全 文 ：第 39 卷 第 3 期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol． 39 No． 3
2011 年 3 月 JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY Mar． 2011
1) 科技部科技基础性工作专项 2007 年重点项目( 2007FY110400 －
5) ;黑龙江省科技攻关项目( GA07B301 － 09) 资助。
第一作者简介: 于景华，男，1972 年 9 月生，森林植物生态学教育
部重点实验室( 东北林业大学) ，副教授。
通信作者:祖元刚，森林植物生态学教育部重点实验室 ( 东北林
业大学) ，教授。E － mail: zygor@ nefu． edu． cn。
收稿日期: 2010 年 10 月 13 日。
责任编辑:张建华。
RP －HPLC法测定细叶杜香叶中4种活性成分的质量分数1)
于景华 赵 丹 付玉杰 孔 羽 原树生 祖元刚
( 森林植物生态学教育部重点实验室( 东北林业大学) ，哈尔滨，150040)
摘 要 为了建立测定细叶杜香叶中秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷和槲皮素质量分数的方法，采用反相高效液相色
谱法(色谱条件:色谱柱为 Inertsil ODS － SP( 5 μm，4． 6 mm ×250 mm，柱号:9KI92609)、流动相为 V(甲醇) ∶ V( 0． 2%醋酸)
=43∶ 57、流速 1． 0 mL·min －1、检测波长350 nm)，测得秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷和槲皮素4种成分的平均加样回收率
分别为 99． 71%、98． 62%、100． 13%、98． 33%，其相对标准偏差 RSD分别为 1． 45%、1． 53%、1． 04%、1． 69%。结果表明:反相
高效液相色谱法操作简便、准确，具有良好的重复性，可用于细叶杜香中此 4种成分的质量分数的测定。
关键词 反相高效液相色谱法;细叶杜香;秦皮乙素;秦皮素;金丝桃苷;槲皮素
分类号 R914． 1
Content Determination of Four Components in Ledum palustre Leaves by RP-HPLC/Yu Jinghua，Zhao Dan，Fu
Yujie，Kong Yu，Yuan Shusheng，Zu Yuangang( Key Laboratory of Forest Plant Ecology ( Northeast Forestry University) ，
Ministry of Education，Harbin 150040，P． R． China) / / Journal of Northeast Forestry University． － 2011，39( 3) ． － 106 ～
107，119
An experiment was conducted to establish a RP-HPLC method for content determination of aesculetin，fraxetin，hy-
peroside and quercetin in Ledum palustre leaves． The reversed-phase high performance liquid chromatography ( RP-HPLC)
system consisted of an Inertsil ODS-SP column ( 5 μm，4． 6 mm × 250 mm，series number: 9KI92609) ． Volume ratio of
methanol to 0． 2% acetic acid ( 43∶ 57 ) was used as mobile phase． Flow rate was 1． 0 mL·min －1，and the detector
wavelength was set at 350 nm． The average recoveries of aesculetin，fraxetin，hyperoside and quercetin were 99． 71%，98．
62%，100． 13%，and 98． 33% with relative standard deviations of 1． 45%，1． 53%，1． 04% and 1． 69%，respectively．
The RP-HPLC method is simple，accurate and repeatable，and it could be applied to the content determination of four
components in L． palustre leaves．
Keywords Reversed-phase high performance liquid chromatography; Ledum palustre; Aesculetin; Fraxetin; Hyper-
oside; Quercetin
细叶杜香( Ledum palustre L． ) ，又名喇叭茶、绊脚丝、狭叶
杜香，是杜鹃花科杜香属常绿小灌木，具有止咳、祛痰、抗菌、
消炎等作用，用于治疗慢性气管炎、百日咳［1］。该种主要分
