,从而提高了其抗肿瘤和调节细胞免疫功能的作
用 ,达到了抑制肿瘤生长的目的。
参考文献
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收稿日期:1999-11-24
灯盏花注射液抗脑缺血作用的实验研究
刘　红(恩施 445000 湖北民族学院药理教研室)
摘要　目的:为探讨灯盏花注射液的脑保护机制 , 观察了灯盏花注射液对血栓形成和缺血性脑水肿的作用。 方法:结扎小鼠
带迷走神经的两侧颈总动脉造成急性脑缺血 , 结扎大鼠双侧颈总动脉造成急性不完性脑缺血 , 实验性造成大鼠体内血栓形
成 ,观察灯盏花对它们的影响。结果:灯盏花注射液明显延长小鼠缺氧存活时间 , 同时还能明显延长小鼠因结扎带迷走神经
的两侧颈总动脉造成急性脑缺血的存活时间 ,能减轻大鼠实验性血栓的湿重和干重。显著降低大鼠急性不完全性脑缺血脑
组织含水量。结论:本结果为灯盏花注射液在临床上用于预防缺血性中风提供了实验依据。
关键词　灯盏花注射液;急性脑缺血;抗血栓作用
Protective effect of brevescapin against acute experimental cerebral ischemia
Liu Hong(Liu H)(Dept of Pharmacology , Hubei Institute for Nationalities , Hubei 445000)
ABSTRACT　OBJECTIVE:To observe the protective effect of brevescapin in the brains of mice and rats in ischemia models.METHODS:
Acute brain ischemia in mice was induced by bilateral ligation of common carotid arteries with vagus nerves.Acute incomplete brain ischemia in
rats was induced by bilateral carotid artery occlusion.Thrombosis was caused by experimental factor.RESULTS:Brevescapin injection
prolonged the survival time of hypoxic mice and significantly prolong the life span of mice with acute experimental cerebral ischemia by bilateral
·96· Chin JMAP ,2001 Apri l ,Vol.18 No.2　　　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2001年 4月第 18卷第 2期