全 文 ：缓冲液 ｐＨ７０。通过实验验证得蛋白质含量为
３０１８ｍｇ·ｇ－１，提取工艺合理可行。
４ 讨论
桑叶凝集素是一类结构各异的非酶非免疫来源
的能够与糖进行专一性可逆结合的蛋白或糖蛋白。
本研究采用考马斯亮蓝法测定桑叶凝集素含量，通
过蛋白质加样回收率实验得ＲＳＤ为２５３％，说明此
种方法来测定合理可行，准确度较高。由桑叶浸提
液中蛋白质含量与凝血效价的显著线性关系可知，
用蛋白质含量来代替桑叶凝集素的含量是合理的。
由于ＴＢＳ的ｐＨ随温度变化较大，所以本研究
选择 ＰＢＳ作为提取缓冲液。通过单因素及正交试
验得出了桑叶凝集素的最佳提取条件，即料液比为
１∶６０，ＮａＣｌ浓度为０ｍｏｌ·Ｌ－１，时间为２０ｈ，提取
缓冲液ｐＨ值为７０，这与单因素试验中得出的结
果不完全一致，因为单因素试验均只考虑了其中的
１个因素，当多个因素共同作用的时候会稍有差
别。凝集效价的检测方法允许有１～２孔的误差［１］，
所以在表示凝集效价的时候有１～２孔变化异常也
是正常的。
［参考文献］
［１］ 孙 册．凝集素［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８１：２．
［２］ 赵寅生．凝集素生物学功能及应用［Ｊ］．安徽农业大学学报，
２００１，２８（４）：４４５．
［３］ 朱 月．凝集素的作用与应用［Ｊ］．水产科学，２００５，２４（１２）：
４８．
［４］ 高 莹，瞿礼嘉，陈章良．植物凝集素的分子生物学研究［Ｊ］．
生物技术通报，２０００（５）：１８．
［５］ 黄燮才．常用中草药识别与应用［Ｍ］．北京：化学工业出版
社，２００３：５２６．
［６］ 李丹彤，崔铁军，宋玉娟，等．角叉菜凝集素的分离纯化及其
性质［Ｊ］．中国水产科学，２０００，７（３）：８０．
［７］ 吕淑霞．基础生物化学实验指导［Ｍ］．北京：中国农业出版
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［８］ 查 果，曾群辉，索朗斯珠，等．山茱萸凝集素的测定及其提
取方法的比较［Ｊ］．中国兽药杂志，２００４，３８（８）：１７．
［９］ 周 彬，杨文革，陆修涛，等．槲寄生凝集素粗品提取工艺研
究［Ｊ］．中成药，２００７，２９（５）：７６２．
［１０］ 张 力．ＳＰＳＳ１３０在生物统计中的应用［Ｍ］．厦门：厦门大
学出版社，２００６：７２．
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００８０５２９
［基金项目］ 国家“十一五”科技攻关项目（２００６ＢＡＩＯ９Ｂ００６０２）
［通讯作者］ 丁安伟，Ｔｅｌ：１３９５１９１６４３５，Ｅｍａｉｌ：ａｗｄｉｎｇ１０５＠
１６３．ｃｏｍ
［作者简介］ 和颖颖，硕士，主要从事中药炮制工艺及质量标
准研究，Ｔｅｌ：１５９５１８９１２６０，Ｅｍａｉｌ：ｈｅｙｙ８３＠１６３．ｃｏｍ；
正交法优选白茅根饮片炮切制的最佳工艺
和颖颖，焦 坤，丁安伟，张 丽，陈佩东
（南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室，江苏 南京 ２１００４６）
白茅根为禾本科植物白茅 Ｉｍｐｅｒａｔａｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ
Ｂｅａｕｖ．ｖａｒ．ｍａｊｏｒ（Ｎｅｅｓ）Ｃ．Ｅ．Ｈｕｂｂ．的干燥根茎，
味甘，性寒，具有凉血止血，清热利尿的功效，为《中国
药典》所收载。其主要成分为三萜、内酯、甾醇和有机
酸类，其中绿原酸的含量较高，又具有明显的止血作
用。目前对白茅根的研究多集中在化学成分及药理
作用方面，缺乏对其工艺的规范，故作者采用正交优
选法对白茅根饮片的炮制工艺进行了研究，以期筛选
出白茅根饮片的最佳炮制工艺。含水量是饮片的重
要质量指标；白茅根中所含的绿原酸含量较高，具有
止血等广泛的生理活性［１］，符合白茅根饮片的临床应
用，同时白茅根饮片临床上常用水煎服治疗各种出血
等症状，因此选择绿原酸含量、水分及水溶性浸出物
作为指标，优选白茅根饮片的最佳炮制工艺。
１ 仪器与材料
ＤＨＧ－９１４０Ａ电热恒温鼓风干燥箱（上海医用
恒温设备厂），ＫＱ－２５０Ｅ型医用超声波清洗器（功
率５００Ｗ，频率４０ＫＨｚ），ＦＷ１００型高速万能粉碎机
（天津泰斯特仪器厂），ＦＡ－１００４电子分析天平（上
