全 文 ：大蒜新素抑制人巨细胞病毒
即刻早期抗原表达的实验研究
舒赛男 o方 峰 o董永绥
k华中科技大学同济医学院附属同济医院 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }通过研究大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期抗原k ‹≤  ∂ Œ∞„l的抑制作用 o探讨大蒜新素体
外对 ‹≤  ∂ 感染的预防 !阻断和治疗效应及其机制 ∀方法 }采用细胞形态观察和  × × 比色法检测大蒜新素的细
胞毒性 ∀以流式细胞术定量检测和比较大蒜新素不同剂量 o不同处理时间kuw ow{ ozu o|y «l以及病毒感染不同阶
段k病毒吸附前 !吸附时和吸附后l应用大蒜新素时 ‹≤  ∂ Œ∞„表达水平变化 ∀结果 }人胚肺成纤维细胞对大蒜新
素的最大耐受浓度为 | qys °ª#p t ∀病毒吸附后持续用药可显著抑制 ‹≤  ∂ Œ∞„ 的表达 o用药 zu « ‹≤  ∂ Œ∞„
抑制率达 {| qv h ~大蒜新素预处理细胞后感染病毒 o‹≤  ∂ Œ∞„抑制率为 u{ qy h ~药物与病毒吸附同时应用 o即刻
早期抗原kŒ∞„l抑制率仅为 ts qv h ∀结论 }大蒜新素体外持续用药可显著抑制 ‹≤  ∂ Œ∞„ 的表达 ~其预防作用较
弱 ~即时抑制效应不明显 ∀大蒜新素对 Œ∞„表达的明显抑制可能是大蒜新素抗 ‹≤  ∂ 效应的主要作用机制之一 ∀
≈关键词  大蒜新素 ~人巨细胞病毒 ~即刻早期抗原 ~流式细胞术
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlts2s|yz2sw
人巨细胞病毒 k ‹∏°¤± ≤¼·²° ª¨¤ ²¯√¬µ∏¶o
‹≤  ∂l属疱疹病毒科 o是一种有包膜的线状双链
⁄‘„病毒 ∀ ‹≤  ∂ 感染极为普遍 o虽然一般表现为
无症状感染 o但在胎儿 !婴幼儿 !艾滋病 !器官移植和
恶性肿瘤等免疫低下或抑制人群 o可导致严重疾病
甚至死亡 ∀目前抗 ‹≤  ∂ 感染的一线药物仍为更
昔洛韦 o但因其骨髓毒性和日益增多的耐药性使临
床应用受到很大限制 ∀国内外大量的临床和实验研
究表明 o传统食物大蒜中含有多种有药用价值的化
学成分 o具有抗微生物 !抗肿瘤 !抗血小板聚集 !降血
脂 !降血糖 !抗氧化 !增强免疫力等功能≈t  ∀大蒜新
素是大蒜的主要有效成分之一 o其化学名称为二烯
丙基三硫 o化学式 ≤y ‹ts≥v o化学性质较稳定 o可从大
蒜鳞茎中提取或人工合成 ∀前人已证明它可杀灭流
感病毒和单纯疱疹病毒≈u  o对巨细胞病毒有抑制作
用≈v  ∀在此我们采用一种快速 !准确 !重复性好的方
法 ) ) ) 流式细胞术 o对不同剂量和不同阶段应用大
蒜新素时 ‹≤  ∂ Œ∞„的表达进行定量分析 o以证实
大蒜新素抗 ‹≤  ∂ 效应并探讨其作用机制 ∀
≈收稿日期  ussu2s{2us
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kvsszs|u{l
≈通讯作者  舒赛男 ר¯ }kstsly{vtwwuu2x|{s ∞2°¤¬¯}¶«∏2
¶¤¬±¤±ƒ tyv q¦²° q
1 材料和方法
1 q1 材料及来源
大蒜素注射液k大蒜新素含量 tx ª#ptl o由上
海禾丰制药有限公司生产 o批号 sssvsu ou °r支 ∀
‹≤  ∂ „⁄ty|标准毒株由湖北省预防医学科学院
病毒所提供 ~自制人胚肺成纤维细胞k‹∞l o第 v代
用于本试验 ∀小鼠抗人 ‹≤  ∂ Œ∞„ 单抗 o由美国
˜„…儿童医院 …µ¬··教授惠赠 ∀ ƒŒ× ≤ 标记山羊抗
小鼠 ŒªŠ o购自北京中山生物技术有限公司 ∀
1 q2 大蒜新素细胞毒性的测定
常规培养 ‹∞细胞于 |y孔培养板中 o置 x h
≤ ’u ovz ε 培养箱中生长成单层 ∀根据药物毒性实
验原则≈w  o加入含不同浓度大蒜新素维持液 o每 v §
换含药维持液 t次 o镜下跟踪观察细胞形态 ∀z §后
