全 文 ：≈参考文献 
≈t  陆付耳 o阮金兰 o余达经 o等 q试论微米中药 q世界科学技术2中
药现代化 ousst ovktl }tu q
≈u  韩国柱 q中草药药代动力学 q北京 }中国医药科技出版社 o
t||| quuz q
≈v  任光友 o张贵林 o卢素琳 q六味地黄丸对阴虚动物的药理作用
研究 q中成药 ot||| outkttl }x{y q
≈w  陈玉祥 o刘劲松 o伊纯得 q降糖饮降糖作用的实验研究 q湖南
医科大学学报 ot||z ouukxl }v|z q
≈x  杨 君 o邹全明 o王东昕 q鳖甲超微细粉免疫调节功能实验研
究 q食品科学 ousss oukvl }ws q
Στυδψ ον Πηαρµ αχολογψ οφ Υλτρα2φινε Παρτιχλεσ Χοµ πουνδ Ρεηµ αννια
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≈责任编辑 方文贤 
板蓝根 ƒsuu部位抗内毒素活性研究
林爱华 o方淑贤 o方建国 o杜 光 o刘云海
k华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }研究板蓝根 ƒsuu部位抗内毒素活性并初步探讨其作用机理 ∀方法 }∞Œ≥„ 法检测内毒素刺激
鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子 Αk× ‘ƒ2Αl !白介素 ykŒ2yl 水平 ~内毒素致兔发热实验 ~内毒素致 …≤ Š增敏小
鼠死亡实验 ∀结果 }ƒsuu与 °≥同时或 ƒsuu提前 t «处理巨噬细胞 o能显著性抑制上清中 × ‘ƒ2Α和 Œ2y水平 ∀先给
予 ƒsuu o能拮抗内毒素所致家兔发热反应 o显著延长 …≤ Š增敏小鼠受 °≥攻击后的存活时间 o并呈剂量依赖性 ∀
结论 }以上结果提示 ƒsuu对内毒素拮抗作用发生在 °≥激活机体免疫系统之前 o该过程 ƒsuu可能竞争性阻断 °≥
与其受体的结合 ∀
≈关键词  板蓝根 ~ƒsuu部位 ~抗内毒素活性 ~× ‘ƒ2Α~Œ2y
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsy2swv|2sw
细菌内毒素k ±¨§²·²¬¬±l的主要成分是革兰阴性
菌细胞壁外膜中的脂多糖 k¬³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ o
°≥l o当其侵入机体血流 o可激活全身防御系统而
≈收稿日期  usst2sy2tw
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|{zs{zul
≈通讯作者  电话 }ksuzl{vywx{ty
产生多种生物活性物质 o包括肿瘤坏死因子 Αk× ‘ƒ2
Αl !白介素 ykŒ2yl !一氧化氮k‘’l等各种细胞因
子 ∀大量细胞因子的释放可触激体内一系列病理生
理过程而引起发热 !休克 !弥散性血管内凝血 !多器
官功能性衰竭 o以致死亡 ∀我们早期研究证明板蓝
根具有抗内毒素作用 o其中氯仿部位作用最强≈t ou  ∀
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第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qy
∏±¨ qoussu
