全 文 ：鸦胆子油乳诱导 2ys细胞凋亡的研究
王 芳 o曹 玉 o刘红岩 o付招娣 o韩 锐
k中国医学科学院 药物研究所 o北京 tsssxsl
≈摘要 目的 }研究鸦胆子油乳诱导 2ys细胞凋亡的作用 ∀方法 }鸦胆子油乳 tΒtss otΒws otΒus k ∂ r∂ l 分
别处理 2ys细胞 y «o琼脂糖凝胶电泳法 o流式细胞仪法 o荧光显微镜法 o电镜分别观察药物诱导 2ys细胞凋亡的
作用 ∀结果 }鸦胆子油乳 tΒws组产生明显 ⁄ 梯状条带 ~流式细胞仪检测药物浓度为 tΒws otΒus组的凋亡细胞百
分率分别为 {y q{ h 和 |z h ~鸦胆子油乳 tΒws组在荧光显微镜呈现明显凋亡细胞特征 ~药物浓度为 tΒws otΒus组的
细胞经电镜观察呈现明显凋亡细胞特征 ∀结论 }鸦胆子油乳 tΒus 和 tΒws组有明显的诱导 2ys细胞凋亡的作用 ∀
≈关键词 鸦胆子油乳 ~ 2ys细胞 ~凋亡
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvls{2szx|2sw
鸦胆子 Βρυχεα ϕαϖανιχαkql µ¨µq为苦木科植
物 o味苦 o有毒 ∀我国民间广泛地用于治疗阿米巴痢
疾 ∀us世纪 xs年代用其碎仁外敷治疗乳头瘤 ozs
年代用它治疗子宫颈癌也获得一定疗效 ∀鸦胆子的
成分可分为水溶性和脂溶性两部分 o水溶性成分有
毒 o主要是四环三萜类化合物 ∀脂溶性的成分无
毒≈t o其中油酸 o亚油酸被认为是抗肿瘤的活性成
分≈u ∀鸦胆子油是由成熟果实提取的脂肪油 o其静
脉乳剂是鸦胆子油经过乳化制成 ∀鸦胆子油乳≈v2x
在对白血病 o结肠癌 o黑色素瘤 o卵巢癌 o口腔上皮
癌 o艾氏腹水瘤 o¨ º¬¶肺癌及肉瘤 t{s体内 !外的抑
瘤实验中都显示了疗效 ∀ ∏
等≈y 对兔体肺癌脑
转移模型的研究发现 o静脉注射鸦胆子油乳能够显
著降低转移引起的颅内压升高 o该作用已得到临床
实验的进一步证实 ∀近年来对鸦胆子油乳作用机制
的探讨认为≈z 它能够抑制肿瘤细胞的 ⁄合成 o这
可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一 ∀
细胞凋亡k¤³²³·²¶¬¶l或称程序性细胞死亡k³µ²2
ªµ¤°° §¨¦¨¯¯ §¨¤·«o°≤⁄l是受基因控制的主动性细
胞自杀过程 ∀恶性肿瘤的细胞凋亡研究对于认识肿
瘤的发病机理有非常重要的意义 ∀以往的肿瘤研究
集中于细胞增生的失调 o细胞分化与增殖紊乱几乎
是恶性肿瘤机制研究的全部内容 o直至近年人们才
认识到 o细胞凋亡的减少也是恶性肿瘤的重要机制 ∀
≈收稿日期 ussu2tt2su
≈通讯作者 ר¯ }kstslyvtyxusy ∞2°¤¬¯}• ¤±ª©¤±ª³∏°¦
«²·°¤¬¯q¦²°
本文从诱导肿瘤细胞凋亡的角度探讨了鸦胆子油乳
的作用机制 o从而为其临床应用提供理论依据 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
1 q1 q1 药品及试剂 鸦胆子油乳 o浙江三九邦而康
药业有限公司产品 o批号 usstsysw ~蛋白酶 o
¤¶¨ o溴化丙啶k°l o ²¨ ¦«¶·vvvwu均购自 ≥¬ª2
°¤公司 ~ ° tyws 培养基购自 ¬¥¦²公司 ~新生
小牛血清购自杭州四季青公司 ∀
1 q1 q2 仪器 库尔特k≤²∏¯·¨µl∞°≤≥ ÷流式细
胞仪 ~荧光显微镜 ~电子显微镜 ∀
1 q1 q3 细胞培养 人早幼粒白血病细胞系k2ys
细胞l本室传代保存 ∀用含 ts h新生小牛血清的
° tyws培养基在 vz ε ox h 二氧化碳孵箱中