海天平仪器厂），Ｗａｔｅｒｓ５１５型 ＨＰＬＣ，ＢＷＴ５５０型石
英亚沸高纯水提纯器（江苏金坛高教仪器厂），Ｃ１４
－１０型剁刀式切药机（天津市中药机械厂）。
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第３３卷第２１期
２００８年１１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２１
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００８
白茅根药材产地安徽，经中药鉴定教研室吴启
南教授鉴定；绿原酸对照品购自中国药品生物制品
检定所，批号１１０７５３２００４１３；甲醇为色谱纯，水为重
蒸水，其余试剂为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 试验设计
白茅根炮制工艺中的影响因素有水处理方式、
干燥温度与干燥时间等。考虑到２００５年版药典在
描述白茅根生品炮制时应“洗净，微润，切断，干燥，
除去碎屑”［１］，以加水量，浸润时间，干燥温度，干燥
时间作为因素，对各个因素相应安排了３个水平进
行实验，选用 Ｌ９（３
４）正交表安排实验，因素水平安
排见表１。取白茅根药材２ｋｇ，根据最常用的切段
规则软化后切制成０５ｃｍ左右小段。称取９份５０
ｇ，０５ｃｍ左右的小段按照正交试验安排进行，共制
成饮片９份白茅根样品，样品无重叠的平铺于托盘
中干燥。各样品性状为长约０５ｃｍ不规则小段，外
部黄白色。
表１ 因素水平
水平
加水量
／ｇ·ｇ－１
浸润时间
／ｈ
干燥温度
／℃
干燥时间
／ｈ
１ １０ １ ４０ １
２ １５ ２ ５０ ２
３ ２０ ２ ６０ ２
２．２ 水溶性浸出物测定
照《中国药典》２００５年版一部附录ⅩＡ操作，取
供试品２ｇ，精密称定，置２５０ｍＬ锥形瓶中，精密加
水７５ｍＬ，密塞，称定质量。静置１ｈ后，连接回流冷
凝装置，加热至沸腾，并保持微沸１ｈ，放冷后，取下，
称重。用水补足减失的质量，摇匀，过滤。
２．３ 绿原酸含量测定
２．３．１ 色谱条件 ＫｒｏｍｏｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ）；流动相甲醇００５％醋酸（１４∶８６）；检测波
长３２６ｎｍ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３０℃。
２．３．２ 供试品溶液的制备 取样品粗粉０５ｇ（过６０
目筛），精密称定，置１００ｍＬ锥形瓶中，精密加入５０％
甲醇２５ｍＬ，称定，超声（５００／４０ｋＨｚ）提取４５ｍｉｎ，放
冷，用５０％甲醇补足损失的质量，滤过即得［２］。
２．３．３ 线性关系的考察 取绿原酸对照品１０ｍｇ，
精密称定，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，得０９９４
０ｇ·Ｌ－１的溶液作为对照品储备液，精密量取５ｍＬ
稀释至５０ｍＬ。再分别量取１，２，３，４，５ｍＬ至１０ｍＬ
量瓶中，分别精密吸取２０μＬ进样高效液相色谱仪中
进行测定，以绿原酸的浓度为横坐标，以峰面积Ｙ为
纵坐标，绘制标准曲线，回归方程得 Ｙ＝６００４０４１９Ｘ
－８３１１９５，ｒ＝０９９９８（ｎ＝５），结果表明绿原酸在
０００９９４～００４９７ｇ·Ｌ－１线性关系良好。
２．３．４ 精密度实验 取３号对照品溶液２０μＬ，重
复进样６次，测得绿原酸峰面积的 ＲＳＤ为０９１％，
表明本方法精密度良好。
２．３．５ 重复性试验 取７号样品０５ｇ精密称定，共
６份，按供试品方法制备，进样２０μＬ，测得绿原酸峰
面积的ＲＳＤ为０７４％，表明本方法的重复性良好。
２．３．６ 稳定性试验 取７号供试品溶液，分别于
０，２，４，８，１２，２４ｈ进样２０μＬ测定。测得绿原酸峰
面积的ＲＳＤ为０８０％，结果表明供试品溶液在２４ｈ
内稳定。
２．３．７ 加样回收率试验 取７号药材粉末６份，每
份约０５ｇ，精密称定，各加入０４９７０ｇ·Ｌ－１的标
准液１ｍＬ，按照３．２．３项下操作，配制成６份加样
的供试品溶液，在上述色谱条件进样分析，计算回收
率，结果见表２。
表２ 绿原酸加样回收率
称样量
／ｇ
样品中含量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０２５０２ ０．５１９０ １０２０ １００８
