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An Experimental Study of Effect of Different Extracts of Alisma Orientalis on Urinary Calcium Oxalate Stones Formation in Rats

泽泻提取物不同组分对尿草酸钙结石形成的实验研究



全 文 :组 o表明经过茶多酚干预的肝纤维化大鼠肠道内毒
素吸收或体内内毒素的清除功能增加 o结合茶多酚
药理作用的现有研究成果 o可能的机制是一方面茶
多酚本身具有的抗菌活性 o抑制和杀灭了肠道细菌 o
减少了内毒素的产生 ~另一方面可能是茶多酚在免
疫功能上的调节作用 o它可能通过调节枯否细胞的
免疫活性 o下调其介导的酒精性肝纤维化作用 ∀
总之 o本试验提示茶多酚对肝纤维化有一定的
阻断作用 o其作用机制可能是通过抗氧化作用和降
低体内内毒素水平而抑制肝纤维化的发展 ∀茶多酚
作为抗肝纤维化药可能具有良好的临床应用前景 o
早期应用可能会减慢或阻断肝纤维化的发生 ∀
≈参考文献 
≈t  ‹¬ª§²±  ∂ oƒµ¨¬…q × ¤¨ ≤¤·¨¦«¬±¶¤±§°²¯¼³«¨ ±²¯¶} ‹ ¤¨¯·« ∞©2
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≈u  朱向明 o赵振东 o黄志力 o等 q茶多酚预防高脂血症的实验研究 o
中国中西医结合杂志 ot||y otyk|l }xw| q
≈v  ‘²¯¤±  ° q ׫¨ • ²¯¨ ²© ∞±§²·²¬¬± ¬± ¬√ µ¨Œ±­∏µ¼ q Š¤¶·µ²¨ ±2
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Εφφεχτ οφ Τεα Πολψπηενολ ον Λιϖερ Φιβροσισιν Ρατσ ανδ Ρελατεδ Μεχηανισµ
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨ ¦·²©·¨¤³²¯¼³«¨ ±²¯k× °l. ¶²± ¬¯√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶¬± µ¤·¶¤±§¬·¶³²¶¶¬¥¯¨ ° ¦¨«¤±¬¶° q
Μετηοδ : • ¤·¶º µ¨¨ §¬√¬§¨ §¬±·² x ªµ²∏³¶ow ªµ²∏³¶²© º«¬¦« º µ¨¨ ¶·²°¤¦« ³¨µ©∏¶¨§ º¬·«¤¯¦²«²¯ µ¨¶∏¯·¬±ª¬± ¤¯¦²«²¯¬¦¬¯√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶o
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§¨·¨µ°¬±¨ §¤··«¨ ¶¤°¨·¬°¨qΡεσυλτ : ¬√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶¬± ×° ªµ²∏³ º¤¶¶¯¬ª«·o¤±§¤±·¬2²¬¬§¬½¨ ¬±§¨ ¬¤±§ ±¨§²·²¬¬±¯¨ √¨¯ º µ¨¨ °¤µ®¨ §¯¼
¬°³µ²√ §¨¬± ¦²°³¤µ¬¶²± º¬·«·«²¶¨ ²©¤¯¦²«²¯ ªµ²∏³¶qΧονχλυσιον : × ¤¨ ³²¯¼³«¨ ±²¯ ¦¤± ³µ²·¨¦·«¨ ³¤·²¦¼·¨¶©µ²° ©¬¥µ²¶¬¶qŒ·¶° ¦¨«¤2
