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Determination of Epimedin C and Icariin in Herba Epimedii by HPLC

高效液相色谱法测定淫羊藿中淫羊藿定C和淫羊藿苷的含量



全 文 :u q÷¬¤±¼¤±ª …∏¦«¤±ª °«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ≤²°³¤±¼ ¬°¬·¨§o ÷¬¤±¼¤±ª ztusss o≥«¤±¬¬o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ³µ²√¬§¨ µ¨©¨ µ¨±¦¨ ©²µ·«¨ °¬¦µ²¶¦²³¬¦¬§¨ ±·¬©¬¦¤·¬²± ²©¦¤∏¯¬¶«¨µ¥q Μετηοδ : ≥¼¶·¨°¤·¬¦¤µµ¤±ª¨ ° ±¨·
¤±§¦²°³¤µ¤·¬√¨¶·∏§¬¨¶º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§²∏·²±·«¨ °¬¦µ²¶·µ∏¦·∏µ¨ ²© ° §¨¬¦¬±¤¯ «¨µ¥²©§¬©©¨ µ¨±·ªµ²∏³¶¤±§¶«¤³¨¶qΡεσυλτ : × «¨ µ∏¯¨¤±§
¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶²©·«¨ °¬¦µ²¶·µ∏¦·∏µ¨ ²©¦¤∏¯¬¶«¨µ¥ º µ¨¨ §¬¶¦∏¶¶¨§o¤±§·«¨ ¶²µ·¬±ª¶¨¤µ¦« ¬¯¶·²©·«¨ °¬¦µ²¶·µ∏¦·∏µ¨ ²©¦²°°²± ¦¤∏¯¬¶
«¨µ¥ º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §qΧονχλυσιον : × «¨ °¬¦µ²¶·µ∏¦·∏µ¨ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶²©¦¤∏¯¬¶«¨µ¥o¤¶·«¨ µ¨©¨ µ¨±¦¨ ²©·«¨ °¬¦µ²¶¦²³¬¦¬§¨ ±·¬©¬¦¤·¬²±
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[ Κεψ ωορδσ] ©²¯¬∏° «¨µ¥¶~ °¬¦µ²¶·µ∏¦·∏µ¨
≈责任编辑 袁桂京 
高效液相色谱法测定淫羊藿中
淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷的含量
王明权t o毕志明t o李 萍t o季 晖t o陈飞龙u
kt q中国药科大学 生药学教研室 o江苏 南京 utssv{ ~
u q浙江佐力药业股份有限公司 研发中心 o浙江 杭州 vtvussl
≈摘要  目的 }测定不同种和不同产地的淫羊藿中淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷的含量 o探讨淫羊藿药材的质量控
制方法 ∀方法 }色谱柱为 ‹¼³¨µ¶¬¯ …⁄≥2≤t{kw °° ≅ uxs °° ox Λ°l o以乙腈2s qsx h 磷酸作为梯度洗脱流动相 o
Štvtx „光电二极管阵列检测器 o检测波长uzu±° ∀结果 }淫羊藿定 ≤和淫羊藿苷平均回收率分别为|| qz h o
tsu qx h o• ≥⁄分别为 t qx h ot qt h ∀结论 }本方法快速 o重现性和稳定性好 o可用于淫羊藿药材质量控制 ∀
≈关键词  淫羊藿 ~淫羊藿定 ≤ ~淫羊藿苷 ~ • °2‹°≤ 法
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltt2tsux2sv
淫羊藿为常用中药 o具有补肾壮阳 o祛风除湿等
功效≈t  ∀ 5中国药典6kusss年版l收载为小檗科植
物淫羊藿 Επι µεδιυ µ βρεϖιχορνυ µ ¤¬¬° q!箭叶淫
羊藿 Ε . σαγιττατυ µ k≥¬¨¥q ·¨∏¦¦ql ¤¬¬° q!柔毛
淫羊藿 Ε . πυβεσχενσ ¤¬¬° q!巫山淫羊藿 Ε .
