全 文 ：° ·¨«¤±²¯ q≥¨ ³¨µ¤·¬²± ²©·«¨ ¶²¯∏·¬²± º¤¶³¨µ©²µ° §¨²± ¤± ⁄≥ ¦²¯∏°± º¬·«¤ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ²©¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2º¤·¨µkt{Β{ul o§¨·¨¦·¨§¤·uvs ±° q
Χονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯¨oµ¨³¨ ¤·¤¥¯¨o¤¦¦∏µ¤·¨ ¤±§¤³³¯¬¦¤¥¯¨q
[ Κεψ ωορδσ] ³µ¨³¤µ¨§¶¯¬¦¨¶²© Παεονιαλαχτιφλον ~ ∏´¤¯¬·¼ ¦µ¬·¨µ¬¤~³¤¨ ²±¬©¯²µ¬±~ °≤ ≈责任编辑 李 禾
°≤2∞≥2≥测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中
腺苷和虫草素含量
黄兰芳t o郭方遒t o梁逸曾t 3 o陈本美u
kt q中南大学 化学化工学院 中药现代化研究中心 o湖南 长沙 wtss{v ~
u q中南大学 湘雅医学院 分析测试中心 o湖南 长沙 wtss{vl
≈摘要 目的 }建立测定冬虫夏草及蚕蛹虫草中腺苷和虫草素的方法 ∀方法 }°≤2∞≥2≥法 o用甲醇为提取
溶剂 o采用选择性离子检测k≥l和电喷雾离子化k∞≥l ~色谱条件 }≥«¬°¤§½∏ ∂°2⁄≥色谱柱 ~流动相水2甲醇2甲酸
k|wΒxΒtl o以 u2氯腺苷为内标 ∀结果 }腺苷回归方程 Ψ s qtvw y Ξ n s qstu | oρ s q||{ w o线性范围 s qx ∗ tuw qx °ª#
pt ~虫草素回归方程 Ψ s quty w Ξ n s qsut x oρ s q||| t o线性范围 s qx ∗ tvy qx °ª#pt ~腺苷和虫草素加样回收率
分别为 |x q{ h及 |{ qt h ∀结论 }方法灵敏 !快速和选择性好 o可用于冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的分析及
质量控制 ∀
≈关键词 °≤ ~∞≥~≥ ~冬虫夏草 ~蚕蛹虫草 ~核苷类
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls{2szyu2sv
冬虫夏草 Χορδψχεπσ σινενσισ是我国传统名贵中
药材之一 o由于自然条件的限制 o来源紧缺 !价格昂
贵 o现多采用人工深层发酵培养虫草菌丝体 o以满足
市场的需求 ∀核苷类物质为冬虫夏草有效成分之
一 o尤以腺苷和虫草素具有明显的药理作用 o如可用
于治疗高血糖症 !肝脏疾病 !肾功能紊乱和肾衰
竭≈t ou ∀腺苷已被用作冬虫夏草的质控指标≈v ∀测
定冬虫夏草中腺苷等核苷类物质的含量 o主要有薄
层色谱法≈w ox o高效液相色谱法≈y oz 和毛细管电泳
法≈{ o| o其中以 °≤ 法最适用 o但该类方法灵敏度
低 !选择性差且耗时过长 ∀本研究首次报道采用
°≤2∞≥2≥法测定天然和人工冬虫夏草中腺苷和
虫草素的含量 o为冬虫夏草的质量评定提供了一种
快捷 !有效的检测方法 ∀
1 仪器与试剂
≥«¬°¤§½∏≤≥ p ustsk日本京都 o含 ≤ p ts
§√³高压泵 oƒ≤∂ p ts ¯ √³低压梯度装置 o⁄ p
≈收稿日期 ussv2sw2ux
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kustzxsv ousuvxsusl