为进一步研究板蓝根抗内毒素活性物质 o本文将其
氯仿提取物经不同极性溶剂梯度洗脱 o得到 ƒsuu部
位 o研究 ƒsuu的抗内毒素活性并对其作用机理作初
步探讨 ∀
1 材料与方法
1 q1 药品与试剂
板蓝根 o购自邢台市药材公司 o经同济医院药学
部方建国副主任药师鉴定为十字花科植物菘蓝
Ισατισινδιγοτιχα ƒ²µ·q的干燥根 ∀
细菌内毒素kzss ∞˜r支 o批号 |{s|ts o福建省
药品检验所 ~x °ªr支 o≥¬ª°¤公司产品l ~卡介苗
k…≤ Š oxs °ªr支 o批号 ||s|st o上海生物制品研究
所l ~× ‘ƒ2Α和 Œ2y试剂盒k北京邦定泰克生物有限
公司l ~新生小牛血清k‘…≥ o批号 |{ttu{ o沈阳安迪
生物高科技公司l ∀ • ° Œ2tyws 细胞培养液kŠŒ…2
≤ ’公司l ~s q| h氯化钠注射液k‘≥ o批号 ssswu| o连
云港制药厂l ~层析硅胶ktss ∗ uss目 o青岛海洋化
工厂l ~氯仿 !甲醇 !石油醚等均为分析纯 ∀
1 q2 主要仪器
t{tx× ≤ 型 ≤ ’u 培养箱 o≥«¨ 2¯¤¥公司产 ~ Žv
型酶标仪 o ¤¥¶¼¶·¨° ⁄µ¤ª²±产品 ~ ≤v 型数字温
度计 o大连欧姆龙有限公司 ∀
1 q3 动物
≤xz…ry小鼠k α oy ∗ {周龄 o体重 tz ∗ t| ªl o
由同济医学院器官移植研究所提供 ∀大耳白家兔
k α ⎯ 兼备 o体重 u qs ∗ u qx ®ªl o昆明种小白鼠k ⎯ o
体重 t{ ∗ uu ªl o由同济医学院实验动物中心提供 o
均为清洁级 ∀
1 q4 ƒsuu的提取
取板蓝根 o粉碎 o用 |x h乙醇渗漉提取 o合并渗
漉液 o减压浓缩 o得浸膏 o用石油醚萃取至除尽石油
醚部位 o再用氯仿提取 v次 o合并氯仿提取液 o减压
蒸去氯仿 o得氯仿提取部位 o收率为 s q{ h ∀将氯仿
提取部位上硅胶柱 o以不同比例氯仿和甲醇作梯度
洗脱 o其中氯仿和甲醇为 tsΒt洗脱所得的极性部位
为 ƒsuu o收率为 wt q{ h ∀
1 q5 腹腔巨噬细胞的制备及培养
按文献≈v 方法 }取 ≤xz …ry 小鼠 o腹腔注射
…≤ Š u °ªr只 ow §后拉颈处死动物 o在无菌条件下
注入冰冷的 • ° Œ2tyws 培养液 x °k含 {s ˜ #
°p t青霉素 !tss Λª# °p t链霉素 !ts ˜# °p t肝
素l o轻揉腹部数次 o抽取腹腔液 o离心 o用无血清的
• ° Œ2tyws洗涤细胞 u次 o加入含 ts h灭活小牛血
清的 • ° Œ2tyws 培养液 o调整细胞浓度为 u ≅ tsy
个r°o加入 uw孔培养板内 o每孔 t °o置 vz ε o
x h ≤ ’u培养箱内培养 u «后 o用无血清的 • ° Œ2
tyws洗去非粘附细胞 o贴壁细胞即为巨噬细胞 ∀
1 q6 × ‘ƒ2Α和 Œ2y的诱生
取上述腹腔巨噬细胞 o按下面方式处理细胞 }≠
将终浓度为 xs ±ª# °p t °≥的 • ° Œ2tyws t °
培养巨噬细胞 t «后 o再加入 { qvy °ª#°p tƒsuu样
品液k相当于生药 u qx ª# °p tl及其空白对照 t
°~将终浓度 xs ±ª# °p t °≥与 ƒsuu样品液充
分混合后同时处理巨噬细胞并设不含 ƒsuu的空白对
照 ~≈将 ƒsuu样品液及 • ° Œ2tyws各 t °培养巨
噬细胞 t «后 o再加入终浓度为 xs ±ª#°p t的 °≥ ∀