布于北半球温带或寒温带地区，在我国集中分布于大兴安岭
地区落叶松林和落叶松白桦针阔混交林下，小兴安岭和长白
山也有分布，资源十分丰富［2］。细叶杜香的化学成分主要有
香豆素类、黄酮类、萜类、挥发油类等［3］，而其中金丝桃苷和
槲皮素作为黄酮类代表性化合物，具有降压、降血脂、抗动脉
硬化、镇痛、抗氧化、抗肿瘤等生物活性［4 － 5］;秦皮乙素和秦皮
素作为香豆素类代表性化合物，具有抗菌、抗炎、降低血尿酸、
抗肿瘤等生物活性［6 － 7］。目前国内外对细叶杜香质量分数的
研究主要集中在萜类及挥发油类［8 － 11］方面，而对香豆素类及
黄酮类的研究少有报道。笔者采用 HPLC法同时对细叶杜香
中 2 种香豆素类及 2 种黄酮类化学成分的质量分数进行测
定，其操作方法简便、准确、重复性好，可作为细叶杜香质量控
制标准，为细叶杜香的进一步开发应用提供科学依据。
1 仪器与试药
Waters 1525 系列高效液相色谱仪: Waters 1525 泵，Wa-
ters 717 自动进样器，Waters 2487 双通道紫外可见检测器，
Empower化学工作站( 美国 Waters 公司) ; UV － 2550 紫外可
见分光光度计( 日本岛津公司) ; KQ －250DB型数控超声波清
洗器( 昆山市超声仪器有限公司) ; Sigma 3K30 超速冷冻离心
机( 德国 Sigma 公司) ; Satorious BS210S 电子分析天平 ( 北京
赛多利斯天平有限公司) 。
秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷、槲皮素对照品均购自芜湖
甙尔塔医药科技有限公司，纯度 ＞ 98% ;甲醇为色谱纯; 水为
超纯水;其余试剂均为分析纯。
细叶杜香采自大兴安岭地区，经森林植物生态学教育部
重点实验室( 东北林业大学) 聂绍荃教授鉴定，为杜鹃花科杜
香属植物细叶杜香( Ledum palustre L． ) 。
2 方法与结果
检测波长的选择 分光光度计全波长扫描结果显示，4
种物质在 330 ～ 370 nm 范围内均有较强紫外吸收，结合文献
选择 340 、350、360 nm 3 个波长进行考察［12 － 13］，结果表明，4
种物质在 350 nm处峰面积值理想，峰形好且干扰少，故检测
波长选定为 350 nm。
流动相的选择 分别采用不同体积比的甲醇—水、乙
腈—水、甲醇—醋酸水溶液、乙腈—醋酸水溶液作为流动相进
行考察［14］，结果表明:以 V( 甲醇) ∶ V( 0． 2%醋酸) = 43∶ 57
作为流动相，可以使各组分色谱峰的峰形好、分离度高，并且，
各个待测物质的保留时间合适。
色谱条件 色谱柱为 Inertsil ODS － SP( 5 μm，4． 6 mm ×
250 mm，柱号: 9KI92609) ;流动相为 V( 甲醇) ∶ V( 0． 2%醋酸)
=43∶ 57;流速 1． 0 mL·min －1，检测波长为 350 nm; 进样量
10 μL;柱温 30 ℃。
对照品溶液的制备 分别精密称取秦皮乙素、秦皮素、金
丝桃苷、槲皮素对照品各 1 mg，加入纯甲醇溶解并定容至 1
mL，摇匀，制成质量浓度为 1 g·L －1的对照品储备液。
提取条件的选择 为获得最佳提取效率，分别对提取溶
剂体积分数( 50%、65%、80%、95% ) 、提取时间( 15、30 、45、
60 min) 、提取次数 ( 1、2、3 次) 及提取溶剂用量 ( 6、9、12、15
倍) 进行了考察，确定最佳提取工艺为: 12 倍体积分数为 65%
的乙醇溶液超声提取 3 次，每次 45 min。结果表明，该提取条
件效果佳，4 种成分均达到较高提取效率。
供试品溶液的制备 将细叶杜香嫩叶阴干，粉碎，过 60
目筛，精密称取该粉末 1 g，加入体积分数为 65%的乙醇 12
mL，超声提取 45 min，共提取 3 次，合并提取液并定容至一定
刻度。离心、过滤，滤液即为供试品液。
系统适应性试验 在上述色谱条件下，取供试品溶液 10
μL进样，各组分色谱峰与其相邻峰达到完全分离。混合对照
品溶液和供试品溶液的色谱图见图 1。
图 1 混合对照品溶液( A) 及供试品溶液( B) 色谱图
1．秦皮乙素; 2．秦皮素; 3．金丝桃苷; 4．槲皮素。
线性关系 精密称取秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷、槲皮
素对照品储备液适量，制成 6 种不同质量浓度的混合对照品
溶液。按上述色谱条件，测定 4 个组分峰面积，以峰面积 A对
质量浓度 C进行线性回归，绘制标准曲线，求得各自的回归
方程，见表 1。结果表明: 4 个组分在各自质量浓度范围内呈
良好的线性关系。
表 1 各组分线性关系测定结果( n = 6)
化合物 回归方程 R2 线性范围 / g·L －1
秦皮乙素 A =3 ×107C －271 495 0． 999 8 0． 012 0 ～ 0． 120 0
秦皮素 A = 2 × 107C － 30 960 0． 999 6 0． 002 5 ～ 0． 025 0
金丝桃苷 A = 2 × 107C － 14 475 0． 999 5 0． 010 0 ～ 0． 100 0
槲皮素 A = 2 × 107C － 44 911 0． 999 5 0． 002 5 ～ 0． 025 0
精密度试验 取混合对照品溶液，按上述色谱条件重复
进样 6 次，秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷、槲皮素的峰面积的相