≈通讯作者 3梁逸曾 oר¯ }kszvtl{{vs{vt
tw在线脱气机 o≤× p ts√³柱温箱 o≥°⁄p ts√³
二极管阵列检测器 o四极杆质谱仪 ∀
腺苷 !虫草素和内标 u2氯腺苷购于 ≥¬ª°¤公司
k≥·q²∏¬¶o o美国l o甲酸为分析纯 ~色谱纯甲醇
购于江苏汉邦科学技术有限公司 ~藏产冬虫夏草购
于长沙九芝堂 o蚕蛹虫草由云南蚕桑研究所提供 ∀
2 方法与结果
2 q1 色谱条件 ≥«¬°¤§½∏∂° p ⁄≥色谱柱ku qs °°
≅ txs °° ox Λ°l o色谱柱前用 • ¤·¨µ¶≤t{小柱保护
k• ¤·¨µ¶o ¬¯©²µ§o o ≥l ∀流动相水2甲醇2甲酸
k|wΒxΒtl o使用前超声脱气 o流动相中的每一组分均
用 s quu Λ°微孔滤膜过滤 o配制流动相用 ¬¯¯¬2± 纯
水 ~温度为室温 o流速 s qu °#°¬±p t o进样量 x Λ∀
2 q2 质谱检测条件 离子化方式 }电喷雾离子化
k∞≥l ~离子极性 }正离子 ~选择性离子检测 µ/ ζ }腺
苷 uy{≈ n n ~虫草素 uxu≈ n n ~u2氯腺苷k内
标 o≥lvsu≈ n n ∀ ∞≥源温度 v{s ε ∀脱溶剂和
加热块温度分别为 uxs ε 和 uss ε ∀源电压 n w qs
®∂ ∀检测电压 t qx ®∂ ∀脱溶剂电压 p t{ ∂ ∀ ±2阵列
偏转电压 wx ∂ ∀雾化气kul流速为 w qx #°¬±pt ∀
2 q3 对照品溶液的制备 甲醇用 s qwx Λ°微孔滤
#uyz#
第 u|卷第 {期
ussw年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ {
∏ª∏¶·oussw
膜过滤并经脱气处理 o各化合物的储备液ks qu ª#
ptl用甲醇配制并保存于冰箱中 ~工作液ku qs ous qs
°ª#ptl用甲醇稀释储备液配制 ∀将混合对照品或
冬虫夏草和蚕蛹虫草在拟定 °≤2∞≥2≥条件下分
析 o腺苷 !虫草素和 u2氯腺苷达基线分离 o保留时间
分别为 u qtv ov qvx ow quy °¬±k见图 tl ∀
图 t ≥ 模式下的 ×≤
q混合标准品 ~
q西藏虫草 ~t q腺苷 ~u q虫草素 ~v qu2氯腺苷
2 q4 标准曲线的制备 每一组分分别配制 z个浓
度 o其范围在 s qx ∗ tws qs °ª#pt o用以计算标准曲
线 ∀标准曲线由腺苷或虫草素和 u2氯腺苷在选择性
离子检测模式下k≥l总离子流图k×≤l中的峰面积
比kΨl对各组分浓度k Ξ o°ª#ptl经回归处理 o内标
浓度为 ts qs °ª#pt ∀腺苷在 s qx ∗ tuw qx °ª#pt线
性关系良好 o回归方程为 Ψ s qtvw y Ξ n s qsst u| o
ρ s q||{ w ~虫草素在 s qx ∗ tvy qx Λª#°pt呈现良
好的线性关系 o回归方程为 Ψ s quty w Ξ n s qsut x o
ρ s q||| t ∀
2 q5 供试品溶液的制备 将于 vx ε 烘干后的冬虫
夏草或蚕蛹虫草磨为粉末状k大约 us目l o精密称取
虫草 s qx ª于索氏提取器中 o加甲醇 {s °o回流提
取 w «∀提取液真空干燥 o残渣用甲醇溶解转移至 ts
°量瓶中 o精密加入 s qx °u2氯腺苷贮备液 o加甲
醇至刻度 o摇匀 ∀经 s qwx Λ°微孔滤膜过滤 o滤液即
为供试液 ∀
2 q6 精密度试验 分别取 us °ª#pt腺苷和虫草素
对照品溶液 o按上述 °≤2∞≥2≥条件连续测定 y
次 o得腺苷和虫草素与 u2氯腺苷峰面积比的平均值
