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HPLC测定不同品种秦皮药材中香豆素类成分



全 文 :  
1.草酸钙簇晶;2.上表皮;3.下表皮;4.果皮细胞;
5.种皮表皮细胞;6.导管;7.非腺毛;8.花萼条裂碎片;
9.淀粉粒;10.根表皮细胞
图5 小风鼓草全草粉末
细小草本,微酸气;茎常红棕色;蒴果四棱杯状,顶端
具膜质冠,状如风鼓斗。显微鉴别特征是根、茎、叶
中薄壁组织发达;气孔为半环式;非腺毛为大形长锥
形;茎、叶和花萼腺毛多见。全草粉末草酸钙簇晶多
见;果皮表皮细胞壁木化,深波状弯曲;种皮表皮细
胞形状多样,细胞壁增厚不一。《福建植物志》第4
卷肉穗草属植物仅2种,为楮头红和东方肉穗草,据
调查2种入药分别称为大风鼓草和小风鼓草,小风
鼓草药效较好;大风鼓草药材不带花果入药,叶较
大,长2~6cm,宽1~35cm,边缘具细锯齿;草酸
钙针晶束多见,茎髓中有3~5个异常维管束与小风
鼓草相区别。
[参考文献]
[1] 福建省科学技术委员会福建植物志编写组.福建植物志.第4
卷种子植物[M].福州:福建科学技术出版社,1989:124.
[2] 中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志.第53卷第1分
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[3] 陈得水.东方肉穗草林下栽培技术[J].林业科技开发,2004,
18(6):76.
[4] 张绪璋,周以飞,潘大仁.肉穗草组织培养与扩繁研究[J].中
国农学通报,2008,24(6):48.
[责任编辑 吕冬梅]
HPLC测定不同品种秦皮药材中香豆素类成分
陈 琳1,刘丽梅1,王瑞海1,王 丽2
(1.中国中医科学院 中医基础理论研究所,北京 100700;
2.哈药集团三精制药股份有限公司,黑龙江 哈尔滨 150069)
[收稿日期] 20080309
[通讯作者]  陈琳,Tel:13801001515,Email:chenlin73@
sina.com
  秦皮为常用中药,《神农本草经》列为上品。药
典(2005年版)规定秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树
FraxinusrhynchophylaHance.、白蜡树 F.chinensis
Roxb.、尖叶白蜡树F.szaboanaLingelsh.、宿柱白蜡
树F.stylosaLingelsh.的干燥枝皮或干皮。苦、涩、
寒。归肝、胆、大肠经。具有清热燥湿,收涩,明目的
功能[1]。现代药理实验表明,秦皮具有抗菌、消炎、
镇静、利尿、镇咳、祛痰和平喘等作用[2]。本研究从
苦枥白蜡树皮中分离到5种香豆素成分,分别为秦
皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷、6,7二甲氧基8
羟基香豆素,并对其进行了结构鉴定。以往研究曾
采用HPLC对部分品种药材中秦皮甲素、秦皮乙素、
秦皮素、秦皮苷进行含量测定[3]。在此基础上,本
研究运用HPLC对药典收载的4个品种秦皮药材中
5种香豆素类成分进行了含量测定,用5个成分共
同标定秦皮药材的质量,结果表明该方法操作简单,
精密度好,准确可靠。为建立秦皮药材科学合理的
质量控制方法提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪(G1311A四元泵,
G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1315BDAD
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
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检测器,HP化学工作站);Sartorius电子天平
CP225D。甲醇(色谱纯,Fisher公司);其他试剂为
分析纯;水为纯净水。秦皮甲素、秦皮乙素为中国药
品生物制品检定所提供(批号 07409403,741
9404);秦皮苷、秦皮素、6,7二甲氧基8羟基香豆素
为自制(光谱及纯度 >98%)。秦皮药材(46批)均
由中国中医科学院中药研究所胡世林研究员和陕西
中医学院胡本祥、王继涛教授鉴定(表1)。
2 方法与结果
2.1  色谱条件   AgilentExtendC18色谱柱
(46mm×250mm,5μm);流 动 相 甲 醇 (A)
04%醋酸水溶液(B);梯度洗脱 0~25min(89%
B),25~30min(89%~75%B);检测波长340nm;
柱温40℃;流速 15mL·min-1;进样量 5μL;
检测时间45min(图1)。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取秦皮甲素、秦皮
