全 文 ：Στυδψ ον τηε Γενετιεψ Ρελατιονσηιπ βετωεεν Χηινεσε ανδ Κορεαν Μεδιχιναλ
Ματεριαλσ οφ Νιυξ βψ ωιτη τηε Μετηοδ οφ Ρ ΑΠ∆
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k…¨ ¬­¬±ª ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© × ≤  o …¨ ¬­¬±ª tsstsu o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ «¨ µ¨§¬·¤µ¼ µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¥¨·º¨¨ ± ≤«¬±¨ ¶¨ ¤±§Ž²µ¨¤± ° §¨¬¦¬±¤¯ °¤·¨µ¬¤¯¶²© ‘¬∏¬¬¤¦«¼µ¤±2
·«¬¶µ²²·q Μετηοδ : × ±¨ ¶¤°³¯ ¶¨²©©²∏µ®¬±§¶²© ‘¬∏¬¬º¤¶¶·∏§¬¨§ º¬·«·«¨ ° ·¨«²§²© • „°⁄qΡεσυλτ : ∞¬³¤±§¨ §³µ²§∏¦·¶«²º §¨·²2
·¤¯ µ¨¦²µ§²©tss ¶³¨¦·µ∏° ¥¤±§¶o º«¬¦«³µ²√ §¨·«¤··«¨ «¨ µ¨§¬·¤µ¼ ª¤³¥¨·º¨¨ ± Ž²µ¨¤± ¶¨ ©¯2³µ²§∏¦¨§ Α .ϕαπονιχα ¤±§ Α . βιδεντατα
¬¶¶°¤¯¯¨ ¶·qΧονχλυσιον : Ž²µ¨¤± ¶¨ ©¯2³µ²§∏¦¨§ Α .ϕαπονιχᬶ±¨ ¤µ·² „ q≥¬§¨ ±·¤·¤q
[ Κεψ ωορδσ] • „°⁄~Ž²µ¨¤± ≥¨¯©2³µ²§∏¦¨§ Αχηψραντηεσ εαπονιχα ; Αχηψραντηεσ βιδεντατα
≈责任编辑 王康正 
蚯蚓纤溶酶活性影响因子的研究
刘向辉 o戈 峰
k中国科学院 动物研究所 o北京 tsss{sl
≈摘要  目的 }对提取过程中影响蚯蚓纤溶酶活性的 x种因子进行了分析 o以提高纤溶酶的提取活性 ∀方法 }
分别采用 s q| h ‘¤≤¯抽提 !ts h蔗糖抽提 !zx h酒精抽提出粗酶 ∀酶活测定方法采用尿激酶琼脂糖2纤维蛋白平板
法 ∀硒含量的测定方法采用 v ovχ2二氨基联苯胺比色法 ~砷含量的测定方法采用二乙氨基二硫代甲酸银比色法 ∀
结果 }饲养在牛粪饵料中的蚯蚓纤溶酶活性比饲养于生活垃圾中的蚯蚓纤溶酶活性更高 o蚯蚓体内砷的含量与纤
溶酶活性呈正相关 o而蚯蚓体内硒的含量对纤溶酶活性影响不大 ∀在采用 v种不同的蚯蚓纤溶酶的抽提方法中 o
zx h酒精抽提效率最高 os q| h氯化钠次之 ots h蔗糖最低 ~在蚯蚓纤溶酶纯化过程中 o透析比超滤对蚯蚓纤溶酶的
活性影响更小一些 ∀结论 }通过将蚯蚓饲养在适宜的饵料中 o使用合适的提取手段和提纯方法 o可以提高蚯蚓纤溶
酶的提取活性 ∀
≈关键词  蚯蚓纤溶酶活性 ~饵料 ~重金属 ~抽提方法
≈中图分类号  • u{w qu ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsy2swuv2sw
地龙k蚯蚓l o自古为常用中药 ∀近年来 o特别是
发现了它具有纤溶活性后 o对蚯蚓的实验研究和临
床研究愈来愈广泛 !深入≈t ∗ w  ∀
以蚯蚓体内含有 v种溶解血栓的蚓激酶k即纤
维溶解酶 !纤溶酶原激活物和胶原酶l是国家批准的
预防和治疗心脑血管疾病的二类新药≈x  ∀蚯蚓纤溶
酶在临床用于预防和治疗脑血栓 o高血压等都有一
定的疗效 o越来越受到人们的重视 o但由于蚯蚓蚓激
≈收稿日期  usst2tu2us
