全 文 ：雄黄纳米微粒对人白血病细胞株 ‹2ys
的诱导分化作用
罗丽云t o张天蓝u 3 o王 夔t
kt1 北京大学 药学院 o北京 tsss{v ~u1 首都医科大学 药学院 o北京 tsssy|l
≈摘要  目的 }探讨雄黄k„¶w≥wl纳米微粒对于人急性早幼粒白血病细胞 ‹2ys的抑制增殖和诱导分化作用 ∀
方法 }采用 ×× 法观察低浓度雄黄对 ‹2ys 细胞增殖的影响 o• µ¬ª«·2Š¬¨°¶¤染色观察细胞形态 o硝基四氮唑蓝
k‘…×l还原反应和流式细胞术抗原检测等鉴定细胞的分化 ∀结果 }细胞经雄黄处理后呈现明显的分化形态 ∀经
s1ux ∗ t1s Λ°²¯#pt雄黄作用 uw «后 o‘…×阳性率升高 ∀用 s1xs Λ°²¯#pt雄黄处理 w{ «o细胞表面分化抗原 ≤⁄tt¥
表达升高 o细胞周期阻滞于 Št期 ∀结论 }低浓度雄黄对 ‹2ys细胞具有诱导分化作用 ∀
≈关键词  雄黄 ~‹2ys ~细胞分化 ~纳米微粒 ~白血病
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussylty2tvwv2sw
≈收稿日期  ussx2tt2ut
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kusuztssx ~usxztssyl
≈通讯作者  3张天蓝 oר¯ }kstsl{u{stxv| oƒ¤¬}kstsl{v|ttxvv o
∞2°¤¬¯}·¯½«¤±ªƒ ¥­°∏q¨§∏q¦±
中药难溶矿物药雄黄的主要成分是四硫化四砷
k„¶w≥wl o有报道采用雄黄治疗急性早幼粒细胞白血
病k„°l可取得良好疗效≈t  o而且其不良反应较小 ∀
前期的研究表明 o雄黄可诱导人急性早幼粒白血病
细胞 ‹2ys凋亡≈u  ∀为进一步探讨雄黄治疗白血病
的作用机制 o对雄黄潜在的诱导分化作用进行了研
究 o从而为雄黄的临床应用提供实验依据 ∀
1 材料和方法
111 细胞系和主要试剂 ‹2ys细胞株k北京大学
基础医学院l o• °Œtyws培养基kŠ¬¥¦²l o胎牛血清
kƒ…o天津财惠l o雄黄k„¶w≥w o纯度 |{ h l !氯化硝基
四氮唑蓝k‘…×l !佛波酯k×°„l !全反式维甲酸k„2
ו „lk≥¬ª°¤l oƒŒ×≤ 标记的抗人 ≤⁄tt¥的单克隆抗
体k…¬²¨ª¨ ±§l o≥∏³¨µ¶¦µ¬³× ¶ • √¨¨ µ¶¨ ×µ¤±¶¦µ¬³·¤¶¨
kŒ±√¬·µ²ª¨±l !×µ¬½²¯ 试剂 !• ‘¤¶¨„ 酶 !引物k赛百盛公
司l o甲基噻唑蓝k×× o沃德赛斯生物公司l o• µ¬ª«·2
Š¬¨°¶¤¶·¤¬±染料k„°µ¨¶¦²l ∀
112 试剂制备及细胞培养 将雄黄用双蒸水水飞
处理 o过 s1{ Λ°膜 ~超声 ts °¬±o再过 s1uu Λ°微孔
滤器除菌 o密封 w ε 保存 ∀取少量制剂 o分别用砷钼
蓝法测定其浓度≈v 和在 ‘¤±² ≥¨ µ¬¨¶粒度测定仪上测
定粒度 ∀使用时用无血清的 • °Œtyws培养基稀释
至适当浓度 ∀ ‹2ys细胞培养于 • °Œtyws培养基
中 o其中含 ts h热灭活胎牛血清 ∀细胞培养箱控制
条件为 vz ε 和 x h ≤’u ∀根据预试验结果设定用药
浓度 o以 t1s Λ°²¯#pt的 „ו „作为阳性对照 ∀
113 细胞增殖抑制率测定 将培养的细胞离心 o
用 ts °°²¯#pt°…≥k³‹ z1wl洗 t次 ∀然后取约 x ≅
