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Studies on the determination of gastrodin in turber of Gastrodia elata by HPLC

天麻中天麻素含量测定方法的研究



全 文 :≈参考文献 
≈t  中国植物志编辑委员会 q中国植物志 q第四十二卷 q北京 }科学
出版社 ot|zz qxtu q
≈u  丛蒲珠 q质谱在天然有机化学中的应用 q北京 }科学出版社 o
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Αναλψσισ οφ χηεµιχαλ χονστιτυεντσφροµ τηε ϖολατιλε οιλ οφ Ερεµοσπαρτον σονγοριχυµ
⁄Œ‘Š ¤±tou o⁄∞‘Š ≠¤±2µ∏t o • „‘Š ‹¤±2 ¬´±ªt
kt qΣτατε Κεψ Λαβορατορψφορ Οξο Σψντηεσισ ανδ Σελεχτιϖε Οξιδατιον , Λανζηου Ινστιτυτε οφ Χηεµιχαλ Πηψσιχσ , Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Σχιενχεσ ,
Λανζηου zvssss , Χηινα~
u qΧολλεγε οφ Λιφε Σχιενχεσ, Νορτηωεστ Νορµαλ Υνιϖερσιτψ, Λανζηου zvsszs , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¤±¤¯¼¶¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶²© √²¯¤·¬¯¨ ²¬¯ ©µ²° Ερεµοσπαρτον σονγοριχυµ ¥¼ Š≤2≥ q Μετηοδ : ׫¨
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±²µ°¤¯¬½¤·¬²± ° ·¨«²§o¤±§·«¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¤±§¬§¨±·¬©¬¨§¥¼ Š≤2≥ q Ρεσυλτ : xx ≤²°³²∏±§¶º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§¤±§¬§¨±·¬©¬¨§o
º«¬¦«¤¦¦²∏±·¨§©²µ{s qt h ²©·²·¤¯ √²¯¤·¬¯¨ ²¬¯qΧονχλυσιον : ׫¨ °¤¬±¦²±¶·¬·∏¨±·¶¬±·«¨ ¶¨¶¨±·¬¤¯ ²¬¯©µ²° Ερεµοσπαρτον . σονγοριχυµ ¤µ¨ t2
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[ Κεψ ωορδσ] Ερεµοσπαρτον σονγοριχυµ ~√²¯¤·¬¯¨ ²¬¯~Š≤2≥
≈责任编辑 李 禾 
≈收稿日期  ussv2sz2tx
≈通讯作者  3吴春敏 oר¯ }ksx|tlzyuuusu
天麻中天麻素含量测定方法的研究
吴春敏 3 o陈海滨
k福建省药品检验所 o福建 福州 vxssstl
≈摘要  目的 }改进 usss年版5中国药典6天麻中天麻素的含量测定方法 ∀方法 }样品用 xs h乙醇回流提取 ~
‹¼³¨µ¶¬¯2≤t{色谱柱 o流动相乙腈2水kvΒ|zl o流速 t °#°¬±p t o检测波长 uus ±° o室温下进行测定 ∀结果 }天麻素线性
范围为 s qsws ∗ w qs Λªkρ€ s q||| |l o平均加样回收率为 |z qt h o• ≥⁄为 s q{z h k ν € |l ∀结论 }采用 usss年版5中国
药典6天麻中天麻素的含量测定方法 o天麻素提取不完全 o检测灵敏度较低 ∀本方法灵敏 !结果准确可靠 ∀