u qzvu和 w qu{x o ≥⁄分别为 s q{z和 s q|v h o表明精
密度良好 ∀
2 q7 重现性试验 以拟定提取方法平行提取 x份
蚕蛹虫草 t o在拟定 °≤2∞≥2≥条件下测定 ∀结果
腺苷的平均值为 t tyv Λª#ªpt o ≥⁄t q{ h ~虫草素平
均值 zvu Λª#ªpt o ≥⁄ u qy h ∀证明此方法重现性良
好 ∀
2 q8 选择性和检测限 由图 t 知 o腺苷 !虫草素
和 ≥分离良好 o由于使用选择性离子检测模式 o在
腺苷和虫草素保留时间区域内没有干扰 o故本法有
很高的专属性 ∀当信噪比为 vΒt时 o腺苷和虫草素
的检测限k⁄l均为 s qt °ª#pt ∀
2 q9 回收率实验 精密称取蚕蛹虫草 u样品 s qx
ªox份 o分别加入与试样含量相当的腺苷和虫草素 o
按 2 q5制备供试品溶液以测定回收率 ∀腺苷和虫草
素平均回收率分别为 |x q{ h o|{ qt h o ≥⁄为 t qu h o
t qv h ∀
2 q10 样品分析 分别将 v个样品的供试液进样测
定 ∀测定结果见表 t ∀
3 讨论
3 q1 色谱条件的优化 °≤2∞≥2≥联用法在选
择流动相时既应考虑对分离也应考虑对离子化的影
响 ∀由于各核苷类化合物有着相似的结构 o它们很
难被分离出来 o优化色谱条件使必要的 ∀考虑到分
离和离子化两因素 o选择流动相为水2甲醇2甲酸k|wΒ
xΒtl等度淋洗 ∀
表 t 样品测定结果k ν xl
样品 组分 样品含量 Λª#ªpt ≥⁄r h
西藏虫草 腺苷 tzu w qy
虫草素 x qw x qv
蚕蛹虫草 t 腺苷 t tw{ u qt
虫草素 zuy u qz
蚕蛹虫草 u 腺苷 |wz u qx
虫草素 yxu v qw
3 q2 ∞≥2≥条件的优化 当在 µ/ ζ xs ∗ vxs扫描
时 o可得腺苷 !虫草素和 u2氯腺苷的质谱图 o由实验
可知 o各化合物均以分子离子≈ n n为基峰 ∀将
含有腺苷 !虫草素和 u2氯腺苷的混合物注入 ≤2≥
系统中 o选 µ/ ζ为 uy{ ouxu和 vsu的≈ n n峰 o用
≥ 模式监测这些化合物 o从而同时测定腺苷 !虫草
素 ∀用腺苷标准液kus °ª#ptl优化 ∞≥2≥的灵敏
度 o∞≥2≥的最优条件列于 2 q2 ∀
3 q3 样品预处理是运用 °≤2∞≥2≥法测定腺苷
和虫草素含量的关键之一 ∀经试验 o作者用甲醇索
氏回流提取 o可完全杜绝蛋白质的溶出 o从而保护了
色谱柱 ∀经方法学各项试验 o结果令人满意 ∀提取
时间以 w ∗ x «为宜 o样品于 u ∗ w ε 储存 ovy «内腺
苷和虫草素含量稳定 ∀
3 q4 试验中 o作者分别测定了西藏冬虫夏草和 u个
云南蚕蛹虫草中腺苷和虫草素的含量 ∀结果表明 o
蚕蛹虫草中腺苷和虫草素的含量高于冬虫夏草 ∀这
与文献报道相吻合≈{ ∀
3 q5 本实验测定方法经各项试验考察 o结果表明方
#vyz#
第 u|卷第 {期
ussw年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ {
∏ª∏¶·oussw
法简便易行 o结果准确 o重现性好 o可适于测定冬虫
夏草及其替代物中腺苷和虫草素的含量 ∀
≈参考文献
≈t ≥ «∏o ¤¯³¨µ±o²±¨ ¶q׫¨ ¶¦¬¨±·¬©¬¦µ¨§¬¶¦²√ µ¨¼ ²©¤± ¤±2
¦¬¨±·≤«¬±¨ ¶¨ «¨µ¥¤¯ ° §¨¬¦¬±¨ } Χορδψχεπσ σινενσισ} ³¤µ·q ϑ Αλτερν
Χοµπλεµεντ Μεδ ot||{ owkvl }u{| q
≈u ≥ «∏o ¤¯³¨µ±o²±¨ ¶q׫¨ ¶¦¬¨±·¬©¬¦µ¨§¬¶¦²√¨ µ¼ ²©¤ ³µ¨2
