全 文 ：子萌发的影响 q华中农业大学学报 ot||| ot{ }{v q
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ροτυνδατα ¦²°³¯ ¬¨ ¤±§ ∆ . πραεηενσιλισ . Πλαντ Χελλ Τισσ Οργ Χυλτ ,
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χαλ Πεστ Μαναγεµεντ ot|{| ouy }tzs q
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Οργ Χυλτ ot||x owu }uzt q
Στυδιεσ ον πλαντλετ ρεγενερατιον φροµ τηε µατυρελεαϖεσ οφ
∆ιοσχορεα ζινγιβερενσισ
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( Φαχυλτψ οφ Λιφε Σχιενχεσ , Ηυβει Υνιϖερσιτψ, Ωυηαν wvssyu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤³µ²·²¦²¯ ²©µ¤³¬§¦¯²±¤¯ ³µ²³¤ª¤·¬²± ²© ∆ιοσχορεα ζινγιβερενσισ ∏¶¬±ª °¤·∏µ¨ ¯¨ ¤√ ¶¨¤¶ ¬¨³¯¤±·¶q
Μετηοδ : ’∏··«¨ ²³·¬°¤¯ «²µ°²±¨ ¦²°¥¬±¤·¬²±¶©²µ¦¤¯ ∏¯¶¬±§∏¦·¬²±o¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶¥∏§¬±¬·¬¤·¬²±o¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶¥∏§ °∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²± ¤±§µ²²·¬±ª
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[ Κεψ ωορδσ] ∆ιοσχορεα ζινγιβερενσισ ; ¯¨ ¤©¦∏¯·∏µ¨ ~¦¤¯ ∏¯¶~¤§√ ±¨·¬·¬²∏¶¥∏§~ ιν ϖιτρο ¦¯²±¤¯ ³µ²³¤ª¤·¬²±
≈责任编辑 王康正 
安徽药菊叶片直接再生植株技术的研究
薛建平 3 o张爱民 o常 玮
k淮北煤炭师范学院 生物系 o安徽 淮北 uvxsssl
≈摘要  目的 }建立诱导安徽药菊叶片直接再生植株的最佳培养基 ∀方法 }从无菌脱毒苗上采取叶片 o以不同
方式接种到附加不同植物生长物质的培养基中 o诱导叶片直接再生植株 ∀结果与结论 }对亳菊 !滁菊来说 o培养基
≥ n y2…„ s qt °ª#pt n ‘„„ s qt °ª#pt诱导效果最好 ~其中以背接方式适于植株的直接再生 ∀
≈关键词  药用菊花 ~叶片 ~直接再生植株 ~组织培养
≈中图分类号  ≥ xyz ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsu2stvu2sw
≈收稿日期  ussv2sz2ts
≈基金项目  安徽省/十五0重大科技专项kst{svsswl
≈通讯作者  3 薛建平 oר¯ }ksxytlv{susux o ∞2°¤¬¯}¬∏¨­³usss ƒ
¼¤«²²q¦²° q¦±