≈关键词  天麻 ~天麻素 ~高效液相色谱
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltu2ttxz2sv
天麻为兰科植物天麻 Γαστροδια ελατα …¯ q的干燥
块茎 o具平肝息风止痛之功效 o含天麻素 !天麻苷元
等酚类化合物及甾醇 !有机酸 !多种氨基酸 !多糖 !核
苷 !淀粉等成分≈t  o其中天麻素为天麻的主要有效成
分 ∀天麻中天麻素的含量测定方法有紫外分光光度
法≈u  !薄层扫描法≈v  !高效液相色谱法≈w  ∀本研究改
进了 usss年版药典天麻中天麻素的含量测定方法 o
建立了更加准确 !灵敏的测定方法 o以期为天麻药材
品质评价提供科学依据 ∀
1 仪器与试药
„ª¬¯¨ ±·p ttss高效液相色谱仪 o包括 }真空脱气
机 o四元泵 o自动进样器 o二级管阵列检测器 o„ª¬¯¨ ±·2
≤«¨ °¬¶·¤·¬²±数据处理系统k„ª¬¯¨ ±·公司l ~超纯水器
k¬¯¬¯³²µ¨l ~植物粉碎机k天津泰斯特有限公司l ~≠…
p 减压真空干燥器k天津药典标准仪器厂l ~超声
波发生器k奥特宝恩斯仪器有限公司l ∀
天麻素对照品k中国药品生物制品检定所 o批号
#zxtt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tu
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
s{sz2||svl o乙腈为色谱纯 o水为超纯水 o其余试剂均
为分析纯 ∀
天麻药材来源 }陕西 t号k陕西省药品检验所提
供l o湖北英山k栽培lk湖北省药品检验所提供l o四
川马尔康k野生l !四川康定k野生lk均为四川省药品
检验所提供l o云南昭通k栽培lk云南省药品检验所
提供l o福建松溪k栽培lk福建省松溪药品监督管理
局提供l o陕西u号 !安徽 !长白山 !湖北 !四川 !浙江
k均购自当地药材公司 o产于当地l ∀
2 方法与结果
2 q1 色谱条件 ‹¼³¨µ¶¬¯ ≤t{色谱柱kw qy °° ≅ uxs
°° ox Λ° o大连依利特科学仪器公司l ~流动相乙腈2
水kvΒ|zl ~检测波长 uus ±° ~柱温为室温 ~流速 t °#
°¬±pt ~进样量 ts ˏ∀色谱图见图 t ∀
图 t 天麻素对照品及样品的 ‹°≤色谱图
„ q天麻素对照品 ~…q天麻样品 ~t q天麻素
2 q2 线性关系考察 精密称取在 {s ε 减压干燥 t
«的对照品适量 o加乙腈2水kvΒ|zl溶液溶解 o制成
每t °含w qst| o{ qsv{ ous qs|x ows qt| o{s qvw o
tys q{ ouwt qt ovut qx owst q| Λª的溶液 o分别精密吸取
上述溶液各 ts ˏ注入高效液相色谱仪中 o按上述
色谱条件测定峰面积 o以对照品进样量 ΞkΛªl为横
坐标 o峰面积的积分值为纵坐标 o线性回归 o回归方
程 Ψ€ t {ty qy Ξ p t{ qxvv oρ€ s q||| | o天麻素在
s qsws ∗ w qs Λªo进样量与峰面积呈良好的线性关
系 ∀
2 q3 提取方法的选择
2 q3 q1 提取溶剂及浓度的选择 对陕西 t号天麻
药材用甲醇及乙醇提取 o结果见表 t ∀结果表明 o样
品用 vs h乙醇提取 o溶液经过滤后仍浑浊 o无法测
定 ∀xs h乙醇或 xs h甲醇提取 o提取率比其他方法
高 ∀考虑到乙醇更为环保 o所以选择 xs h乙醇为提
取用溶剂 ∀
2 q3 q2 提取时间的选择 对陕西 t 号天麻药材用
xs h乙醇为溶剂 o提取 t ou ov ow «o结果见表 t ∀结果
表明样品用 xs h乙醇提取 v «o天麻素提取完全 ∀
2 q3 q3 不同溶剂用量的选择 对陕西 t号天麻药
材用 xs h乙醇 ux oxs otss °提取 o结果见表 t ∀结
果表明用 xs h乙醇 xs °即可将天麻素提取完全 ∀
表 t 不同提取方法测定天麻药材中的天麻素含量