±¬¶° ¬¶³²¶¶¬¥¯¼ §∏¨ ·² ¦¯ ¤¨±¬±ª∏³²√ µ¨©∏¯¯ ¬¯³¬§³¨µ2²¬¬§¤·¬²± ¤±§µ¨§∏¦¬±ª·«¨ ¯¨ √¨¯ ²© ±¨§²·²¬¬±q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¯√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶~·¨¤³²¯¼³«¨ ±²¯ ~µ¤·¶ ≈责任编辑 方文贤 
泽泻提取物不同组分
对尿草酸钙结石形成的实验研究
曹正国t o刘继红t o鲁德曼t o吴继洲u o尹春萍u o周四维t
kt q华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 o湖北 武汉 wvssvs ~
u q华中科技大学 同济医学院 药学院 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }研究泽泻提取物不同组分对尿草酸钙结石形成的影响 o并确定其抑制尿草酸钙结石形成的有
效部位 ∀方法 }通过喂服泽泻提取物不同组分对乙二醇和氯化铵诱导的大白鼠肾草酸钙结石模型进行实验研究 ∀
结果 }服用泽泻醋酸乙酯浸膏的醋酸乙酯洗脱液大鼠的血清尿素氮k…˜‘l o肌酐k≤µl o肾钙k≤¤u n l含量 ouw «尿
≤¤u n分泌量 o肾组织的草酸钙晶体沉积均明显低于成石组k Π s qsxl ∀结论 }泽泻醋酸乙酯浸膏的醋酸乙酯洗脱液
能抑制实验性高草酸尿症大白鼠体内肾草酸钙晶体的形成 o是泽泻抑制尿草酸钙结石形成的有效部位 ∀
≈关键词  尿石 ~草酸钙 ~泽泻 ~大鼠
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltt2stszu2sw
≈收稿日期  ussu2tt2us
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv||zs{|tl
≈通讯作者  曹正国 ר¯ }ksuzl {vyyvwsz ∞2°¤¬¯}½ª¦¤²ussu ƒ «²·°¤¬¯q¦²°
#uzst#
第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨°¥¨µoussv
中药泽泻是用于治疗泌尿系结石的常用传统中
药 o为了阐明泽泻治疗尿石症的物质基础及其作用
机理 o并提取和分离出一种或数种具有抑制尿草酸
钙结石形成的活性成分 o我们将泽泻抑制尿草酸钙
结石的泽泻醋酸乙酯浸膏有效活性部位进一步分
离 o得到几种泽泻提取物的不同组分来探讨它们对
尿草酸钙结石形成的影响 o现报告如下 ∀
1 材料和方法
1 q1 泽泻提取物不同组分的提取和分离
中药泽泻饮片产于福建 o由华中科技大学同济
医学院药学院吴继洲教授鉴定为 Αλισµ α οριενταλισ
k≥¤° ql ∏½¨ ³qo取 v |ux ªo用 xs h甲醇回流提取 o回
收甲醇至浸膏状kwus ªl ∀加适量水溶解后 o用水饱
和醋酸乙酯萃取得泽泻醋酸乙酯部位浸膏 vx ªo留
trw配样 o其余的用硅藻土拌样 o装柱 ∀分别用石油
醚 !醋酸乙酯 !甲醇依次洗脱后浓缩得醋酸乙酯浸膏
的石油醚洗脱液 s q|xx ª!醋酸乙酯浸膏的醋酸乙
酯洗脱液u qszxª !醋酸乙酯浸膏的甲醇洗脱液
s qyx{ ª∀将这 v种洗脱液和 w qwzv ª醋酸乙酯浸膏
分别与 ux qs °无水乙醇和 ux qs °山梨醇甲酯
混匀后 o用蒸馏水定容至 xss °k以上 v种溶液
的浓度均相当于每毫升含 t qs ª泽泻生药材l ∀
1 q2 实验方法
1 q2 q1 动物分组及给药方法 • ¬¶·¤µ健康雄性大
白鼠k由华中科技大学同济医学院实验动物学部提
供lys只 o体重 t{s ∗ uus ªo随机分为 y组 o每组 ts