分别培养 y «和 uw «后 o取上清液 o于 p us ε 保存
待测 ∀
1 q7 × ‘ƒ2Α和 Œ2y的定量检测
∞Œ≥„法测定各标准品和样品吸收光度值
k Αl o以各标准品浓度对 Α值作标准曲线 o结果表
明 × ‘ƒ2Α和 Œ2y浓度在 s qt ∗ ts ±ª#°p t与 Α值
具有良好的线性关系 ∀由标准曲线求算出待测样品
的 × ‘ƒ2Α和 Œ2y的含量 o作统计学 τ检验 ∀ × ‘ƒ2Α
抑制率 € k对照组浓度 p药物组浓度lr对照组浓度
≅ tss h ∀Œ2y抑制率的计算方法同上 ∀
1 q8 内毒素致兔发热实验
按5中国药典6/热原检查法0项下规定要求≈w 选
择体重和正常体温在规定范围内且每只经两次测定
正常体温差在 s qus ε 以内家兔 t{只 o随机分成 v
组 o每组 y只 o分别为模型对照组 !ƒsuu空白组和 ƒsuu
实验组 ∀分别自耳缘静脉按 x °#®ªp t注入 u qx ª#
°p t的 ƒsuu样品液 ∀
模型对照组给予等量的 ‘≥ ∀ts °¬±后注入 ws
∞˜#®ªp t内毒素液 oƒsuu空白组给予等量的 ‘≥ ∀
各组均于注射内毒素液后 s qx ot ou ov ow «测肛
温 ∀计算时间体温反应指数k× • Œo以梯形法求得的
温度时间曲线下面积l和最高温差k∃ Τ°¤¬l o作组间
τ检验 ∀
1 q9 内毒素致 …≤Š增敏小鼠死亡实验
每只小鼠按 tss °ª#®ªp t¬√给予 …≤ Š ots §后 o
随机分为 w组 o每组 us只 o分别为模型对照组 !高剂
量组kxs ª#°p tl !中剂量组kux ª#°p tl和低剂量
组ktu qx ª#°p tl ∀每 us ª灌胃 s qw °ot qx «后 o
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ussu年 y月
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静脉给予 °≥ w °ª#®ªp t ow{ «内观察小鼠死亡情
况 o与对照组作统计学 ςu检验 ∀
2 结果
2 q1 ƒsuu处理巨噬细胞的不同方式对其分泌 × ‘ƒ2
Α和 Œ2y的影响
以 v 种方式处理鼠腹腔巨噬细胞 o结果表明 o
°≥先处理巨噬细胞 t «k„l oƒsuu对 × ‘ƒ2Α和 Œ2y
水平无显著的抑制作用 ~ƒsuu与 °≥ 同时k…l或在
°≥前 t «k≤l处理巨噬细胞 oƒsuu能明显抑制巨噬
细胞分泌 × ‘ƒ2Α和 Œ2y o且 ≤ 处理方式的抑制作用
略强于 …k表 tl ∀
表 t ƒsuu对 °≥所致鼠腹腔巨噬细胞分泌 × ‘ƒ2Α和
Œ2y的影响k ξ ? σ, ν € vl
处理
方式
ƒsuu剂量
rª#°p t
× ‘ƒ2Α浓度
r±ª#°p t
× ‘ƒ2Α
抑制率r h
Œ2y浓度
±ª#°p t
Œ2y抑制
率r h
„ s u q{v ? s qtw w qsy ? s qxw
u qx u quv ? s qvz ut qus v qsz ? s qy{ uw qv{
… s u qyy ? s qxt w qzv ? s qwu
u qx t qtw ? s quxtl xz qtw t qyu ? s qwvul yx qy|
≤ s u q|t ? s quz w q{y ? s qvv
u qx t qsz ? s qtuul yv qvu t quw ? s qt|ul zw qw|