乙素、秦皮苷、秦皮素、6,7二甲氧基8羟基香豆素
对照品适量,分别加甲醇制成含02837g·L-1秦
皮甲素、00499g·L-1秦皮乙素、01100g·L-1秦
皮苷、00700g·L-1秦皮素、002g·L-16,7二甲
氧基8羟基香豆素的对照品溶液,过微孔滤膜
(045μm),取续滤液备用。
2.3 样品溶液的制备 秦皮药材粉碎(过四号
筛),精密称取药材20g,加入30mL甲醇加热回流
1h,过微孔滤膜(045μm),取续滤液备用。
2.4 线性关系的考察 精密吸取各对照品液1,3,
5,7,9,11μL,按2.1项下色谱条件测定峰面积,以
峰面积(Y)为纵坐标,进样量(X,μL)为横坐标,绘
制标准曲线(表2)。
2.5 精密度试验 精密吸取样品溶液5μL,按2.1
项下色谱条件,重复进样6次,测定5种香豆素峰面
积,峰面积 RSD分别为 083%,075%,097%,
10%,070%,仪器的精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取样品溶液5μL,在24
h内测定 5种香豆素峰面积,峰面积 RSD分别为
095%,10%,098%,093%,073%,样品在24h
内稳定。
2.7 重复性试验 取秦皮药材按2.3项下方法同
时制备6份,测定5种香豆素峰面积,计算峰面积
RSD分别为 16%,15%,18%,22%,15%,该
方法重复性较好。
2.8 加样回收率试验 精密称取秦皮药材025g,
每组平行6份,按一定比例分别添加5种香豆素对
照品,测定5种香豆素峰面积,计算回收率(表3)。
表1 秦皮药材来源及及鉴定结果
购买地或采集地 性状 鉴定结果 购买地或采集地 性状 鉴定结果
辽宁沈阳  饮片 苦枥白蜡树 陕西西安    饮片    尖叶白蜡树
齐齐哈尔  饮片 苦枥白蜡树 广东广州    饮片    白蜡树  
齐齐哈尔  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋东岳村 枝皮或干皮 白蜡树  
齐齐哈尔  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋高河村 枝皮或干皮 白蜡树  
齐齐哈尔  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋赵河村 枝皮或干皮 白蜡树  
黑龙江绥化 饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋兴荣村 枝皮或干皮 白蜡树  
辽宁阜新  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋梧桐村 枝皮或干皮 白蜡树  
山东潍坊  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋顺河村 枝皮或干皮 白蜡树  
山东潍坊  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋兴荣村 枝皮或干皮 白蜡树  
山东潍坊  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋顺河村 枝皮或干皮 白蜡树  
山东潍坊  饮片 苦枥白蜡树 四川峨嵋东岳村 枝皮或干皮 白蜡树  
广东广州  饮片 苦枥白蜡树 山西大同    饮片    白蜡树  
齐齐哈尔  饮片 尖叶白蜡树 陕西洛南    饮片    宿柱白蜡树
山东潍坊  饮片 尖叶白蜡树 陕西商南杨家沟 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
广东广州  饮片 尖叶白蜡树 陕西商南二道河 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
四川成都  饮片 尖叶白蜡树 陕西商南二道河 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
陕西澄城  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳潘家沟 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
山西大同  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳潘家沟 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
陕西西安  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳子房沟 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
