全 文 ：三七中人参三醇苷对脑缺血的保护作用及其机制
姚小皓 o李学军
k北京大学 基础医学院 药理学系 o北京 tsss{vl
≈摘要  目的 }研究三七中人参三醇苷k°×≥l对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及作用机制 ∀方法 }以大鼠永久
性大脑中动脉阻塞模型k  ≤ „’l为基础 o采用免疫转移印迹k • ¶¨·¨µ± …¯ ²·l的方法 o观察 °×≥对大鼠脑缺血的保护
作用及 v种脑缺血相关蛋白k∂ ∞Šƒ o ‹≥°zs和转铁蛋白l表达的影响 ∀结果 }¬³°×≥ tu qx °ª#®ªp t ≅ z §k术前 x §o
术后 u §l可降低  ≤ „’ 大鼠脑含水量 o并影响两种脑缺血相关蛋白k‹≥°zs和转铁蛋白l的含量 o但对 ∂ ∞Šƒ 表达
量在手术后的变化没有明显的影响 ∀ 结论 }°×≥ 对大鼠局灶性脑缺血有一定的保护作用 o其机制可能是上调
‹≥°zs和下调转铁蛋白 o并保护血脑屏障 ∀
≈关键词  三七 ~人参三醇苷 ~大脑中动脉阻塞 ~脑含水量 ~免疫印迹
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsx2svzt2sv
脑缺血是一种临床上常见且预后不良的病症 o
可导致脑卒中等严重后果 o直接原因是供应特定脑
组织区域的脑血流被阻断或减少 o其中大脑中动脉
支配区域的发生率最高 ∀三七为五加科人参属植物
三七 Παναξ νοτογινσενγ k…∏µ®lƒ q‹ q≤«¨ ± 的干燥
根 o是我国特产的珍贵药材 o具有散瘀止痛 !消肿定
痛的功效 ∀近年来临床用三七治疗脑血管意外后遗
症有效≈t ou  ~许多药理实验也证实三七的活性成分
) ) ) 三七总皂苷k°‘≥l对缺血性脑损伤有明显的保
护作用≈v ow  ∀人参三醇苷k °×≥l是三七总皂苷的主
要组分 o本文采用  ≤ „’ 模型为基础 o观察给予不
同剂量的 °×≥ 对大脑中动脉阻塞大鼠的脑含水量
和脑缺血相关蛋白表达的影响 o以进一步明确其脑
保护作用和作用机制 ∀
1 材料和方法
1 q1 药物和仪器 °×≥ 由天津药物研究院提供 ∀
羊抗人转铁蛋白多抗为美国 ≥¬ª°¤公司产品 o其余
抗体和试剂均购自北京中山生物技术公司 ∀ • ¶¨·2
µ¨± …¯ ²·所用仪器为美国 …¬²2• ¤§公司产品 ∀
1 q2 大鼠  ≤ „’ 模型的建立 ≥³µ¤ª∏¨2⁄¤º¯¨ ¼大
鼠 o成年雄性 o体重 uxs ∗ vxs ª∀用水和氯醛kvxs
°ª#®ªp t o¬³l麻醉 o以 …¨ §¨µ¶²±法制成左侧大脑中
动脉阻塞模型≈x  o即热凝阻断嗅束内侧 u °° 至大
脑下静脉一段大脑中动脉 ∀除不作热凝阻断以外 o
≈收稿日期  usst2s{2s|
≈通讯作者  电话 }ksxytlv{suuux
制成假手术动物模型作为对照 ∀动物随机分为 w
组 }假手术 n 生理盐水 ~ ≤ „’ n 生理盐水 ~ ≤ „’
n °×≥ tu qx °ª#®ªp t ~ ≤ „’ n °×≥ xs °ª#®ªp t ∀
给药方式均为 ¬³os qu °#tss ªp t o术前 x §o术后 u
§给药 ∀
1 q3 大鼠脑含水量的测定 取大鼠手术侧视交叉
之前部分脑组织并测湿重 o后置于 |s ε 烤箱将组织
块烤至恒重并测干重 ∀计算脑含水量 }k湿重 p 干
重lr湿重 ≅ tss h ∀
1 q4 免疫印迹
1 q4 q1 蛋白样品的制备 取大鼠手术侧视交叉与
脑垂体之间的脑组织 o冰浴下匀浆k匀浆液配方 }
s qvu °²¯#p t蔗糖 os qv °°²¯#pt苯甲基磺酰氟 o