去掉培养液 o用  × × 法检查细胞存活状况 o计算细
胞存活率 }
细胞存活率k h l € 实验孔吸收度值 r 对照孔吸收度值
≅ tss h
找出 ‹∞细胞对药物的最大耐受浓度
k × ≤l o该浓度以下k包括该浓度l细胞存活率为
tss h ∀
1 q3 病毒感染性的测定
用 |y孔板培养 ‹∞细胞 o连续 ts倍递次稀释
#zy|#
第 u{卷第 ts期
ussv年 ts月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ ts
’¦·²¥¨µoussv
ktsp t ∗ tsp ttl病毒悬液吸附细胞 u «o每稀释度 w
复孔 o并设正常细胞对照 o每日观察细胞病变效应
k≤°∞l o规定无 ≤°∞为 / p 0 ~[ ux h ≤°∞为 / n 0 ~
uy h ∗ xs h ≤°∞为/ 6 0 ~xt h ∗ zx h ≤°∞为/ 7 0 ~
zy h ∗ tss h ≤°∞为/ 8 0 ∀待 ≤°∞不再继续k约 u
周后l判定结果 o计算 ‹≤  ∂ „⁄ty|标准毒株的半
数组织细胞感染量k × ≤Œ⁄xsl o以 tss × ≤Œ⁄xsrs qt
°作为标准病毒吸附量 ∀
1 q4 流式细胞术检测 ‹≤  ∂ Œ∞„
1 q4 q1 药物量效关系分析 ‹∞细胞 t ≅ tsxr°
接种于 y孔板 o以标准病毒吸附量的 ‹≤  ∂ 悬液接
种于 ‹∞ovz ε 吸附 u «∀弃病毒 o换含药维持液 o
药物按  × ≤ 浓度等倍稀释 o分别为 | qy ow q{ ou qw o
t qu os qy °ª#pt o每种浓度 v复孔 o另设不加药物
的病毒感染细胞对照 v孔 ∀uw «后 o将细胞制成单
个细胞悬液 ∀依次加入一抗和二抗孵育后 o用流式
细胞仪kƒ„≤≥·¤µo美国 …⁄公司 o激发波长 w{{ ±° o
发射波长 xux ±° o激光能量 tss ° • l测定荧光强
度 o按下列公式计算不同剂量大蒜新素的 ‹≤  ∂
Œ∞„ 抑制率 }
抑制率k h l € k感染细胞对照组荧光强度 p实验组荧光
强度lr 感染细胞对照组荧光强度 ≅ tss h
1 q4 q2 药物预防 !阻断和治疗效应及药物时效关系
分析 ≠药物预防组 }用含 | qys °ª#p t大蒜新素
维持液预处理细胞kv复孔luw «o弃去含药液 o吸附
病毒 u «后换用不含药物维持液继续培养 uw «∀ 
药物阻断组 }与病毒接种同时加入含 | qys °ª#p t
大蒜新素维持液kv复孔l o吸附 u «后 o换用不含药
物维持液继续培养 uw «∀ ≈ 药物治疗组 }病毒吸附
u «后换用含 | qys °ª#p t大蒜新素维持液 o并持续
应用 o设药物作用时相为 uw ow{ ozu o|y «o每组 v复
孔 ∀ …感染细胞对照组 }与上组同期接种病毒 tu
孔 o于 uw ow{ ozu o|y «各收集 v孔 ∀制备单个细胞
悬液 oƒ≤  检测 ‹≤  ∂ Œ∞„ o其抑制率计算同前 ∀
1 q5 统计学处理
≥„≥统计软件处理 o多组均数两两比较采用 θ
检验 o两组均数比较采用 τ检验 o用相关系数检测指
标间的相关性 ∀
2 结果
2 q1  × × 比色法检测
结果显示 o‹∞细胞对大蒜新素的最大耐受浓
度为 | qys °ª#p t ∀加药后k药物浓度 | qys °ª#
ptl o光镜下跟踪观察显示 o大蒜新素对 ‹∞细胞
刺激性较大 ∀细胞在加药即刻发生胞体圆缩 !细胞
间隙增宽 !细胞轮廓增强 ouw «后细胞形态基本恢复
k见图 tl ∀
图 t 加药前后 ‹∞细胞的形态变化k ≅ tssl
„ q加药前细胞 …q加药即刻细胞 ≤ q加药 uw «后细胞
2 q2 ‹≤  ∂ „⁄ty|株感染性测定
≤°∞达 xs h k 6 l以上者计数为病变孔 ∀xs h
k6 l以下者计数为非病变孔 ∀结果显示 o‹≤  ∂
„⁄ty| 的 × ≤Œ⁄xs介于 tsp x ∗ tsp y o根据 • ¨¨ §2
 ∏¨ ±¦«法 }
‹≤  ∂ „⁄ty|的 × ≤Œ⁄xs €高于 xs h感染率稀释倍数的
