全 文 ：≈参考文献 
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uxkul }yz q
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#中药现代化 ousss ouktl }u{ q
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Πρελιµιναρψστυδψ ον ηεµατοποιετιχ χονστιτυεντσ οφ ΣΙ2 ΩΥ2ΤΑΝΓ
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(Ινστιτυτε οφ Ραδιατιον Μεδιχινε , Αχαδεµψ οφ Μιλιταρψ Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tss{xs , Χηινα)
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≈责任编辑 方文贤 
骨碎补提取液对实验性牙槽骨吸收疗效的研究
陈莉丽t o唐 琪t o严 杰u 3
kt q浙江大学 医学院 附属第二医院 口腔科 o浙江 杭州 vtsss| ~
u q浙江大学 医学院 病原生物学教研室 o浙江 杭州 vtsssyl
≈摘要  目的 }建立实验性大鼠牙槽骨吸收模型 o了解中药骨碎补k⁄ƒ≥l对大鼠牙槽骨吸收的疗效 ∀方法 }采
用 ≥⁄大鼠局部注射大肠杆菌内毒素k∞2°≥l建立牙槽骨吸收模型 ∀制备 ⁄ƒ≥ 水相提取液 ∀建模大鼠用 ⁄ƒ≥ 水提
液每天灌胃 t 次 o分别用药 ts ous ovs §∀采用血清碱性磷酸酶k„°l活性 !钙离子k≤¤u n l和骨钙素k’≤l浓度测定 o
以及牙体2牙周联合标本骨密度k…⁄l !抗酒石酸酸性磷酸酶kו „°l染色破骨细胞计数 !‹∞染色组织病理学检查 o
评价 ⁄ƒ≥ 水提液治疗实验性牙槽骨吸收的疗效 ∀结果 }与相应阴性对照组比较 o用药 ts §大鼠的实验牙位骨密度
显著升高k Π s qsxl o牙周破骨细胞消失k Π s qsxl o‹²º¶«¬³陷窝明显减少 o大多出现根分叉区有成骨细胞附着的
新生未钙化骨样基质 o且第 us ovs天检查结果与第 ts天相似 ∀用药 ts ∗ vs §大鼠的血清标本中 „°活性 !≤¤un和
’≤ 浓度与对照组比较均无显著性差异k Ё s qsxl ∀结论 }⁄ƒ≥ 水提液对大鼠实验性牙槽骨吸收有明确的疗效 o能
抑制骨质吸收 !促进骨质再生 ∀血清 „°活性 !≤¤un和 ’≤ 浓度不能作为观察动物模型中牙槽骨吸收及再生的有效
指标 ∀
≈收稿日期  ussv2ts2uv
≈基金项目  浙江省科技厅资助项目k||ttsvttxl
≈通讯作者  3严杰 oר¯ }ksxztl{zutzv{x oƒ¤¬}ksxztl{zutzsww o∞2°¤¬¯}¼¤±¦«¨ ±ƒ °¤¬¯q«½q½­q¦±
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第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≈关键词  中药 ~骨碎补 ~大鼠 ~实验性牙槽骨吸收模型 ~疗效
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsy2sxw|2sx
骨代谢是成骨细胞和破骨细胞的动态平衡过
程 o该平衡的失调将引发骨代谢性疾病≈t  ∀牙周炎
是各国人群中最为常见的口腔疾病之一 o我国约有
zs h的人群患有各种牙周炎≈u  ∀牙周炎主要的病理
改变是牙周袋形成和牙槽骨吸收 o导致牙松动甚至
脱落≈u  ∀牙槽骨是人体骨骼中代谢最活跃的组织 ∀
正常生理情况下 o成骨细胞和破骨细胞的平衡维持
着牙槽骨代谢的稳定≈v  ∀牙周感染时细菌内毒素及
多种炎性因子诱导破骨细胞活化 !增殖 o抑制成骨细
