全 文 ：苦参注射液生物碱类成分指纹图谱的研究
马仁玲t o周红华t o于喜水u o盛龙生t
kt q中国药科大学 分析测试中心 o江苏 南京 utsss| ~
u q黑龙江医药工业研究所 o黑龙江 哈尔滨 txsswsl
≈摘要 目的 }建立中药苦参k包括药材 !中间体及注射液成品l中生物碱类成分 °≤ 指纹图谱的测试方法 ∀
方法 }利用 °2°≤ o采用线性梯度洗脱等进行指纹图谱的测定 o并应用 ≤r ≥技术指认指纹图谱中的主要色谱
峰 ∀结果 }获得了较为理想的中药苦参生物碱类成分的 °≤ 指纹图谱 o比较了苦参药材 !中间体及注射液成品间
的相关性 o根据 ≥所提供的分子量信息 x个色谱峰被指认 ∀结论 }本法可得到精密度 !重复性和稳定性较好的中
药苦参生物碱类成分的 °≤ 指纹图谱 o为中药苦参的质量控制提供有效手段 ∀
≈关键词 指纹图谱 ~苦参 ~生物碱
≈中图分类号 u{v ~ u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvls|2s{tz2sv
苦参 Σοπηορα φλαϖσεχενσ ¬·q是一种常用中药 o
为豆科槐属植物苦参的干燥根 ∀具有清热利湿 !祛
风杀虫 !抗肿瘤≈t !抑菌≈u 等作用 ∀苦参中主要含
有生物碱 !黄酮等化学成分 o其有效成分为生物碱 ∀
从苦参中已分离出苦参碱 !氧化苦参碱等多种生物
碱成分≈v ow ∀中药指纹图谱是近几年提出的 !目前
国际上公认的控制中药或天然药物质量的最有效的
手段之一≈x ∀本文采用 °≤2 ≥法对中药苦参中
生物碱类成分进行了指纹图谱的研究 ∀
1 实验部分
1 q1 仪器与试药
ª¬¯¨ ±·ttss ≤r ≥⁄液相色谱r质谱联用仪 }
具二元梯度泵 !在线真空脱气机 !自动进样器 !恒温
柱箱 !⁄⁄检测器 !电喷雾k∞≥l接口 ! ≥⁄检测
器 !ª¬¯¨ ±·化学工作站 ∀试剂 }甲醇k色谱纯 o美国
× §¨¬¤公司l ~醋酸铵k分析纯 o南京化学试剂厂l ~水
为超纯水 ∀
药材 }苦参药材产自黑龙江泰康县k黑龙江医药
工业研究所于喜水研究员鉴定l !苦参注射液中间体
和注射液成品由黑龙江医药工业研究所提供 ∀
1 q2 实验方法
1 q2 q1 供试品的制备 药材样品处理 取苦参
药材粉末k过 ws目筛l约 tªo置于 txs °圆底烧瓶
≈收稿日期 ussu2tu2sw
≈通讯作者 ר¯ }ksuxlvuztxys ∞2°¤¬¯}°¤µ¨±¯¬±ª ¶²«∏q¦²°
中 o加水 xs °o回流 t «k沸腾开始计时l o用滤纸滤
过 o取续滤液放冷 o经 s qwx Λ°的微孔滤膜滤过 o即
得供试品 ∀
中间体 称取中间体约 tss °ª置 xs °的容
量瓶中 o以流动相 溶解制成约 u ª#pt的溶液 o然
后经 s qwx Λ°的微孔滤膜滤过 o即得供试品 ∀
注射液 将注射液成品直接以 s qwx Λ°的微
孔滤膜滤过 o即得供试品 ∀
取以上供试品各 x Λ分别注入 ≤r ≥ 联用
仪进行测定 ∀
1 q2 q2 参照物 以指纹图谱中氧化苦参碱k保留
时间约 ts °¬±l作为指纹图谱的参照物 ∀
1 q2 q3 色谱条件 色谱柱 ²µ¥¤¬ ∞¬·¨±§2≤t{柱 o
u qt °° ≅ xs °° ox Λ° ∀保护柱 ²µ¥¤¬ ∞¬·¨±§2≤t{
柱 ou qt °° ≅ tu qx °° ox Λ° ∀柱温ux ε ~流速
s qx °# °¬±p t ∀检测波长 uus ±° ∀记录时间 ys
°¬±∀
流动相 }s qst °²¯#p t的醋酸铵水溶液 o用浓
氨水调 ³ 为 { qs ~
}s qss{ x °²¯#p t的醋酸铵甲
醇水溶液k甲醇2水 |Βtl o采用梯度洗脱 } s h
ϖ
vs °¬±
ws h
ϖ
ux °¬±
tss h
kx °¬±l ϖ
t °¬±
s h
kx °¬±l ∀
1 q2 q4 质谱条件 ≥记录总离子流k×≤l色谱
图 ∀离子扫描方式 ∞≥k n l ∀质量扫描范围 tus ∗
{ss ¤°∏∀毛细管电压 w sss ∂ ∀传输r裂解电压 zs
