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Effects of different penetration enhancers on percutaneous absorption of lappaconitine gel in vitro

不同透皮促进剂对高乌甲素凝胶体外透皮吸收的影响



全 文 :4 结论
上述指纹图谱和含量测定结果表明 o不同制备
工艺对参麦注射液中总皂苷含量以及各皂苷比例均
有影响 ∀为保证药品质量 o制备工艺应经科学比较
筛选并在制备过程中对工艺条件进行严格控制 ∀
≈参考文献 
≈t  ‹„‘Š ‹ o • ˜ ≠ o≤‹∞‘Š ≠ ≠ q„±¤¯¼¶¬¶²© / ≥«¨ ±2°¤¬0 ¬±­¨¦2
·¬²± ¥¼ ‹°≤r≥r≥ q Πηαρµ βιοµεδ αναλ, ussv ovtktl }tzx q
≈u  李惠霞 o陈 斌 o陈创然 q制剂中麦冬不同提取工艺的探讨 q
中草药 ot||| ovskvl }t{| q
≈v  陈闽军 o吴永江 o程翼宇 q高效液相色谱用于参麦注射液人参
皂苷的含量测定和批次一致性考察 q中国药学杂志 oussv ov{
k{l }yuv q
≈w  张全英 o施爱明 o袁心慧 q参麦注射液中人参皂苷含量测定 q
中草药 ousss ovtktsl }zxs q
≈x  ¤± Ž° o¨²±ª ‹ ° o ≥¤±ª … ‹ o ετ αλ. ‹¬ª«2³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§
¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¤±¤¯¼¶¬¶²© ª¬±¶¨±ª ¶¤³²±¬±¶ ∏¶¬±ª √¨¤³²µ¤·¬√¨ ¬¯ª«·
¶¦¤·¨µ¬±ª§¨·¨¦·¬²±o ϑ χηροµατογρ Α, t||y ozvy }zz q
≈y  程翼宇 o陈闽军 o吴永江 q化学指纹图谱的相似性测度及其评
价方法 q化学学报 oussu oyskttl }ustz q

Τηε εφφεχτ οφ πρεπαρατιον µετηοδ ον τηε θυαλιτψ οφ Σηεν2 µαι ινϕεχτιον
• ˜ ≠²±ª2­¬¤±ªo≤˜Œ ±¬±2°¬±o≤‹∞‘Š ≠¬2¼∏
( ∆επαρτµεντ οφ Χηινεσε Μεδιχινε Σχιενχε ανδ Ενγινεερινγ , Χολλεγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨¦·²©§¬©©¨µ¨±·³µ¨³¤µ¤·¬²± ° ·¨«²§²±·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ²© ≥«¨ ±2°¤¬¬±­¨¦·¬²±q Μετηοδ : ׫¨
≥«¨ ±2°¤¬¬±­¨¦·¬²± ¶¤°³¯ ¶¨º µ¨¨ ³µ¨³¤µ¨§∏¶¬±ª·«µ¨¨§¬©©¨µ¨±·° ·¨«²§¶qƒ¬±ª¨µ³µ¬±·¶²©≥«¨ ±2°¤¬ ¬¨·µ¤¦·¶µ¨§ª¬±¶¨±ªo¤±§¬·¶¬±·¨µ° §¨¬¤·¨¶
º µ¨¨ ²¥·¤¬±¨ §∏¶¬±ª¤± ‹°≤ ¤±¤¯¼·¬¦¤¯ ³µ²¦¨§∏µ¨ q׫¨ ¦²±·¨±·¶²©ª¬±¶¨±²¶¬§¨ •ªt o •¦¤±§ •¥t o¤±§·«¨ ªµ²¶¶¶¤³²±¬±¶²©≥«¨ ±2°¤¬ ¬¨·µ¤¦·
º µ¨¨ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¯¼ ° ±¨¶∏µ¨§º¬·« ‹°≤ ³µ²¦¨§∏µ¨¶q Ρεσυλτ : ׫¨ µ¨ º¤¶¶¬±ª¬©¬¦¤±·§¬©©¨µ¨±¦¨ ¬±©¬±ª¨µ³µ¬±·¶¤±§¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±·¨±·¶²©·«¨ ¬±2