tsw#°pt的对数生长期细胞接种于 |y孔板 o每孔
txs ˏ~分别加入 „¶w≥w制剂k临用前超声 x °¬±l o使
各孔中 „¶w≥w的终浓度依次为 s os1ts os1ux os1xs o
s1zx ot1ss ot1ux ot1xs ot1zx ou1ss Λ°²¯ #pt o每组 y
复孔 ∀在 x h ≤’u和 vz ε 培养 uw ow{ ozu «o结束前 w
«加入 ××k终浓度为 s1xs °ª#°ptl ~培养 w «后 o
每孔加 tss ˏ酸化异丙醇 o振荡摇匀 o使甲瓒晶体
溶解 ~置于酶标仪上测定 xzs ±°的吸光度 o以 yvs
±°为参比 ∀
细胞增殖抑制率k h l € kt p给药组吸光度r对照组吸光
度l ≅ tss h
114 形态学观察 ‹2ys细胞经 s1xs Λ°²¯#pt雄
黄处理 v §o取细胞在 t sss µ#°¬±pt离心 x °¬±o弃上
清 ~涂片 o迅速风干 ~加入 • µ¬ª«·2Š¬¨°¶¤染色液染色
ts °¬±o用蒸馏水冲洗 o风干 ~在图像分析系统下观
察 o照相 ∀
115 ‘…×还原能力检测 用终浓度依次为 s os1ux o
s1xs os1zx ot1ss Λ°²¯ #pt的雄黄处理 ‹2ys细胞 o
在 uw ow{ ozu o|y «分别取 t ≅ tsy个细胞 o离心 ~将细
#vwvt#
第 vt卷第 ty期
ussy年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ ty
„∏ª∏¶·oussy
胞用 w °ª#°pt的 ‘…× 溶液 tss ˏ重悬 o混匀 ~加
入 tss Λ×°„ku Λª#°ptl o混匀 o然后将细胞置于
vz ε 水浴中 us °¬±~再加入 uss ˏw ε 的 t °²¯#pt
‹≤¯ 结束反应 ∀离心 o弃上清 o加入 yss ˏ二甲基亚
砜k⁄≥’l溶解甲瓒颗粒 ∀将其混匀后加于 |y孔
板 o在酶标仪上测定其 xys ±°的吸光度≈w  ∀
116 细胞表面抗原 ≤⁄tt¥和 ≤⁄tw的免疫检测
在 y孔板上每孔接种 t ≅ tsw个细胞 o加药组k雄黄终
浓度 s1xs Λ°²¯#ptl和空白组均培养 w{ «∀采用血
细胞计数板计数细胞数 ∀根据细胞数从各组分别取
t ≅ tsy个细胞于灭菌的 x °管中 o离心收集 o弃上
清 ∀用 °…≥洗 u遍后 o在各管中加入 tss ˏ°…≥ ∀
在避光条件下于每管中加入 ƒŒ×≤ 标记的人 ≤⁄tt¥
抗体k≤…• trx抗体l和 ƒŒ×≤ 标记的人 ≤⁄tw抗体
kyt⁄vl各 us ˏo混匀 ∀在 w ε 放置 t «后 o用含 t h
多聚甲醛的 °…≥洗 u遍 ∀加入 xss ˏ含 t h多聚甲
醛的 °…≥固定细胞表面的免疫结合抗体 ∀在流式
细胞仪上单通道检测 ƒŒ×≤ o计数tx sss个细胞的被
标记的荧光强度≈x  ∀
117 细胞周期测定 在 y孔板上每孔接种 t ≅ tsx
个细胞 o在终浓度为 s1ux ∗ t1xs Λ°²¯#pt的 „¶w≥w存
在下分别培养 vy «后 o离心收集细胞 ~用 °…≥洗 t
次 o离心弃上清 ~用 tss ˏ°…≥充分混匀细胞 o加入
t °冰冷的 zs h乙醇 o混匀 ~w ε 冰箱过夜 ∀弃去
乙醇 o用 u °°…≥洗 u次 o用约 s1xs °°…≥混匀细
胞 o加入 tss °ª#pt的 • ‘¤¶¨„酶 o在 vz ε 消化 t «∀
加入 u滴 yx °ª#pt °Œo于 w ε 避光染色 ts °¬±~用