∂ ∀干燥气k u l流速ts # °¬±p t ~干燥气压力
#zt{#
第 u{卷第 |期
ussv年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv
uz| qx ®°¤~干燥气温度 vxs ε ∀
2 结果与讨论
2 q1 药材提取方法
考察了苦参药材的氯仿加浓氨溶液提取法 !水
提取法以及 xs h甲醇水溶液提取法 ∀氯仿加浓氨
溶液提取法和水提取法主要提取生物碱类成分 o提
取物相似 ∀xs h甲醇水溶液提取法则提取了生物碱
和黄酮两大类成分 ∀苦参的有效成分为生物碱 o因
指纹图谱主要考察与成品相关的类别成分 o综合各
方面的因素 o苦参药材采用水作为提取溶剂 ∀此法
能最大限度地保留供试品中的生物碱类成分 o提取
方法简便 !无毒且能保证药材与注射剂的指纹图谱
具有相关性 ∀
2 q2 色谱条件的选择
2 q2 q1 检测波长的选择 o苦参中所含的生物碱类
化学成分在 uts ∗ uvs ±° 范围紫外吸收较强 o在
uts ±°处吸收最强 o但综合考虑其末端吸收的干
扰 o°≤ 梯度洗脱中基线的稳定性等因素 o我们选
择 uus ±°作为检测波长≈y ∀
2 q2 q2 生物碱类物质因碱性较强 o所以液相分离
较困难 ∀试验中曾试用过氨基柱 }¼³¨µ¶¬¯°≥u
w qy °° ≅ txs °° ox Λ° ~⁄≥柱 }²µ¥¤¬
≥2
° w qy °° ≅ txs °° ox Λ° 和 ²µ¥¤¬ ∞¬·¨±§2≤t{
柱 ou qt °° ≅ xs °° ox Λ° ∀最后确定所使用的色
谱柱为 ²µ¥¤¬ ∞¬·¨±§2≤t{柱 ou qt °° ≅ xs °° ox
Λ° ∀色谱条件如 1 q2 q3 项下所示 o指纹图谱中各色
谱峰能达到较好的分离 ∀
2 q3 指纹图谱中参照物的选择
用外标法对照可知 o图谱中保留时间约为 ts
°¬±的色谱峰为氧化苦参碱 o考虑到氧化苦参碱的
标准品易得到 o其色谱峰与其他峰分离良好 o各批样
品中均为主峰 o且峰形稳定 o保留时间适中 o故采用
此峰作为参照物峰 ∀
2 q4 方法学考察
2 q4 q1 精密度试验 取同一供试品溶液k药材 !中
间体 !注射液l o连续进样 x次 o考察色谱峰的相对保
留时间和峰面积比值的一致性 ∀试验结果表明各色
谱峰的相对保留时间和峰面积比值的 ≥⁄值均小
于 v qs h o表明进样的精密度良好 ∀
2 q4 q2 稳定性试验 取同一供试品溶液k药材 !
中间体 !注射液l o分别在 uw «内不同时间段进样 o
考察色谱峰的相对保留时间和峰面积比值的一致
性 ∀试验结果表明各色谱峰的相对保留时间和峰面
积比值的 ≥⁄值均小于 v qs h o表明供试品溶液至
少在 uw «内稳定 ∀
2 q4 q3 重复性试验 取同一批号的供试品 x份
k药材 !中间体 !注射液l o按供试品的制备和检测方
法制备供试品和进行检测 o考察色谱峰的相对保留
时间和峰面积比值的一致性 ∀试验结果表明各色谱
峰的相对保留时间和峰面积比值的 ≥⁄值均小于
v qs h o表明其重复性良好 ∀
2 q5 中药苦参指纹图谱及其相关性
图 t为苦参药材 !中间体 !注射液的 °≤2 ∂
指纹图谱 ∀从图中可以看出 o苦参药材中 t ou ov ow o
x处的色谱峰在苦参中间体和注射液中的相应位置
也存在这些色谱峰 ∀由此可见 o苦参药材 !中间体和
注射液指纹图谱之间存在相关性 ∀
分别对 ts批苦参药材 !ts批中间体 !ts批注射
液的指纹图谱进行了测定 o其各色谱峰的相对保留
时间的 ≥⁄值均小于 u qs h o峰面积比值也具有稳
定性 ∀
图 t °≤2 ∂ 指纹图谱
¤q苦参药材 ¥q中间体 ¦q注射液k图 u同l
t q槐花醇 Ν2氧化物 u q氧化苦参碱 v qΝ2氧化槐碱
w q苦参碱 x q槐果碱或异槐果碱k图 u同l
2 q6 苦参指纹图谱中主要色谱峰的指认
采用 ≤2∞≥2 ≥⁄联用技术 o我们指认了苦参
药材指纹图谱中的 x个色谱峰 ∀图 u为苦参药材 !
