全 文 ：地黄水提液对 u型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及 µ¨¶¬¶·¬±
基因 ° 和蛋白表达的影响
吕秀芳 o孟庆宇 o郭新民 3
k牡丹江医学院 生物化学与分子生物学教研室 o黑龙江 牡丹江 txzsttl
≈摘要 目的 }探讨中药地黄水提液对 u型糖尿病大鼠糖脂代谢和 µ¨¶¬¶·¬±基因表达的影响 ∀方法 }• ¬¶·¤µ大
鼠喂以高热量饲料加链脲佐菌素建立 u型糖尿病大鼠模型 o随机分为正常对照组 !u型糖尿病模型组 !地黄高 !中 !
低剂量治疗组 ∀ {周后 o以 ×2°≤ 法检测大网膜脂肪组织 µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 的表达 o以 ≥⁄≥2°∞检测其蛋白的
表达 ∀同时观察空腹血糖 !空腹血胰岛素 !血脂的含量和胰岛素抵抗指数的变化 o研究不同剂量地黄水提液对上述
各指标的影响 ∀结果 }地黄治疗组大鼠较模型组大鼠 µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 和蛋白表达显著降低 kΠ s1sxl∀各治疗
组 ƒ°oƒ≥o×o⁄o≤的含量及 显著降低 kΠ s1sxlo而 ⁄则显著升高 kΠ s1sxl∀结论 }地黄水提液通
过抑制脂肪组织抵抗素基因的表达 o降低血胰岛素抵抗水平 !改善脂代谢紊乱 o从而降低 u型糖尿病大鼠血糖 ∀
≈关键词 地黄水提液 ~u型糖尿病 ~胰岛素抵抗 ~µ¨¶¬¶·¬±基因 ~基因表达
≈中图分类号 u{xqx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlus2ut{u2sv
≈收稿日期 ussy2tu2us
≈通讯作者 3 郭新民 oר¯}kswxvlyx{utxy2vv{uo∞2°¤¬¯}
u型糖尿病 ku2§¬¤¥¨ ·¨¶°¨¯ ¬¯·∏¶ou2⁄ l是一种发
病机制比较复杂的异质性代谢紊乱性疾病 ∀胰岛素
抵抗 k¬±¶∏¯¬± µ¨¶¬¶·¤±¦¨l贯穿于 u2⁄ 的整个发生发
展过程中 ∀地黄为玄参科植物地黄 Ρεηµ αννια γλυτι2
νοσα的块根 o具有降低高血糖 !增强机体免疫力功能 !
保护肾脏等作用 ≈t o是治疗 u2⁄ 的一味良药 o但地
黄降低高血糖的分子生物学机制国内外尚无人报道 ∀
地黄水提液制作简便 o药物成分损失较少 o且为地黄
的主要有效部位 o本实验观察地黄水提液对 u2⁄ 模
型大鼠的血糖 !血脂代谢紊乱及胰岛素抵抗的作用 ~
µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 及蛋白表达的影响 o以探讨其降
低 u2⁄大鼠血糖的分子生物学机制 o为进一步开发
治疗 u2⁄的中药提供一定的理论依据 ∀
1 材料与方法
1q1 动物
健康纯系 • ¬¶·¤µ大鼠 o体重 uus ∗ uxs ªo雌雄各
半 o购于佳木斯大学实验动物中心 ∀
1q2 仪器和试剂
德国 ∞³³¨ ±§²µ©xvvt型 °≤ 扩增仪 ~∂ ° ⁄≥
p{sss型凝胶成像分析系统 ~北京六一电泳仪 !电
泳槽 ∀怀生地购于牡丹江天合大药房 o黑龙江省普
通高校医学与药物开发重点实验室鉴定 o符合药典
规定标准 ∀链脲佐菌素 k¶·µ¨³·²½²·²¦¬±o≥×o≥¬ª°¤
公司 l~胰岛素放免分析试剂盒 k中国人民解放军总
医院科技开发中心放免研究所 l~ ×2°≤ 试剂
k×≠
≤²qo·§ql~引物核苷酸片段 k上海生物