胞活性 o牙槽骨代谢平衡失调 o出现病理性牙槽骨吸
收≈w  ∀
至今临床上不能根治牙周炎的主要原因之一是
无效果良好的阻断牙槽骨吸收或促进牙槽骨再生的
药物≈x  ∀骨碎补是中医骨伤科方剂中常用的主药 o
具有促进骨折愈合 !强骨补肾的功效 o但其作用机制
不明≈y  ∀以往的研究结果证实 o较低浓度的骨碎补
水提物具有促成小鼠成骨细胞 ≤v×v2∞t增殖和钙
化的作用 o但不清楚体内是否有类似药效 ∀
本室采用细菌内毒素诱导的 ≥⁄大鼠牙槽骨吸
收模型 o研究了骨碎补水提液对动物牙槽骨吸收的
治疗效果 ∀
1 材料与方法
1 q1 实验动物
选用清洁二级 ts周龄 ≥⁄大鼠 o雄性 o体重kuvs
? us l ª∀
1 q2 试剂和药物
大肠杆菌 ’ttt }…w株脂多糖k∞2°≥l购自 ≥¬ª°¤
公司k批号 2uyvsl ∀粉碎的骨碎补和蒸馏水 tΒts
k ΩΒςl 混合 o沸水回流 x «∀收集提取液 o粗滤后残
渣再次沸水回流 v «∀合并两次提取液 o旋转蒸发浓
缩 o所得骨碎补水提液浓度为 v ®ª#pt ∀
1 q3 实验方法
1 q3 q1 大鼠牙槽骨吸收模型的建立 大鼠乙醚吸
入麻醉后 o左上颌第 t磨牙颊侧正中龈下注射含 ts
ª#pt ∞2°≥的生理盐水 xs ˏo每 w{ «注射 t次 o共
w次 ∀通过牙槽骨骨密度k…⁄l !破骨细胞数 !组织
病理学检查确定牙槽骨吸收模型制备的效果 ∀
1 q3 q2 实验分组 大鼠常规饲养 o实验分组为治疗
组 }按 tx ª#®ªpt灌胃 o每天 t次 o分别给药 ts ous o
vs §o各有建模大鼠 x只 ~对照组 }等体积生理盐水灌
胃 o每天 t次 o分别灌胃 ts ous ovs §o各有建模大鼠 x
只 ~正常对照组 }不做任何处理的正常大鼠 w只 ∀所
有大鼠常规饲养 ∀治疗组和阴性对照组大鼠均在预
定时间取外周血分离血清 o然后处死取左上颌牙体2
牙周组织联合标本用 ts h甲醛液固定 ∀正常对照组
大鼠在第 vs天时取血清及相同部位的牙体2牙周组
织标本 ∀
1 q3 q3 血清碱性磷酸酶k„°l活性测定 采用全自
动生化分析仪k美国 …¨ ®°¤±公司l测定血清标本中
的 „°活性≈z  ∀
1 q3 q4 血清 ≤¤u n测定 采用全自动生化分析仪k美
国 …¨ ®°¤±公司l测定血清标本中的 ≤¤u n浓度≈z  ∀
1 q3 q5 血清骨钙素k’≤l测定 采用放射免疫法测
定血清标本中的 ’≤ 浓度≈{  ∀tuxŒ2骨钙素检测试剂盒
购自北京中国原子能科学研究院同位素研究所 ∀
1 q3 q6 …⁄测定 采用 ∏±¨ µ双能量 ÷ 线 …⁄分
析仪测定牙体2牙周组织标本中实验牙位处的
…⁄≈|  ∀
1 q3 q7 破骨细胞计数 牙体2牙周组织标本用 ts h
∞⁄ׄ w ε 脱钙 o常规组织病理学方法制备组织切
片 o抗酒石酸酸性磷酸酶kו „°l染色法染色≈ts  ∀活
性破骨细胞鉴定标准 }胞浆红色 o胞核蓝色 o胞体与
牙槽骨表面直接接触 ∀利用测微尺在显微镜下ktss
≅ l计数从牙槽嵴顶沿固有牙槽骨表面 t sss Λ°范
围内的活性破骨细胞≈tt  ∀
1 q3 q8 组织病理学检查 脱钙的牙体2牙周组织切
片 o‹∞染色后显微镜下ktss ≅ l检查牙槽骨吸收和
骨再生情况 ∀破骨细胞鉴定标准 }胞核数目 ∴u o胞
浆强嗜酸性 o胞体大而不规则 o与牙槽骨表面直接接
触或位于 ‹²º¶«¬³陷窝内≈tu  ∀成骨细胞鉴定标准 }
大单个胞核 o胞浆嗜碱性 o胞体立方形 o排列在新生
未钙化骨样基质表面≈tv  ∀新生未钙化骨样基质鉴
定标准 }位于牙槽骨表面浅粉红色 !无嗜碱性反射线
的骨样基质≈tw  ∀
1 q4 统计学分析
应用 ≥°≥≥软件 ts qs版本进行方差分析 ∀
2 结果
2 q1 大鼠牙槽骨吸收模型的评价
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建模大鼠k ν € xl实验牙位牙槽骨 …⁄ks quus ?