负对数 n距离比例 ~其中距离比例 € k高于 xs h感染百分率
p xs h lrk高于 xs h感染百分率 p低于 xs h感染百分率l
计算得 × ≤Œ⁄xs为 x qx o即当 ‹≤  ∂ „⁄ty|浓度
为 tsp x qx时 o可使 xs h细胞发生病变 ∀
2 q3 流式细胞术检测不同处理情况下 ‹≤  ∂ Œ∞„
表达水平
2 q3 q1 不同剂量大蒜新素对感染细胞 ‹≤  ∂ Œ∞„
表达的影响 从表 t 和图 u 可见 o大蒜新素对
‹≤  ∂ Œ∞„ 的表达有抑制作用 ~在  × ≤ 范围内 o
‹≤  ∂ Œ∞„抑制率与药物剂量呈明显正相关关系
kρ€ s q|yl ∀
2 q3 q2 大蒜新素预防性 !即时性和治疗性给药以及
#{y|#
第 u{卷第 ts期
ussv年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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药物不同处理时间与 ‹≤  ∂ Œ∞„ 表达水平的关系
k见表 u ovl ∀
表 t 不同剂量大蒜新素对
‹≤  ∂ Œ∞„表达的影响k ν € v , ξ ? σl
药物剂量r°ª#p t 荧光强度 抑制率r h
| qy tw quw ? s qtx z{ qu
w q{ u{ quu ? t qt| xy q{
u qw ws qxz ? s qtz vz q|
t qu xv qxt ? s qvw t{ qt
s qy x| qyx ? s qtv { qz
感染细胞对照 yx qvv ? s quu
图 u 大蒜新素抗 ‹≤  ∂ 效应的剂量反应曲线
表 u 大蒜新素预防性 !即时性和治疗性给药对
‹≤  ∂ Œ∞„表达的影响k ν € v , ξ ? σl
组别 荧光强度 抑制率r h
药物预防组 wy qyw ? s qyztl u{ qy
药物阻断组 x{ qys ? s qvttl ts qv
药物治疗组 tw quw ? s qtxtl z{ qu
感染细胞对照组 yx qvv ? s quu
注 }与感染细胞对照组比 tl Π s qst
表 v 大蒜新素不同处理时间对
‹≤  ∂ Œ∞„表达的影响k ν € v , ξ ? σl
时间
r«
荧光强度
药物处理组 感染对照组
≤  ∂ Œ∞„
抑制率r h
uw tw quw ? s qtxtl yx qvv ? s quu z{ qu
w{ ty qzw ? s qvstl y{ q|s ? s quv zx qz
zu vw qsu ? s qustl vtz q|s ? s qy| {| qv
|y ut qwz ? s qtvtl uuy qsx ? s qxy |s qx
注 }与各感染对照组比 tl Π s qst
3 讨论
本研究显示 o大蒜新素有显著的抗 ≤  ∂ 效应 ∀
抑制效应与药物剂量正相关 ∀在  × ≤ 范围内 o加大
药物剂量可增强药物抑制 ‹≤  ∂ Œ∞„表达的效应 ∀
从大蒜新素抗 ‹≤  ∂ 的时效关系来看 o当药物
处理 uw «后 o大蒜新素对 Œ∞„ 表达的抑制率已高达
z{ qu h ~在感染后 zu «o‹≤  ∂ Œ∞„ 表达的高峰期 o
即子代病毒增殖的高峰期≈x  o抑制效应达峰值 ∀结
果表明 o大蒜新素对 ‹≤  ∂ Œ∞„的表达抑制效应在
病毒增殖的早期就已发生 ∀
观察大蒜新素与病毒同时吸附的阻断效应 o发
现药物对 ‹≤  ∂ Œ∞„表达的抑制率很低 o仅为
ts qv h o与药物治疗效应相比 o仅为治疗抑制率的
trz弱 ∀
将大蒜新素预防性处理细胞 o再感染病毒 o可使
u{ qy h的 ‹≤  ∂ Œ∞„ 表达受抑制 ∀此时 Œ∞„ 表达
水平明显低于未处理感染细胞 o提示大蒜新素有一
定的预防作用 o但预防效应明显低于药物的治疗效
应 ∀有学者证明 o‹≤  ∂ 的吸附和 ´型主要组织相
容性抗原有关≈y oz  ∀大蒜新素的预防效应是否是通
过影响  ‹≤ ´类抗原的表达 o还是影响细胞表面病