­¨¦·¬²±¶³µ¨³¤µ¨§¥¼ ·«¨ ·«µ¨¨ §¬©©¨µ¨±·° ·¨«²§¶q Χονχλυσιον : ׫¨ ∏´¤¯¬·¼ ²© ≥«¨ ±2°¤¬¬±­¨¦·¬²± º¤¶ªµ¨¤·¯¼ ¬±©¯∏¨ ±¦¨§ ¥¼ ·«¨ ³µ¨³¤µ¤·¬²±
° ·¨«²§q ‹°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª ° ·¨«²§¦¤± ¥¨ ¤³³¯¬¨§©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©·«¨ ≥«¨ ±2°¤¬³µ¨³¤µ¤·¬²±¶q
[ Κεψ ωορδσ] ≥«¨ ±2°¤¬¬±­¨¦·¬²±~ ∏´¤¯¬·¼ ²©·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ ~³µ¨³¤µ¤·¬²± ° ·¨«²§~¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦©¬±ª¨µ³µ¬±·
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期  ussw2s|2su
≈通讯作者  3王英姿 oר¯ }kstslywzutuwu o∞2°¤¬¯}º¤±ª¼½¬ƒ ¶¬±¤q¦²°
不同透皮促进剂对高乌甲素凝胶体外透皮吸收的影响
王英姿t o任天池t o肖永庆u
kt1北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu ~u1中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }研究不同透皮促进剂对高乌甲素凝胶体外经皮渗透的影响 o筛选有效的复合透皮吸收促进剂 o
提高高乌甲素的透皮吸收速率 ∀方法 }采用改良的 ƒµ¤±½扩散池 o以离体大鼠皮肤为透皮屏障 o用高效液相色谱法
测定不同透皮吸收促进剂对高乌甲素凝胶的累积渗透量 !透皮吸收速率 !透皮时滞等体外透皮吸收动力学参数的
影响 ∀对氮酮k„½²±¨ l !丙二醇k°Šl !油酸k’„l !月桂醇k„lw种透皮吸收促进剂单独应用和任意 u种合用的促渗效
果进行考察 ∀结果 }以 „½²±¨ n °Š o„ n °Š o’„ n °Š为复合促进剂时释药速率显著提高 o其中以 ’„ n °Š促渗作用
最强 ∀结论 }通过考察促进剂对高乌甲素凝胶的影响 o为研究其透皮给药提供了参考依据 ∀
≈关键词  高乌甲素凝胶 ~透皮吸收 ~促渗剂 ~‹°≤
≈中图分类号  • u{v ~• u{x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxls|2syyx2sw
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第 vs卷第 |期
ussx年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤¼oussx
高乌甲素又称刺乌头碱 !拉巴乌头碱k¯ ¤³³¤¦²±¬2
·¬±¨ l o系由毛莨科乌头属植物高乌头 Αχονιτυµ
σινοµοντανυµ ‘¤®¤¬根中提取的生物碱 o为国内首创
的非成瘾性镇痛新药 o用于治疗中度以上疼痛≈t  o镇
痛强度是氨基比林的 z倍 o与度冷丁相比镇痛效果
相当 o而且维持时间长 o是优良的非成瘾性镇痛药 o
无致畸致突变作用 o也不会发生积蓄中毒 o还具有显
著的抗炎消肿 !降温解热与局部麻醉等作用≈u  ∀高
乌甲素对恶性肿瘤及其他顽固性疼痛的疗效显著 o
对炎症性疼痛 o如风湿性或类风湿性关节炎k• „l等
引起的疼痛效果亦佳≈v  ∀因此 o将高乌甲素研制成
透皮吸收制剂 o可使药物避免肝脏的/首过效应0和
胃肠道的破坏 o降低药物毒性和副作用 o维持稳定 !