s qsuyl低于正常大鼠k ν € wlks qvwv ? s qstxlk Π
s qsxl !破骨细胞数目kz q{ss ? u qy{vl高于正常大鼠
ks qwss ? s qxw{l ∀建模大鼠牙槽骨表面出现 ‹²º¶«¬³
陷窝 o陷窝内可见破骨细胞 o未见成骨细胞及新生骨
样基质k见图 tl ∀正常对照组大鼠牙槽骨表面光滑
完整 o未见明显破骨或成骨活动k见图 ul ∀表明用
∞2°≥按本实验中的方案能制备稳定 !可靠的实验
性大鼠牙槽骨吸收模型 ∀
图 t ∞2°≥诱导的牙槽骨吸收大鼠牙体2
牙周标本中位于牙槽骨表面的破骨细胞k‹∞染色 ≅ tssl
图 u 正常大鼠牙体2牙周标本的形态k‹∞染色 ≅ tssl
2 q2 血清 „°活性 !≤¤u n和 ’≤浓度测定结果
治疗组血清标本中 „°活性 !≤¤u n和 ’≤ 浓度
与对照组比较 o均无显著性差异k Ё s qsxl o见表 t ∀
表 t 各组大鼠血清标本中 „°活性及 ≤¤un和 ’≤浓度
k ξ ? σ, ν € xl
组别 时间r§ „°r˜#pt ≤¤u n r°°²¯#pt ’≤r±ª#pt
治疗组 ts vss qx ? v| qw u qzvx ? s qtux xy qzx ? z q{w
us u|t qy ? vu qu u qyww ? s qtv{ yu q{{ ? u| qz{
vs uwy qs ? xv qv u qxyw ? s qsxz v{ qws ? tu q{{
对照组 ts vsv qs ? w| qs u qxtx ? s qxv| |t qw| ? zs quu
us uy| q{ ? |x qv u qyys ? s qt{{ ys q{u ? t{ qsu
vs v{t qx ? tuz qu u qys{ ? s qttz xx qyt ? uz qw|
2 q3 …⁄测定结果
与相应对照组比较 o用药后第 ts ous ovs 天治疗
组牙体2牙周标本中牙槽骨的骨密度显著升高k Π
s qsxl表 u ∀
2 q4 破骨细胞计数结果
⁄ƒ≥水提液治疗第 ts ous ovs 天大鼠牙体2牙周
标本中的破骨细胞数目明显少于相应的阴性对照组
k Π s qsxl o见表 u o图 v ∀
表 u 治疗组和对照组大鼠牙体2
牙周标本中的破骨细胞数目k ξ ? σ, ν € xl
组别 时间r§ …⁄r ª#¦°u 破骨细胞数目
治疗组 ts s qvv{ ? s qsu|tl s qyss ? s qxw{tl
us s qvvw ? s qstztl s quss ? s quvztl
vs s qvvt ? s qsuxtl s qsss ? s qssstl
对照组 ts s quu| ? s qsuw { qsss ? u q|ty
us s qu|| ? s qstv x qsss ? t qvwx
vs s qu{t ? s qstv w qyss ? t q|w|
注 }与相应对照组比较 tlΠ s qsx
图 v ∞2°≥诱导的牙槽骨吸收大鼠牙体2牙周标本中
位于牙槽骨表面的活性破骨细胞kו „°染色 ≅ wssl
2 q5 组织病理学检查结果
阴性对照组大鼠第 ts ous ovs 天 的牙体2牙周
标本中仍存在明显的 ‹²º¶«¬³陷窝 o陷窝内可见破骨
细胞 o未见成骨细胞及新生未钙化骨样基质k见图
wl ∀ ⁄ƒ≥治疗第 ts天大鼠的牙体2牙周标本中 ‹²º2
¶«¬³陷窝均明显减少 o未见破骨细胞 o大多出现根分
叉区的新生未钙化骨样基质 o有成骨细胞附着于骨
样基质表面k见图 xl ∀第 us ovs天检查结果与第 ts
天相似 ∀
图 w ∞2°≥诱导后 vs §牙槽骨吸收大鼠牙体2牙周标本中
位于牙槽骨表面的破骨细胞k‹∞染色 ≅ ussl
3 讨论
牙周炎所致的牙槽骨吸收是非可逆的 o牙周附
着也难以完全恢复至生理状态 o因而目前临床上仅
能控制 !但不能根治牙周炎 ∀缺乏疗效确切的阻断
牙槽骨吸收 !促进牙槽骨再生的药物 o是根治牙周炎
困难的主要原因≈x  ∀从疗效可靠的骨伤科常用中草