工程技术服务有限公司合成 l∀
1q3 地黄水提液 k ∞l的制备
称取生地黄 vx ªo加水 xss °o浸泡 vs °¬±o大
火煮沸后文火煲煎 t «o纱布过滤取药汁 o重复 u次 o
将 v次煎得药汁混合 ∀ {s ε 水浴分别浓缩为含生
药 s1tos1uos1w ª# °pt的 xs °药液 ∀高压灭
菌 o冷藏备用 ∀
1q4 动物模型的建立及分组给药
随机选取健康 • ¬¶·¤µ大鼠 {s只 o雌雄各半 o其
中 tw只作为正常对照组 klo喂以基础饲料 ∀余 yy
只喂以高热量饮食 o持续喂养 {周后 o尾静脉注射
≥×注射剂 ux °ª# ®ªpt ∀正常组注射相同体积的
柠檬酸钠 2柠檬酸缓冲液 ∀随机选取造模成功大鼠
xy只分为糖尿病模型组 k
l~中药高剂量组 k≤ou1w
ª# ®ªpt # §pt l~中剂量组 k⁄ot1u ª# ®ªpt # §pt l~
低剂量治疗组 k∞os1y ª# ®ªpt # §pt l∀治疗组以地
黄水提液灌胃 o其余两组蒸馏水灌胃 o用药 {周 ∀
1q5 标本收集与检测
各组大鼠乙醚麻醉 o眼内眦静脉从采血 ~腹正中
#u{tu#
第 vu卷第 us期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
切口 o迅速剖开腹腔 o取大网膜脂肪组织 ∀
邻甲苯胺法测定空腹血糖 ~放免法测定空腹血
胰岛素 ~酶法测定甘油三酯 !高密度脂蛋白 !低密度
脂蛋白 !胆固醇的含量 ∀计算胰岛素抵抗指数 ≈u
kƒ° ≅ ƒ≥l ruu1x∀
脂肪组织 µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 及蛋白表达检测 }
×µ¬½²¯法提取大网膜脂肪组织总 o逆转录为 ¦⁄2
∀ °≤ 反应体系 xs Λo条件为 }|x ε 预变性 x
°¬±o|w ε 变性 t °¬±oxw ε 退火 ws ¶ozu ε 延伸 ws
¶o循环 vv次 ozu ε 终末延伸 ts °¬±∀以 Β2¤¦·¬±作
为内参照 ∀ Β2¤¦·¬±ku{s ¥³l上游引物 }xχ2××≤2
≤×≤×≤≤×≤≤×2vχ~下游引物 }xχ2×≤≤×≤ 2
≤××××2vχ∀ ¶¨¬¶·¬±kv|y ¥³l上游引
物 }xχ2≤×≤≤××××××2vχ~下游引
物 } xχ2≤××≤×≤≤×××≤ 2vχ∀ 将
°≤ 产物经 t1xh琼脂糖凝胶电泳 o凝胶成像系统
分析 ∀蛋白表达检测 }取脂肪组织加入预冷的组织
裂解液 o匀浆后移入 t1x °∞°管中 ∀以 vss • o
w ¶≅ twk间隔时间 l ≅ y次 !碎裂细胞 ot{ sss µ#
°¬±pt离心 o吸取上清 ∀以 txh ≥⁄≥2°∞电泳 o结
果用凝胶成像系统分析 ∀
1q6 统计学分析
实验数据以 cξ ? σ表示 o并采用 ≥°≥≥ tt1x统计
软件 o多组均数统计学处理采用 ≥2´ 检验和 ⁄∏±2
± ·¨τ检验验 oΠ s1sx示结果具有统计学意义 ∀
2 结果
2q1 ∞对 u2⁄ 大鼠 ƒ°oƒ≥o×o≤ o⁄o
⁄及 影响
与正常组相比 u型糖尿病模型组大鼠血清
ƒ°oƒ≥o×o≤ o⁄的含量增加 kΠ s1stlo
⁄含量明显降低 kΠ s1stl~给地黄水提液后
各组 ƒ°oƒ≥o×o 显著下降 kΠ s1stlo≤ o
⁄kΠ s1sxlo⁄含量显著升高 kΠ s1sxl
k表 tl∀
表 t 对大鼠 ƒ°oƒ≥o×o≤ o⁄o⁄的影响 (cξ ? σ, ν twl