广东深圳  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳子房沟 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
四川成都  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳李家坪 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
四川成都  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳杨家村 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
陕西西安  饮片 尖叶白蜡树 陕西山阳杨家村 枝皮或干皮 宿柱白蜡树
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1秦皮甲素;2秦皮乙素;3秦皮苷;4秦皮素;
56,7二甲氧基8羟基香豆素
图1 标准品HPLC图谱
表2 对照品的线性范围
对照品 回归方程 r 线性范围/μg
秦皮甲素 Y=393×102X+169 09998 014~312
秦皮乙素 Y=115×102X-0593 10000 005~055
秦皮苷 Y=101×102X+831 10000 012~221
秦皮素 Y=132×102X-104 09999 004~077
 6,7二甲氧基Y=034×102X+335 09999 001~022
8羟基香豆素      
表3 5种香豆素回收率试验
名称
样品中量
/mg
加入量
/mg
回收量
/mg
回收率
/%
RSD
/%
秦皮甲素 3578 2813 2815 1001 29
秦皮乙素 1165 0998 1008 1010 24
秦皮苷 1419 1100 1104 1004 26
秦皮素 05627 03510 03583 1021 19
 6,7二甲氧基 01941 02000 02015 1008 17
8羟基香豆素          
2.9 样品含量测定 对药典收载的4个品种各取
样10批以上,共对46个样品进行了含量测定。分
别精密吸取对照品溶液与样品溶液5μL按上述色
谱条件测定5种香豆素峰面积,按外标一点法计算
各成分含量(表4)。不同品种间5种香豆素类成分
含量无明显差异。
3 讨论
本研究对药典收载的4种秦皮药材中5种香豆
素类成分同时进行含量测定,结果表明各品种中5
种香豆素成分均为秦皮甲素含量最高,6,7二甲氧
基8羟基香豆素含量最低。苦枥白蜡树、白蜡树中
秦皮苷含量高于秦皮乙素,宿柱白蜡树中秦皮乙素
  
表4 4种秦皮中5种香豆素质量分数(n=2) % 
名称
苦枥
白蜡树
尖叶
白蜡树
白蜡树
宿柱
白蜡树
秦皮甲素 184 124 182 186
秦皮乙素 0347 0384 0110 0883
秦皮苷 135 0500 173 0298
秦皮素 0148 0104 0036 0085
6,7二甲氧基8羟基香豆素 0046 0009 0008 0025
含量高于秦皮苷,尖叶白蜡树中这2种成分的含量
接近,各品种秦皮素含量均小于秦皮苷、秦皮乙素,
这说明各香豆素成分含量与品种有直接的关系。
研究对4个品种秦皮药材中5种香豆素含量总
和进行了对比,含量由高到低各品种排列顺序为:苦
枥白蜡树,白蜡树,宿柱白蜡树,尖叶白蜡树,总香豆
素平均含量为320%。各品种总香豆素含量比较
接近,并无明显差异,故药典将其收载作为药用秦皮
使用具有一定合理性。
种内含量变化标准偏差越小,说明它在该品种
药材中的含量变化越小,就越稳定。秦皮甲素和6,
7二甲氧基8羟基香豆素在苦枥白蜡树中的含量与
其他品种相比较稳定;秦皮乙素、秦皮素在白蜡树中
的含量与其他品种相比较稳定;秦皮苷在宿柱白蜡
树中的含量与其他品种相比较稳定。从种间的变化
情况可以看出,5种香豆素单体含量在不同品种间
变化较小的是秦皮素,其次秦皮甲素、秦皮乙素,变
化最大的是秦皮苷。这对药材对照品的选择具有一
定的参考价值。对照品应选择专属性强、含量较稳
定和含量较高的活性成分,这有利于药物质量控制
以及药效的稳定。因此建议可以考虑秦皮甲素、秦
皮乙素,秦皮素做秦皮药材的对照品,而秦皮苷含量
变化较大,可以不考虑。6,7二甲氧基8羟基香豆
素含量在不同品种间变化虽最小,但其在药材中的
含量很低或不含有该成分(本研究采用的46批药
材中有10批不含该成分),因此可不做考虑。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S].2005:191.
[2] 肖培根.新编中药志.第 3卷[M]北京:化学工业出版社,
2002:633.
[责任编辑 王亚君]
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