只 o在清洁级环境室温下饲养 o合格证号 }t|2sxs ∀
购买后适应性饲养 t周 ∀具体分组如下 }„ 组k空白
对照组l ~…组k草酸钙结石成石组l }t h乙二醇k∞Šl
饮水十 u h氯化铵k„≤l每天灌胃 u °r只 ~≤ 组k泽
泻醋酸乙酯浸膏组l }在给予与 …组相同诱石剂的同
时 o每日给大鼠灌胃 t次kz次r周l泽泻醋酸乙酯浸
膏 x qs ª#®ªp tk体重l o以下各实验组以此类推 ~⁄组
k醋酸乙酯浸膏的石油醚洗脱液组l ~∞组k醋酸乙酯
浸膏的醋酸乙酯洗脱液组l ~ƒ 组k醋酸乙酯浸膏的
甲醇洗脱液组l ∀各组大鼠均饲养 w周 ∀
1 q2 q2 观察指标及检测方法 实验结束前一天用
代谢笼收集尿液并测 uw «尿量 o尿 ³‹ 值 ouw «尿草
酸k’¬l的分泌量k过氧化氢2盐酸苯肼法≈t l ∀断颈
处死大鼠 o下腔静脉穿刺取血k不抗凝l o离心kv xss
µ# °¬±p tlts °¬±后 o取上层血清测血 …˜‘o≤µo° o
≤¤u n含量k’ ¼¯°³∏¶ „∏tsss 自动分析仪l ∀切取双
肾 o纵向剖开 o取左侧肾脏用 ts h 中性福尔马林固
定 o作常规 ‹∞石蜡切片和 ∂ ²±2Ž²¶¶¤. ¶染色 o偏光
显微镜观察肾组织草酸钙结晶形态分布及肾组织的
病理改变 o日立 t{s2{s型原子吸收光谱仪进行右肾
组织 ≤¤u n o ªu n含量 o尿总 ≤¤u n o总  ªu n含量测
定 ∀
1 q3 统计学分析
所有检验结果均用 ξ ? σ表示 o组间差异用 τ检
验 o以 ≥„≥ y qtu统计软件进行分析 ∀
2 结果
2 q1 一般情况
泽泻提取物不同组分对大鼠 uw «尿量和尿 ³‹
值影响的结果如表 t所示 }∞组大鼠的 uw «尿量明
显多于 „和 …组 o差异有显著性意义k Π s qsxl o泽
泻的其余各提取物组大鼠的 uw «尿量与 „ 和 …组
相比 o差异无显著性意义k Ё s qsxl ∀泽泻各提取
物对大鼠尿 ³‹ 值均无明显影响 ∀
表 t 泽泻提取物不同组分对大鼠 uw «
尿量和尿 ³‹ 值的影响k ξ ? σ, ν € tsl
组别 uw«尿量r° 尿 ³‹ 值
对照组 tz qxy ? t qxu y quw ? s qxw
成石组 ty q|x ? s q{w y qux ? t qs|
醋酸乙酯浸膏 t| qtw ? t qyw y quy ? s q{s
浸膏石油醚洗脱 t{ qty ? t qzs y quy ? s qzy
浸膏醋酸乙酯洗脱 ux qsz ? t qw|tl y qux ? t qwv
浸膏甲醇洗脱 t| quw ? t qxw y quw ? s qxv
注 }与成石组相比 tl Π s qsx ul Π s qst
2 q2 血生化检查结果
y组大鼠的血清生化指标结果如表 u所示 }„组
血清 …˜‘o≤µ含量明显低于其他组 o差异有显著性
意义 ~与其他浸膏组相比 o≤ 组和 ∞组血清的 …˜‘
含量 o≤µ含量均明显低于 …组 o差异有显著性意义 ~
血清 ≤¤u n o°含量各组间差异均无显著性意义 ∀
2 q3 uw «尿 ’¬o≤¤u n o ªu n 分泌量和肾组织 o
≤¤u n o ªu n含量结果
y组大白鼠 uw «尿 ’¬o≤¤u n o ªu n分泌量和肾
组织 ≤¤u n o ªu n的含量结果如表 v所示 }„ 组 uw «
尿 ’¬o≤¤u n分泌量 o肾 ≤¤u n含量明显低于其他各
组 o差异有显著性意义 ~与其他浸膏组相比 o≤ o⁄o∞
组 uw «尿 ≤¤u n分泌量和肾 ≤¤u n含量均明显低于 …
组 o差异有显著性意义 ~uw «尿 ’¬分泌量除 „ 组
外 o各组间差异均无显著性意义 ~uw «尿  ªu n分泌
量 o肾  ªu n含量 o各组间差异均无显著性意义 ∀