vss目尼龙网过滤后 o在流式细胞仪上检测 o计数
tx sss个细胞 o然后进行细胞周期 ⁄‘„ 含量的分
析≈y  ∀
118 统计学分析 实验所得数据表示为 cξ ? σo加
药组和对照组采用 τ检验k≥°≥≥统计软件l o实验组
的比较采用单因素方差 o每组均重复 v次 ∀
2 结果
211 雄黄对 ‹2ys细胞的增殖抑制作用 ‹2ys细
胞经 s1ts ∗ u1ss Λ°²¯#pt雄黄处理 uw ow{ ozu «后 o
细胞增殖抑制率均随浓度的增加而升高 ~当雄黄浓
度达到或超过 t1xs Λ°²¯#pt后 o细胞增殖抑制率趋
于稳定k图 tl ∀
212 雄黄对 ‹2ys细胞形态的影响 用 s1xs Λ°²¯#
pt雄黄处理 w{ «后 o细胞形态发生了明显变化k图
ul }对照组细胞胞浆少 o核呈圆形或椭圆形 o染色质

图 t 不同浓度雄黄对 ‹2ys细胞的增殖抑制作用
细 o核仁大而明显 o油镜下计数有 |s h以上是早幼
粒细胞 o还有少量是中幼粒细胞 ~而加药组细胞胞体
较小 o核呈肾形 !≥形 !˜形或胞核分叶等 o核染色质
致密 o核仁消失 o呈现晚幼粒 !杆状或分叶核细胞形
态 o占细胞总数的 {w h以上 o其他为少量的中幼粒
和早幼粒细胞 ∀
图 u 用 s1xs Λ°²¯#pt雄黄处理 w{ «后 ‹2ys细胞的
形态变化k瑞氏2姬萨姆染色 o≅ tssl
„1 对照组细胞 ~…1 生分化的细胞
213 雄黄对细胞分化程度的影响 分别用 s1ux ∗
t1s Λ°²¯#pt雄黄处理 uw ow{ ozu o|y «后 o‹2ys细
胞的 ‘…×还原反应阳性率与对照组相比均有显著
差异k Π s1sxl o且不同浓度的 ‘…× 还原反应阳性
率均呈时间依赖性增加 ∀不同浓度相比较 o其中以
s1xs Λ°²¯#pt雄黄诱导分化的作用最强 o在处理时
间大于 w{ «的条件下 o低于或高于 s1xs Λ°²¯#pt均
使诱导分化作用减弱 ∀阳性对照 t1s Λ°²¯#pt的 „2
ו „与 s1ux ∗ t1ss Λ°²¯ #pt雄黄的作用大致相当
k表 tl ∀
表 t 不同雄黄浓度kΛ°²¯#ptl对 ‹2ys细胞 ‘…×
还原能力k Αxysl的影响
组别 诱导时间r«uw w{ zu |y
对照 s qsz| ? s qssu s qs{u ? s qssw s qs{t ? s qssy s qs{w ? s qssx
s qux s qs{| ? s qssz s qtxv ? s qss| s qtxv ? s qstv s qtyu ? s qstt
s qxs s qs{| ? s qssu s qtxw ? s qssw s qtys ? s qss| s qtzz ? s qstv
s qzx s qtsx ? s qssy s qtyw ? s qsts s qtxu ? s qssz s qtx| ? s qstw
t qss s qs{z ? s qssv s qts| ? s qssw s qtuy ? s qssz s qtyz ? s qsuw
„ו „ s qtst ? s qssx s qtsz ? s qssu s qtv| ? s qstt s qusw ? s qsw{
#wwvt#
第 vt卷第 ty期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ ty
„∏ª∏¶·oussy
214 雄黄对 ‹2ys细胞表面分化抗原表达量的影
响 ‹2ys细胞用 s1xs Λ°²¯#pt雄黄处理 zu «后 o