持久的血药浓度 o提高疗效 o给药方便等具有极其重
要的意义 ∀有关高乌甲素的透皮吸收特性的研究尚
未见报道 ∀本研究以累积渗透量 !透皮吸收速率 !透
皮时滞等动力学特征参数为指标 o系统考察了氮酮
k„½²±¨ l !丙二醇k°Šl !油酸k’„l !月桂醇k„lw种常
用透皮吸收促进剂单独应用和任意 u种复合使用时
对高乌甲素凝胶透皮吸收的影响 o为开发研制新型
药物制剂提供依据 ∀
1 材料
111 仪器与试剂
‹°ts|s高效液相色谱仪k美国l ~xst型超级恒
温水浴k上海实验仪器总厂l ~z| p u型磁力搅拌器
k深圳市沙头角国华仪器厂l ~≥Žp t试管振荡混匀
器k江苏医疗仪器厂l ~⁄x p u„离心沉淀机k北京医
用离心机厂l ~改良 ƒµ¤±½扩散池k自制l ∀
高乌甲素对照品k‹°≤ 测定纯度为 |{1{ h l及
样品 k自制l ~卡波姆2|vw° k…ƒ Š²²§ µ¬¦«o批号
≤≤{yŠ……yzxl ~羟丙基甲基纤维素k山东聊城阿华制
药有限公司 o批号 ussvtstyl ~„½²±¨ k北京化学试剂
公司l ~’„k天津市福晨化学试剂厂l ~°Šk北京益利
精细化学品有限公司l ~„k北京化学试剂公司l ~高
效液相所用甲醇为色谱纯 o水为高纯水 o其余试剂均
为市售分析纯 ∀
112 动物
≥⁄大鼠 oα o⎯ 各半 o体重kuss ? tsl ªo购自山
东中医药大学动物中心 o动物级别 ≥°ƒ级 o动物合格
证书编号 ≥≤÷Žk鲁 ussvssswl ∀
2 方法与结果
211 凝胶的处方
高乌甲素 u1s ªo卡波姆 v ªo羟丙基甲基纤维素
u ªo无水乙醇 us °o三乙醇胺 u ªo加蒸馏水至
tss ª∀
212 凝胶剂的制备
将卡波姆均匀撒于适量蒸馏水面上 o静置 o使之
充分溶胀 o配成 v h的卡波姆水凝胶 o并配制 u h羟
丙基甲基纤维素水凝胶 o然后将这 u种凝胶以不同
比例混合均匀 o加入适量促进剂 o置乳钵中研磨均匀
得凝胶基质 ∀将高乌甲素用适量乙醇溶解 o加入到
凝胶基质中 o边加边搅拌 o再缓慢滴加三乙醇胺 o加
水至足量 o搅拌均匀 o即可 ∀
为方便进行比较 o且根据将各促进剂的性质 o将
其在凝胶中质量比含量均设为 v h o则共有 ´ kv h
„½²±¨ l oµkv h „l o¶kv h ’„l o·kv h °Šl o∏kv h
„½²±¨ n v h „l o√ kv h „½²±¨ n v h ’„ otΒtl oº kv h
„½²±¨ n v h ’„ otΒul o¬kv h „½²±¨ n v h °Šl o¼ kv h
„ n v h ’„l o½ kv h „ n v h °Šl o¾kv h ’„ n v h
°Šl等 tt种凝胶和 t份不加促进剂的空白凝胶 ∀
213 高乌甲素体外分析方法的建立
21311 标准曲线的制备 色谱条件 }≤ {¯色谱柱
kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l ~流动相甲醇2s1st °²¯ #
pt磷酸二氢钠k{sΒusl ~检测波长 uxu ±° ~流速 t
°#°¬±pt ~进样量 us ˏ~灵敏度 s1su „∏©¶∀
标准曲线绘制 }精密称取干燥器内恒重 w{ «的
高乌甲素对照品一定量 o用甲醇制成含量为 us ows o
{s otus otys ouss Λª#°pt的系列标准溶液 ∀分别精
密吸取各标准贮备液 t1s °o移入带塞刻度试管
中 o于 ws ∗ xs ε 水浴上挥干甲醇 ∀精密加入接受液
x1s °o氯仿 x1s °o密塞振荡混匀 vs ¶ow sss µ#
°¬±pt o离心 tx °¬±o精密吸取氯仿层 o于 ws ∗ xs ε
水浴中挥干氯仿 o加入甲醇 tss ˏ溶解 o取 us ˏ注
入色谱仪 o以峰面积为纵坐标 o高乌甲素含量为横坐
标绘制标准曲线 o得回归方程 Α€ us1||tΧp tv|1x o
ρ€ s1||| z o在 us ∗ uss Λª#°pt线性关系良好 ∀并
测得高乌甲素的最低检测量为 u ±ª∀
21312 精密度试验 精密吸取含量为 ws Λª#°pt
的同一对照品溶液 us ˏo在 t §内重复测定 x次 o
计算日内精密度 • ≥⁄t1|y h ~每 t §测定 t次 o重复
测定 x §o计算日间精密度 • ≥⁄ u1sw h o表明其精密
度良好 ∀
21313 样品测定 取本品适量k约相当于高乌甲素
us °ªl精密称定 o置 tss °量瓶中 o加流动相适量 o
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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超声处理 vs °¬±o放冷至室温 o加流动相至刻度 o摇
匀 o滤过 ∀精密吸取续滤液 x °于 xs °量瓶中 o
加流动相至刻度 o摇匀 o作为供试品溶液 ∀进样 us
ˏo按外标法以峰面积计算样品含量为kus1zv ?