¦¬²∏¶¤±¦¬¨±·≤«¬±¨ ¶¨ «¨µ¥¤¯ µ¨ª¬°¨ ± } Χορδψχεπσ σινενσισ}³¤µ·µ q ϑ
Αλτερν Χοµπλεµεντ Μεδ ot||{ owkwl }wu| q
≈v 中国药典 qusss q{y q
≈w 吴洪臻 o董新红 o马德恩 o等 q冬虫夏草及其代用品有效成分比
较 q中草药 ousss ovtk{l }xzy q
≈x 陈 明 o张 荣 q冬虫夏草中核苷及其碱基含量测定方法的研
究 q中成药 ot||x otzkwl }ws q
≈y 吴春敏 o叶榕平 q°≤法测定冬虫夏草中腺苷的含量 q中草药 o
t||| ovsk|l }yx{ q
≈z 李雪芹 o王 雁 o包天桐 q反相高效液相色谱法测定人工冬虫夏
草中腺苷的含量 q中国中药杂志 ot||| ouwktl }tu q
≈{ 李绍平 o李 萍 o季 晖 o等 q天然与发酵培养冬虫夏草中核苷
类成分的含量及其变化 q药学学报 ousst ovykyl }wvy q
≈| ≥ ° o° o⁄ × ÷ ׬±¤o ετ αλq⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²±²©±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶¬±
±¤·∏µ¤¯ Χορδψχεπσσινενσι󤱧¦∏¯·∏µ¨§ χορδψχεπσ µψχελια ¥¼ Χαπιλλαρψ
ελεχτροπηορεσισ . Ελεχτροπηορεσισousst ouu }tww q
∆ετερµινατιον οφ αδενοσινε ανδ χορδψχεπιν ιν Χορδψχεπσσινενσισ ανδ
Χ . µιλιταρρισ ωιτη ΗΠΛΧ2ΕΣΙ2ΜΣ
¤±2©¤±ªt o ƒ¤±ª2 ¬´∏t o ≠¬2½¨ ±ªt o≤∞
¨ ±2° ¬¨u
kt . Ρεσεαρχη Χεντερ οφ Μοδερνιζατιον οφ Χηινεσε Ηερβαλ Μεδιχινεσ , Χολλεγε οφ Χηεµιχαλ ανδ Χηεµιχαλ Ενγινεερινγ , Χηανγσηα wtss{v , Χηινα ;
u . Αναλψτιχαλ Τεστινγ Χεντερ οφ Ξιανγψα Μεδιχαλ Χολλεγε , Χεντραλ Σουτη Υνιϖερσιτψ, Χηανγσηα wtss{v , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : °≤2∞≥2≥ ·² ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ ° ·¨«²§©²µ¶¬°∏¯·¤±¨ ²∏¶§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¤§¨ ±²¶¬±¨ ¤±§¦²µ§¼¦¨³¬±¬± Χορδψχεπσ
σινενσι󤱧 Χ. µιλιταρρισq Μετηοδ : °≤2∞≥2≥ ° ·¨«²§q ± ¨¯ ¦¨·µ²¶³µ¤¼¬²±¬½¤·¬²± k∞≥l ¬±·¨µ©¤¦¨ ¤±§¶¨¯¨ ¦·¬√¨¬²± °²±¬·²µ¬±ªk≥l
°²§¨ º µ¨¨ ∏¶¨§q׫¨ ¤±¤¯¼·¬¦¤¯ ¦²¯∏°± º¤¶¤ u qs °° ≅ txs °° ≥«¬°¤§½∏ ∂° p ⁄≥ ¦²¯∏°± ¤±§·«¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ º¤¶º¤·¨µk|w h l o