被 ƒŒ×≤标记的抗人 ≤⁄tt¥的单克隆抗体结合的
≤⁄tt¥和被 ƒŒ×≤标记的抗人 ≤⁄tw的单克隆抗体结
合的 ≤⁄tw均增加 ∀将实测结果用 ƒ„≤≥¦¤±软件处
理后可以看出 o≤⁄tt¥表达量由对照组的 s1{y h上
升至加药组的 yz1sy h o≤⁄tw则由对照组的 s1wy h
上升至加药组的 xs1vx h ∀
215 雄黄对 ‹2ys细胞周期的影响 ‹2ys细胞用
低浓度雄黄处理 vy «后均表现 Št期阻滞 ∀未加药
处理的细胞主要分布于 ≥期 o约占 x{ h ~其次分布
在 Št期 o约占 vx h ∀只有少数分布于 Šu2 期 o约占
z h ∀经浓度为 s1ux ∗ t1s Λ°²¯#pt的雄黄处理后 o
Št期均明显升高 ∀其中 s1xs Λ°²¯ #pt雄黄处理组
最明显 oŠt从 vx h上升到 xx h o≥期由 x{ h降低至
vz h ∀其他浓度雄黄处理组的细胞 Št期也都在
w{ h以上 ∀
3 讨论
雄黄及其复方对于白血病的疗效已在多年的临
床应用中得到了肯定≈z  o雄黄对 ‹2ys细胞的诱导
凋亡作用也已经获得了多种实验的证实≈u o{  ∀然
而 o对于雄黄潜在的诱导分化作用尚未见报道 ∀除
了诱导凋亡之外 o诱导分化作用也可能对雄黄的药
效有贡献 ∀与相同剂量的 „¶u ’v相比 o„¶w≥w的毒性
要小得多 ~而诱导分化的剂量又比诱导凋亡的剂量
小得多 ∀从降低副作用的角度看 o在白血病治疗中
实行/雄黄k而不是 „¶u’vl诱导分化k而不是凋亡l0
的策略具有很强的优势 ∀本研究采用细胞形态 !生
化指标 !分子免疫和细胞周期测定等方法 o证实了雄
黄对 ‹2ys细胞的诱导分化作用 ∀
白血病细胞的增殖能力与其分化水平关系密
切 o肿瘤细胞的分化能力越差 o临床观察表明预后也
越差 ∀用低浓度的雄黄处理后 o‹2ys的细胞周期
发生了变化 o多数细胞被阻滞于 Šs2Št期 o≥期细胞
减少 ∀这表明分化诱导剂可阻止细胞进入 ≥期 o减
少细胞增殖 ∀许多研究表明 o细胞生长被抑制和细
胞退出增殖周期是细胞趋向分化的先决条件之
一≈|  ∀雄黄诱导 ‹2ys细胞进一步分化为接近正常
的成熟细胞 o使得大量的肿瘤细胞不再进入细胞增
殖周期 o而是进入/静止0期kŠs2Št期l o执行正常细
胞功能 o从而达到抑制肿瘤细胞增殖 !治疗白血病的
目的 ∀值得注意的是 o雄黄的诱导分化作用在高于
s1xs Λ°²¯#pt后 o随着浓度的增加反而下降 ~这是
由于高浓度雄黄诱导凋亡所致≈u  o表明在该条件下
雄黄对 ‹2ys细胞同时具有诱导分化和凋亡的双重
作用 ∀因此 o将雄黄运用于临床治疗白血病时 o应该
选择一个诱导分化和凋亡的最适浓度 o从而达到毒
性小 !疗效高的最佳效果 ∀
≈参考文献 
≈t  ¬¤ ≠  o¬∏≥ ÷ q ≤¯ ¬±¬¦¤¯ ¬±√¨ ¶·¬ª¤·¬²± ²©µ¨¤¯ª¤µ·²¤¦∏·¨ ³µ²°¼¨ ²¯2
¦¼·¬¦¯¨ ∏®¨ °¬¤q≤«¬± °µ¬°  §¨°«¤µ° oussw ott }tv{ q
≈u  宁 凝 o彭作富 o袁 兰 o等 q雄黄纳米微粒对于白血病细胞
的诱导凋亡及坏死作用 q中国中药杂志 oussx ovskul }tvy q
≈v  ¤µ¦½¨ ±®²  q元素的分光光度测定 q北京 }地质出版社 ot|zy }
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≈w  „±¤ ≤¯ ¤∏§¬¤ Š¤¯√g¤² ƒµ¨¬µ¨ o≤µ¬¶·¬¤±¨ ƒ µ¨±¤±§¨¶§¨ „¶¶¬¤o „¯ ¬¨¤±§¨µ
