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HPLC fingerprint of Herba Senecionis Scandentis and its ESI-MS analysis

千里光药材的HPLC指纹图谱及ESI-MS分析



全 文 :StudyonHPLCfingerprintofPrunelavulgaris
SUNWeiguang1,KEXuehong2,LIYuan3,HUARufeng2,CHENJinfu2
(1.GuangzhouXingqunPharmaceuticalLtd.Co.,Guangzhou510288,China;
2.FirstHospitalAfiliatedtoGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510405,China;
3.ProvincialInstituteofMedicine,Guangzhou510440,China)
[Abstract] Objective:ToestablishHPLCfingerprintofPrunelavulgariseforqualitycontroloftheherbalmedicine.Method:
AsunfireC18analyticalcolumnwasused.ThemobilephaseAwas1% aceticacid,andmobilephaseBwasmethanol.Theelutionwas
ingradientmodeanddetectionwavelengfhwassetat290nm.Theflowratewas10mL·min-1andthecolumntemperatureat30℃.
Theanalysistimewas60min.Result:Thesimilarityof10batchesofPvulgariswasnotlowerthan0810.Thefingerprintsofthe
herbalmedicinewereclassifiedPvulgarisontheresultsofclusteranalysis.Conclusion:Thismethodisavailableforqualityevalua
tionandcontrolthequalityofPvulgaris.
[Keywords] Prunelavulgaris;fingerprint;HPLC;qualitycontrol
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20071106
[基金项目] 国家“十五”重大科技专项(2004AA2Z373015)
[通讯作者] 张朝凤,Tel:(025)85391245,Email:njchaofeng
@126.com
千里光药材的 HPLC指纹图谱及 ESIMS分析
张朝凤,陈录新,张 勉,王峥涛
(中国药科大学 生药研究室,江苏 南京 210038)
[摘要] 目的:建立千里光Senecioscandens药材的质量评价方法。方法:采用 HPLCUV对12批千里光药材
的指纹图谱进行比较研究,用LCESIMS技术对其共有峰进行分析。结果:获得千里光药材的HPLC指纹图谱,并
检出8个共有峰,LCESIMS分析结果表明共有峰主要为绿原酸或黄酮类成分的吸收峰。结论:建立的HPLC指纹
图谱可用于千里光的质量评价。
[关键词] 千里光;HPLC;指纹图谱;ESIMS分析
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18209304
  千里光为菊科Compositae千里光属植物Senecio
scandensBuch.Ham.的干燥地上部分,我国应用历
史悠久的常用中药。本品以千里及之名始载于《本
草拾遗》,味苦、辛,性寒,清热解毒,明目退翳,杀虫
止痒。主治流感,上呼吸道感染,黄疸型肝炎,胆囊
炎,急性尿路感染,目赤肿痛翳障等[1]。主要分布
于我国浙江、江苏、安徽等地,广西、云南也有分布。
千里光HerbaSenecionisScandentis中化学成分主要
有黄酮、酚酸、生物碱类等[2]。国内外对千里光属
植物的研究较多,但针对千里光 Senecioscandens的