培养 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 琼脂糖凝胶电泳法 喜树碱 s .t Λ 作为
阳性对照 o 2ys细胞用鸦胆子油乳 tΒtss otΒws
k∂ r∂ l作用 y «后离心收集细胞 o°
≥洗 u次 o每管
加入裂解液k×µ¬¶q≤wx ° o∞⁄× t ° o °ws
s qux h o ¤¶¨ t °ª#°p tl s qu °ovz ε 水浴
t «∀每管再加入蛋白酶 ts Λovz ε 水浴 t «∀
tu sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o取上清 vs Λo加上样
缓冲液 y Λo混匀后上样 oyx ∂ 电泳 u «o紫外灯下
观察结果照相 ∀
1 q2 q2 流式细胞仪观察细胞凋亡 喜树碱 s .t Λ
作为阳性对照 o2ys细胞用鸦胆子油乳tΒtss o
tΒws otΒusk∂ r∂ l作用 y «后离心 o°
≥ 洗 u次 ozs
#|xz#
第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o¶¶∏¨ {
∏ª∏¶·oussv
h乙醇固定 ow ε 过夜 ∀染色前用 °
≥ 洗 u次 o除去
固定液 ∀加入 uss Λ ¤¶¨ ovz ε 水浴 vs °¬±∀
加入 {ss Λ° ktss ª#p tl染液混匀 ow ε 避光 vs
°¬±owss目筛网过滤 o流式细胞仪检测 o激发波长
为 w{{ ±° ∀
1 q2 q3 观察细胞凋亡 2ys细胞用鸦胆子油乳
tΒws作用 y «后收集细胞 o加入 ²¨ ¦«¶·vvvwukt Λª
#°p tluss Λvz ε 染色 vs °¬±o荧光显微镜下观
察 o照相 ∀
1 q2 q4 电镜观察细胞凋亡 2ys细胞用鸦胆子
油乳 tΒws otΒus分别作用 y «后离心收集 o°
≥ 洗
u遍 o用 u qx h 戊二醛固定 tu «以上 ∀ °
≥洗后用
四氧化锇及 tx h 亚铁氰化钾固定 t «以上 ∀用环
氧树脂 {tu浸泡 o包埋聚合后 o组织块经超薄切片 o
在 °«¬¯¬³¶∞2us{≥ 型电镜下观察 o照相 ∀
2 结果
2 q1 琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡结果k图 tl
图 t 琼脂糖凝胶电泳检测鸦胆子油乳
对 2ys细胞的诱导凋亡作用
q正常组
q喜树碱 s qt Λ
≤ o⁄q鸦胆子 tΒws otΒtss k∂ r∂ l ∞q⁄ °¤µ®¨ µ
由图 t可见 otΒws鸦胆子油乳处理 2ys细胞
y «o可见典型的 ⁄梯状条带 o而低浓度ktΒtssl
组无此作用 ∀
2 q2 流式细胞仪 °染色法观察k图 ul
如图 u所示 otΒtss 鸦胆子油乳诱导 2ys细
胞凋亡的百分比为 | qsy h o而 tΒws otΒus鸦胆子
作用后 o凋亡细胞百分比分别为 {y q{ h和 |z h ∀
2 q3 活细胞悬液荧光染色法k图 vl
由图v可见 o对照组细胞核呈弥散均匀荧光 o
tΒws鸦胆子油乳处理 2ys细胞 y «可见典型凋
亡细胞 o细胞核或细胞浆内可见浓染致密的团块状
荧光 o²¨ ¦«¶·vvvwu染为明亮的蓝色凋亡小体 ∀
2 q4 电镜观察 2ys细胞凋亡k图 wl
如图 w 所示 otΒws otΒus 的鸦胆子油乳处理
2ys细胞 y «后细胞出现明显凋亡特征 }细胞体
积变小 o细胞核皱缩破坏 o染色质固缩 o常聚集于核
膜内侧 o呈界限分明的块状或月型小体 o细胞器结构
完整 ∀其中 tΒus 处理组的细胞凋亡现象更明显 o细
胞核裂解成碎块 ∀
3 讨论
鸦胆子油乳在临床上已用于肺癌 !转移性脑瘤 !