菊花 Χηρψσαντηεµυµ µοριφολιυµ •¤°¤·q是我国传
统的大宗药材 o已有 v sss年的栽培史 ∀历史上安徽
省的亳菊 !滁菊 !贡菊以其品质优 o药效好 o产量高而
最有名≈t  ∀但是由于长期以来菊花生产中多采用分
#uvt#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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根 !扦插等无性繁殖方法 o使得感染病毒严重≈u ov  ∀
目前侵袭菊花的病毒不下 ts种 o如菊花矮缩类病毒
≤≥≤ o烟草花叶病毒 א ∂ 等 o而且随种植时间延长病
情逐渐恶化 o许多优良品种因此丢失 ∀为解决安徽
药菊的病毒病 o保留优良品种基因 o人们主要采用茎
尖脱毒苗技术≈w  ∀近年来 o以药菊叶片为外植体脱
分化诱导愈伤组织 o再分化形成再生植株≈x  o为叶盘
法基因工程改造菊花的品质提供了技术平台 ∀
但这一途径往往存在变异 o因为在愈伤组织中 o
常可见到细胞染色体组成发生变化而表现出遗传上
的不稳定性≈y oz  ∀若利用叶片再生植株 o不经过愈伤
阶段 o可望保持亲本的遗传性状 ∀而且叶片取材方
便 o来源广泛 o均一性强 o为此作者开展了安徽药菊
叶片直接再生植株的研究工作 o国内外尚未见相关
报道 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
安徽药菊 }亳菊 !贡菊 !滁菊脱毒苗叶片≈w  o经薛
建平副教授鉴定为菊科植物药用菊花 Χηρψσαντηε2
µυµ µοριφολιυµ 的脱毒苗 ∀
1 q2 培养基及培养条件
以 ≥为基本培养基 o附加不同种类和浓度的
植物生长物质 ov qs h的蔗糖 o用 s q{ h的琼脂固化 o
³‹值 x q{ ∗ y qs ∀光强 u sss ∗ v sss ¬¯o光照时间 tu
«#§pt o培养温度kux ? tl ε ∀
1 q3 方法
剪取脱毒苗叶片 o叶片以背接k叶片背面接种于
培养基l和正接k叶片正面接种lu种接种方式 ∀每
个培养基中接种 x个叶片 o重复 x瓶 oux §后统计直
接再生不定芽叶片的频率 ∀
2 结果
2 q1 植物生长物质及接种方式对亳菊叶片直接再
生植株的影响
将亳菊叶片以背接和正接 u种方式接到添加了
不同种类和浓度的植物生长物质的 {种培养基中
k表 tl ∀在 u种接种方式中 o背接方式的直接再生植
株率最高且成苗壮 o而正接方式中叶片的叶柄和叶
尖部向上卷曲 o多表现为生长停滞 o出现坏死现象较
多 ∀在正接及背接方式中 o靠近叶柄的近基端再生
能力明显高于叶顶部 ∀以背接方式培养 x §后 o叶
片向下反卷生长 o叶柄和叶尖端插入培养基中 ~z §
后 o叶片仍保持原有绿色 o面积和厚度未有明显变
化 otx §后 ot ov及 { v种培养基中叶片主脉k少
数在侧脉l上分化出 t ∗ u个小突起 o这绿色突起一
般在叶片主脉上呈密集的突起群 o最早分化的绿色
突起 o逐渐长成圆锥状芽原体 o形成不定芽 ∀而 u o
w ox oy和 z中芽点多集中于叶柄基部膨大处 o
在叶片上直接再生成苗少且弱 ∀其中 t 培养基中
诱导直接再生植株效果最好 o成壮苗较多 ∀以上结
果表明 o在低浓度的 y2…„ks qt °ª#ptl及 ‘„„ks qt
°ª#ptl中芽较粗壮 o叶片舒展 o且芽成单株状 o易区
分 o随着 y2…„浓度的增加 o芽增殖率开始增加 o因此
y2…„在亳菊直接再生植株中起主导作用 ∀但是在
y ∗ {中 y2…„的单独使用并不利于植株的后期生
长 ∀