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第 u{卷第 tt期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨°¥¨µoussv
表 u 泽泻提取物不同组分对大鼠血清生化检查结果k ξ ? σ, ν € tsl
组别 …˜‘r°°²¯#p t ≤µrΛ°²¯#p t ≤¤u n r°°²¯#p t °r°°²¯#p t
对照组 y quy ? t qtsul vw quv ? tt qs|ul u quz ? s qsw u q{{ ? s qw|
成石组 tt q{z ? u qzxwl {t q|u ? ty qyxwl u qwy ? s qs{ u q|| ? s qxu
醋酸乙酯浸膏 { q|{ ? u qt{t ovl yx qzv ? tt qywu owl u qv{ ? s qsw u qw| ? s qyw
浸膏石油醚洗脱 | qyz ? v quvvl {u qsz ? tv qt{wl u qwu ? s qsw u qyx ? s qv|
浸膏醋酸乙酯洗脱 { qsw ? t qust ovl yv q|s ? | qs{u owl u qvz ? s qsv u q{z ? s qx{
浸膏甲醇洗脱 tt qst ? u quxwl y| qss ? t| qvuwl u qw{ ? s qtu u qx{ ? t qss
注 }与成石组相比 tl Π s qsx ul Π s qst 与对照组相比 vl Π s qsx wl Π s qst k表 v同l
表 v 泽泻提取物不同组分对大鼠 uw «尿 ’¬o≤¤u n o ªu n分泌量
和肾组织 ≤¤u n o ªu n含量的结果k ξ ? σ, ν € tsl
组别
尿 ’¬
rΛ°²¯#uw «p t
尿 ≤¤u n
rΛ°²¯#uw «p t
尿  ªu n
r°°²¯#uw «p t
肾 ≤¤u n
r°ª#ªp t
肾  ªu n
rΛ°²¯#ªp t
对照组 uw quu ? y qw|ul v qtw ? s q|sul | qtt ? t qzx t qxw ? s qztul ts qx{ ? t qty
成石组 z{ qw{ ? tx qwxwl { qxv ? t qzvwl z qxy ? t qxx tu qyv ? u qu|wl | qyw ? u qxv
醋酸乙酯浸膏 zs qux ? ts qwzwl w qvt ? t qvxu ovl { qvs ? t qsz { qxy ? u qssu owl ts qys ? v qv|
浸膏石油醚洗脱 y| qyu ? tw qstwl x qt{ ? t qzuu ovl { qsu ? t q|| | qzs ? u qv|u owl | qs{ ? t q{s
浸膏醋酸乙酯洗脱 yx q{z ? tx q{vwl x qvw ? t qtsu ovl { qwt ? t qyw z qvu ? t qx|u owl ts qyz ? v qt{
浸膏甲醇洗脱 zv quu ? z qzvwl { qxt ? u qvxwl z qwu ? t qvu tt qus ? w qttwl | qyx ? u qtx
2 q4 肾组织病理学检查及偏光显微镜检查
肉眼观 }„组大鼠肾脏表面色泽均匀 o组织结构
清晰 o切面鲜红色 ∀除 „组外 o各组大鼠肾脏的大体
观察 o外形和切面颜色无差别 o但 …组大鼠肾脏明显
肿大 o切面苍白色 o用手触摸有明显之细砂摩擦感 o
皮质和髓质分界不清楚 o而其他组大鼠变化则不明
显 ∀常规病理切片 ‹∞染色之后 o草酸钙晶体在偏
光显微镜镜下显示为淡蓝色晶体 o不规则 !折光性较
强 ~∂²±2Ž²¶¶¤. ¶染色后 o草酸钙晶体呈黑褐色 ∀ „