对标准偏差 RSD值分别为 1． 26%、1． 22%、0． 71%、1． 47%，表
明仪器进样精密度良好。
重复性试验 精密称取同一批供试品 6 份，按供试品溶
液的制备方法进行制备，按上述色谱条件测定秦皮乙素、秦皮
素、金丝桃苷、槲皮素的质量浓度，所得 RSD 值分别为
1． 51%、1． 60%、0． 70%、1． 65%。
稳定性试验 取于室温放置的供试品溶液，分别于 0、2、
4、8、12、24 h进样测定秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷、槲皮素的
峰面积的 RSD值，其结果分别为 1． 54%、1． 81%、0． 85%、1． 97%，
表明供试品溶液在室温下 24 h内稳定。
加样回收率试验 精密称取 6 份已知质量分数的细叶杜
香样品 0． 5 g，分别加入秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷、槲皮素
对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备成高、中、低 3 种
质量浓度的供试品溶液，按上述色谱条件测定质量浓度，计算
回收率，结果见表 2。
样品的测定 分别精密称取大兴安岭地区不同产地细叶
杜香样品 1 g，按供试品溶液的制备方法制备样品，并按上述
色谱条件测定样品。根据峰面积积分值，采用外标法计算出
各组分的质量分数，见表 3。
表 2 加样回收率试验结果( n = 6)
成 分
样品质量浓
度 /mg·L －1
加入对照品质量
浓度 /mg·L －1
测得质量浓
度 /mg·L －1
回收
率 /%
平均
值 /%
RSD /
%
秦皮乙素 60． 2 50 109． 0 97． 65 99． 71 1． 45
60． 2 50 109． 9 99． 37
60． 2 60 121． 0 101． 38
60． 2 60 119． 8 99． 31
60． 2 70 131． 4 101． 77
60． 2 70 129． 3 98． 76
秦皮素 9． 1 7 15． 9 97． 33 98． 62 1． 53
9． 1 7 16． 1 100． 62
9． 1 9 18． 0 99． 04
9． 1 9 17． 9 97． 25
9． 1 10 18． 8 97． 04
9． 1 10 19． 1 100． 47
金丝桃苷 46． 3 40 86． 2 99． 30 100． 13 1． 04
46． 3 40 86． 5 100． 38
46． 3 50 96． 1 99． 67
46． 3 50 95． 7 98． 73
46． 3 60 106． 8 100． 82
46． 3 60 107． 4 101． 89
槲皮素 4． 6 4 8． 5 97． 08 98． 33 1． 69
4． 6 4 8． 6 100． 49
4． 6 5 9． 7 98． 58
4． 6 5 9． 6 96． 53
4． 6 6 10． 6 96． 92
4． 6 6 10． 8 100． 58
测定结果分析 试验结果表明，所测细叶杜香中都含有
秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷和槲皮素 4 种活性成分，但不同
产地质量分数有一定差异，这可能与气候和地形等生态环境
因素以及采收期有关，其具体原因有待进一步研究。
( 下转 119 页)
701第 3 期 于景华等: RP － HPLC法测定细叶杜香叶中 4 种活性成分的质量分数
［3］ 李成德，张爽．中国蚜小蜂属一新种及一新记录种( 膜翅目: 蚜
小蜂科) ［J］．昆虫分类学报，2005，27( 1) : 69 － 73．
［4］ 廖定熹，李学骝，庞雄飞，等．中国经济昆虫志:第 34 册［M］．北
京: 科学出版社，1987: 1 － 241．
［5］ 潘孟祥．浙江蚜小蜂属一新种( 膜翅目: 蚜小蜂科) ［J］． 动物分
类学报，1992，17( 1) : 75 － 77．
［6］ 杨集昆，陈昱君． 寄生于红腹缢管蚜的蚜小蜂属二新种 ( 膜翅
目: 蚜小蜂科) ［J］．昆虫分类学报，1995，17( 4) : 296 － 302．
［7］ Ferrière C． Aphelinides ( Hym． ) parasites de pucerons: les genres
Mesidia Foerst． et Mesidiopsis Novicky［J］． Mitt Schweiz ent Ges，
1962，35: 139 － 145．
［8］ Graham M W R de V． New British record of Mesidia annulipes
( Walker) and a note on the identity of Myina livens Walker ( Hy-
menoptera: Aphelinidae) ［J］． Ent mon Mag，1961，97: 140 － 142．
［9］ Graham M W R de V． The British species of Aphelinus with notes
and descriptions of other European Aphelinidae ( Hymenoptera )
［J］． Syst Entomol，1976，1: 123 － 146．