组别 提取方法 天麻素含量r h
提取溶 药典方法 s qtvu
剂及浓度 甲醇索氏提取 x « s qtwv
药典方法的甲醇改为 xs h乙醇 s qwuy
zs h乙醇回流提取 v « s qwyz
vs h乙醇回流提取 v « 溶液经过滤后略有浑浊
xs h乙醇回流提取 v « s qw||
xs h甲醇回流提取 v « s qw|w
提取时间 xs h乙醇回流提取 t « s qwyy
xs h乙醇回流提取 u « s qw{w
xs h乙醇回流提取 v « s qw||
xs h乙醇回流提取 w « s qw{x
溶剂用量 xs h乙醇 ux °回流提取 v « s qwxx
xs h乙醇 xs °回流提取 v « s qxsw
xs h乙醇 tss °回流提取 v « s qw||
以上实验结果表明 o用药典方法提取 o天麻素含
量约为 xs h乙醇回流提取 v «的 trv o该方法提取不
完全 ∀用不同的溶剂 !不同的浓度及不同的溶剂用
量 !不同的提取时间提取 o结果表明提取溶剂的浓度
对结果影响最大 ∀样品用 xs h乙醇 xs °加热回流
提取 v «o天麻素的含量将不再增加 ∀
2 q4 精密度试验 取天麻素对照品溶液ktst q{ Λª#
°l o连续进样|次 o测得天麻素峰面积的 • ≥⁄为
s qtx h o表明精密度良好 ∀
2 q5 重复性试验 取陕西 t号样品 x份 o按样品溶
液的制备方法和色谱条件分析 o天麻素含量的 • ≥⁄
为 s q|t h o表明该方法重复性良好 ∀
2 q6 稳定性试验 取陕西 t号样品 o放置 s ow o{ o
tu oty ouw «o分别按上述色谱条件测定 o色谱峰面积
分别为t xy{ qvxz ot xvs qtx{ ot xuy quvx ot xu{ qvwx o
t xys qvvu ot xus qvyx o• ≥⁄为 t qv h o表明样品放置
uw «稳定 ∀
2 q7 回收率试验 采用加样回收法 o取已知天麻素
含量ks qw|{ h l的陕西 t号样品 |份 o各约 s qw ªo精
密称定 o分别按下表加入天麻素对照品 o按样品测定
项下所述方法测定 o结果见表 u o其平均回收率为
|z qt h ∀
2 q8 样品测定 取经 {s ε 减压干燥后的天麻粉末
k过 w号筛ls q{ ªo精密称定 o置三角烧瓶中 o加 xs h
乙醇溶液 xs °o称定重量 o加热回流提取 v «o放冷 o
补足减失的重量 o滤过 o取续滤液 ts °浓缩至近
#{xtt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 u 天麻素加样回收率试验结果
取样量

样品中含量
r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
• ≥⁄
r h
s qvt{ x t qx{y t qswy u qyss |y q|
s qvuy s t qyuw t qswy u qyu{ |y qs
s qvuy | t qyu{ t qswy u qyvz |y qx
s qv|{ { t q|{y u qs|v w qssu |y qv
s qwst w t q||| u qs|v w qsvs |z qs |z qt s q{z
s qwsw v u qstv u qs|v w qszy |{ qy
s qwz| z u qv{| u qyty w q|uy |z qs
s qw{x x u qwt{ u qyty w q|{w |{ qt
s qw{v z u qws| u qyty w q|yt |z qy
干 o残渣用乙腈2水kvΒ|zl溶液溶解 o移至 ts °量瓶
中 o并用乙腈2水kvΒ|zl溶液稀释至刻度 ∀按上述色
谱条件测定天麻素含量 o结果见表 v ∀
表 v 天麻药材中天麻素含量测定结果 h
产地 含量
陕西 t号 s qw|{
贵州 s qvwx
湖北英山k栽培l s qwxx
四川马尔康k野生l s qtyz
四川康定k野生l s quy|