注 }与空白对照组比较kτ检验l tl Π s .st u) Π s qsstk表 u
同l
2 q2 ƒsuu对 °≥致兔发热模型的解热作用
如表 u所示 oƒsuu样品液本身无致热作用 o先给
予 ƒsuu后 o实验组的 × • Œw和 ∃ Τ°¤¬与对照组比较均
有显著性差异k Π s qstl o表明 ƒsuu能拮抗 °≥所
致兔发热反应 ∀预实验中 o我们先给予 °≥ o发现该
药对发热家兔无解热作用k数据未给出l
表 u ƒsuu对 °≥致热家兔解热作用k ξ ? σ, ν € yl
组别 基础体温r ε × • Œwr¦°u ∃ Τ°¤¬r ε
模型对照组 v| quu ? s qtx v qss ? s qw| t qsx ? s qtz
ƒsuu空白组 v| qtu ? s qt{ s qsu ? s qtt s qt{ ? s qsv
ƒsuu实验组 v| qtz ? s qt{ t qtv ? s qtztl s qwz ? s qs{tl
2 q3 ƒsuu对 °≥致 …≤Š增敏小鼠死亡的保护作用
对照组小鼠受 °≥攻击后 x «出现死亡高峰 o
死亡率达 zs h ∀ ƒsuu的高 !中 !低 v个剂量均能延长
…≤ Š增敏小鼠受 °≥攻击后存活时间 o该保护作用
呈剂量依赖性 o在高 !中 !低 v个剂量下 o…≤ Š增敏小
鼠受 °≥攻击后死亡率分别为 us h ovs h owx h o低
剂量组与对照组比较无显著性差异k Ё s qsxlk见
图 tl ∀
3 讨论
细菌内毒素与靶细胞相互作用可表现出广泛的
图 t ƒsuu对 °≥所致 …≤ Š增敏小鼠死亡的保护作用
与空白对照组比较kς u检验l tl Π s .sx u) Π s qst
生物学活性 o从分子水平上看 o该作用主要通过内毒
素和其受体 ≤⁄tw之间特异性结合来介导 o°≥与
受体结合后 o通过 Š 蛋白偶联 o激活蛋白激酶 ≤
k°Ž≤l o完成信号跨膜转导 o激活单核巨噬细胞 o促
进 × ‘ƒ2Α和 Œ2y等炎性因子的释放 ∀临床上常见
的内毒素性疾病主要是通过内毒素诱导细胞因子和
炎性介质而发生的 o因此检测细胞因子和炎性介质
的释放可反映对内毒素的清除作用 ∀
我们前期研究证明≈t !x  o板蓝根氯仿提取物能
直接中和 °≥ o破坏其超微结构 o并能显著抑制鼠腹
腔巨噬细胞分泌 × ‘ƒ2Α和 Œ2y ∀本文以 ƒsuu和 °≥
处理鼠巨噬细胞不同顺序探讨其对巨噬细胞分泌
× ‘ƒ2Α和 Œ2y的影响 o结果发现 ƒsuu提前 t «和同
时与 °≥处理鼠巨噬细胞 o两种方式均能显著抑制
× ‘ƒ2Α和 Œ2y的分泌 ~若将 °≥提前 t «处理鼠巨
噬细胞 o则 ƒsuu抑制作用不明显 ∀提示 ƒsuu对炎性
因子抑制作用可能是 ƒsuu先将细胞膜上的受体封闭
后 o进而抑制 °≥与其受体的结合 o而对 °≥激活
的巨噬细胞无抑制作用 ∀
致热是内毒素最主要的生物活性之一 ∀一般 t
±ª水平的内毒素足以引起健康成人发热反应 o这种
发热反应自应用内毒素后的 s qx «出现 o并可持续 w
«左右 ∀注射内毒素后可见兔耳 !唇 !眼发红 o兔体
温升高 o烦渴喜饮 ∀本实验证明 o先给予 ƒsuu o该药
对兔热模型具有显著的解热作用 ~若先注射 °≥ o则
无解热作用 ∀提示该解热作用发生在内毒素刺激机
体免疫系统发挥生物学效应之前 ∀
不同实验动物对内毒素的敏感性有很大的差
异 o小鼠为低敏感动物 ∀有很多方法可增强小鼠对
内毒素的敏感性 o如切除肾上腺 !免疫抑制 !肝损伤 !