ωυσηανενσε × q ≥ q ≠¬±ª!或朝鲜淫羊藿 Ε . κορε2
ανυ µ ‘¤®¤¬的干燥地上部分 ∀现代药理实验表明
淫羊藿具有多种药理活性 o临床报道对于冠心病 !高
血压病 !骨质疏松 !糖尿病 !肾虚 !神经衰弱等均有疗
效≈u ov  o药用和保健价值较高 o用量日益增大 o但因
种类多 o分布广 o在药材收购中常有品种混杂现象 o
使其质量控制具有较大难度 ∀国内许多学者 o在此
方面做了大量工作≈w2|  ∀郭宝林等≈w2z 曾对淫羊藿
≈收稿日期  ussu2tu2us
≈通讯作者  李萍 ר¯ }ksuxlxvuuww{ ∞2°¤¬¯}¯¬³¬±ª¯¬ƒ ³∏¥¯¬2
¦¯ q³··q­¶q¦±
进行了较全面质量分析 o建立了淫羊藿黄酮的
‹°≤分析方法 o但淫羊藿定 ≤k ³¨¬° §¨¬± ≤l和淫羊
藿苷k¬¦¤µ¬¬±l分离度不佳 ∀本文改善了梯度洗脱条
件 o缩短了分析时间 o且使淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷
达到基线分离 ∀
1 仪器 !试药与药材
‹°ttss高效液相色谱系统 }Štvtu„ 二元泵 o
Štvtx„光电二极管阵列检测器 o‹° ≤«¨ ° ≥·¤·¬²±
色谱数据工作站 ~× Švu{…万分之一天平k上海天平
仪器厂l ∀对照品淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷为自制 o
结构经  ≥ ot ‹2‘ • otv≤2‘ • 确证 o纯度经 ‹°≤
分析 ∴|{ h ∀乙腈为色谱纯 o水为纯净水 o磷酸为分
析纯 ∀实验样品采自陕西 !辽宁 !河南等地 o凭证标
本存于中国药科大学标本馆 ∀
2 方法与结果
2 q1 色谱条件 色谱柱 ‹¼³¨µ¶¬¯ …⁄≥2≤t{kw °° ≅
uxs °° ox Λ°l ~流动相以 „ s qsx h磷酸和 …乙腈
#xust#
第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨°¥¨µoussv
梯度洗脱 ∀ …按下列次序变化 }起始时 … uz h ~t
°¬± … vu h ~w qx °¬± … us h ~z °¬± … uz h ~tw °¬±
… vs h ~tx °¬± … {x h ~流速 t qs °#°¬±p t o检测波
长 uzu ±° o柱温 ux ε o进样量 us ˏ∀对照品和样
品色谱分离图见图 t o图 u ∀
图 t 对照品色谱分离图
t q淫羊藿定 ≤ u q淫羊藿苷 k图 u同l
2 q2 线性关系考察 取对照品淫羊藿定 ≤ 和淫羊
藿苷各约 ux °ªo精密称定 o分别置 ux °量瓶中 o
加甲醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o即得淫羊藿定 ≤
s q|{x ª#p t o淫羊藿苷 t qsvv ª#p t的储备溶液 ∀
分别精密吸取 u种对照品储备溶液 ts ous ows oys o
{s otss ˏo于 u °量瓶中 o加甲醇稀释至刻度 o依
次进样 o以不同浓度时对照品峰面积积分值k Ψl对
淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷的进样量k Ξl进行回归 o得
回归方程及线性范围分别为 }淫羊藿定 ≤ oΨ €
s .sytx Ξ n s .zyyu(ρ € s q||| {l o线性范围 s qs|{
∗ s q|{ Λª~淫羊藿苷 oΨ € s .swu{ Ξ p s .svzz(ρ €
s q||| {l o线性范围 s qts ∗ t qs Λª∀
图 u 供试品色谱分离图
2 q3 供试品制备 取淫羊藿药粉k过 ws目筛 oys
ε 烘 w «l约 tss °ªo精密称定 o置于 tss °圆底烧
瓶中 ovs h乙醇 {s ε 水浴上热回流提取 u次 o每次