#{t{#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv
中间体 !注射液的质谱的总离子流色谱图k×≤l ∀
我们根据质谱所提供的分子量信息 o结合文献报道 o
对指纹图谱中的主要色谱峰进行了归属 o其质谱数
据见表 t ∀
图 u ≥ ×≤ 指纹图谱
表 t 主要色谱峰的鉴别
峰号 分子量 化合物
t u{s 槐花醇 Ν2氧化物
u uyw 氧化苦参碱
v uyu Ν2氧化槐果碱
w uw{ 苦参碱
x uwy 槐果碱或异槐果碱
≈参考文献
≈t 李金陵 o程爱明 o荆宇红 o等 q中药苦参抗肿瘤作用的实验研
究 q中国肿瘤临床与康复 oussu o|kul }u{ q
≈u 蒋莲芳 o蒋亚生 q苦参药理研究进展 q时珍国医国药 ousss ott
kvl }uz{ q
≈v 白世泽 o何继华 o杨泽铨 o等 q苦参生物碱成分的研究 q氧化
苦参碱及其它生物碱成分的分离 q中草药 ot|{u otvkwl }{ q
≈w ®∏§¤≥ o ∏µ¤®²¶«¬o¤°¤·¤ o ·¨¤¯ q≥·∏§¬¨¶²± ∏³¬± ®¯¤2
²¯¬§¶q q ׫¨ ¬±²µ ®¯¤¯²¬§¶²© ¤³¤±¨ ¶¨ ≥²³«²µ¤ ©¯¤√ ¶¨¦¨±¶q
≤«¨ ° °«¤µ°
∏¯¯ot|yx otvkwl }w{u q
≈x 屠鹏飞 q中药指纹图谱指定的方法学讨论 q现代化中药产业
关键技术系列研讨会k一l }国际色谱指纹图谱评价中药质量研
讨会 q广州 qusst q
≈y 金莉霞 o崔燕岩 o章观德 q苦参生物碱的高效液相色谱法测定 q
药学学报 ot||v ou{kul }tvy q
Στυδψ ον τηε Φινγερπριντσ οφ τηε Αλκαλοιδσιν Σοπηορα φλαϖεσχενσ
±¨2¯¬±ªt o ²±ª2«∏¤t o ≠ ÷¬2¶«∏¬u o≥∞ ²±ª2¶«¨ ±ªt
kt q≤ ±¨·¨µ©²µ±¶·µ∏° ±¨·¤¯ ±¤¯¼¶¬¶o≤«¬±¤³«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ±¬√ µ¨¶¬·¼ o ¤±¬±ª utsss| o¬¤±ª¶∏o≤«¬±¤~
u q ¬¨¯²±ª¬¤±ª ¦¤§¨ °¼ ²© §¨¬¦¤¯ ±§∏¶·µ¼ o¤¨µ¥¬± txssws o ¬¨¯²±ª¬¤±ªo≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ ° ·¨«²§©²µ°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©·«¨ ¤¯®¤¯²¬§¶¬± Σ . φλαϖεσχενσq Μετηοδ :
°2°≤ o¯¬±¨ ¤µªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²± o≤r ≥ o¨·¦q º µ¨¨ ∏¶¨§·² §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¤±§¬§¨ ±·¬©¼·«¨ °¤¬± ³¨ ¤®¶¬±·«¨ °≤ ©¬±2
ª¨µ³µ¬±·q Ρεσυλτ : ¶¤·¬¶©¤¦·²µ¼ ° ·¨«²§©²µ°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©·«¨ ¤¯®¤¯²¬§¶¬± Σ . φλαϖεσχενσq º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §o¤±§x
³¨ ¤®¶¬±·«¨ °≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§qΧονχλυσιον : × «¨ ³¨µ©¨ ¦·©¬±ª¨µ³µ¬±·¦¤± ¥¨ ²¥·¤¬±¨ §¤±§·«¨ ° ·¨«²§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ
∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²© Σ . φλαϖεσχενσq
[ Κεψ ωορδσ] °≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·~Σοπηορα φλαϖεσχενσ~¤¯®¤¯²¬§¶
≈责任编辑 袁桂京
本刊自 t||x年 t月 t日开始对来稿收取处理费k每篇 tsss字以下 vs元 otsss字以上 xs元l o请作者在
寄发稿件的同时将处理费通过邮局寄汇本刊k请勿在稿件中夹带现金l ∀汇单上请注明论文题目及第一作者
姓名 ∀收款地址 }北京市东直门内南小街 ty号5中国中药杂志6社 o邮编 tsszss ∀
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