° ·¨«¤±²¯ kx h l ¤±§©²µ°¬¦¤¦¬§kt h l qu2≤«¯²µ²¤§¨ ±²¶¬±¨ º¤¶∏¶¨§¤¶¬±·¨µ±¤¯ ¶·¤±§¤µ§©²µ·«¬¶¤¶¶¤¼qΡεσυλτ : ׫¨ µ¨ªµ¨¶¶¬²± ¨´ ∏¤·¬²±¶¤±§
¦²¨©©¬¦¬¨±·º µ¨¨ Ψ s qtvw y Ξ n s qsst u| kρ s q||{ wl ©²µ¤§¨ ±²¶¬±¨ o Ψ s quty w Ξ n s qsut x kρ s q||| tl ©²µ¦²µ§¼¦¨³¬±q׫¨ ¬¯±¨ µ
µ¤±ª¨ º¤¶s qx ∗ tuw qx Λª#°pt ¤±§s qx ∗ tvy qx Λª#°pt©²µ¤§¨±²¶¬±¨ ¤±§¦²µ§¼¦¨³¬±oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²©¤§¨ ±²¶¬±¨
¤±§¦²µ§¼¦¨³¬± º µ¨¨ |x q{ h ¤±§|{ qt h oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q Χονχλυσιον : ׫¬¶° ·¨«²§¬¶«¬ª«¯¼ ¶¨±¶¬·¬√¨o©¤¶·¤±§¶¨¯¨ ¦·¬√¨oº«¬¦«¦¤± ¥¨ ∏¶¨§
©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶¬± Χ. σινενσι󤱧¬·¶¶∏¥¶·¬·∏·¨¶q׫¬¶° ·¨«²§¦¤± ¤¯¶² ¥¨ ¤³³¯¬¨§©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©¤¥²√¨«¨µ¥¶q
[ Κεψ ωορδσ] °≤ ~∞≥~ ≥ ~ Χορδψχεπσσινενσισ~ Χορδψχεπσ µιλιταρρισ~±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶ ≈责任编辑 李 禾
≤2≥建立石菖蒲挥发油特征指纹图谱方法学研究
魏 刚 3 o方永奇 o刘东辉 o林双峰
k广州中医药大学 第一附属医院 实验中心 o广东 广州 xtswsxl
≈摘要 目的 }建立石菖蒲挥发油 ≤2≥分析色谱条件 o初步拟定挥发油指纹特征图谱指标成分群 ∀方法 }采
用 ≤2≥法分析 ts批石菖蒲挥发油化学成分 ∀结果 }在进样口温度 uxs ε o接口温度 uvs ε o载气流速 t qv °#
°¬±p t o柱压 {s ®°¤o电离电压 t qw ®∂ o升温速率 v ε #°¬±pt的色谱条件下 o石菖蒲挥发油主成分可达到较好分离 ~挥
发油主要含有甲基丁香酚ku qtv h l !顺式甲基异丁香酚kw qw{ h l !反式甲基异丁香酚ks q{u h l !Χ2细辛醚kw qxt h l !
Β2细辛醚kyy qtx h l !Α2细辛醚ky qvx h l等 y个特征成分 ~以此 y个主要共有峰为评价指标 o≤2≥色谱条件的精密
度 !稳定性 !重现性良好 ∀结论 }方法准确可靠 o重复性好 o可用于石菖蒲挥发油指纹图谱的研究 ∀
≈收稿日期 ussv2st2ux
≈通讯作者 3魏刚 oר¯ }ksuslvyx|tzws o∞2°¤¬¯}º ¬¨ª¤±ªsut tyv q¦²°
#wyz#
第 u|卷第 {期
ussw年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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