表 t 植物生长物质及接种方式对
亳菊叶片直接再生植株的影响
培养基
激素组合r °ª#pt
y2…„ ‘„„
正接再生
率r h
背接再生
率r h
t s qt s qt us {s
u s qx s qt tx ys
v s qx s qx s ws
w t qs s qt s vu
x u qs s qt tx ws
y s qx s us
z t qs s us
{ u qs s ws
注 }培养 ux §统计结果 o外植体数为 ux个
2 q2 植物生长物质及接种方式对滁菊叶片直接再
生植株的影响
滁菊脱毒苗叶片以正 !背接 u种方式接种至 {
种培养基中k见表 ul otx §后发现 t ou oz 和 {
培养基中开始有不定芽出现 oux §后其他培养基中
也有芽点的分化 o其中 t培养基对直接植株再生诱
导效果较好 ∀而且只有在背接方式中叶片有不定芽
分化 o正接方式中叶片仅在 z培养基中有芽点分化
形成 o但褐化死亡 o未进一步发育形成幼苗 ∀
2 q3 植物生长物质及接种方式对贡菊叶片直接再
生植株的影响
贡菊脱毒苗叶片中以正 !背接 u种方式接种于 {
种培养基中k表 vl o结果表明 oux §后只有在 t培养
基中有芽点出现 o再生率只有 ts h 左右 ~而在 v o
w ox o{ 中均无明显现象 ∀总的来看 o和亳菊 !滁
菊相比 o贡菊叶片直接再生植株过程多表现为生长
停滞 !分化慢 o这可能与其品种的基因型有关 ∀
#vvt#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 u 植物生长物质及接种方式对滁菊叶片直接再生植株的影响
培养基 正接 再生率r h 背接 再生率r h
t u片叶生出幼根 s 叶基大量膨大 otx片叶产生苗 ys
u 叶基稍膨大 s 叶基大量膨大 ots片叶有苗 ws
v 叶基稍膨大 s 叶基大量膨大 oz片叶产生幼苗 uw
w 无明显现象 s x片叶基膨大 ou片坏死 us
x 无明显现象 s 叶基处膨大 ox片叶有苗 us
y 叶基处少量膨大 s 叶基处大量膨大 o{片叶有苗 vu
z 叶面大量膨大 s 叶柄基部膨大 ots片叶产生幼苗 ws
{ 叶基少量膨大 s 叶基大量膨大 ots片叶有苗 ws
注 }培养 ux §统计结果 o外植体数为 ux个
表 v 植物生长物质及接种方式对
贡菊叶片直接再生植株的影响
培养基 正接 背接
t 叶基少量膨大 叶基大量膨大 o叶脉有芽点
u 叶基及叶边缘少量膨大幼根出现 叶基大量膨大
v 无明显现象 叶基处大量膨大
w 无明显现象 无明显现象
x 无明显现象 叶基大量膨大
y 叶基少量膨大 叶基大量膨大
z 叶基少量膨大 叶基及边缘大量膨大
{ 无明显现象 叶基大量膨大
注 }培养 ux §观察结果
3 讨论
在正接及背接方式中靠近叶柄的近基端再生能
力明显高于叶顶部 o造成这种现象的原因可能是维
管束在叶中的分布密度不同≈{  ∀维管束是激素在叶
内运输的主要通道 o维管束周围的薄壁细胞较容易
吸收到培养基中生长调节物质 o从而促进了此处薄
壁细胞的生长分化 ∀基部的维管束分布较密 o分化
能力较高 ∀这也是为什么离体叶片培养 o不定芽多
是从叶脉上分化出来的原因 ∀
叶片背接方式中芽的分化率远远高于正接方
式 o这可能与叶片极性有关 ∀当叶片背接时 o叶片向
下反卷生长 o叶柄和叶尖端插入培养基中 o叶片可以
从培养基中吸收更多的养分 ~而且叶背面气孔多 o也
有助于水分和养分的吸收 ∀但当叶片正接时 o叶片
向上反卷生长 o叶柄和叶尖端不能接触培养基 o使得
叶片无法从培养基中吸收养分 o从而造成生长停滞 o
出现坏死现象较 o芽分化率低 ∀在试验中还发现对