研究较少,且未被药典收录。为了合理利用药材资
源、有效控制其质量、完善药典,作者在获得有效成
分对照品金丝桃苷的基础上[3],建立了12批千里光
药材的HPLC指纹图谱,并对8个共有峰进行了LC
ESIMS分析,以期对千里光药材的质量控制提供理
论依据。
1 仪器、试剂与药材
Agilent1100高效液相色谱仪,G1313自动进样
器,G1314可变波长紫外检测器,HpChemstation
System色谱工作站,Agilent1100LCDADMS系统;
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医用数控超声波清洗仪(KQ-250DE,昆山超声仪
器有限公司);电子分析天平(METTLERTOLEDO
PL303型);1/1万电子分析天平(METTLERTOLE
DOAL104型);1/10万电子分析天平(SartoriusBT
25)。
乙腈(色谱纯,美国 Tedia公司),磷酸(分析
纯),甲醇(分析纯),水为超纯水(Milipore超纯水
纯化系统);金丝桃苷(hyperoside)对照品为自备,从
安徽繁昌采集千里光 S.candens中分离得到,结构
经TLC,NMR资料及文献比较确证。在本实验色谱
条件下按HPLC归一化法得纯度>98%。
千里光药材从安徽繁昌等地收集,共 12批药
材,编号为S1~S12(表1),均由张勉副教授鉴定,
凭证标本存放于中国药科大学生药研究室。
表1 12批千里光药材的样品
No. 采集地
采集
日期
No. 采集地
采集
日期
S1 安徽繁昌   200408 S7 云南昆明世博园 200503
S2 陕西西安   200503 S8 安徽亳州    200511
S3 河南郑州   200506 S9 四川新津    200507
S4 贵州贵阳   200403 S10 镇江宝华山   200508
S5 四川峨眉山  200403 S11 浙江天目山   200507
S6 安徽芜湖丫山 200506 S12 重庆标本园   200406
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取对照品金丝桃苷适量,加甲醇制成1
mL含金丝桃苷0056mg的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
将样品60℃烘干6h,粉碎,过50目筛备用。
取样品粉末约10g,精密称定,置500mL圆底烧瓶
中,加入75%甲醇30mL,加热回流1h,放冷,过滤,
挥去溶剂,残渣用少量甲醇溶解并用流动相定容至
25mL量瓶中,摇匀,微孔滤膜(045μm)滤过,取
续滤液,得各供试品溶液。
2.3 色谱条件及系统适应性实验
AngilentZorbaxSB-C18色谱柱(46mm×250
mm,5μm);柱温25℃;流动相为003%磷酸水溶
液(A)和乙腈(B)梯度洗脱(表 2);检测波长 254
nm;流速1mL·min-1;进样量20μL;理论塔板数
按金丝桃苷计为18×104;拖尾因子为080,峰形
基本对称(图1)。
2.4 方法学考察
表2 流动相梯度洗脱程序
t/min A/% B/% t/min A/% B/%
0 98 2 50 82 18
5 98 2 65 75 25
10 93 7 68 0 100
35 84 16      
A.千里光药材(S1);B.12批千里光药材(S1~S12);
1~8特征峰
图1 千里光药材指纹图谱
  以S1号样品的主要色谱峰(1~8号峰,6号峰
为参照峰金丝桃苷,图1)的相对保留时间及相对
保留峰面积来考察分析方法的稳定性,仪器精密度
及实验方法的重现性。
2.4.1 稳定性试验 取S1号样品的供试品液分别
在0,4,8,12,36,48h进样20μL,记录指纹图谱,结
果表明各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比
值无明显变化,RSD分别为 093% ~25%和
11%~27%,显示供试品溶液至少在48h稳定,
符合指纹图谱要求。
2.4.2 精密度试验 取 S1号样品的供试品溶液。
重复进样6次,记录指纹图谱,结果表明各主要色谱
峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化,
RSD分别为004%~15%和049%~24%,符合