组为正常肾组织结构 ~…组大鼠肾组织有多数结晶
形成 o结晶主要存在于肾乳头和肾皮质内 o部分结晶
成堆而且互相连接成片 o高倍镜下晶体主要存在于
近曲小管和远曲小管 o上皮细胞明显肿胀 !变性 !坏
死 o管腔明显扩张 o管腔内可见嗜伊红染色样坏死物
质及部分脱落上皮细胞 o周围有晶体聚集 o肾间质有
明显的慢性炎性细胞浸润 ~≤ o∞组大鼠肾组织中的
草酸钙晶体明显少于 …组 o仅有少数结晶分布在肾
皮质和髓质 o结晶大多散在不成堆 o管腔扩大也明显
比 …组轻 o管腔内也无明显的坏死脱落样物质 ~ ⁄
和 ƒ组肾组织病理改变与 …组类似 o但较轻 ∀
3 讨论
泽泻为植物泽泻的干燥块茎 o具有利水渗湿功
效 o可与多种中草药配伍组成治疗尿路结石的传统
方剂 o如猪苓汤 !五苓散等 ∀小川等≈t 研究证实猪苓
汤具有排石和体外抑制草酸钙结晶的作用 o认为猪
苓汤主要是通过降低尿草酸排泄量而抑制实验性大
白鼠尿草酸钙结石形成 ∀ ≠¤°¤ª∏¦«¬等≈u 和尹春萍
等≈v 在 ∞Š和 tΑk’ ‹l ∂¬·⁄v 诱导的实验性大白鼠
肾草酸钙结石模型中 o发现泽泻水提液能明显抑制
大白鼠尿草酸钙结石形成 o同时泽泻水提液对草酸
及钙的代谢没有影响 ∀其抑制结石的形成 o推测可
能是通过抑制草酸钙结晶的生长和聚集 o减少肾小
管内草酸钙晶体的形成和沉积 o从而抑制实验性大
白鼠尿草酸钙结石的形成 ∀
本实验采用 t h的乙二醇和 u h氯化铵灌胃诱
导大白鼠肾草酸钙结石形成 ∀乙二醇是草酸的代谢
前体 o从肠道吸收后 o在体内代谢转化为草酸 o通过
肾小球过滤后 o形成高草酸尿和草酸钙的过饱和状
态 o进而在肾脏形成草酸钙结石 ∀在诱石过程中 o随
着时间延长 o肾小球囊内草酸与同时排泄出的钙形
成的草酸钙晶体阻塞肾小管 o导致肾小管扩张 o肾小
管上皮细胞发生变性坏死 o脱落 o其中大量脱落的细
胞成为结石晶体形成的附着体 o管腔内便出现晶体
的微结石 ∀动物实验中 o…组大鼠的血清 …˜‘o≤µ
含量 ouw «尿 ’¬o≤¤u n分泌量和肾 ≤¤u n含量显著高
于 „组 o这与肾组织病理切片观察到的结果是一致
的 ∀而泽泻的醋酸乙酯浸膏 !醋酸乙酯浸膏的醋酸
乙酯洗脱液体内均能明显降低实验性草酸钙结石大
白鼠 uw «尿 ≤¤u n分泌量 o肾组织 ≤¤u n含量和草酸
钙晶体在肾组织内的沉积 o在一定程度上减轻了肾
#wzst#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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小管的扩张和肾功能的损害 ~同时泽泻的醋酸乙酯
浸膏的醋酸乙酯洗脱液组大鼠的 uw «尿量明显多
于正常对照组和成石组 o有较强的利尿作用 o因此能
抑制大鼠体内尿草酸钙结石的形成 ∀而且本研究显
示 o泽泻的各实验组体内均不能降低尿 ’¬的排泄 o
这与以往学者的研究结果是一致的 o进一步证实泽
泻的醋酸乙酯浸膏的醋酸乙酯洗脱液主要是通过增
加尿量 o阻止草酸钙结晶生长和聚集作用而抑制结
石形成 o是泽泻抑制尿草酸钙结石形成的有效活性
部位 ∀
川村等≈w 对泽泻具有体外抑制草酸钙结晶生长
和聚集的有效成分进行了研究 o发现主要是分子量
 ts sss 的物质 o并不含葡胺聚糖类物质 ∀ ‹²±§¤
等≈x 的研究发现 o泽泻煮沸提取的成分中分子量小
于 tss sss及 xs sss ∗ vss sss的成分有抑制草酸钙
结晶生长的作用 ∀我们将泽泻的醋酸乙酯浸膏的醋
酸乙酯洗脱液进行初步的碳 !氢核磁共振质谱分析 o
发现其主要成分主要是以四环三萜类化合物为主 ∀
因此 o有必要对泽泻抑制草酸钙结晶生长和聚集的
有效活性成分作进一步的研究 ∀