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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图 x 用药 ts §的牙槽骨吸收大鼠根分叉区新生未钙化
骨样基质及附着的成骨细胞k‹∞染色 ≅ tssl
药中筛选抑制骨吸收 !促进骨再生的有效成分 o是发
现治疗牙周炎新药的途径之一 ∀
建立稳定 !可靠的实验性牙槽骨吸收细胞及动
物模型 o是筛选相关新药的重要条件之一 ∀作者实
验结果证实 o大鼠局部连续注射 ∞2°≥ o可导致牙周
破骨细胞活化和增殖 o牙槽骨出现 ‹²º¶«¬³陷窝 !骨
密度下降 o表现为与早期牙周炎类似的牙槽骨吸收
病变≈tx  o表明用 ∞2°≥可制备稳定 !可靠的实验性
大鼠牙槽骨吸收模型 ∀
…⁄的变化远远早于 ÷ 线可见的骨吸收 o是敏
感 !直接地反映骨量是否丢失的指标≈ty  ∀ ו „°是
酸性磷酸酶的同功酶 o为破骨细胞所特有≈tz  ∀牙体2
牙周联合标本 ‹∞染色镜检 o是目前获得牙周破骨 !
成骨活动直接证据最为可靠的常用方法≈t{  ∀实验
结果表明 o⁄ƒ≥ 水提液能有效地阻断牙槽骨吸收 ∀
表现为用药ts ∗ vs§的大鼠 …⁄显著升高k Π 
s qsxl !牙周破骨细胞消失k Π s qsxl !‹²º¶«¬³陷窝
数目明显减少 !大多根分叉区牙槽骨出现新生未钙
化骨样基质和附着的成骨细胞 o提示 ⁄ƒ≥水提液能
有效地抑制牙槽骨吸收 !促进牙槽骨再生 ∀用药 us o
vs §的 …⁄!破骨细胞计数和组织病理学检查结果
与 ts §相似 o提示用药 ts §已是 ⁄ƒ≥水提液的有效
疗程 ∀
⁄ƒ≥水提液治疗大鼠的血清标本中 „°活性 !
≤¤u n和 ’≤浓度与相应对照组相似k Ё s qsxl o表明
血清 „°活性 !≤¤u n和 ’≤ 浓度不能作为牙槽骨吸
收及再生的有效观察指标 o其原因可能是局部病变
尚不足以引起全身的 „°活性 !≤¤u n和 ’≤ 浓度改
变 ∀
综上所述 o本实验首次证实 ⁄ƒ≥水提液可治疗
大鼠的实验性牙槽骨吸收 o该药物有明显的抑制牙
吸收 !促进骨再生的作用 o为进一步研制治疗牙周炎
的新药奠定了基础 ∀
≈参考文献 
≈t  •¤¬¶½ Šq  ¦¨«¤±¬¶°¶¤±§µ¨ª∏¯¤·¬²±²©¥²±¨ µ¨¶²µ³·¬²± ¥¼ ²¶·¨²¦¯¤¶2
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第 u|卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
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u . ∆επαρτµεντ οφ Μεδ Μιχροβιολογψ ανδ Παρασιτολογψ, Χολλεγε οφ Μεδιχαλ Σχιενχε , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtsssy , Χηινα)
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≈责任编辑 方文贤 
信息
由甘肃省中医药研究院主办的国家级中医药继续教育项目/中药新药研发培训班0k批准号 uusxssssul将于 ussw年 |月在嘉
峪关市举办 ∀培训班将邀请有关专家就中药新药研究方法与开发专题授课 ∀培训班期间还将参观敦煌医药学宝库 ∀培训班
将授予结业证书和国家级教育学分 {分k具体时间 !地址及有关事宜见正式通知l ∀联系人 }魏清琳 ר¯ }s|vt p vyuwx|s op
{ytvzv| ~吕玉兰 ר¯ }s|vt p w{yvuys ~tvs{{z|xy{w 地址 }甘肃兰州市嘉峪关西路 wv{号甘肃省中医药研究院 邮编 }zvssus
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中 国 中 药 杂 志
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