s1u|y tl °ª#ªptk ν € vl ∀
21314 加样回收率试验 精密称取已知含量的凝
胶样品 x份 o每份 s1x ªo分别精密加入 t °ª#°pt高
乌甲素对照品溶液 tu1ss °o按供试品溶液制备方
法处理后 o进样 us ˏo依法测定峰面积 o计算回收
率 o• ≥⁄t1tv h ∀
214 透皮吸收实验
21411 离体鼠皮的制备 取体重kuss ? tsl ª健康
大鼠 o处死后立即剃除其腹部毛 o剥离腹部皮肤 o去
除其皮下脂肪及黏液组织后洗净 o置于无菌生理盐
水中 o放入冰箱k p us ε l冷冻保存 o于 t周内用完 ∀
实验前鼠皮不得有任何损伤 ∀
21412 实验方法 采用改良 ƒµ¤±½扩散池 o扩散面
积为 u1uz ¦°u o将鼠皮置于扩散池与接受池之间 o皮
肤真皮面向接受池 ∀准确称取凝胶剂 t ªo均匀涂布
于皮肤表面 o接受池加入 tw °接受液k乙醇Β生理
盐水 € zΒvl o恒温kvz ? s1xl ε o搅拌速度 tss µ#
°¬±pt o分别于 u ow oy o{ ots «取样 u °k同时补充接
受液 u °l o用 s1wx Λ°微孔滤膜滤过 o用 213 项下
方法测定高乌甲素的含量 o并计算累积渗透量 Θo
将累积渗透量对 τ进行回归 o得高乌甲素凝胶体外
透皮动力学方程及渗透速率 ∀
215 结果
将 212项下tu种凝胶按21412 项操作分别进行
体外透皮试验 ∀结果表明 o促进剂对高乌甲素凝胶
的促渗效果为 ¾k’„ n °Šl  º k„½²±¨ n °Šl  √
k„½²±¨ n ’„ ot }tl  ¬k„½²±¨ n ’„ ot }ul  ∏k’„ n
„l  ¼ k„½²±¨ n „ l  ½ k„ n °Šl o¶k’„l  ´
k„½²±¨ l  µk„l  ·k°Šl ∀见表 t ∀
由表 t可见 o与空白比较 o单独使用 °Š o„ o„2
½²±¨ 和 ’„可使高乌甲素凝胶的透皮吸收速率依次
增加 o对药物的透皮吸收促进作用依次增大 o增透倍
数分别为 t1s{ ot1xs ot1{w ou1uv o其中 ’„ 还具有较
短的透皮时滞 ∀这 w种透皮吸收促渗剂对高乌甲素
凝胶体外经皮渗透的影响如图 t所示 ∀
任意 u种促渗剂合用对药物的透皮吸收作用有
明显的促进作用 o其中 o’„ 与 °Š合用对高乌甲素
凝胶的透皮促进效果最为显著 o增透倍数可高达
表 t 不同促进剂对高乌甲素凝胶体外透皮吸收的影响
凝胶 Θ2τ方程 ρ Κ
rΛª#¦°pu#«pt
τ¯¤ª
≤²±·µ²¯ Θ€ z1z{v uτp y1ssx y s1||| x z1z{v u s1zzt y
vh „½²±¨ Θ€ tw1vvvτn {1v{t u s1||| z tw1vvv s1x{w z
vh „ Θ€ tt1yxuτp z1zss t s1||| z tt1yxu s1yys {
vh ’„ Θ€ tz1vytτn |1{ts w s1||{ x tz1vyt s1xyx t
vh °Š Θ€ {1wtz yτp x1zxw { s1||{ x {1wtz y s1y{v z
„½²±¨ n „ Θ€ tz1{uuτn |1zuu s1||| v tz1{uu s1xwx x
„½²±¨ n ’„ktΒtl Θ€ ut1{x{τn tu1tvv s1||y v ut1{x{ s1xxx t