０２５０５ ０．５１９５ １０２８ １０２３
０２４９５ ０．５１７５ １００１ ９７２８
９９２８ １９５
０２５０１ ０．５１８５ １００８ ９８４９
０２４９６ ０．５１７５ １００３ ９７６９
０２４９９ ０．５１８５ １０１１ ９９０９
注：加标量均为０４９７０ｍｇ
２．３．８ 样品含量测定 精密吸取供试品溶液２０μＬ
进样，按上述色谱条件测定，含量测定结果见表３。
表３ 正交试验结果
Ｎｏ． 水浸物／％ 绿原酸／ｍｇ·ｇ－１ 综合评分
１ ３３０５ ２１１ ９８８８
２ ３６４３ ２００ ９９４６
３ ３７１８ １９０ ９９５３
４ ３４５８ １７０ ９８８５
５ ３５１２ ２３２ ９９４６
６ ３５６５ １５７ ９８９６
７ ３８６０ ２０８ ９９９６
８ ３７２６ １８５ ９９５１
９ ３８６７ １２５ ９９３１
３ 数据处理与分析
采用多指标实验公式评分法处理数据。在加权
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评分时，把绿原酸的最高含量值定为１００分，把水
溶性浸出物的最高值定为１００分，将各值换算成相
应的分数。水溶性浸出物加权占０２，由于绿原酸
在药材中含量较高同时又有明显的止血作用，所以
设定绿原酸含量加权占０８，以此分数为基础，进行
正交实验数据处理及方差分析。综合各因素和水平
的结果，见列表４。
表４ 结果的方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 Ｆ Ｐ
Ａ ８９０７ ２ ４４５４ １５０３ ＞００５
Ｂ ３３１８９ ２ １６５９５ ５６００ ＜００５
Ｃ ４６４２５ ２ ２３２１２ ７８３３ ＜００５
Ｄ（误差） ５９３ ２ ２９７
注：Ｆ００５（２，２）＝１９，Ｆ００１（２，２）＝９９
方差分析：由表５可以看出，因为 Ｄ项 Ｒ值最
小所以以Ｄ因素为误差项，Ｂ和 Ｃ２种因素对白茅
根饮片炮制影响最显著。
直观分析：由表４的极差（Ｒ）可以看出：在该正
交试验设定的因素、水平条件下，对综合评分影响大
小的因素进行分析，依次为 Ｃ＞Ｂ＞Ａ，即 Ｃ因素影
响最大，其次为 Ｂ，再次为 Ａ，Ｄ因素影响最小；同时
ⅠＡ＞ⅡＡ＞ⅢＡ，ⅡＢ＞ⅠＢ＞ⅢＢ，ⅢＣ＞ⅠＣ＞ⅡＣ，ⅡＤ
＞ⅢＤ＞ⅠＤ。因此，对综合质量评分而言，最佳炮制
工艺技术条件为Ａ３Ｂ１Ｃ３Ｄ２。
由上述实验结果可以得到，白茅根最佳炮制工
艺条件为Ａ３Ｂ１Ｃ３Ｄ２。即加入２倍量的水，润１ｈ，６０
℃烘２ｈ。
４ 工艺验证实验
为验证上述最佳工艺条件的科学性、定性和可
重复性，进行了３次验证实验，进一步考察正交实验
结果的准确性和可靠性。
取白茅根原药材３份，每份０５ｋｇ，迅速洗净，
喷洒２倍量的水，然后浸润１ｈ，置６０℃烘制２ｈ，取
出，晾凉，分别测定各指标成分的含量，结果水浸出
物质量分数分别为３８６２％，３７４３％，３７６５％。绿
原酸分别为２１１％，２０５％，２０９％。结果表明，验
证实验样品中各指标含量与正交实验优选结果相
近，说明优选的工艺条件稳定可行。
５ 讨论
本研究以药材软化时的加水量、浸润时间、干燥
温度、干燥时间为考察因素，以绿原酸含量为主要指
标同时结合水溶性浸出物，采用正交设计法，优选白
茅根的软化切制工艺，经过研究确定白茅根最佳炮
制工艺条件为加入２倍量的水，润１ｈ，６０℃烘２ｈ。
试验证明方法是稳定可行的，能适应于饮片的工业
化生产和规范化生产。
本试验采用多指标综合评判优选白茅根饮片的
软化切制工艺，符合中药综合作用的用药特点，可为
饮片规范化研究提供借鉴。
［参考文献］
［１］ 冯丽华，江 丰，汪 玢．ＨＰＬＣ法测定白茅根中绿原酸的含量
［Ｊ］．江西化工，２００５（４）：１０４．
［责任编辑 鲍 雷］
本刊征订启事
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１９５５年７月，是创刊最早、发行量最大的中药学术刊物。《中国中药杂志》全面反映我国中医药科研最高学术水平，主要报道
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述、研究论文、研究报告、临床、学术探讨、药事管理、经验交流、信息等栏目。
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