’·² ƒµ¬¦®o ·¨¤¯ qŒ±©¯∏¨±¦¨ ²©³µ²·¨¬± ³«²¶³«¤·¤¶¨ ¬±«¬¥¬·²µ¶²± ‹2ys
¦¨¯¯¶§¨¤·«¬±§∏¦·¬²± ¥¼ §¨«¼§µ²¦µ²·²±¬±q¨∏® • ¶¨oussv ouz }{uv q
≈x  Ž¤±ª≥ ‘o¨¨  ‹ oŽ¬° Ž¤±o ·¨¤¯ qŒ±§∏¦·¬²± ²©«∏°¤± ³µ²°¼¨ 2
²¯¦¼·¬¦¯¨ ∏®¨ °¬¤ ‹2ys ¦¨¯¯ §¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±¬±·² °²±²¦¼·¨¶¥¼¶¬¯¬¥¬±¬±}
¬±√²¯√¨ °¨ ±·²© ³µ²·¨¬± ®¬±¤¶¨ ≤ q …¬²¦«¨ ° °«¤µ°¤¦²¯ o usst o yt }
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≈y  …µ²º± Š o⁄µ¤¼¶²±  × o⁄∏µ«¤°o ·¨¤¯ q‹2ys ¦¨¯¯¶«¤¯·¨§¬± Št ²µ
≥ ³«¤¶¨ §¬©©¨µ¨±·¬¤·¨ ±²µ°¤¯ ¼¯ q∞¬³ ≤¨¯¯ • ¶¨oussu ou{t }u{ q
≈z  潘炳力 o徐凌云 o杨祥良 q雄黄抗肿瘤作用研究进展 q中药材 o
ussw ouzkvl }uuy q
≈{  肖延风 o刘 雅 o刘陕西 o等 q雄黄对急性白血病细胞株存活
蛋白k¶∏µ√¬√¬±l基因表达的影响及其意义 q中国实验血液学杂
志 oussx otvkvl }v{y q
≈|  ≥·∏§¬±¶®¬Š ° o ‹¤µµ¬¶²± ∞q ⁄¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±2µ¨ ¤¯·¨§¦«¤±ª¨¶¬± ·«¨
¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨·µ¤√¨ µ¶¨ qŒ±·• √¨ ≤¼·²¯ ot||| ot{| }t q
∆ιφφερεντιατιον οφ ΗΛ2ys χελλσινδυχεδ βψ ρεαλγαρ νανο2παρτιχλεσ
˜’ ¬2¼∏±t o‹„‘Š ׬¤±2¯ ¤±u o • „‘Š Ž∏¬t
(t1 Πεκινγ Υνιϖερσιτψ Σχηοολ οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsss{v , Χηινα ;
u1 Σχηοολ οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Χαπιταλ Υνιϖερσιτψ οφ Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsssy| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±¬±«¬¥¬·¬²± ¤±§·«¨ §¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²± ©¨©¨¦·¶²©µ¨¤¯ª¤µk„¶w≥wl ±¤±²2³¤µ·¬¦¯ ¶¨²± «∏2
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第 vt卷第 ty期