叶片直接再生植株来说 o叶龄也是一个重要因素 o叶
龄过老 o再生困难 ~叶龄过小的嫩叶往往培养后易坏
死 ∀因此应该选择植株上部的 u ∗ v片幼龄健壮叶
作培养材料 o则有利于直接再生植株 ∀
从对亳菊 !滁菊和贡菊的比较研究中发现 o不同
品种间再生能力存在着很大差异 ∀全息胚学说的观
点认为 o生物体由处于不同发育阶段的具有不同特
化程度的全息胚组成 o对于诱导不定芽的发生 o一定
浓度的 y2…„是不可缺少的 o植物的枝 !叶都是特化
了的全息胚 ∀从叶中重新诱导芽 o也就是全息胚的
重演性 o重演性需要全息胚分化促进剂 ∀y2…„可能
就是一种全息胚分化促进剂 o其效应因浓度而
异≈|  ~亳菊 !滁菊和贡菊由于基因型的不同 o全息胚
的重演可能需要不同的全息胚分化促进剂和培养条
件 ∀我们初步建立了亳菊和滁菊叶片直接再生植株
的培养基 o以 ≥ n y2…„ s qt °ª#pt n ‘„„ s qt °ª#
pt较为适宜 o为今后利用遗传转化技术培育药菊新
品种提供了技术支持 o但贡菊的再生体系仍有待进
一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  国家中医药管理局中华本草编委会 q中华本草 q上海 }上海科学
技术出版社 ot||{ q|u| q
≈u  蔡祝南 o杨莉莉 o彭超美 o等 q切花菊病毒及脱毒苗的检测 q福建
农业科技 ot||u ouuktl }vw q
≈w  薛建平 o张爱民 o赵丰兰 o等 q安徽药菊茎尖组织培养技术的研
究 q中国中药杂志 oussu ouzkxl }us q
≈x  薛建平 o于淼 o张爱民 q安徽药菊叶片愈伤组织诱导及植株再生
技术的研究 q中国中药杂志 oussv ou{kvl }utv q
≈y  ‹¬µ²¶«¬∞o∞½∏·¤Š q‹¬ª«¯¼©µ¨ ∏´¨ ±·¤³³¨µ¤±¦¨ ²©·¨·µ¤³¯²¬§¼¬±µ¨ª¨ ±2
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Πλαντ Σχιε ot||u o{x }us| q
≈z  许智宏 q植物生物技术 q上海 }上海科学技术出版社 ot||{ q
t{y q
≈{  李小芳 o汤章城 o何玉科 q不定根的形态发生与调节机制 q细胞
生物学杂志 ousst ouvkvl }tvs q
≈|  周根余 o沈光华 o程 磊 q洋桔梗叶片培养中的全息现象k简
报l q植物生理学通讯 ousss ovykvl }utx q
#wvt#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Στυδιεσ ον τηε τεχηνολογψ οφ διρεχτλψινδυχινγ ρεγενερατεδ
πλαντλετ φροµ λεαφ οφ Χηρψσαντηεµυµ µοριφολιυµ
÷˜∞ ¬¤±2³¬±ªo≤‹„‘Š • ¬¨o‹„‘Š „¬2°¬±
( ∆επαρτµεντ οφ Βιολογψ, Ηυαιβει ΧοαλΙνδυστρψ Τεαχηερσ. Χολλεγε , Ηυαιβει uvxsss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·∏³·«¨ ©¬·¨¶·° §¨¬∏°©²µ§¬µ¨¦·¯¼¬±§∏¦¬±ªµ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§³¯¤±·¯¨·©µ²° ¯¨ ¤©²© Χηρψσαντηεµυµ µοριφολιυµ .