„½²±¨ n ’„ktΒul Θ€ t{1yyxτn ts1xss s1||{ w t{1yyx s1xyu y
vh „½²±¨ n vh °Š Θ€ vv1svuτp tz1xt{ s1||z | vv1svu s1xvs v
vh „ nvh ’„ Θ€ t{1vyvτn ts1vts s1||| w t{1vyv s1xyt x
vh „ nvh °Š Θ€ tv1tyzτn z1xvu s1||| w tv1tyz s1xzu s
vh ’„ n vh °Š Θ€ ww1ywxτp uu1xsu s1||| v ww1ywx s1xsw s
图 t 不同单一促渗剂对高乌甲素
累积透过量的影响
x1zw o同时透皮时滞较短ks1x «左右l ∀混合促渗剂
对高乌甲素凝胶体外经皮渗透的影响如图 u所示 ∀
图 u 混合促渗剂对高乌甲素累积透过量的影响
3 讨论
311 曾以高乌甲素饱和水溶液为供给液 o考察其
在 vu ε 及 vz ε 时在大鼠皮肤中的渗透性 o结果表
明 o温度对高乌甲素的透皮有显著影响 o随温度升
高 o渗透系数 Π增大 o时滞k τ¯¤ªl减小 o故选择 vz ε
作为扩散池水浴温度 ∀
312 高乌甲素凝胶透过皮肤的扩散符合 Θ2τ零级
释药方程 o情况与贮库型外用贴剂相似 ∀在亲水性
凝胶中 o脂溶性药物可形成类似于多贮库型系统 o此
时药物的释放主要由控制释药的材料性质决定 o以
卡波姆 !羟丙基甲基纤维素等组成的亲水凝胶是由
材料性质控制药物释放的 o因此 o在该凝胶中高乌甲
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素的释放表现为零级释放≈w  ∀
313 °Š o„ o„½²±¨ 和 ’„ 单独使用对药物的释放
均具有促进作用 o增渗强度依次增大 ∀
’„对高乌甲素表现出了优良的促渗作用 ∀一
般认为 o促进剂的作用效果与它们的作用机理直接
相关 ∀高乌甲素为不溶于水的脂溶性药物 o其经皮
吸收的主要屏障是角质层 ∀ °Š被广泛作为助渗溶
剂应用 o单独使用促进效果不明显 o有时反而阻滞药
物透过 o这是由于较高浓度的 °Š黏性增加 o从而阻
滞药物扩散≈x  o但 °Š与其他促进剂合用通常会产
生明显促进效果 ∀„主要影响非极性通道 o能脱去
角质层的脂质而破坏角质层结构的完整性 ∀ „½²±¨
对亲水 !亲油性的许多药物均具有透皮吸收促进作
用 o它作用于细胞间类脂膜双分子层 o使其致密性改
变 o流动性增加 ∀ ’„与皮肤中的脂肪酸有相似的结
构 o其双键的不对称性能使脂质分子层产生扭转效
应 o形成微孔 o增加药物通过角质层的渗透性 ∀实验
表明通过分解角质层类脂的紧密结构来降低皮肤的
阻力 o并增加类脂流动性是促进高乌甲素经皮渗透
的重要途径 ∀
314 药物的透皮吸收药量与基质成分与药物的渗
透促进作用有关 ∀本研究中任意 u种促进剂合用均
比单用效果好 ∀结果表明 o’„与 °Š合用具有协同
作用 o可大大改善高乌甲素的皮肤渗透性 o对高乌甲
素凝胶的透皮促进效果最为显著 o增透倍数可高达
x1zw o同时透皮时滞较短ks1x «左右l o而且用此促
渗剂制成的凝胶比其他凝胶从外观上更加细腻 !透
明 !涂展性好 ∀在今后的试验中 o将进一步对 ’„与
°Š合用的最佳浓度进行筛选 o以确定高乌甲素凝胶
成型工艺的最佳促渗剂 ∀
≈参考文献 