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°¤± ¤¦∏·¨ °¼¨ ²¯¬§¯¨ ∏®¨ °¬¤¦¨¯¯ ¬¯±¨ ‹2ys q Μετηοδ : ≤¨¯¯√¬¤¥¬¯¬·¼ º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ×× ¤±§°Œ2¶·¤¬±¨ §¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨¤¶¶¤¼¶q׫¨ µ¨¤¯ª¤µ¬±2
§∏¦¨§°²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤±ª¨¶²± ¦¨¯¯¶º µ¨¨ ¬¨¤°¬±¨ §¤©·¨µ• µ¬ª«·2Š¬¨°¶¤¶·¤¬±¬±ªq׫¨ ¦¨¯¯ §¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²± º¤¶ √¨¤¯∏¤·¨§º¬·«‘…× ¤±§¶³¨¦¬©¬¦
¦¨¯¯ ¶∏µ©¤¦¨ ¤±·¬ª¨ ± k≤⁄tt¥¤±§≤⁄twl ¬¨³µ¨¶¶¬²±¤¶¶¤¼¶qΡεσυλτ : ‹2ys ¦¨¯¯¶ ¬¨«¬¥¬·¨§²¥√¬²∏¶°²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ ©¨ ¤·∏µ¨¶²©§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±¤©·¨µ
·«¨ µ¨¤¯ª¤µ·µ¨¤·° ±¨·q„ uw «¬±¦∏¥¤·¬²± ²©·«¨ ¦¨¯¯¶º¬·«s1ux2t1s Λ°²¯#pt µ¨¤¯ª¤µ¦¤∏¶¨§¤ªµ¨¤·¬±¦µ¨¤¶¨ ¬± ‘…× µ¨§∏¦·¬²±¤¥¬¯¬·¼q׫¨ ¬¨2
³µ¨¶¶¬²±¶²© ≤⁄tt¥¤±§≤⁄tw º µ¨¨ ¤∏ª° ±¨·¨§¬± ¦¨¯¯¶·µ¨¤·¨§º¬·«s1xs Λ°²¯#pt µ¨¤¯ª¤µ©²µw{ «o¤±§¦¨¯¯ ¦¼¦¯ ¶¨º µ¨¨ ¤µµ¨¶·¨§¬± Št ³«¤¶¨ q
Χονχλυσιον : ²º §²¶¨ µ¨¤¯ª¤µ¬±§∏¦¨¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±¬± «∏°¤± ¤¦∏·¨ °¼¨ ²¯¬§¯¨ ∏®¨ °¬¤¦¨¯¯ ¬¯±¨ ‹2ys q
[ Κεψ ωορδσ] µ¨¤¯ª¤µ~ ‹2ys ~¦¨¯¯ §¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±~±¤±²³¤µ·¬¦¯ ¶¨~¯¨ ∏®¨ °¬¤ ≈责任编辑 刘  
≈收稿日期  ussx2tu2ty
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kusvvtsus ~uststsstl
≈通讯作者  3杨晓达 o ר¯ }kstsl{u{stxv| o ∞2°¤¬¯}¬¼¤±ªƒ ¥­2
°∏q¨§∏q¦±
报告基因方法监测重金属汞及其化合物的早期毒性
余占江t o杨 秦t o杨晓达t ou 3 o王 夔t ou
kt1 北京大学 药学院 o北京 tsss{v ~u1 北京大学 天然药物和仿生药物国家重点实验室 o北京 tsss{vl