组别 剂量 rª# ®ªpt ƒ° r°°²¯# pt ƒ≥r°# pt × r°°²¯# pt
正常 p w1|y ? t1tu uu1z{ ? tx1|z s1x{ ? s1uw
模型 p tw1{| ? {1uwtl wu1{v ? ty1|xtl u1yu ? s1zytl
∞ u1w y1tx ? v1s|vl ut1zz ? tt1swvl t1x{ ? s1vuvl
t1u z1|t ? v1syvl uw1yw ? {1|zvl t1yt ? s1u{vl
s1y |1tw ? x1{|ul ux1s{ ? tu1u{vl t1yy ? s1yxvl
组别 剂量 rª# ®ªpt ≤ r°°²¯# pt ⁄r°°²¯# pt ⁄r°°²¯# pt
正常 p t1yy ? s1v{ u1s| ? s1tw t1{s ? s1vx t1wy ? s1|z
模型 p v1{x ? s1xttl w1su ? s1uxtl t1tt ? s1txtl v1ty ? t1sytl
∞ u1w u1vt ? s1ywul v1xz ? s1t{ul t1vy ? s1t|ul t1{s ? s1{tvl
t1u u1w| ? s1uyul v1x| ? s1usul t1u| ? s1v{ul t1{v ? s1w{vl
s1y u1z| ? s1vsul v1yu ? s1tzul t1ut ? s1t|ul t1|t ? s1yuvl
注 }与正常组比较 tl Π s1st~与模型组比较 ul Π s1sxo vl oΠ s1st
2q2 ∞对 u2⁄ 大鼠大网膜脂肪组织 µ¨¶¬¶·¬±
基因 ° 及蛋白表达
扩增后得到 Β2¤¦·¬± u{s ¥³和 µ¨¶¬¶·¬± v|y ¥³u
个片段 ∀图像分析结果显示 o与正常组相比 u型糖
尿病模型组大鼠大网膜脂肪组织 µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 2
及蛋白表达量显著增高 kΠ s1stl~给 后
能降低的 µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 及蛋白表达 kΠ
s1sxlo其中高剂量组最明显 o但是 v组间无显著性
差异 k图 toul∀
3 讨论
usst年 ≥·¨³³¤±等 ≈v 发现抵抗素使糖尿病和肥
胖症研究领域取得突破性进展 ∀越来越多的实验证
明它是联系肥胖与 u2⁄ 的中间环节 o与胰岛素抵
#v{tu#
第 vu卷第 us期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
抗密切相关 ∀本实验采用小剂量链脲佐菌素尾静脉
注射加高脂高糖喂养的方法复制大鼠 u2⁄ 模型 o
此模型具有高血糖 !高胰岛素 !高血脂及胰岛素抵抗
的特点 o与人类的特点相似 ≈w ∀实验结果显示地黄
水提液各剂量组均能降低 u2⁄ 模型大鼠 ƒ°o
ƒ≥kΠ s1stl∀说明地黄水提液能直接降低 u2
⁄大鼠血糖 !增加胰岛素敏感性 ∀
高 ×和游离脂肪酸血症是导致 的重要因
素 ≈xoy ∀本实验结果表明 o地黄水提液能降低 u2⁄
大鼠高脂血症和胰岛素抵抗指数 ∀说明地黄水提液
能够改善脂代谢紊乱及 ∀
抵抗素可以促进前脂肪细胞的分化 o增加小鼠
肝糖异生 o并与血胰岛素 !血糖和血脂水平呈负相
关 ≈zo{ ∀本实验结果表明 o地黄水提液能降低 u2⁄
大鼠大网膜脂肪组织 µ¨¶¬¶·¬±基因 ° 和蛋白表
达 ∀说明地黄水提液通过抑制脂肪组织抵抗素基因
的表达 o降低胰岛素抵抗水平 o从而降低 u型糖尿病