毒受体的构象 !表面电荷等来减少病毒的吸附量而
起作用 o有待进一步深入研究 ∀
众所周知 o‹≤  ∂ 的极早期k¬°° §¨¬¤·¨2 ¤¨µ¯¼ o
Œ∞l !早期k ¤¨µ¯¼ o∞l和晚期k¯ ¤·¨ ol基因为连锁调控 o
呈时序级联地相继表达 ∀Œ∞基因编码的 Œ∞„ 为调
节自身基因启动子和相继表达的 ∞基因和 基因启
动子所必需的调节蛋白 o在病毒复制增殖中起重要
的调控作用 ∀大蒜新素能明显抑制 Œ∞„的表达可能
是大蒜新素抗 ≤  ∂ 效应的主要作用机制之一 ∀
本研究还显示 o大蒜新素对细胞有直接刺激作
用 o但在 uw «后又能基本恢复 ∀大蒜新素是一种挥
发性油剂 o其对细胞的直接刺激作用可能与其理化
特性有关 ∀而在整体水平 o大蒜新素毒性较低 ∀陆
道培等≈{ 临床研究表明 o大蒜提取物的长期应用对
心 !肝 !肾 !肺等脏器均无明显毒副作用 ∀这亦说明
药物在体内的代谢和作用过程远比体外直接作用于
细胞要复杂得多 ∀故在体外进行体内状况模拟k如
药物加血清孵育后使用l以降低大蒜新素直接细胞
毒性的尝试值得研究 ∀
≈参考文献 
≈t  „ °¤ª¤¶¨ ‹ o ° ·¨¨¶¦« … o ¤·¶∏∏µ¤ ‹ o ·¨¤¯ qŒ±·¤®¨ ²© Š¤µ¯¬¦
¤±§Œ·¶…¬²¤¦·¬√¨ ≤²°³²±¨ ±·¶q ‘∏·µousst otvtkv¶l }|xx¶q
≈u  ׶¤¬≠ o≤²¯¨o⁄¤√¬¶∞o ·¨¤¯ q „±·¬√¬µ¤¯ °µ²³¨µ·¬¨¶²© Š¤µ2
¬¯¦} Ιν ϖιτρο ∞©©¨ ¦·¶²± Œ±©¯∏¨ ±½¤ …o ‹ µ¨³¨ ¶ ≥¬°³¯ ¬¨ ¤±§ ≤²¬2
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≈v  郭乃榄 o陆道培 o周桂珍 o等 q大蒜提取物体外抑制巨细胞病毒
的研究 q中华实验和临床病毒学杂志 ot||t oxktl }zt q
≈w  徐叔云 o卞如濂 o陈 修 q药理实验方法学 q北京 }人民卫生出版
社 ot||t qust q
≈x  ƒ¯ ¨°¬±ª·² ∞ Žq ‹ µ¨³¨ ¶ ∂¬µ∏¶¼·¬¦• ³¨¯¬¦¤·¬²± ¤±§·«¨ ≤¨¯¯ ≤¼2
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第 u{卷第 ts期
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Αν Εξπεριµενταλ Στυδψ ον τηε Εφφεχτ οφ Αλλιτριδιν ον
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ³µ²³«¼¯¤¦·¬¦o¥¯²¦®¬±ª¤±§·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ ©¨©¨ ¦·¶²© „¯¯¬·µ¬§¬± ²±¬±«¬¥¬·¬±ª ‹≤  ∂ ³µ²¯¬©2
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√¬µ¤¯ ¬±²¦∏¯¤·¬²±¬± º«¬¦«¤¶¨µ¬¤¯ §²¶¨¶k°¤¬¬°∏° ·²¯ µ¨¤±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±o × ≤ ©²µ«∏°¤± ¨°¥¼² ∏¯±ª¦¨¯¯¶o‹∞l ²© „¯¯¬·µ¬§¬± º¤¶
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º¤¶| qys °ª#p t q„¯¯¬·µ¬§¬± µ¨ °¤µ®¤¥¯¼¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ‹≤  ∂ Œ∞„ ιν ϖιτρο q• ¬·«¬±  × ≤ o·«¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼µ¤·¨ «¤§¤¶¬ª2