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Εφφεχτσ οφ διφφερεντ πενετρατιον ενηανχερσ ον περχυτανεουσ
αβσορπτιον οφλαππαχονιτινε γελ ιν ϖιτρο
• „‘Š ≠¬±ª2½¬t o • ∞‘׬¤±2¦«¬t o÷Œ„’ ≠²±ª2 ¬´±ªu
(t1 Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsstsu , Χηινα ;
u1 Χηινα Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·¶²©§¬©©¨µ¨±·³¨ ±¨ ·µ¤·¬²± ±¨«¤±¦¨µ¶²±·«¨ ·µ¤±¶¦∏·¤±¨ ²∏¶³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ ²© ¤¯³³¤¦²±¬·¬±¨ ª¨¯ ιν
ϖιτρο ¤±§·«¨µ¨©²µ¨ ·²¶¦µ¨ ±¨ ²∏··«¨ ©¨©¨¦·¬√¨¤¦¦¨¯¨µ¤·²µ·² ±¨«¤±¦¨ ·«¨ ³¨µ° ¤¨·¬²±µ¤·¨ ²© ¤¯³³¤¦²±¬·¬±¨ 1 Μετηοδ : ˜¶¬±ª¬°³µ²√ §¨ƒµ¤±½2·¼³¨
§¬©©∏¶¬²± ¦¨¯¯ ¤±§ ¬¨¦¬¶¨§¥¬ª °²∏¶¨ ¶®¬±¬± √¬·µ²¤¶·µ¤±¶§¨µ°¤¯ ¥¤µµ¬¨µo·«¨ ®¬±¨ ·¬¦¶³¤µ¤° ·¨¨µ¶¶∏¦«¤¶¦∏°∏¯¤·¬√¨³¨µ° ¤¨·¬²± ∏´¤±·¬·¼o³¨µ2
° ¤¨·¬²±µ¤·¨ ¤±§³¨µ° ¤¨·¬²± ¤¯ªª¨ §·¬°¨ º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ‹°≤1 ׫¨ ±¨«¤±¦¨ ° ±¨·¤¥¬¯¬·¼ ²©©²∏µ§¬©©¨µ¨±· ±¨«¤±¦¨µ¶¶∏¦«¤¶¤½²±¨ k„2
½²±¨ l o³µ²³¼¯ ±¨¨ ª¯¼¦²¯k°Šl o²¯ ¬¨¦¤¦¬§k’„l ¤±§ ¤¯∏µ¼¯ ¤¯¦²«²¯k„l oº¤¶¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§º«¨ ± ∏¶¨§ ¬¨·«¨µ∏±¬´∏¨ ¼¯ ²µ¦²°¥¬±¤·¬√¨¯¼ ¤¨¦«²·«¨µ
¤·µ¤±§²°1 Ρεσυλτ : • «¨ ± ∏¶¨§¦²°¥¬±¤·¬√¨¯¼ o „½²±¨ n °Š o„ n °Š o’„ n °Š ¦¤± ±¨«¤±¦¨ ·«¨ ¦∏°∏¯¤·¬√¨ ³¨µ° ¤¨·¬²± ∏´¤±·¬·¼o ’„ n °Š
º¤¶·«¨ ¥¨¶·²±¨ ¤°²±ª·«¨ °1 Χονχλυσιον : ׫¨ ¶¨¯¨ ¦·¬²± ²©·«¨ ¥¨¶·³¨ ±¨ ·µ¤·¬²± ±¨«¤±¦¨µ¶³µ²√¬§¨§µ¨©¨µ¨±¦¨ ©²µ¯¤³³¤¦²±¬·¬±¨ ·µ¤±¶§¨µ°¤¯ §¨2
¬¯√ µ¨¼1
[ Κεψ ωορδσ] ¤¯³³¤¦²±¬·¬±¨ Š¨ ¯~·µ¤±¶§¨µ°¤¯ ¤¥¶²µ³·¬²±~³¨ ±¨ ·µ¤·¬²± ±¨«¤±¦¨µ¶~ ‹°≤
≈责任编辑 刘  
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