us °°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯³‹ z qwl ∀w ε 下离心 o{ss µ
#°¬±p t oux °¬±~取上清再离心 oty sss µ#°¬±p t ot qx
«o取上清液置于 p zs ε 备用 ∀
1 q4 q2 蛋白含量的测定 ²ºµ¼ 法测定≈y  o以牛血
清白蛋白制备标准曲线 ∀
1 q4 q3 蛋白质免疫印迹≈z  ≥⁄≥2°„Š∞电泳分离
蛋白质 o恒压 txs ∂ oxx °¬±~电转移至硝酸纤维素
膜 o恒流 txs °„ ou «∀将膜置于适量封闭液中kx h
脱脂奶粉2ׅ≥ }s q| h ‘¤≤¯os qt °²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯o
³‹ z qxl在平缓摇动的水平摇床上室温孵育 t «o封
闭结束后 o将膜放入杂交袋中 o根据滤膜面积 s qt
°#¦°u 的量加入适量稀释度的抗体k孵育液配方 }
u qx h脱脂奶粉2ׅ≥l o排除气泡 o封闭袋口 o室温下
孵育 过 夜 ∀ 剪 开 杂 交 袋 o废 弃 抗 体 os qsx h
#tzv#
第 uz卷第 x期
ussu年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qx
¤¼ qoussu
× º¨¨ ±us2ׅ≥ 洗膜 v 次 o每次 ts °¬±o然后加入碱
磷酶标记的二抗 o室温孵育 u «o洗膜 v 次后 ox2溴2w2
氯2v2吲哚磷酸盐r氮蓝四唑k…≤Œ°r‘…×l底物显色 ∀
蛋白条带扫描定量 ∀
2 结果
2 q1 °×≥对  ≤ „’ 大鼠脑含水量的影响 与假手
术对照组相比 o ≤ „’ 组大鼠的脑含水量明显升高
kΠ€ s qswl ~而给药组中 o低剂量组 °×≥ ¬³tu qx °ª
#®ªp t ≅ z §可明显降低  ≤ „’ 大鼠的脑含水量k Π
€ s qsul o而 xs °ª#®ªp t组反而无效k表 tl ∀
表 t °×≥对  ≤ „’ 大鼠脑含水量的影响k ξ ? σl
组别 剂量r°ª#®ªp t ν 脑含水量r h
假手术 n生理盐水 y {s qvt ? s qv
 ≤ „’ n生理盐水 x {t qzw ? t qw{tl
 ≤ „’ n °×≥ tu qx x z| qv{ ? s qxxul
 ≤ „’ n °×≥ xs x {t q{{ ? t quv
注 }与假手术对照组比较 tl Π s qsx 与生理盐水对照组比较
ul Π s qsx
2 q2 °×≥ 对 v种脑缺血相关蛋白的影响 血管内
皮细胞生长因子k∂ ∞Šƒl o转铁蛋白和热休克蛋白
zsk‹≥°zsl是 v种与脑缺血密切相关的蛋白质 ∀实
验中我们发现 o在大鼠  ≤ „’ 手术后 o在脑中
∂ ∞Šƒ和转铁蛋白的含量明显升高 o这与许多文献
报道的结果相一致≈{ o|  o而 ‹≥°zs的含量明显降低 ∀
°×≥ 术前预防给药 x §o术后给药 u §o°×≥ tu qx °ª
#®ªp t ≅ z §对 ∂ ∞Šƒ 在术后的变化无明显的影响 o
对转铁蛋白的增高有明显的抑制作用 o而 ‹≥°zs的
含量在给药后则有明显的回升k图 t ou ~表 ul ∀
图 t °×≥对  ≤ „’ 大鼠脑中 ∂ ∞Šƒ 含量的影响k ν € x ∗ yl
¤t 和 ¤u q ≤ „’ n生理盐水 ¥t 和 ¥u q假手术 n生理盐水
¦t n ¦u q ≤ „’ n °×≥ tu qx °ª#®ªp t §t n §u q  ≤ „’ n °×≥ xs °ª#®ªp t
图 u °×≥对  ≤ „’ 大鼠脑中转铁蛋白和
热休克蛋白 zs含量的影响k ν € x ∗ yl
¤q假手术 n生理盐水 ¥q ≤ „’ n生理盐水
¦q ≤ „’ n °×≥ tu qx °ª#®ªp t §q ≤ „’ n °×≥ xs °ª#®ªp t
表 u °×≥对 v种脑缺血相关蛋白的影响k ξ ? σl
组别 剂量r°ª#®ªp t ν ∂ ∞Šƒr h 转铁蛋白r h ‹≥°zsr h
假手术 n生理盐水 p y s qsz ? s qst y qwx ? s qt | q|y ? s qy|
 ≤ „’ n生理盐水 p x t{ qz{ ? t q||tl t{ qsu ? t qvytl w qyy ? s qxxtl
 ≤ „’ n °×≥ tu qx x ut qy| ? u qtu ts quy ? t qvuul tx q{s ? u qtsul
 ≤ „’ n °×≥ xs x ux qv| ? t q|{ ty qst ? t qxu | qt{ ? s qwsul
注 }表中百分比数值代表蛋白条带经扫描后的光吸收度 与假手术对照组比较 tl Π s qsx 与生理盐水对照组比较 ul Π s qsx
3 讨论
越来越多的实验证据表明 o脑缺血可使脑内许
多基因的表达改变 o其中对内源性 ∂ ∞Šƒ 和 ‹≥°zs
的研究发现 o二者可能对缺血脑组织具有神经保护
作用≈ts ott  ∀大鼠永久性  ≤ „’ 后 o∂ ∞Šƒ 及其受体
的表达均上调≈{  ~而 ‹≥°zs在严重缺血的梗死区内
其基因的转录和翻译被终止 o但在梗死周边区 o即缺
血半影区 o‹≥°zs °• ‘„ 和 ‹≥°zs蛋白质的表达增
多 o所以 ‹≥°zs可作为细胞或组织遭受可逆性缺血
损害的分子生物学标志≈tt  ∀我们以前的实验已证
实 o转铁蛋白在缺血脑组织中的含量增多≈|  ∀转铁
蛋白是血浆的成分之一 o同时存在于脑组织的细胞
外液 o而脑毛细血管内皮细胞 !脉络膜丛上皮细胞和
神经元均表达转铁蛋白受体 ∀他们在生理状态下主
要参与脑组织中铁的转运≈tu  o在急性脑缺血的病生
理过程所发挥的作用尚无定论 ∀脑缺血可造成血脑
屏障的破坏 o因此从血浆中的渗出很可能是缺血脑
组织区转铁蛋白增多的主要来源 ∀从影响蛋白表达
的角度研究中药的脑保护作用机制尚无相关报道 o
本实验在此方面对 °×≥ 的脑保护作用机制进行了
初步探讨 ∀结果表明 o各剂量组的 °×≥对 ∂ ∞Šƒ 表
达的变化无明显影响 o但低剂量组的 °×≥ 即对
‹≥°zs蛋白的表达有明显的回升作用 o说明 °×≥ 可
扩大缺血脑组织的半影区 o从而发挥脑保护的作用 ∀
低剂量组的 °×≥ 即可明显抑制缺血脑组织区转铁
蛋白的升高 o提示 °×≥ 可能是通过降低毛细血管的
通透性 o维护血脑屏障 o从而起到脑保护的作用 ∀
本文结果表明 o通过  ≤ „’ 手术造成大鼠局灶
性脑缺血 o可使大鼠患侧的脑含水量明显升高 o说明
在局灶性脑缺血的病变基础上会出现脑水肿的并发
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症 ∀缺血性脑血管病早期阶段为细胞内水肿 o后由
于细胞膜离子泵失灵 o缺血 !缺氧持续存在 o则血脑
屏障被破坏 o形成血管源性脑水肿≈tv  ∀本实验所设
的两个剂量组 o低剂量 °×≥ ¬³ tu qx °ª#®ªp t ≅ z §
k术前 x §o术后 u §l可明显降低  ≤ „’ 大鼠的脑含
水量 o而 xs °ª#®ªp t的剂量反而无效 o这说明 °×≥
减轻脑水肿是三七皂苷发挥脑保护作用的机制之
一 o但其最低有效剂量尚有待进一步摸索 ∀
≈参考文献 
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症 ousss o|kvl }tvs q
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§²·«¨ ¬¯¤¯ Šµ²º·«ƒ¤¦·²µk∂ ∞Šƒl ¤±§Œ·¶• ¦¨¨³·²µ¶k©¯·2t ¤±§©¯®2
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学#脑血管疾病分册 ot||| ozkxl }ux| q
≈tt  谷文萍 o谢光洁 o杨期东 q热休克蛋白 zs 研究进展 q国外医
学#神经病学神经外科学分册 ot||| ouykul }xz q
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σενγ k°×≥l ²± ©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤¬± µ¤·¥µ¤¬±q Μετηοδ : × «¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨¶²© °×≥ ²± ¦¨µ¨¥µ¤¯ º¤·¨µ¦²±·¨±·¤±§·«µ¨¨¶³¨¦¬©¬¦³µ²2
·¨¬±¶k∂ ∞Šƒ o ‹≥°zs ¤±§·µ¤±¶©¨µµ¬±l µ¨ ¤¯·¨§ º¬·« ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤ º µ¨¨ ¶·∏§¬¨§ º¬·« ∏±¬¯¤·¨µ¤¯ ²¦¦¯∏¶¬²± ²©·«¨ °¬§§¯¨ ¦¨µ¨¥µ¤¯
¤µ·¨µ¼ k  ≤ „’l ¤±§ • ¶¨·¨µ± …¯ ²·q Ρεσυλτ : °×≥ tu qx °ª#®ªp t ¬³≅ z §kx §¥¨©²µ¨  ≤ „ ’ ¤±§u §¤©·¨µ  ≤ „’l ¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¬±2
¦µ¨¤¶¨ ²©¦¨µ¨¥µ¤¯ º¤·¨µ¦²±·¨±·¦¤∏¶¨§¥¼  ≤ „’ ¤±§¬±©¯∏¨ ±¦¨§¦²±·¨±·¶²© ‹≥°zs ¤±§·µ¤±¶©¨µµ¬±o¥∏·«¤§±²¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²± ∂ ∞Šƒ
³µ²·¨¬± ¯¨ √¨¯ qΧονχλυσιον : °×≥ ¶«²º¶¤³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨ ¦·²±©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤¬±µ¤·¥µ¤¬± ¥¼ ¤¯¯¨ √¬¤·¬±ª¦¨µ¨¥µ¤¯ §¨¨ °¤o∏³2µ¨ª∏2
¤¯·¬±ª·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ‹≥°zs o§²º±2µ¨ª∏¯¤·¬±ª·µ¤±¶©¨µµ¬± ¤±§ °¤¬±·¤¬±¬±ª¥¯²²§2¥µ¤¬± ¥¤µµ¬¨µq
[ Κεψ ωορδσ] Παναξ νοτογινσενγ ~³¤±¤¬¤·µ¬²¯ ¶¤³²±¬±¶k°×≥l ~°¬§§¯¨¦¨µ¨¥µ¤¯ ¤µ·¨µ¼ ²¦¦¯∏¶¬²± k  ≤ „’l ~¦¨µ¨¥µ¤¯ º¤·¨µ¦²±2
·¨±·~ º ¶¨·¨µ± ¥¯²·
≈责任编辑 方文贤 
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