［10］ Hayat M． The species of Aphelinus Dalman，1820 ( Hymenoptera:
Aphelinidae) from India［J］． Entomophaga，1972，17 ( 1 ) : 49 －
58．
［11］ Hayat M． Taxonomic studies on Aphelinus ( Hymenoptera: Aphe-
linidae) ． 2． A new subgenus from India with comments on Mesidia
and Mesidiopsis［J］． Oriental Insects，1990，24: 253 － 257．
［12］ Hayat M． Aphelinidae of India ( Hymenoptera: Chalcidoidea) : a
taxonomic revision［M］． Hayat M． Memoirs on Entomology，Inter-
national，Vol 13． Florida，Associated Publisher，1998．
［13］ Hayat M，Fatima K，Girault A A． Taxonomic studies on Aphelinus
( Hymenoptera: Aphelinidae ) : 1． The Australian species de-
scribed by A． A． Girault［J］． Oriental Insects，1990，24: 247 －
252．
［14］ Jasnosh V A． New species of the genus Aphelinus Dalm． ( Hyme-
noptera: Chalcidoidea ) in the fauna of the USSR． ［J］． Ent
Obozr，1963，42( 1) : 178 － 185．
［15］ Jasnosh V A． Fam． Aphelinidae［M］Lehr P A． Key to Insects of
Russian Far East． Vol 4． Part 2． Hymenoptera． Vladivostok: Dal
nauka，1995: 506 － 551．
［16］ Li Chengde，Langor D W． A new species of Aphelinus ( Hymenop-
tera: Aphelinidae) from Northeastern China［J］． The Canadian
Entomologist，1998，130: 799 － 801．
［17］ Li Chengde，Byeon Y W，Choi B R． An aphelinid species，Aph-
elinus asychis Walker ( Hymenoptera: Aphelinidae) New to Korea
［J］． J Asia － Pacific Entomology，2007，10( 1) : 13 － 15．
［18］ Mackauer M． The aphid － attacking genera of Aphelinidae ( Hyme-
noptera) ，including the description of a new genus［J］． The Cana-
dian Entomologist，1972，104: 1771 － 1779．
［19］ Mackauer M，Finlayson T H． The hymenopterous parasites ( Hy-
menoptera: Aphidiidae et Aphelinidae) of the pea aphid in East-
ern North America［J］． The Canadian Entomologist，1967，99
( 10) : 1051 － 1082．
［20］ Nikolskaja M N，Jasnosh V A． Aphelinids of the european part of
the USSR and the Caucasus ( Hymenoptera: Aphelinidae) ［M］．
Moscow and Leningrad，Nauka: Opredelitel Faune SSSR，No． 91，
1966．
［21］ Prinsloo G L，Neser O C． The southern African species of Apheli-
nus Dalman ( Hymenoptera: Aphelinidae ) ，parasitoids of aphids
( Homoptera: Aphidoidea) ［J］． J Afr Zool，1994，108 ( 2 ) : 143 －
162．
［22］ Trjapitzin V A． Keys to the Insects of the european part of USSR，
Volum III，Hymenoptera Part II．［M］． New Delhi: Oxonian Press
Pvt Ltd，1988．
［23］ Walker F． Notes on Chalcidites，and descriptions of various new
species［J］． Ann Mag Nat Hist，1851，7:
210 － 216．
( 上接 107 页)