指纹图谱要求。
2.4.3 重复性试验 取S1号样材6份,精密称定,
按照2.2项下方法制备供试品溶液,记录指纹图谱,
结果表明各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积
比值无明显变化,RSD分别为 089% ~15%和
055%~26%,符合指纹图谱要求。
2.4.4 千里光药材指纹图谱的测定 分别精密12
批千里光药材的供试品溶液各20μL,注入液相色
谱仪,按照2.2项下方法制备供试品溶液,记录指纹
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图谱(图1),将6号峰(金丝桃苷)确定为内参比峰,
计算各色谱峰与内参比峰的保留时间及相对峰面积
值,各峰相对保留时间RSD小于3%,共有指纹峰的
峰面积之和大于90%。
2.5 数据处理
取上述12批样品,分别按照2.2项下方法制备
供试样品,并测定色谱图,将各样品色谱图导入“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典委员
会2004A版),选定 S1号样品色谱图为参照图谱,
设定时间漂移值01,采用中位数法谱峰自动匹配,
自动生成对照谱(R)。各药材样品与对照图谱R比
较及相互比较,可得各药材相似度结果。共检出8
个共有峰,选定这8个峰位构成指纹图谱的稳定特
征峰。
2.6 共有峰的归属
取金丝桃苷对照品溶液20μL,得色谱图,对比
相对保留时间可知指纹图谱中的6号峰为金丝桃苷
对应的色谱峰,采用 LCESIMS并结合文献对共有
特征色谱峰进行分析。峰 2,3的准分子离子峰
[M-H]-均为m/z353。ESIMSMS分析中可检测
到由酯键断裂形成的m/z191[quinicacidH]-离子
即奎宁酸负离子、m/z173[quinicacidHH2O]
-离
子等绿原酸类化合物的特征碎片离子,结合绿原酸
标准品的色谱峰,推断2,3号峰为绿原酸类化合物;
4,5号峰的准分子离子峰[M-H]-均为 m/z609,
结合金丝桃苷的提取质谱图,对其进行MS2分析,含
有m/z301[M-H-308]-,可能为槲皮素负离子碎
片;MS3分析含有碎片 m/z1511,179,271,与金丝
桃苷碎片基本一致,推断均可能为含有五碳醛糖及
六碳醛糖取代基团的双糖苷化的黄酮类化合物;7
号峰,准分子离子峰[M-H]-为m/z463,与金丝桃
苷的相对分子质量相同,主要碎片峰基本一致,推测
可能为以槲皮素为母核,不同六碳醛糖取代的黄酮
醇苷类化合物;8号峰,准分子离子峰[M-H]-为
m/z447,金丝桃苷的相对分子质量相比校,相差
16,对其进行MS2,MS3分析,有m/z301,1511,179,
271等碎片峰,与金丝桃苷的基本一致,推测可能是
以槲皮素为母核,五碳醛糖取代的黄酮醇苷类化合
物。
3 讨论
比较了超声提取和水浴回流提取对千里光药材
的提取效果,结果表明,水浴回流提取完全,指纹图
谱中色谱峰高且多,效果比较好。比较25%,50%,
60%,75%,90%的甲醇,50%,75%,90%的乙醇对
千里光的提取效果。结果表明,75%甲醇回流提取,
指纹图谱中色谱峰高且多,效果比较好。
通过比较12个收集地的药材,可知千里光药材
的化学成分变化较大,共检出8个共有峰,并对其中
的7个共有峰进行 LCMS分析。结果表明,7个共
有峰可能为黄酮苷或绿原酸类成分。文献[45]报
道绿原酸(chlorogenicacid)具有清热解毒、消炎利
胆、抗菌、降血脂等生理功能;金丝桃苷具有抗炎、抗
菌、止咳等显著的药理活性。这二者活性与千里光
药材的主治上呼吸道感染、黄疸性肝炎、胆囊炎等临
床药效基本一致,提示黄酮苷或绿原酸类成分为千
里光的主要活性物质。
测定了12个收集地的千里光药材中金丝桃苷
的含量(表2),结果表明,贵州贵阳样品(S4)中金
丝桃苷的含量最高,在不同来源的千里光药材虽然
都出现了相应的主峰成分,但是峰面积比值差异较
大。提示中药必须在固定原产地及加工条件下才能
保证其质量稳定可控。如果控制其制剂的质量,在
固定工艺的基础上,确定药材的产地范围不宜太大,
以减少产地不同带来的影响。
[参考文献]
[1] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.上册[M].北京:人
民卫生出版社,1975:112.