Μετηοδ : ¨¤√ ¶¨²©§¬©©¨µ¨±·³«¤¶¨¶²¥·¤¬±¨ §©µ²°·«¨ √¬µ∏¶2©µ¨¨³¯¤±·¯¨·¶º µ¨¨ ¦∏·¤±§¦∏¯·∏µ¨§¬±¶²°¨®¬±§¶²© ° §¨¬¤q Ρεσυλτ ανδ Χονχλυ2
σιον : ײ …² µοριφολιυµ ¤±§≤«∏ µοριφολιυµ , ·«¨ ©¬·¨¶·° §¨¬∏°©²µ·«¨ ©²µ°¤·¬²± ²©µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§³¯¤±·¯¨·º¤¶≥ n y2…„ s qt °ª#pt n ‘„„
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[ Κεψ ωορδσ] Χηρψσαντηεµυµ µοριφολιυµ ~¯¨ ¤©~§¬µ¨¦·¯¼¬±§∏¦¬±ªµ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§³¯¤±·¯¨·~·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨
≈责任编辑 王康正 
用高效离子交换色谱法分析使君子
药材中胡芦巴碱成分
姜舜尧t ou 3 o田颂九u
kt q浙江省药品检验所 o浙江 杭州 vtsssw ~u q中国药品生物制品检定所 o北京 tsssxsl
≈摘要  目的 }运用高效离子交换色谱法测定使君子药材中胡芦巴碱成分的含量 ∀方法 }色谱柱为 ≥³«¨µ¬¶²µ¥
≥≤÷kw qy °° ≅ txs °° ox Λ°l o流动相为 us °°²¯#pt磷酸盐溶液kus °°²¯#pt磷酸二氢钠溶液用 us °°²¯#pt磷酸
溶液调节 ³‹至 v qul o检测波长 uyx ±° o流速 t qs °#°¬±p t o柱温 ux ε ∀结果 }选用 ≥≤÷ 柱 o使君子药材中胡芦巴
碱成分可得到较好分离 o胡芦巴碱进样量在 s qsx| y ∗ t qz{{ Λª呈良好线性关系 o方法平均回收率为 || qw h k ν € yl ∀
实验另发现使君子果皮中不含胡芦巴碱成分 ∀结论 }本方法的建立可用于控制使君子药材的质量 ∀
≈关键词  胡芦巴碱 ~使君子 ~离子交换液相色谱法
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsu2stvx2sw
胡芦巴碱是一种植物激素类活性成分≈t2v  o在植
物中分布比较普遍 ∀采用液相法分析植物中胡芦巴
碱成分国外已有不少报道 o其色谱条件多采用反相
键合相色谱柱 o以水或磷酸盐 !醋酸盐等缓冲盐溶液
作为流动相进行分离≈w2y  ∀由于胡芦巴碱为吡啶类
两性小分子生物碱 o极性大 o在烷基键合相色谱柱上
的保留因子很小 o缓冲盐和离子对试剂的加入虽可
在一定程度上增大其保留因子 o但仍较为有限的保
留因子使得该成分在分离测定时因植物中其他杂质
干扰而受到一定限制 ∀
≈收稿日期  ussu2tt2ts
≈通讯作者  3 姜舜尧 oר¯ }ksxztl{{{w{wyz o∞2°¤¬¯}­¬¤±ª¶«∏±¼¤²
ƒ tyv q¦²°
胡芦巴碱亦存在于使君子药材中≈z  ∀笔者以使
君子药材为研究对象 o以离子型键合相为分离基质 o
通过以离子交换为主的保留机理 o使得样品中胡芦
巴碱成分得以在较短时间内分离完全 o从而测定其
含量 ∀
1 仪器及试药 ‹°ttss 高效液相色谱系统 }
Štvtt„四元泵 oŠtvuu„ 脱气 机 oŠtvtv„ 自动进样
器 oŠtvtw 紫外可见检测器 oŠtvty 柱温箱 o„s{ qsv
版 „±ª¬¯¨ ±·化学工作站 ∀对照品胡芦巴碱由中国药
品生物制品检定所提供 o归一化法测定未检出杂峰 ∀
使君子仁 v批 o使君子果实 u批 o经姜舜尧鉴定为使
君子科植物使君子 Θυισθυαλισινδιχαq的干燥成熟果
实或果仁 ∀试剂均为分析纯 o重蒸馏水 ∀
2 色谱条件 色谱柱为 ≥³«¨µ¬¶²µ¥ ≥≤÷kw qy °° ≅
#xvt#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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