云南昭通k栽培l s qyvw
福建松溪k栽培l s quxv
陕西 u号 s qu|u
安徽 s qyxu
长白山 s qxyx
湖北 s qvzz
四川 s q|vw
浙江 t qtwx
3 讨论
3 q1 测定波长的确定 天麻素在 uzs ouus ±°波长
处有最大吸收 ∀usss年版药典用 uzs ±°为测定波
长 o从天麻素对照品的光谱图可见 uus ±°检测的灵
敏度远高于 uzs ±° o分析 u个波长的峰面积 ouus ±°
检测的灵敏度为 uzs ±°的 tx倍 o所以选择 uus ±°
作为测定波长 ∀
3 q2 流动相的选择 比较 usss年版药典与本研究
所提供的流动相 o结果均可获得良好的色谱图 o由于
本研究所采用的流动相不含盐 o所以采用乙腈2水kv
Β|zl溶液为流动相 ∀提取的样品用流动相溶解后进
样 o避免出现前倾峰 ∀
3 q3 提取方法的优选 采用多种方法提取样品中
天麻素 o结果显示样品用 xs h乙醇溶液加热回流提
取 v «的天麻素含量比用药典方法提取的高 v ∗ w
倍 ∀样品用乙腈2水kvΒ|zl溶液提取 o样品难以过
滤 o过 s qwx ∏°滤膜后溶液仍浑浊 ∀
基于以上实验 o选择用 xs h乙醇溶液加热回流
提取 v «∀样品用药典方法及甲醇索氏提取 x « o均
不能将样品中的天麻素提取完全 o可能是由于天麻
中含有大量的淀粉及蛋白质 !多糖等成分 o用含水有
机溶剂提取 o更易提出有效成分 ∀
3 q4 各产地天麻的质量评价 天麻主产于四川 !长
白山 !安徽 !浙江 !湖北 !陕西 ∀实验结果表明家栽天
麻天麻素含量高于野生天麻 o这与文献报道的结果
一致≈x  ∀从 tv批药材测定结果来看 o各产地药材天
麻素含量变化较大 o同一产地天麻药材天麻素含量
相差也较大 o这可能与种植条件 !采收季节及加工方
法等因素有关 ∀
≈参考文献 
≈t  金文姗 o田德蔷 q天麻的药理和化学研究概况 q中药研究与信
息 ousss oukyl }ut q
≈u  蒋礼年 q天麻不同切制法的质量比较 q中药材 ot|{| otukttl }vs q
≈v  王永山 o袁铸人 q不同加工方法对天麻中的天麻素及其甙元含
量的影响 q中成药 ot|{| ottkvl }t{ q
≈w  中国药典 q一部 qusss qww q
≈x  胡一冰 o崔 佳 o韩 笑 q中药天麻研究进展 q贵阳中医学院学
报 ousst ouvkwl }w{ q
Στυδιεσ ον τηε δετερµινατιον οφ γαστροδιν ιν τυρβερ οφ Γαστροδια ελατα βψ ΗΠΛΧ
• ˜ ≤«∏±2°¬±o≤‹∞‘‹¤¬2¥¬±
k Φυϑιαν Ινστιτυτε φορ ∆ρυγ Χοντρολ, Φυζηου vxssst , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬°³µ²√¨·«¨ ° ·¨«²§²© ≤«¬±¤³«¤µ°¤¦²³²¨¬¤kusssl ©²µ§¨·¨µ°¬±¬±ªª¤¶·µ²§¬±¬±·∏¥¨µ²© Γαστροδια ελατα q
Μετηοδ : ׫¨ ¶¤°³¯¨ º¤¶ ¬¨·µ¤¦·¨§¥¼ xs h ¤¯¦²«²¯ q ‹¼³¨µ¶¬¯2≤t{ ¦²¯∏°± º¤¶∏¶¨§o·«¨ °²¥¬¯ ³«¤¶¨ º¤¶¤ °¬¬·∏µ¨ ²©¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2º¤·¨µkvΒ
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[ Κεψ ωορδσ] Γαστροδια ελατα ~ª¤¶·µ²§¬±~ ‹°≤ ≈责任编辑 李 禾 
#|xtt#
第 u|卷第 tu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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