[2] 陈录新,李 宁,张 勉,等.千里光的研究进展[J].海峡药
学,2006,18(4):13.
[3] 陈录新,马鸿雁,张朝凤,等.千里光的化学成分研究[J].中国
中药杂志,2006,31(11):1872.
[4] 曹建国,赵则海,杨逢建,等.刺五加中金丝桃苷含量的测定
[J].植物学通报,2005,22(2):203.
[5] 杜延兵,裘爱泳.绿原酸生物活性、资源及其提取纯化[J].现
代食品科技,2006,22(2):250.
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HPLCfingerprintofHerbaSenecionisScandentisanditsESIMSanalysis
ZHANGChaofeng,CHENLuxin,ZHANGMian,WANGZhengtao
(DepartmentofPharmacognosy,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038,China)
[Abstract] Objective:TostudyandestablishthefingerprintsofHerbaSenecionisScandentisbyRPHPLCandLCMS.
Method:C18columnwasusedintheHPLCseparation.Themobilephasewascomposedofacetonitrileand003% phosphoricacid
withgradientelution.Theflowratewas10mL·min-1anddetectionwavelengthwas254nm.Result:Underthisselectedchromato
graphiccondition,goodHPLCfingerprintsofSenecioscandenswereobtained.Conclusion:HPLCfingerprintfacilitatetheevaluation
ofthequalityofHerbaSenecionisScandentis.
[Keywords] Senecioscandens;HPLC;fingerprint;ESIMSanalysis
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20080219
[基金项目] 科技部科研院所社会公益研究专项(2004DIB1JO
39)
[通讯作者] 张本刚,Tel:(010)62899725,Email:zhang
bengang@163.net
龙胆规范化种植中农药世高安全使用标准的研究
刘海涛1,刘洪科1,2,薛 健1,郑友兰2,陈 峰1,张本刚1
(1.中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所,北京 100094;
2.吉林农业大学,吉林 长春 130118)
[摘要] 目的:制定龙胆规范化种植中农药世高的安全使用标准,以保证其施用安全有效。方法:通过测定农
药世高在龙胆生长期的降解动态,计算农药世高在龙胆中的半衰期,从而制定农药世高的安全使用标准。结果:在
当地的气候条件下,农药世高在龙胆茎叶上的半衰期为684~690d。结论:龙胆规范化种植中,建议农药世高喷
施量应小于400g·hm-2,安全使用间隔期为40d。
[关键词] 世高;龙胆;降解动态;安全使用标准
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18209603
  近年来,中药及其产品的质量引起了人们的高
度重视,中药材 GAP指导原则中明确规定,中药材
GAP生产要符合“无污染、无公害、绿色药材”的标
准。强调中药质量管理,加强中药材规范化种植管
理源头,农药的安全使用是其中的重要环节。
龙胆斑枯病 SeptoriagentianaeThüm.,褐斑病
SeptoriamicrosporaSpeg.是影响龙胆产量和品质的
重要原因,二三年生龙胆草发病率达84% ~100%,
减产高达50%~80%,是制约龙胆药材生产的关键
因素[12]。世高 10%苯醚甲环唑(difenoconazole)水
分散性粒剂(WG),化学通用名苯醚甲环唑,是三唑
类杀菌剂的一种,内吸性强,杀菌谱广。近年来因其
对斑枯病、叶斑病、白粉病等有较好的防治效果而被
广泛用于龙胆栽培中斑枯病的防治,但国内外有关
该农药在作物上安全使用标准的文献报道很少[35],
在中药龙胆上更是一个空白。本试验通过对农药世
高在龙胆中的残留分析和降解动态的研究,提出了
龙胆规范化种植中农药世高的安全使用标准,为龙
胆规范化种植中农药安全使用标准的建立提供了科
学参考。
1 仪器与试药
HP6890N气相色谱仪(电子捕获检测器),中性
氧化铝(100~200目,经430℃灼烧6h,再用5%蒸
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