±¬©¬¦¤·¬√¨¦²µµ¨ ¤¯·¬²± º¬·«¬·¶§²¶¤ª¨ kρ€ s q|yl q„··«¨ ·¬°¨²©Œ∞„ «¬ª«¨¶· ¬¨³µ¨¶¶¬²± kzu «¤©·¨µ¬¬±©¨ ¦·¬²±l o¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·º¤¶
·«¨ ªµ¨¤·¨¶·k¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨ }{| qv h l q• ¬·«³µ¨·µ¨¤·° ±¨·²© „¯¯¬·µ¬§¬±o·«¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨ º¤¶u{ qy h q • «¨ ± „¯¯¬·µ¬§¬± º¤¶∏¶¨§·²2
ª¨·«¨µº¬·« ‹≤  ∂ ¬±²¦∏¯¤·¬²±oŒ∞„ ¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨ º¤¶²±¯ ¼ ts qv h qΧονχλυσιον : „¯¯¬·µ¬§¬± ¦¤±¬±«¬¥¬·‹≤  ∂ oŒ∞„ ¬¨³µ¨¶¶¬²±¬±
√¬·µ²µ¨ °¤µ®¤¥¯¼ º«¬¦«¬¶³µ²¥¤¥¯¼ ²±¨ ²©·«¨ °¤­²µ° ¦¨«¤±¬¶°¶²© „¯¯¬·µ¬§¬± ¤±·¬2‹≤  ∂ ¤¦·¬√¬·¼ ¥¨¦¤∏¶¨ Œ∞„¶¤µ¨ ·«¨ √ µ¨¼¬°³²µ·¤±·
µ¨ª∏¯¤·²µ¼©¤¦·²µ¶©²µ·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¤¯¯ ‹≤  ∂ ª¨ ±¨ ¶qŒ·¶·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ ©¨©¨ ¦·¬¶·«¨ ¥¨¶·¤··«¨ ³¨ ¤®¶·¤ª¨ ²©Œ∞t ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± kzu
«¤©·¨µ¬±©¨ ¦·¬²±l¥∏·¬·«¤¶ ²¯º ³µ²³«¼¯¤¦·¬¦¤±§ ¬¯··¯¨ ¥¯²¦®¬±ª ©¨©¨ ¦·q
[ Κεψ ωορδσ] ¤¯ ¬¯·µ¬§¬±~«∏°¤± ¦¼·²° ª¨¤¯²√¬µ∏¶~¬°° §¨¬¤§¬¤·¨2 ¤¨µ¯¼ ¤¤±·¬ª¨ ± ~©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼
≈责任编辑 古云霞 
强骨膏治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究
彭 涛t o黄芒莉u o熊 玮u o汪 岚v o杨艳萍v
kt q汉口铁路医院 o湖北 武汉 wvssts ~ u q湖北省药品检验所 o湖北 武汉 wvssss ~
v q华中科技大学附属协和医院 o湖北 武汉 wvsstsl
≈摘要  目的 }探讨中药强骨膏对去卵巢形成的骨质疏松大鼠骨密度 !生物力学及性激素的影响 ∀方法 }通过
切除大鼠卵巢形成骨质疏松模型 o观察强骨膏对骨质疏松大鼠骨密度 !股骨最大载荷等生物力学指标和血清雌二
醇的影响 o并与葡萄糖酸钙及龙牡壮骨冲剂对照 ∀结果 }强骨膏治疗的去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度值 o最大载
荷 !最大应力 !屈服点值及雌二醇均明显高于模型组 ∀结论 }强骨膏能提高去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度 o增强抗
外力冲击的能力 o其作用机理可能与其拟雌激素样作用有关 ∀
≈收稿日期  ussu2ts2us
≈通讯作者  彭 涛 ר¯ }ksuzl{u{ztx{v
#sz|#
第 u{卷第 ts期
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