大鼠血糖和改善体内脂代谢紊乱 o达到治疗糖尿病
的目的 ∀但地黄水提液降糖的其他机制有待于进一
步探索和研究 ∀
≈参考文献
≈t 楼之岑 o秦 波 q常用中药材品种整理和质量研究 ≈ q北京 }
北京医科大学 q中国协和医科大学联合出版社 ot||x}{v|q
≈u ¤·«¨ º¶⁄ o ²¶®¨ µ°o ∏§¨ ±¶®¬ ≥o ·¨¤¯q ²° ²¨¶·¤¶¬¶
°²§¨ ¯¤¶¶¨¶¶° ±¨·} ¬±¶∏¯¬± µ¨¶¬¶·¤±¦¨ ¤±§ ¥¨ ·¤2¦¨¯¯ ©∏±¦·¬²± ©µ²°
©¤¶·¬±ª³¯¤¶°¤ª¯∏¦²¶¨ ¤±§¬±¶∏¯¬± ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶¬±°¤±≈ q ⁄¬¤2
¥¨ ·²¯ ª¯¬¤o t|{xou{}wtuwt|q
≈v ≥·¨³³¤± ≤ o
¤¬¯¨ ¼ ≥ ×o
«¤·≥o ·¨¤¯q ׫¨ «²µ°²±¨ µ¨¶¬¶·¬±
¬¯±®¶ ²¥¨ ¶¬·¼ ·² §¬¤¥¨ ·¨¶≈ q ¤·∏µ¨o ussto ws| k y{t{ l}
vszuvtuq
≈w 张芳林 o李 果 qu型糖尿病大鼠模型的建立及其糖代谢特征
分析 ≈ q中国实验动物学报 oussuotsktl}tyq
≈x
²§¨ ± q ²¯¨²©©¤·¼ ¤¦¬§¬± ·«¨ ³¤·«²ª¨ ± ¶¨¬¶²©¬±¶∏¯¬± µ¨¶¬¶¤±¦¨
¤±§⁄⁄ ≈ q ⁄¬¤¥¨ ·¨¶o t||zowyktl}vq
≈y ¨¨ ≠ o ¬µ²¶¨ o «± §¨¤ o ·¨¤tq Β2¦¨¯¯ ¬¯³²·²¬¬¦¬·¼ ¬± ·«¨
³¤·«²ª¨ ± ¶¨¯¶²© ±²±2¬±¶∏¯¬±2§¨ ³¨ ±§¨ ±·§¬¤¥¨ ·¨¶°§¯¬·∏¶²© ²¥¨ ¶¨
µ¤·¶} ¬°³¤¬µ° ±¨·¬± ¤§¬³²¦¼·¨ Β2¦¨¯¯ µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¶≈ q °µ²¦¤·¯
¦¤§≥¦¬≥o t||wo|tkuvl}ts{z{q
≈z ²±ª o ¬≠ o ∏² ÷ o ·¨¤tq ¶¨¬¶·¬± ³µ²°²·¨¶v×v2t ³µ¨¤§¬2
³²¦¼·¨ §¬©©¨µ¨±·¬¤¬²±≈ q ∞∏µ∞±§²¦µ¬±²¯ usswo x¯s}{{xq
≈{ ¤¤¯¤ • o ±¬≠ o °¤·¨¯ o ·¨¤tq ª¨∏¯¤·¬²± ²©µ¨¶¬¶·¬± ¬¨2
³µ¨¶¶¬²± ¤±§¦¬µ¦∏¯¤·¬±ª¯¨ √¨¯¶¬± ²¥¨ ¶¬·¼o §¬¤¥¨ ·¨¶¤±§©¤¶·¬±ª≈ q
⁄¬¤¥¨ ·¨¶o usswoxv}tyztq
Εφφεχτ οφ Ρεηµ αννια γλυτινοσα ωατερ εξτραχτιον ον ινσυλιν ρεσιστανχε ανδ
γενε εξπρεσσιον οφ ρεσιστιν ιν τψπε u διαβετεσ µ ελλιτυσ ρατσ
∂ ÷¬∏2©¤±ªo ∞ ±¬±ª2¼∏o ÷¬±2°¬±
(∆επαρτµ εντ οφ Βιοχηεµ ιστρψ ανδ ΜολεχυλαρΒιολογψ, Μυδανϕιανγ ΜεδιχαλΧολλεγε,
Μυδανϕιανγ Ηειλονγϕιανγ Προϖινχε, Μυδανϕιανγ txzstt, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨¦·²©Ρεηµ αννια γλυτινοσα º¤·¨µ¨ ¬·µ¤¦·¬²± k l ²± ¤§¬³²¶¨ ° ·¨¤¥²¯¬¦§¬¶²µ§¨ µ