≈通讯作者  戈 峰 电话 }kstslyuxw{s|v 传真 }kstsl
yuxyxy{| ∞°¤¬¯}ª¨©ƒ ³¤±§¤q¬²½q¤¦q¦±
酶的活性受原料k蚯蚓l的生产过程及提取分离等多
种因素的影响 o其产率较低 ∀要提高其产率 o就必须
研究影响其活性的因子 o而有关这方面的研究报道
极少 ∀本文研究了蚯蚓饵料 !金属元素 !分离提取方
法对蚯蚓纤溶酶活性的影响 o旨在于为提高蚯蚓蚓
激酶的产率提供科学依据 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
本实验使用的蚯蚓为赤子爱胜蚓 Εισενια φοετι2
δα ≥¤√¬ª±¼ o不同处理的蚯蚓如下 ∀
1 q1 q1 普通蚯蚓 发酵良好的牛粪饲养 ux §的蚯
蚓 ∀
#vuw#
第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qy
∏±¨ qoussu
1 q1 q2 富硒蚯蚓 用含有亚硒酸钠 uss °ª#®ªp t
的发酵良好的牛粪饲养 ux §的蚯蚓 ∀
1 q1 q3 生活垃圾饲养的蚯蚓 用发酵良好的生活
垃圾饲养 ux §的蚯蚓 ∀
1 q1 q4 含砷蚯蚓 分别取自 u个不同含砷土壤的
蚯蚓 o含砷量分别为 v q{ Λª#ªp t和 tz qx Λª#ªp t ∀
1 q1 q5 尿激酶k˜Žl标准品 !牛纤维蛋白原 !牛纤
维蛋白溶酶原 !牛凝血酶 均由中国药品生物制品
检定所购买 o琼脂糖为生化制剂 ∀氯化钠 o蔗糖和酒
精等都为分析纯 ∀
1 q1 q6 超滤器和透析袋的厂家和规格 超滤器为
美国颇尔2格尔曼实验室生产的 ƒ¬¯·µ²±品牌超滤器 o
滤过分子量为 { sss ∀透析袋厂家为美国碳化公司 o
直径为 uz °° o透析分子量为 { sss ∗ tw sss ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 粗酶不同的提取方法
≠蚯蚓鲜重Βs q| h ‘¤≤¯溶液 € tΒu混合捣碎匀
浆 ox sss µ#°¬±p tw ε 离心 o取上清液冷冻干燥 o测
定酶活k表 t ∗ w实验数据都是通过此种方法获得l ~
蚯蚓鲜重Βts h蔗糖溶液 € tΒu 混合捣碎匀浆 ox
sss µ# °¬±p tw ε 离心 o取上清液冷冻干燥 o测定酶
活 ~≈ 蚯蚓鲜重Βzx h酒精溶液 € tΒu 混合捣碎匀
浆 ox sss µ#°¬±p tw ε 离心 o取上清液冷冻干燥 o测
定酶活 ∀
1 q2 q2 酶活测定方法 尿激酶琼脂糖2纤维蛋白平
板法
1 q2 q2 q1 琼脂糖2纤维蛋白平板的制作 称取 t ª
琼脂糖置于 txs °锥型瓶中 o加入 s qt °²¯ #pt
k³‹z qzl磷酸盐缓冲液 |x °o沸水浴中加热至琼脂
糖完全溶解 o冷却至 xx ∗ ys ε o加入事先配好的纤
维蛋白溶酶原 x °k含 y{ °ªl o迅速混匀 o量取 vv
°到入培养皿中 o与事先在每个培养皿中加入的
s qw °的凝血酶液kux …°#°p tl和 s qw °的牛
血纤维蛋白溶酶原迅速混匀后 o静置 vs °¬±o凝固后
即为半透明的平板 ∀用 v °°套管打孔 o每板打孔 |
∗ tt个 ∀
1 q2 q2 q2 标准溶液的制备 取尿激酶标准品 o用
s q| h氯化钠溶液配成每 t °中含有 tss o{s oys o
ws ous ˜ ox个浓度 ∀
1 q2 q2 q3 样品溶液的配制 取样品适量 os q| h氯
化钠溶液配成标准曲线范围内的浓度 ∀
1 q2 q2 q4 测定方法 用微量注射器 o分别吸取尿激
酶标准品及样品溶液 ts ˏo滴在同一平板上 ovz ε
放置 t{ «o取出后用卡尺测量溶圈垂直直径 o以两直
径的乘积为纵坐标 o尿激酶标准品浓度为横坐标 o在
双对数纸上绘制标准曲线 o计算样品效价 ∀
1 q2 q3 蚯蚓体内硒和砷的测定方法
1 q2 q3 q1 硒含量测量方法 在酸性条件下 ov ovχ2二
氨基联苯胺与硒作用生成黄色化合物 o在 ³‹ z左右
能被甲苯提取 o进行比色 ∀此法最低检出量为 t Λª
硒 ∀
1 q2 q3 q2 砷含量测量方法 二乙氨基二硫代甲酸
银比色法k银盐法l≈y  ∀
2 结果分析
2 q1 不同饵料对蚯蚓纤溶酶活性的影响
分别对用牛粪和生活垃圾饲养的蚯蚓测定其纤
溶酶活性 o结果k表 tl表明 o两种饵料饲养的蚯蚓的
纤溶酶活性差异显著k Π s qsxl o说明用牛粪饲养
的蚯蚓的纤溶酶活性显著高于生活垃圾饲养的蚯蚓
的酶活性 ∀
表 t 牛粪和生活垃圾饲养的蚯蚓纤溶酶活性的比较 ˜#ªp t
饵料 纤溶酶活性
牛粪 t wxs
t xss
t wux
生活垃圾 t vzs
t vzx
t u|s
2 q2 砷对蚯蚓纤溶酶的影响
砷是土壤中的一个重要元素 o蚯蚓对砷的富集
能力很强 ∀两种不同处理的蚯蚓砷含量分别为 v q{
Λª#ªp t和 tz qx Λª#ªp t o它们的纤溶酶活性测定结果
如表 u所示 ∀经方差分析表明 o两种不同含砷量的
蚯蚓的纤溶酶活性差异极显著k Π s qstl o即砷含
量越高 o其体内酶活性越大 ∀
表 u 不同含砷量的蚯蚓的纤溶酶活性比较
蚯蚓含砷量rΛª#ªp t 纤溶酶活性r˜#ªp t
v q{ t utx
t uxs
t uvs
tz qx t vtx
t vus
t vt{
2 q3 硒对蚯蚓纤溶酶的影响
硒是人体必需的微量元素 ∀经测定 o蚯蚓饲养
在富硒的饵料中 o可使蚯蚓体内硒含量值为 uts qy
#wuw#
第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qy
∏±¨ qoussu
Λª#ªp t ∀对普通蚯蚓k含硒量 x q| Λª#ªp tl和富硒蚯
蚓k含硒量 uts qy Λª#ªp tl的纤溶酶活性的测定结果
k表vl表明 o两种蚯蚓的酶活性差异不显著k Π 
s qstl o说明蚯蚓体内硒含量的变化对纤溶酶活性没
有影响 ∀
表 v 普通蚯蚓和富硒蚯蚓的酶活比较 ˜#ªp t
蚯蚓种类 纤溶酶活性
普通蚯蚓 t wxs
t xss
t wux
富硒蚯蚓 t wts
t wss
t wvs
2 q4 不同提取方法对酶活的影响
应用氯化钠 !蔗糖和酒精 v种方法抽提纤溶酶
后 o对蚯蚓纤溶酶测定结果如表 w所示 ∀通过方差
分析表明 ov 种抽提方法差异都极显著k Π氯化钠Β蔗糖
 s qst oΠ氯化钠Β酒精  s qst oΠ蔗糖Β酒精  s qstl o其抽
提的效率由高到低依此为 }zx h酒精抽提  s q| h氯
化钠抽提  ts h 蔗糖抽提 o即 v 种抽提方法中以
zx h的酒精效果较好 ∀
表 w 不同抽提纤溶酶方法的酶活比较k ν € vl ˜#ªp t
抽提方法 纤溶酶活性
s q| h氯化钠抽提 t vtx
t vtx
t vus
ts h 蔗糖抽提 t tus
t tts
t svx
zx h 酒精抽提 t w{s
t wsx
t wts
2 q5 超滤与透析方法对纤溶酶活性的影响
将匀浆离心后的蚯蚓的溶液分别用 { ®§的滤
器超滤和透析袋透析 o所得溶液冷冻干燥 o测定纤溶
酶活性 o经方差分析表明 o两种不同的对粗酶的处理
方法对纤溶酶活性的影响差异极显著k Π s qstl o
透析方法所获得的酶活比超滤方法更大k表 xl ∀
表 x 超滤与透析对纤溶酶活性影响的比较k ν € vl ˜#ªp t
不同处理方法 纤溶酶活性
超滤 t vux
t v|s
t wus
透析 u txs
u uss
u t{s
3 讨论
本文通过两种饵料饲养的蚯蚓的纤溶酶的活性
的比较发现 o牛粪饲养的蚯蚓的纤溶酶活性比垃圾
饲养的蚯蚓的活性高 o说明饵料除影响蚯蚓的生长
发育外 o还影响其酶的活性 ∀目前大都用牛粪来饲
养蚯蚓 o这不但有利于蚯蚓的生长 o也有利于蚯蚓体
内酶活的形成 ∀
砷是对人体有害的微量元素 o但蚯蚓对砷的富
集能力较强 o本文测定了两种不同来源的蚯蚓体内
的砷含量分别为 v q{ Λª#ªp t和 tz qxs Λª#ªp t o对其
酶活测定结果表明 o纤溶酶活性呈正相关 o即砷含量
增加 o纤溶酶活性增加 o其具体作用机理仍需进一步
研究 ∀
硒是对人体有益的必需的微量元素 o通过蚯蚓
富硒作用 o可使蚯蚓体内硒含量达到 uts qy Λª#
ªp t≈z  o但硒对蚯蚓的纤溶酶活性基本没有影响 o而
微量硒可提高人体的免疫力 o提高人体抗癌 !防癌的
能力 o因此 o在不影响纤溶酶活性的前提下 o使蚯蚓
体内富集适量的硒 o可提高蚯蚓的利用率 ∀
本研究结果还表明 ov种粗提酶的方法中 ozx h
酒精的效率最高 os q| h氯化钠次之 ots h蔗糖最低 o
说明寻找良好的抽提液是增加蚯蚓纤溶酶产率的有
效途径之一 ∀
同时 o由于蚯蚓体内含有一些对人体有害的重
金属元素 o本研究采用了超滤和透析的两种去除方
法 o并研究了两种方法对纤溶酶活性的影响 ∀研究
表明 o透析对纤溶酶活性的影响更小一些 ∀
由此可见 o通过将蚯蚓饲养在适宜的饵料中 o使
用合适的提取手段和提纯方法 o可以提高蚯蚓纤溶
酶的活性 ∀
≈参考文献 
≈t  金 鸣 q蚯蚓溶栓作用进展 q中草药 ot||w ouwktl }wx q
≈u  路英华 o金汝成 o吴应文 o等 q钜齿远蚓纤溶酶的分离纯化及其
若干性质 q生物化学杂志 ot||{ owkul }tyy q
≈v  徐建民 o张国桢 o陈松鹤 o等 q赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲
和层析纯化和生化特性 q上海医科大学学报 ot||t ot{kwl }
uxu q
≈w  ‘¤®¤­¬°¤‘o ¬«¤µ¤ ‹ o≥∏°¬‹ q≤«¤µ¤¦·¨µ¬½¤·¬²± ²©°²·¨±·ƒ¬¥2
µ¬±²¯¼·¬¦∞±½¼° ¶¨¬± ∞¤µ·«º²µ° ∏°¥µ¬¦∏¶ • ∏¥¨¯¯∏¶q …¬²¦«¨ ° o
t||v oxzktsl }tzuy q
≈x  李 群 q蚓激酶及其制剂活性的研究 q中国药事 ot||{ otx
kxl }u{{ q
≈y  江苏省连云港水产学校 q水产品检验分析 q北京 }中国农业出
版社 ot||x q
≈z  刘向辉 o戈 峰 o徐张红 o等 q亚硒酸钠对蚯蚓的毒性及其蚓体
富硒作用的研究 q应用与环境生物学报 ousst ozkxl }wxz q
#xuw#
第 uz卷第 y期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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ΦαχτορσΙνφλυενχινγ τηε Αχτιϖιτψ οφ Φιβρινολψτιχ Ενζψµεσ Φροµ
Εαρτηωορµ , Εισενια φοετιδα
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¶∏µ¨ ·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©©¬¥µ¬±²¯¼·¬¦ ±¨½¼° ¶¨©µ²° ¤¨µ·«º²µ° q¤±§·«¨ ° ·¨«²§²© v ovχ2§¬¤°¬±²¥¨ ½¬§¬±¨ ·¨·µ¤«¼§µ²¦«¯²µ¬§¨ ¦²¯²µ¬° ·¨µ¼ ·²
º¤¶∏¶¨§ ° ¤¨¶∏µ¨ ·«¨ ¦²±·¨±·²©¶¨¯¨ ±¬∏° q × «¨ ° ·¨«²§∏¶¨ ·¶²© ° ¤¨¶∏µ¬±ª·«¨ ¦²±·¨±·²©¤µ¶¨±¬¦º¤¶¶¬¯√ µ¨§¬¨·«¼¯ §¬·«¬²¦¤µ¥¤°¤·¨
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¶¤¦¦«¤µ²¶¨ º¤¶·«¨ ²¯º ¶¨·q׫¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²©§¬¤¯¼¶¬¶²±·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©©¬¥µ¬±²¯¼·¬± º¤¶¯ ¶¨¶·«¤±·«¤·²©∏¯·µ¤©¬¯·µ¤·¬²±oº«¨ ±·«¨ ¤¨µ·«2
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º²µ° ¬¶µ¨¤µ¨§ º¬·«·«¨ ©¬··¬±ª¥¤¬·¶¤±§ º«¨ ± ¤³³µ²³µ¬¤·¨ ° ·¨«²§¶o²© ¬¨·µ¤¦·¬²± ¤±§³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ¤µ¨ ∏¶¨§q
[ Κεψ ωορδσ] ¤¦·¬√¬·¼ ²©·«¨ ¤¨µ·«º²µ°χ¶©¬¥µ¬±²¯¼·¬± ¥¤¬·~«¨ ¤√¼ ° ·¨¤¯ ~ ° ·¨«²§²© ¬¨·µ¤¦·¬²±
≈责任编辑 王康正 
四倍体白芷药材中欧前胡素的含量测定
彭 菲 o张 胜 o刘塔斯 o肖冰梅
k湖南中医学院 药学院 o湖南 长沙 wtssswl
≈摘要  目的 }测定四倍体白芷药材中欧前胡素的含量 o并与原二倍体白芷相比较 ∀方法 }采用高效液相色谱
法 o色谱柱 ‘²√¤2³¤®w qy °° ≅ uss °° ox Λ° o流动相乙腈2水 o流速 t °#°¬±p t o检测波长 uw{ ±° o柱温 ux ε ∀结
果 }四倍体白芷药材中欧前胡素含量达 s qwy h o二倍体对照药材仅为 s quux h o含量增加了 tsw qw h ∀结论 }人工四
倍体白芷主要有效成分含量成倍提高 ∀
≈关键词  四倍体白芷 ~欧前胡素 ~高效液相色谱
≈中图分类号  ≥ xyz ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsv2swuy2su
白芷为大宗药材 o在湖南省茶陵县种植已有悠
久历史 o为了解决目前生产上的诸多问题 o提高药材
产量 o改善品质 o我们从 t||y年开始对杭白芷 Αν2
γελιχα δαηυριχα kƒ¬¶¦«q¨ ¬ ‹²©©° ql…¨ ±·«q ·¨‹²²®q
©q√¤µq φορµοσανα k…²¬¶¶ql ≥«¤± ·¨≠∏¤±进行了人
工诱导多倍体的实验研究≈t ou  o经对花序进行处
≈收稿日期  usst2tt2tu
≈基金项目  湖南省科技厅资助项目k|z≥≥≠tssxl
≈通讯作者  电话 }kszvtlxx{szvw
理 o获得变异种子 o经检查染色体 o其数目已由原
二倍体的 u± € uu条增至 ww条 o经二代选育 o栽培
对比试验 o产量明显增加k文章待发表l ∀为了明确
药材有效成分的变化情况 o我们采用高效液相色谱
法对其主要药用成分 ) ) ) 欧前胡素≈v 进行了含量测
定 o并与原二倍体药材进行含量比较 ∀
1 仪器 !试剂与样品
高效液相色谱仪 美国 • ¤·¨µ¶xts 双泵 ow{y
˜ ∂ r√¬¶紫外可见检测器 o• ⁄2|x色谱工作站 ∀欧
前胡素标准品由中国药品生物制品检定所提供 o所
#yuw#
第 uz卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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