感染等 ∀不同增敏方法还可用于探讨药物抗内毒素
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作用的机制 o本实验采用 …≤ Š增敏 o其作用机制通
过刺激 × 细胞后活化巨噬细胞 o激活的巨噬细胞的
有丝分裂和代谢能力大大增强 o对 °≥的识别应激
能力进一步提高≈y  ∀ …≤Š增敏小鼠受 °≥刺激后
机体能产生较高的 × ‘ƒ2Α水平 ∀过高的 × ‘ƒ2Α是
引起小鼠死亡的重要因素 ∀本实验证明 ƒsuu能显著
延长 …≤ Š增敏小鼠受 °≥攻击后的生存时间 o且呈
剂量依赖性 ∀
综上所述 o ƒsuu对内毒素拮抗作用发生在 °≥
激活机体免疫系统之前 o该过程 ƒsuu可能竞争性阻
断 °≥与其受体的结合 ∀有关其抗内毒素机理还
需进一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  刘云海 q板蓝根抗内毒素作用研究 q中国药科大学学报 ot||x o
uykxl }u|z q
≈u  刘云海 o刘军民 o申正义 o等 q显色基质法检测板蓝根氯仿提取
物的抗内毒素作用 q同济医科大学学报 ot||x ouwktl }y| q
≈v  Ž²¥¤¼¤¶«¬ ≥ o Ž¤º¤·¤ × o Ž¬°∏µ¤ „ o ·¨¤¯ q ≥∏³³µ¨¶¶¬²± ²©
 ∏µ¬±¨ ∞±§²·²¬¬± • ¶¨³²±¶¨ ¥¼ ∞xxvt o„ ‘²√¨¯ ≥¼±·«¨·¬¦¬³¬§
„±·¤ª²±¬¶·q „±·¬°¬¦µ²¥ „±ª¨ ±·¶ ≤«¨ °²·«¨µo t||{ o wukttl }
u{uw q
≈w  中国药典 qusss q附录 ÷Œ⁄q
≈x  刘云海 o林爱华 o丁水平 o等 q板蓝根对内毒素致炎性因子的影
响 q中国药科大学学报 ousst ovukul }tw| q
≈y  ∂ ²ª¨¯ ≥ ‘o  ²²µ¨ • ‘o≥¬³¨  ⁄o¨·¤¯ q…≤ Š2¬±§∏¦¨§∞±«¤±¦¨2
° ±¨·²© ∞±§²·²¬¬± ≥ ±¨¶¬·¬√¬·¼ ¬± ≤v‹r‹ ¨ ¬¦¨ q  Œ°°∏±²¯ o
t|{s otuwktsl }ussw q
Στυδιεσ ον Αντι2ενδοτοξιν Αχτιϖιτψ οφ Φsuu φροµ Ραδιξ Ισατιδισ
Œ‘ „¬2«∏¤oƒ„‘Š ≥«∏2¬¬¤±oƒ„‘Š ¬¤±2ª∏²o⁄˜ Š∏¤±ªoŒ˜ ≠∏±2«¤¬
kײ±ª­¬‹²¶³¬·¤¯ o ײ±ª­¬  §¨¬¦¤¯ ≤²¯¯¨ ª¨ ²© ‹∏¤½«²±ª ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ≥¦¬¨±¦¨ ¤±§ × ¦¨«±²¯²ª¼ o • ∏«¤± wvssvs o ‹∏¥¨¬o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ¤±·¬2 ±¨§²·²¬¬± ¤¦·¬√¬·¼ ¤±§ ° ¦¨«¤±¬¶° ²© ƒsuu ©µ²° • ¤§¬¬Œ¶¤·¬§¬¶q Μετηοδ : × «¨ ³µ²§∏¦2