ux qs °o提取时间分别为 u ot «∀过滤 o合并滤液 o
减压回收溶剂 o残渣定量转移至 xs °量瓶中 o
vs h乙醇稀释至刻度 os qwx Λ°微孔滤膜滤过 o即
得供试品溶液 ∀
2 q4 精密度试验 同一对照品溶液 o重复进样 x
次 o测定淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷峰面积 o结果日内
精密度分别为u qs h ou qx h o日间精密度分别为
u qv h ou qs h ∀
2 q5 重复性试验 取同一产地药材样品 o按 2 q3 项
下方法制备 x 份 o测定淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷含
量 o• ≥⁄分别为 s q{ h os qx h ∀
2 q6 稳定性试验 取同一供试品溶液 o按 2 q1 项下
色谱条件 o在 s ot ou ow和 { «分别测定淫羊藿定 ≤
及 淫羊藿苷的含量 o• ≥⁄分别为 s qx h os qx h ∀
2 q7 加样回收率试验 精密称取已知含量的淫羊
藿药材粉末 xs °ªo|份 o分别加入对照品溶液 v个
量各 v份 o按 2 q3 项下制备 o测定含量并计算 o结果
淫羊藿定 ≤ 和 淫羊藿苷回收率分别为 || qz h o
tsu qx h o• ≥⁄分别为 t qx h ot qt h ∀结果见表 t ∀
表 t 加样回收率试验结果
样品重量r°ª
样品中
含量r°ª
加入量
r°ª
测得值
r°ª
回收率
r h
ξ
r h
淫羊藿定 ≤ xt qy s q{|{ s qzuu t qyt |{ qy || qz
xu qz s q|tz s qzuu t qyw tss qt
xu q{ s q|t| s qzuu t qyx tst qu
xu qy s q|tx s q|su t q{u tss qv
xt q| s q|sv s q|su t q{v tsu q{
xu qz s q|tz s q|su t q{t || qs
xu qx s q|tv t qs{ t q|{ |{ qt
xu q| s q|us t qs{ t q|z |z qu
xu qz s q|tz t qs{ u qst tss q|
淫羊藿苷 xt qy t qvz t qtu u qxv tsv qy tsu qx
xu qz t qws t qtu u qxz tsw qw
xu q{ t qws t qtu u qxx tsu qz
xu qy t qws t qws u q{w tsv qs
xt q| t qv{ t qws u qz| tss qz
xu qz t qws t qws u q{v tsu qt
xu qx t qv| t qy{ v qs| tst qu
xu q| t qwt t qy{ v qtw tsv qs
xu qw t qv| t qy{ v qts tst q{
2 q8 样品含量测定 依 2 q3 项下方法制备 y个样
品的供试液 o含量高的样品适当稀释使在线性范围
之内 o按 2 q1 项下色谱条件测定 o记录峰面积 o按外
标法计算含量 o结果见表 u ∀
表 u 不同种和不同产地淫羊藿中
淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷的含量 h
样品 植物学名tl 产地 淫羊藿定 ≤ 淫羊藿苷
心叶淫羊藿

Επι µεδιυ µ
βρεϖιχορνυ µ
陕西

t .xu

t .zt

箭叶淫羊藿 Ε . σαγιττατυ µ 河南信阳 s .us s .zs
河南郑州 s .x{ u .uw
朝鲜淫羊藿 Ε . κορεανυ µ 辽宁本溪 s .t| s .zv
柔毛淫羊藿 Ε . πυβεσχενσ 四川 t qvy s qu|
商品k盐城l u quz s q{v
注 }tl李萍教授鉴定