¤±§ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©µ¨¶¬¶·¬± ¬± ·¼³¨ u §¬¤¥¨ ·¨¶°¨¯ ¬¯·∏¶µ¤·¶q Μετηοδ : ׫¨ º¬¶·¤µµ¤·¶°²§¨ ¯²©u2⁄ º µ¨¨ ¬±§∏¦¨§¥¼ «¬ª«¦¤¯²µ¬¨
©¨ §¨¬±ª¤±§¶°¤¯¯§²¶¨ ¬±¨¦·¬²± ²©≥×q ¤·¶º µ¨¨ µ¤±§²° ¼¯ §¬√¬§¨ §¬±·²§¬¤¥¨ ·¬¦°²§¨ ¯ªµ²∏³o §¬¤¥¨ ·¬¦°²§¨ ¯·µ¨¤·¨§º¬·« ku1w
ª# ®ªpt # §pt lo kt1u ª# ®ªpt # §pt lo ks1y ª# ®ªpt # §pt l ¤±§±²µ°¤¯ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³q ׫¨ ¯¨ √¨¯¶²©ƒ°o ƒ≥o ×o
⁄o ⁄o ≤ ¤±§ º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§o ¤±§·«¨ ° ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©µ¨¶¬¶·¬± º¤¶§¨ ·¨µ°¬± §¨ ¥¼ ×2°≤ o ·«¨ ³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²±
° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ≥⁄≥2°⁄ ¤··«¨ ±¨§²©{ º¨¨ ®¶q Ρ εσυλτ: ׫¨ ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©µ¨¶¬¶·¬± ¬± ªµ²∏³º µ¨¨ ²¯º µ¨·«¤± ·«¤·²©§¬¤¥¨ ·¬¦
°²§¨ ¯kΠ s1stlq ׫¨ ¯¨ √¨¯¶²©ƒ°o ƒ≥o ×o ⁄o ≤ o ¬± ªµ²∏³º µ¨¨ ²¯º µ¨·«¤± ·«¤·²©§¬¤¥¨ ·¬¦°²§¨ ¯kΠ s1sxlo
¤±§⁄º µ¨¨ «¬ª«¨ µkΠ s1sxlq Χονχλυδε: ¦¤± ¬°³µ²√¨¬±¶∏¯¬± µ¨¶¬¶·¤±¦¨ ¬± ·«¨ ¬¨³¨ µ¬° ±¨·¤¯ u2⁄ µ¤·¶o ¦¤± ©¨©¨¦·¬√¨¯¼ ¤2
°¨¯¬²µ¤·¨ ¤§¬³²¶¨ ° ·¨¤¥²¯¬¦§¬¶·∏µ¥¤±¦¨ ¤±§§¨ ¦¯¬±¨ ¤±§ƒ≥ ¥¼ ¬±¦µ¨¤¶¬±ª·«¨ ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©µ¨¶¬¶·¬±q
[ Κεψ ωορδσ] Ρεηµ αννια γλυτινοσα º¤·¨µ ¬¨·µ¤¦·¬²±~ u °²§¨ t §¬¤¥¨ ·¬¦~ ¬±¶∏¯¬± µ¨¶¬¶·¤±¦¨~ ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²±~ µ¨¶¬¶·¬±
≈责任编辑 刘
#w{tu#
第 vu卷第 us期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz