全 文 ：大蒜新素对 ‹≤  ∂ 主要即刻早期抗原 Œ∞zu和
Œ∞{y在人胚肺成纤维细胞中表达的影响
甄 宏 o方 峰 3 o刘志峰 o聂兴草 o崔 雯 o李 革
k华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 儿科病毒室 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }研究大蒜新素对人巨细胞病毒k‹≤  ∂l即刻早期抗原kŒ∞„¶l在人胚肺成纤维细胞中表达的影
响 ∀方法 }建立 ‹≤  ∂ „⁄ty|毒株k ’Œ为 u1x和 s1uxl感染细胞模型和大蒜新素kŒ≤xs和 ×≤ 浓度l干预模型 ∀用
• ¶¨·¨µ± …¯²·检测药物处理后感染细胞中 ‹≤  ∂ 主要 Œ∞„¶kŒ∞zu和 Œ∞{yl表达强度变化 o并与相应浓度更昔洛韦
kŠ≤∂l的作用效应相比较 ∀结果 }在高  ’Œ和低  ’Œ感染时 o不同浓度大蒜新素均能使 ‹≤  ∂ Œ∞zu和 Œ∞{y表达强
度明显下降 o对 Œ∞{y表达的抑制率为 Œ∞zu的 u倍左右 ∀与 Š≤∂ 相比 o大蒜新素对 Œ∞zu的抑制率低于 Š≤∂ o而对
Œ∞{y的抑制效应高于 Š≤∂ ∀结论 }大蒜新素明显抑制 ‹≤  ∂ Œ∞zu和 Œ∞{y表达 o对 Œ∞{y的抑制尤为显著 o这可能是
大蒜新素抑制 ‹≤  ∂ 增殖的关键作用环节之一 ∀
≈关键词  大蒜新素 ~巨细胞病毒属 ~即刻早期抗原 ~免疫印迹法
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlst2sswz2sv
人巨细胞病毒k‹≤ ∂l感染在世界范围内普遍
存在 o子宫内感染可致流产 !胎儿畸形和神经系统等
多脏器损害 ~婴儿感染易累及肝脏 ~在免疫缺陷个体
则可导致全身播散型感染 o危及生命≈t  ∀目前治疗
手段有限 o亟待开发低毒高效的抗 ‹≤ ∂ 新药 ∀大
蒜新素是大蒜的主要有效成分之一 ∀前人已证明它
对巨细胞病毒有抑制作用≈u ov  ∀本实验采用蛋白印
迹技术观察大蒜新素对不同即刻早期抗原kŒ∞„¶l表
达的影响 o以进一步证实大蒜新素抗 ‹≤ ∂ 效应和
探讨其抗病毒的作用环节 o为丰富中药抗病毒理论
提供实验依据 ∀
1 材料和方法
111 细胞
人胚肺成纤维细胞k‹∞l o第 ts ∗ tx代用于本
实验 ∀
112 病毒
‹≤ ∂ „⁄ty|病毒株 o由中国预防医学科学院
病毒研究所提供 ∀感染复数k°∏¯·¬³¯¼ ²©¬±©¨¦·¬²±o
’Œl的设定 }’Œ计算公式为 }’Œ€病毒感染性滴
度k°ƒ˜#°ptlr细胞计数 o公认 ’Œ t为低感染复
数 ∀本实验采用两种 ’Œo分别为 u1x和 s1ux ∀
113 药物
大蒜素注射液k即大蒜新素 o¤¯ ¬¯·µ¬§¬±l为上海禾
丰制药有限公司产品 ou °r支 !tx ª# pt o批号
stsxst ~更昔洛韦注射液kŠ≤∂l为丽珠集团湖北科
益药业有限公司产品 oxs °ªr支 o批号 sts|uu ∀
114 试剂
⁄∏¥¨¦¦² ∞ ∞¤ª¯¨培养液为 Š¬¥¦²公司产品 ∀
新生小牛血清为浙江三利公司产品 ∀小鼠抗 ‹≤ ∂
Œ∞„¶混合单克隆抗体由美国 ˜„…儿童医院 …µ¬·教
授惠赠 ∀山羊抗人肌动蛋白k¤¦·¬±l多克隆抗体为
≥¤±·¤≤µ∏½产品 ∀碱性磷酸酶标记的马抗小鼠 ŒªŠ
和兔抗山羊 ŒªŠ o购于北京中山生物技术有限公司 ∀
‘…×r …≤Œ°染色试剂盒为华美生物工程公司产品 ∀
115 方法
11511 细胞对大蒜新素最大耐受浓度k×≤l的确
定采用 ××比色法 ∀ ‹∞在 |y孔板培养孔中培养
生长成单层 o换含系列低比稀释浓度大蒜新素的维
持液k含 v h小牛血清的 ⁄∞ 培养液l o每浓度 w
复孔 o另设 w复孔不含药维持液为对照 ∀隔天换含
原浓度药物的维持液 t次 ∀zu «后换以含 s1x ª#
pt四甲基偶氮唑盐k××l的无血清培养液继续培
养 w «o换二甲基亚砜混匀后 o用酶标仪测 xzs ±°吸
光度kΑ值l ∀计算 }细胞存活率k h l €实验孔 Α值
r对照孔 Α值 ≅ tss h ∀得到对细胞存活无影响最
大的大蒜新素浓度为 |1y °ª#pt ∀
11512 大蒜新素和更昔洛韦对 ‹≤ ∂ 的半数抑制
剂量kŒ≤xsl的测定采用蚀斑抑制法 o得到系列等倍稀
zw
第 vs卷第 t期
ussx年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qvs oŒ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼oussx
释浓度药物作用下的蚀斑抑制率 ∀进一步用对数单
位法k…¨ µ®¶²± ²ª¬·法l≈w 求出大蒜新素和更昔洛韦
对 ‹≤ ∂ 的 Œ≤xs分别为 w1u ot1sv °ª#pt ∀
11513 实验分组 ≠ 病毒对照组 }‹≤ ∂ „⁄ty|感
染 ‹∞~ 大蒜新素处理感染细胞组 }分为 ×≤ 大
蒜新素k|1y °ª#ptl和 Œ≤xs大蒜新素kw1u °ª#ptl
处理组 ~≈更昔洛韦处理感染细胞组 }分高剂量更昔
洛韦ku1v °ª#ptl和 Œ≤xskt1sv °ª#ptl处理组≈高
剂量更昔洛韦浓度 € k大蒜新素 ×≤r大蒜新素
Œ≤xsl ≅更昔洛韦 Œ≤xs  ∀各组均分设高 ’Œ感染和
低 ’Œ感染k ’Œ分别为 u1x和 s1uxl亚组 ∀每亚组
设 v瓶细胞 ∀
11514 病毒感染与药物处理 适量 ‹≤ ∂ „⁄ty|
病毒悬液接种于单层 ‹∞o使感染复数达 u1x 或
s1ux ∀病毒吸附 t «后即换各组含药维持液 ∀每天
换液 t次 ∀于感染后 zu «收获细胞 ∀
11515 ≥⁄≥2聚丙烯酰胺凝胶k°„Š∞l电泳和免疫印迹
按分子克隆实验指南k第二版l操作 ∀提取全细胞蛋
白质 o每孔 xs Λª蛋白质上样经 ts h ≥⁄≥2°„Š∞电泳
后 o电转移至硝酸纤维膜上 ∀与小鼠抗 ‹≤∂ Œ∞„¶
抗体和山羊抗人肌动蛋白抗体 w ε 孵育 us «o洗膜后
加入相应碱性磷酸酶标记的二抗 o‘…×r…≤Œ°显色 ∀
116 统计学处理
计算药物Œ≤xs时使用 ≥°≥≥软件进行相关和直线
回归分析 ∀ • ¶¨·¨µ± …¯²·结果经 ≥¬ª°¤¶¦¤± °µ²x1s软件
分析 o测定各条带的积分吸光度 o以人肌动蛋白为内
参照进行蛋白上样量的校正k校正值 Κ€病毒对照组
¤¦·¬±条带的积分吸光度r药物处理组 ¤¦·¬±条带的积
分吸光度l∀其后对Œ∞„¶条带进行半定量分析 o计算
Œ∞„表达抑制率 }抑制率 € t p药物处理组 Œ∞„条带
的积分吸光度r病毒对照组Œ∞„条带的积分吸光度 ≅
Κ∀实验重复 v次 ∀抑制率以 cξ ? σ表示 ∀
2 结果
• ¶¨·¨µ± …¯²·法检测可见 u条 ‹≤ ∂ 特异性条
带 o分子量为 y{ Ž⁄和 {y Ž⁄o分别为 ‹≤ ∂ Œ∞zu和
Œ∞{y条带 ∀药物处理各组的病毒特异条带显色均
较病毒对照组浅 o条带变窄k图 tl ∀积分吸光度分
析后 o显示各药物处理组对 ‹≤ ∂ Œ∞„ 表达均有抑
制作用k表 tl o且抑制率随药物浓度增高而增高 o呈
剂量依赖性 ∀不同浓度大蒜新素对 Œ∞{y表达的抑
制率为对Œ∞zu抑制率的 u倍左右 ∀与 Š≤∂ 比较 o大
蒜新素对 Œ∞zu的抑制率低于 Š≤∂ o而对 Œ∞{y的抑
制率高于 Š≤∂ ∀Œ≤xs大蒜新素处理时 oŒ∞{y抑制率
为 Œ≤xs浓度更昔洛韦的 t1v ∗ t1z倍 o并接近或稍超
过高浓度更昔洛韦的抑制效应 ∀
图 t 各处理对 ‹≤  ∂ 感染 Œ∞zu和 Œ∞{y表达的影响
„1 高  ’Œ感染 ~…1 低  ’Œ感染 ~t1分子量质量 ¤µ®¨µ~
u1 病毒对照 ~v ow1 ×≤和 Œ≤xs大蒜新素处理组 ~
x oy1 高剂量和 Œ≤xs更昔洛韦处理组 ~z1 正常细胞对照
表 t 药物处理对 ‹≤  ∂ 感染 Œ∞„表达的
抑制效应kcξ ? σ, ν € vlk高  ’Œr低  ’Œl
组别
剂量
r°ª#pt
抑制率r h
Œ∞zu条带 Œ∞{y条带
„ |1y wy1st n t1strw{1|y n v1ws z|1xu n w1vzr{z1u| n w1ts
w1u vy1uz n u1x|rv{1ss n v1tu z{1tu n x1uzr{u1tw n u1tz
… u1v yw1ty n z1xsrxx1tu n v1x{ z|1vu n t1z{rzw1xw n v1xy
t1sv wy1tt n y1xyrww1{w n w1wy wx1x{ n z1ssryu1xz n z1sv
注 }„1大蒜新素 ~…1 更昔洛韦
3 讨论
大蒜新素是食物大蒜的主要有效成分之一 o化
学性质较稳定 o其化学名称为二烯丙基三硫化物≈x  ∀
首先由国内学者发现 o大蒜提取物在体外能有效抑
制 ‹≤ ∂ 增殖≈u  ∀本实验室对静脉用大蒜素注射
液即大蒜新素进行了体外研究 o发现其可明显抑制
‹≤ ∂ 实验毒株和临床毒株的增殖和病毒总 Œ∞„¶
的表达k流式细胞术l≈y  ∀本实验用 • ¶¨·¨µ± ¥¯²·法
进一步证实了大蒜新素对 ‹≤ ∂ Œ∞„¶表达有剂量
依从性的抑制效应 o在 ‹≤ ∂ 高  ’Œ和低 ’Œ感染
的情况下均有抑制作用 ∀而且大蒜新素对 Œ∞{y的
作用尤其明显 }不同浓度大蒜新素对 Œ∞{y的抑制效
应约为 Œ∞zu的 u倍 ~与更昔洛韦相比较 o大蒜新素
对 Œ∞{y的抑制强度更高 ∀更昔洛韦主要是通过抑
制 ⁄‘„聚合酶活性和阻止核苷酸链延长 o在 ⁄‘„
复制水平发挥抗病毒作用的 ∀而在 ‹≤ ∂ 的复制
周期中 oŒ∞„¶的表达发生在病毒 ⁄‘„复制之前 ∀两
种药物对 Œ∞{y作用的差异提示大蒜新素的作用环
{w
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节与更昔洛韦抗 ‹≤ ∂ 的机制有不同 o可能涉及
Œ∞{y的表达调控 ∀
人们已经发现 oŒ∞{y单独或与 Œ∞zu协同反式
激活 ‹≤ ∂ 早 !晚期基因启动子 o是启动 ‹≤ ∂ 产
毒复制过程的关键环节 oŒ∞{y是 ‹≤ ∂ 复制必不可
少的调控因子≈z  ~Œ∞„¶可反式作用于细胞基因并影
响宿主细胞生长 o其中 Œ∞{y 起更主要的作用≈{  ~
Œ∞„¶使前炎症细胞因子表达增加 o导致的炎症反应
是 ‹≤ ∂ 致病机制中的重要部分≈z  ∀而作者的研
究发现 o大蒜新素能抑制 Œ∞„¶o对 Œ∞{y的抑制作用
尤其显著 o提示抑制 ‹≤ ∂ Œ∞„¶表达可能是大蒜新
素抑制 ‹≤ ∂ 增殖的关键作用环节之一 ∀大蒜新
素除能直接抑制病毒增殖外 o是否通过抑制 Œ∞„¶o
特别是 Œ∞{y的表达 o可以阻断或减轻病毒感染导致
的细胞周期进程紊乱和炎症损伤则有待深入研究和
证实 ∀基于 ‹≤ ∂ Œ∞„¶在病毒增殖和致病机制中
的重要作用 o国外学者新近提出特异性抑制 Œ∞基因
表达可作为新的 ‹≤ ∂ 疾病治疗策略≈z  ∀从本研
究结果可以推测 o大蒜新素可能在这种新的治疗策
略中占有重要地位 ∀
≈参考文献 
≈t  ∂¤±¦¬®²√¤  o ⁄√²µ¤® °1 ≤¼·²°¨ ª¤¯²√¬µ∏¶¬±©¨¦·¬²± ¬± ¬°°∏±²¦²°³¨ 2
·¨±·¤±§¬°°∏±¨ ¦²°³µ²°¬¶¨§¬±§¬√¬§∏¤¯¶2¤µ¨√¬¨º1 Χυρρ ∆ρυγ Ταργετσ
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≈z  ≥¦«²¯½  o⁄²¨µµ‹  o≤¬±¤·¯1 Œ±«¬¥¬·¬²± ²©¦¼·²°¨ ª¤¯²√¬µ∏¶¬°°¨ §¬2
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¶¬¶1 Προχ Νατλ Αχαδ Σχι ΥΣΑoussu o|| }u{vy1
Εφφεχτσ οφ αλλιτριδιν ον τηε εξπρεσσιον οφ ηυµαν χψτοµεγαλοϖιρυσιµ µεδιατε
εαρλψ αντιγενσ2ΙΕzu ανδ ΙΕ{y ιν ηυµαν εµ βρψονιχ λυνγ χελλσ
‹∞‘‹²±ªoƒ„‘Š ƒ ±¨ªoŒ˜ «¬2©¨ ±ªo‘Œ∞ ÷¬±ª2¦¤²o≤˜Œ • ±¨ oŒ Š¨
( Πεδιατριχ ∆επαρτµεντ , Τονγϕι Ηοσπιταλ, Τονγϕι Μεδιχαλ Χολλεγε , Ηυαζηονγ Υνιϖερσιτψ οφ Σχιενχε ανδ Τεχηνολογψ, Ωυηαν wvssvs , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√¨ ¶·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨¦·²© ¤¯ ¬¯·µ¬§¬±¬±­¨¦·¬²± ²±·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©«∏°¤± ¦¼·²° ª¨¤¯²√¬µ∏¶k‹≤ ∂l ¬°° §¨¬¤·¨2
¤¨µ¯¼ ¤±·¬ª¨±¶kŒ∞„¶¬±¦¯∏§¬±ªŒ∞zu ¤±§Œ∞{yl¬± «∏°¤± °¨¥µ¼²±¬¦¯ ∏±ª¦¨¯¯¶1 Μετηοδ : ‹≤  ∂ „⁄ty| ∂¬µ∏¶¶·µ¤¬±¬±©¨¦·¨§¦¨¯¯ °²§¨¯k’Œ€
u1x ¤±§s1ux oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼l º µ¨¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §o¤±§·«¨ ±·µ¨¤·¨§ º¬·«Œ≤xs ¤±§ ×≤ §²¶¨¶²© ¤¯ ¬¯·µ¬§¬±1 • ¶¨·¨µ± ¥¯²·º¤¶∏¶¨§·² ¤±¤¯¼½¨ ·«¨
¦«¤±ª¨¶²©Œ∞zu ¤±§Œ∞{y ¬¨³µ¨¶¶¬²± ¤©·¨µ·«¨ ·µ¨¤·° ±¨·oª¤±¦¬¦¯²√¬µkŠ≤∂ oŒ≤xs ¤±§u1v ≅ Œ≤xsl·µ¨¤·° ±¨·¤¶¦²±·µ²¯1 Ρεσυλτ : ‘² °¤·¨µº«¤·
®¬±§²© ’Œ º¤¶∏¶¨§o¥²·«Œ∞{y ¤±§Œ∞zu ¤±·¬ª¨ ±¶. ¬¨³µ¨¶¶¬²± º¤¶ ©¨©¨¦·¬√¨¯¼ ¶∏³³µ¨¶¶¨§¥¼ ¤¯ ¬¯·µ¬§¬±·µ¨¤·° ±¨·o¤±§·«¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨ ²©
Œ∞{y º¤¶¤¯°²¶··º¬¦¨ ²©Œ∞zuχ¶1 ≤²°³¤µ¨§ º¬·« Š≤∂ o¤¯ ¬¯·µ¬§¬± «¤§¶·µ²±ª¨µ¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨¦·²± Œ∞{y ¬¨³µ¨¶¶¬±ªo¤¯·«²∏ª«¬·¶ ©¨©¬¦¤¦¼ ²±
Œ∞zu º¤¶º ¤¨®¨µ·«¤± Š≤∂1 Χονχλυσιον : „¯ ¬¯·µ¬§¬±¦²∏¯§¶∏³³µ¨¶¶·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©Œ∞zu ¤±§Œ∞{y o ¶¨³¨ ¦¬¤¯ ¼¯©²µŒ∞{y ¬¨³µ¨¶¶¬±ªo°¤¼¥¨ ¬·
¬¶²µ¨ ²©®¨ ¼ µ²¯¨¬±·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¤¯ ¬¯·µ¬§¬± ¤ª¤¬±¶·‹≤ ∂1
[ Κεψ ωορδσ] ¤¯ ¬¯·µ¬§¬±~¦¼·²° ª¨¤¯²√¬µ∏¶~¬°° §¨¬¤·¨2 ¤¨µ¯¼ ¤±·¬ª¨ ±¶~º ¶¨·¨µ± ¥¯²·
≈责任编辑 方文贤 
封面图片简介
贴梗海棠 Χηαενοµελεσσπεχιοσα k≥º¨¨·l ‘¤®¤¬别名贴梗木瓜 !皱皮木瓜 o为蔷薇科木瓜属落叶灌木 ∀其花先叶开放或同时开
放 o花梗甚短 o贴茎而生 o故名 ∀花瓣绯红色或稀为淡红色 !白色 o花繁鲜艳 o是早春常见的观赏植物 ∀果实为梨果 o球形或卵球
形 o黄色或黄绿色 o干后果皮皱缩 o是为中药皱皮木瓜 ∀贴梗海棠原产我国西南 o现全国各地均有栽培 o以安徽 !浙江 !陕西 !湖
北 !四川 !云南等地为多 o中药以安徽/宣木瓜0质佳而有名 ∀木瓜始载于5名医别录6 o列为中品 ∀皱皮木瓜味酸 o性温 o有平肝
舒筋 !和胃化湿之功效 o用于风湿骨痛 !跌打损伤 !吐泻转筋 !脚气水肿 ∀ k陈虎彪l
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