≈摘要  目的 }基于热休克信号响应和分泌型碱性磷酸酶k≥∞„°l报告基因 o建立 ‹≥∞2≥∞„°2‹ ¨¤细胞模型 o预
测重金属k汞及其化合物l的早期毒性 ∀方法 }将 ³‹≥∞2≥∞„°质粒转染到人子宫颈癌 ‹ ¨¤细胞中 o建立瞬时 ‹≥∞2
≥∞„°响应模型 ∀热休克kwu ε ot «l或重金属化合物k≤§≤¯ u ox Λ°²¯#pt ow «l处理后 o在完全 ⁄∞ 培养基中恢复
w{ «后 o检测细胞上清液中的分泌型碱性磷酸酶的含量k表示该状态下细胞中的热休克蛋白表达量l o同时用 ××
方法检测对应浓度下的细胞活性 o以验证模型的有效性和重复性 ∀并用亚致死浓度k由 ××实验确定l的无机和矿
物汞k‹ª≤¯ u o‹ª≥和朱砂l和柳硫汞钠处理细胞 o检测诱导的细胞热休克响应 ∀结果 }热休克和 ≤§≤¯ u作用 ‹≥∞2≥∞„°2
‹ ¨¤细胞模型后 o细胞上清液中的分泌型碱性磷酸酶的含量显著升高 ~热休克蛋白表达早于 ≤§un对细胞活性的降
低 ∀w种汞化合物在亚致死浓度均诱导细胞内热休克蛋白的变化 o但 w种化合物的作用时间和浓度效应不同 o显示
不同类型的汞化合物早期毒性存在差异 ∀结论 }‹≥∞2≥∞„°2‹ ¨¤细胞模型可有效检测重金属诱导的热休克应激作
用 o并具有良好的重复性 o可应用于重金属有关的早期毒性预测或药物毒性评估 ∀
≈关键词  热休克蛋白 ~‹ ¨¤细胞 ~重金属 ~报告基因
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussylty2tvwy2sw
由于汞及其化合物k如朱砂l在中药以及复方的
广泛使用 o其毒性一直是关注的热点 ∀热休克蛋白 o
在细胞活性改变前对外界刺激做出反应 o尤其对活
性氧和重金属具有高度敏感性≈t  ∀它作为重金属的
早期毒性标志 o已经在环境监测中广泛应用≈u  ∀
热休克蛋白的应激性表达在转录水平的调节有
赖于 ‹≥° 启动子区内热休克元件k«¨¤·¶«²¦® ¨¯ 2¨
°¨ ±·o‹≥∞l ∀ ‹≥∞ 是具有 us 个核苷酸保守序列
k≤‘‘Š„„‘‘××≤‘‘Šo‘为 w种核苷酸中的任一种l o
将其和分泌型碱性磷酸酶k≥∞„°l报告基因连接可
以构建对热休克应激响应的报告基因质粒≈v ow  ∀
≥∞„°作为一种能自动分泌到细胞外的报告基因 o因
其无需破坏细胞即可动态检测的特性而备受青
睐≈x  ∀本研究旨在建立依据 ≥∞„°报告基因动态监
视细胞内热休克蛋白的新方法 o以建立对重金属和
中药矿物药的早期毒性进行预测的方法 ∀
1 材料和试剂
人子宫颈癌 ‹ ¨¤细胞株k北京大学医学部免疫
学系l ~w2甲基偶氮唑蓝k××l o⁄∞ 培养基和胎牛
血清kƒ…≥lkŠ¬¥¦²公司l ~Λ2高精氨酸和对硝基苯磷
酸k³‘°°lk≥¬ª°¤公司l ~¬³²©¨¦·¤°¬±¨ usss转染试剂
kŒ±√¬·µ²ª¨±公司l ~³‹≥∞2≥∞„°质粒k≤¯ ²±·¨¦«公司l ~
…¤°‹ ´ o…ª¯ ´限制性内切酶kפ®¤¼¤公司l ~ts|
感受态菌和小量质粒提取试剂盒k北京鼎国生物技
术有限公司l ~‹ª≥ksxs|st o贵州同仁化学试剂厂l ~
朱砂ksxsysz o贵州同仁化学试剂厂l ~其他试剂均为
进口或国产分析纯 ∀
#ywvt#
第 vt卷第 ty期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ ty
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