3 结论
反相高效液相色谱法 ( 色谱柱为 Inertsil ODS － SP ( 5
μm，4． 6 mm × 250 mm，柱号: 9KI92609)，流动相为 V( 甲醇) ∶ V
( 0． 2%醋酸) = 43 ∶ 57，流速 1． 0 mL·min －1，检测波长 350
nm，进样量 10 μL，柱温 30 ℃ ) 操作简便、准确，具有良好的重
复性，可用于细叶杜香中秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷和槲皮
素的质量分数的测定。
表 3 大兴安岭地区不同产地细叶杜香中 4 种活性成分质量分数的
测定结果( n = 3)
产 地
秦皮乙素
质量分
数 /%
RSD /
%
秦皮素
质量分
数 /%
RSD /
%
金丝桃苷
质量分
数 /%
RSD /
%
槲皮素
质量分
数 /%
RSD /
%
西林吉 0． 602 1． 13 0． 091 1． 42 0． 464 0． 74 0． 046 1． 36
呼 中 0． 121 0． 95 0． 010 0． 55 0． 231 0． 81 0． 022 1． 59
松 岭 0． 309 0． 88 0． 047 0． 66 0． 464 1． 71 0． 044 1． 60
塔 河 0． 154 0． 72 0． 023 1． 35 0． 146 0． 32 0． 024 1． 54
图 强 0． 309 1． 58 0． 048 1． 40 0． 373 0． 90 0． 037 0． 83
根 河 0． 403 1． 25 0． 068 1． 87 0． 474 1． 21 0． 048 1． 36
奇 乾 0． 238 1． 42 0． 025 1． 39 0． 385 0． 61 0． 031 1． 75
参 考 文 献
［1］ 聂绍荃，袁晓颖，杨逢建，等． 黑龙江植物资源志［M］． 哈尔滨:
东北林业大学出版社，2003: 536．
［2］ 周以良．中国大兴安岭植被［M］．北京: 科学出版社，1991: 239．
［3］ 科诺瓦洛瓦·奥·阿，雷巴勒科·克·斯． 杜香生物活性物质
［J］．林克勤，译．国土与自然资源研究，1995( 1) : 73 － 76．
［4］ 缪亚东，欧阳臻，袁斌，等．高效液相色谱法测定野马追药材中
槲皮素和山柰素含量［J］．药物研究，2009，18( 10) : 20 － 21．
［5］ 鲁巍巍，吕德国，李志霞，等．绿肉山楂叶中五种黄酮类成分含
量动态变化［J］．植物研究，2009，29( 2) : 248 － 252．
［6］ 孟繁姝，赵春杰，李丹，等． HPLC法同时测定蒲丁合剂中秦皮乙
素和咖啡酸的含量［J］．中国药品标准，2009，10( 1) : 38 － 40．
［7］ 庄晓洪，凌学青． HPLC测定秦皮胶囊的主要成分［J］．华西药学
杂志，2005，20( 4) : 358 － 359．
［8］ 张敏，赵旌旌，武文斌，等．杜香不同提取部位的镇痛抗炎作用
研究［J］．天然产物研究与开发，2010，22( 2) : 326 － 329．
［9］ Gretunikova T，Jrvan K，Orav A，et al． Comparative analysis of
the composition of the essential oil from the shoots，leaves and stems
the wild Ledum palustre L． from Estonia［J］． Procedia Chemistry，
2010，2( 1) : 168 － 173．
［10］ Malawska M，Wilkomirski B． The use of dutch myrthe ( Ledum
palustre) and pine needles ( Pinus sylvestris) to detect the polycy-
clic aromatic hydrocarbons ( PAHs) at regional scale［J］． Toxicol-
ogy Letters，2003，144( 1) : 175．
［11］ Narimanov A A． The reproductive capacity of male mice protected
against the superlethal action of gamma radiation by the administra-
tion of a mixture of Archangelica officinalis and Ledum palustre ex-
tracts［J］． Radeobiologiia，1992，32( 2) : 271 － 275．
［12］ 郁韵秋，龚珈，李端，等．高效液相色谱法同时测定罗布麻浸膏
粉中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量［J］． 复旦学报: 自然
科学版，2007，46( 3) : 417 － 420．
［13］ 刘丽梅，李曼玲，冯伟红，等． HPLC 法测定秦皮中香豆素类成
分的含量［J］．中草药，2004，35( 7) : 819 － 822．
［14］ 彭炳先，陈受惠． HPLC 测定不同产地莪术中 3 种有效成分的
含量［J］．中国药学杂志，2009，44( 22) : 1742 － 1744．
911第 3 期 耿淑影等: 蚜小蜂属 1 中国新记录种记述( 膜翅目: 蚜小蜂科)