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第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨°¥¨µoussv
3 讨论
3 q1 本试验曾选用甲醇2水 !乙腈2水进行等度洗脱
和常规的流动相极性逐渐减小的梯度洗脱条件 o均
没有得到满意的结果 ∀最终采用本文的梯度洗脱条
件 o使淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷得到了很好的基线分
离 o并且样品中其他成分也具有很好的分离度 o同时
该方法缩短了分析时间 ∀对于流动相中酸的选用 o
比较了磷酸和乙酸 o以磷酸的效果较佳 ∀
3 q2 试验中选择比较了甲醇 !|x h 乙醇 !zs h 乙
醇 !xs h乙醇 !vs h乙醇和 tx h乙醇 y种提取溶剂 o
并考察了提取方法 !时间和溶剂体积等 o试验结果表
明以 vs h乙醇 {s ε 水浴热回流提取 u次 o提取溶
剂每次 ux °o回流时间分别为 u ot «的提取方法 o
提取效果最好 ∀
3 q3 5中国药典6usss年版中 o淫羊藿质量控制指
标为淫羊藿苷 ∀本试验在测定的 y个样品中 o柔毛
淫羊藿样品中淫羊藿定 ≤ 的含量高于淫羊藿苷 o箭
叶淫羊藿和朝鲜淫羊藿样品中淫羊藿苷也并非是唯
一主要成分 o淫羊藿定 ≤ 也是主要成分之一 o故本
文认为以多指标来考察淫羊藿质量更为科学 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 q一部 qusss quy{ q
≈u  周件贵 q近几年药用淫羊霍的研究进展 q时珍国药研究 ot||y ou
kyl }{z q
≈v  孙国华 q淫羊藿的综合研究与开发利用 q中国中医信息杂志 o
t||z owkwl }tv q
≈w  郭宝林 o王春兰 o肖培根 o等 q箭叶淫羊藿黄酮类成分分析和质
量评价 q中草药 ot||y ouzktsl }x{w q
≈x  郭宝林 o肖培根 q四川产淫羊藿属植物的黄酮类成分分析 q华西
药学杂志 ot||y ottkul }zx q
≈y  郭宝林 o肖培根 qx种淫羊藿的不同部位的黄酮类成分分析 q中
国中药杂志 ot||y outk|l }xuv q
≈z  郭宝林 o王春兰 o陈建民 o等 q药典中 x种淫羊藿中黄酮类成分
的反相高效液相色谱分析 q药学学报 ot||y ovtkwl }u|u q
≈{  张 艺 q{种川商品淫羊藿总黄酮的含量测定及资源利用 q中
国中药杂志 ot||x ouskwl }ust q
≈|  张 艺 o肖崇厚 o钟国跃 q‹°≤ 法测定川产淫羊藿属植物的淫
羊藿甙含量 q中国中药杂志 ot||x ouskxl }uyx q
∆ετερµινατιον οφ Επιµεδιν Χ ανδ Ιχαριιν ιν Ηερβα Επιµεδιι βψ ΗΠΛΧ
• „‘Š ¬±ª2 ∏´¤±t o…Œ «¬2°¬±ªt oŒ °¬±ªt oŒ ‹∏¬t o≤ ‹∞‘Š ƒ ¬¨2¯ ²±ªu
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水飞蓟宾脂质体包封率及其水飞蓟宾含量测定
余江南 o徐希明 o朱 源 o高 昊
k江苏大学 药学院 o江苏 镇江 utusstl
≈摘要  目的 }建立一种一阶导数紫外分光光度法测定水飞蓟宾脂质体包封率及脂质体中水飞蓟宾含量 ∀方
≈收稿日期  ussv2s{2tx
≈基金项目  江苏省自然科学基金资助项目k…Žussusszl ~江苏高校高新技术产业化项目k‹st2sytl
≈通讯作者  余江南 ר¯ }ksxttlxsv{tvx
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第 u{卷第 tt期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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