·¬²± ²© × ‘ƒ2Α¤±§Œ2y ²© °∏µ¬±¨ ³¨µ¬·²±¨ ¤¯ °¤¦µ²³«¤ª¨¶¶·¬°∏¯¤·¨§¥¼ °≥ º¤¶° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ∞Œ≥„ q׫¨ ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ¬±µ¤¥¥¬·¶º¤¶
·¨¶·¨§¤©·¨µ ιϖ ¤§°¬±¬¶·µ¤·¬²± ²© °≥ q ׫¨ ¯¨·«¤¯¬·¼ ²© …≤ Š2³µ¬° §¨ °¬¦¨ º¤¶¬±§∏¦¨§ ¥¼ °≥ q Ρεσυλτ : Œ© ƒsuu º¤¶¤§§¨ §·²
°¤¦µ²³«¤ª¨¶¦∏¯·∏µ¨ ¶¬°∏¯·¤±¨ ²∏¶¯¼ º¬·«°≥ ²µt « ¥¨©²µ¨ ¤§§¬·¬²± ²© °≥ o³µ²§∏¦·¬²± ²© × ‘ƒ2Α¤±§Œ2y ¥¼ °¤¦µ²³«¤ª¨¶º¤¶µ¨2
°¤µ®¤¥¯¼¬±«¬¥¬·¨§ ιν ϖιτρο qƒsuu ¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ©¨ √ µ¨¬±§∏¦¨§¥¼ °≥ ¬± µ¤¥¥¬·¶¤±§³µ²·¨¦·¨§ …≤ Š2³µ¬° §¨ °¬¦¨ ©µ²° °≥ ¬±§∏¦¨§
¯¨·«¤¯¬·¼¬©ª¬√ ±¨ ¥¨©²µ¨ ¤§°¬±¬¶·µ¤·¬²± ²©°≥ qΧονχλυσιον : × «¨ ¤±·¬2 ±¨§²·²¬¬± ©¨©¨ ¦·²©ƒsuu °¤¼¬±«¬¥¬·°≥ ¥¬±§¬±ª·²¬·¶µ¨¦¨³·²µo
¤±§¬·°¤¼ ¥¨ ¤ °≥ µ¨¦¨³·²µ¤±·¤ª²±¬¶·q
[ Κεψ ωορδσ] • ¤§¬¶Œ¶¤·¬§¬¶~ƒsuu ~¤±·¬2 ±¨§²·²¬¬± ¤¦·¬√¬·¼ ~ × ‘ƒ2Α~Œ2y ≈责任编辑 方文贤 
无毒棉籽水提物对皮质酮诱导的
°≤tu细胞损伤的对抗作用
李云峰 o杨 明 o赵毅民 o栾新慧 o罗质璞
k军事医学科学院 毒物药物研究所 o北京 tss{xsl
≈摘要  目的 }探讨无毒棉籽水提物k≤ × ‘2 • l抗抑郁 !抗焦虑作用的可能机理 ∀方法与结果 }提取大鼠大脑皮
层突触膜并与 ≤ × ‘2 • s qst os qsv os qts os qvs °ª#°p t直接孵育 o放免法测定腺苷酸环化酶k„≤l活性的改变 o发
现 ≤ × ‘2 • 可剂量依赖地激活 „≤ ~ × × 比色法研究表明 o≤ × ‘2 • s qs{ os qws ou qss °ª#°p t与皮质酮 u ≅ ts p w °²¯
#p t共孵 °≤tu细胞 w{ «后可防止皮质酮所致的 °≤tu神经细胞损伤 ∀结论 }≤ × ‘2 • 的作用可能与信号转导系统
„≤2¦„  °通路的激活 o从而对损伤神经元产生保护作用有关 o此二者共同组成了 ≤ × ‘2 • 的部分作用机制 ∀
≈收稿日期  usst2sv2t|
≈通讯作者  电话 }kstslyy{zwysy
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