≈参考文献 
≈t  小川由英 q尿路结石 Κ对 9 κ 汉方制剂 Ν化学的解析 Κ关 7
Φ q汉方医 ot|{x ok|l }tt|
≈u  ≠¤°¤ª∏¦«¬≥ o¬«²±ª o ˜·¶∏±²°¬¼¤  o ·¨¤¯ q × «¨ ∞©©¨ ¦·²©
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≈v  尹春萍 o刘继红 o章咏裳 o等 q泽泻水提取液预防草酸钙结石形
成的体外及动物实验研究 q同济医科大学学报 ot||z ouykul }
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Αν Εξπεριµενταλ Στυδψ οφ Εφφεχτ οφ ∆ιφφερεντ Εξτραχτσ οφ Αλισµα
Οριενταλισ ον Υριναρψ Χαλχιυµ Οξαλατε Στονεσ Φορµ ατιον ιν Ρατσ.
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨ ¦·²©§¬©©¨ µ¨±·¨ ¬·µ¤¦·¶²© Αλισµ α οριενταλισ²± ∏µ¬±¤µ¼ ¦¤¯¦¬∏° ²¬¤¯¤·¨ ¶·²±¨ ©²µ°¤·¬²±
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©¨ µ¨±·ªµ²∏³¶º¬·«µ¨±¤¯ ¦¤¯¦¬∏° ²¬¤¯¤·¨ ¶·²±¨ ¶¬±§∏¦¨§¥¼ ·¨«¼¯ ±¨¨ ª¯¼¦²¯ k∞Šl ¤±§¤°°²±¬∏° ¦«¯²µ¬§¨ k„≤l q Ρεσυλτ : Œ± ·«¨ µ¤·¶
¤§°¬±¬¶·¨µ¨§ º¬·« ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨ ¨¯∏·¬²± ²© ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨ ¬¨·µ¤¦·o¥¯²²§≤µo…˜‘oµ¨±¤¯ ·¬¶¶∏¨ ¦¤¯¦¬∏° ¦²±·¨±·o∏µ¬±¤µ¼¦¤¯¦¬∏° ¬¨¦µ¨·¬²±
¤±§¦µ¼¶·¤¯¶§¨ ³²¶¬·¬²±¬± µ¨±¤¯ ·¬¶¶∏¨ º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ²¯º µ¨·«¤±·«²¶¨ ²©·«¨ ¶·²±¨ ©²µ°¤·¬²± ªµ²∏³qΧονχλυσιον : × «¨ ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨
¨¯∏·¬²± ²© ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨©µ¤¦·¬²± ¬¨·µ¤¦·²© Αλισµ α οριενταλι󦤱¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±«¬¥¬·∏µ¬±¤µ¼¦¤¯¦¬∏° ²¬¤¯¤·¨¶·²±¨ ©²µ°¤·¬²±¬±µ¤·¶¤±§
¥¨ ·«¨ °²¶·¨ ©©¨ ¦·¬√¨¦²±¶·¬·∏¨ ±·²© Αλισµ α οριενταλισq
[ Κεψ ωορδσ] ∏µ¬±¤µ¼ ¦¤¯¦∏¯¬~¦¤¯¦¬∏° ²¬¤¯¤·¨ ~ Αλισµ α οριενταλισ~µ¤·
≈责任编辑 古云侠 
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中 国 中 药 杂 志
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