肝癌 !胃肠道肿瘤 !乳腺癌 !肉瘤 !淋巴瘤等多种恶性
肿瘤 o治疗效果略低于细胞毒性药物 o但与之合用可
提高疗效 o减轻毒副反应 o能提高机体免疫力 ∀
• ¤±ª ± 等≈{ 对单用放疗与放疗加静脉注射鸦胆
子油乳治疗肺癌脑转移的病人的治愈率进行了分
析 o发现合用组的生存率和生存时间与单用组相比
都有显著延长 o说明鸦胆子油乳对肺癌脑转移病人
的放疗有协同作用 ∀
近年来文献报道细胞凋亡异常与肿瘤的发生及
发展有关≈|2tt ∀由于肿瘤细胞对药物诱导的凋亡作
用较正常细胞敏感 o诱导肿瘤细胞凋亡是很多化疗
药物的作用机制之一 ∀凋亡在肿瘤的发生 !发展及
防治中的作用越来越受到人们的重视 ∀
鸦胆子脂肪酸对于肿瘤细胞膜的报道已经很
多 o有报道鸦胆子油乳中的油酸具有阻断 ⁄合成
的作用 o进而报道它有抑制 ⁄ 拓扑异构酶的作
用 ∀本文对鸦胆子诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制进
行了研究 o形态学显示经鸦胆子油乳作用后 o细胞核
固缩 o染色质高度浓缩聚集 o随药物浓度增加核染色
质更加密集 o浓缩成块或呈新月形聚集于核膜下 o最
终会形成核膜包裹的凋亡小体 ∀流式细胞仪结果显
示随着鸦胆子油乳浓度增加 o亚 t期细胞群逐渐
增大 o提示其诱导凋亡作用增强 ∀ ⁄ 梯带呈细胞
凋亡的典型特征≈tu ∀本实验利用琼脂糖凝胶电泳
法检测了鸦胆子油乳对肿瘤细胞的影响 o结果显示
了清晰的 ⁄ 梯状条带 ∀
综上所述 o无论从形态学还是生化学角度都证
明 }鸦胆子油乳有诱导肿瘤细胞凋亡的作用 o而且呈
剂量依赖关系 ∀本实验为其临床合理应用提供了理
论及实验依据 ∀
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第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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图 u 流式细胞仪检测鸦胆子油乳对 2ys细胞的诱导凋亡作用
q正常组
q喜树碱 s qt Λ ≤ o⁄o∞q鸦胆子油乳 tΒtss otΒws otΒus k∂ r∂ l
图 v 荧光显微镜观察鸦胆子油乳对 2ys细胞的诱导凋亡作用
q正常组
q鸦胆子油乳 tΒws k∂ r∂ l
图 w 电镜观察鸦胆子油乳对 2ys细胞的诱导凋亡作用
q正常组
qtΒws鸦胆子油乳 ≤ qtΒus 鸦胆子油乳
≈参考文献
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中 国 中 药 杂 志
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癌中的作用k英文l q第四军医大学学报 ousst ouukusl }t{{y q
≈{ • ¤±ª ± q ≤²°¥¬±¨ § ׫¨ µ¤³¼ ²©
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Εξπεριµενταλ Στυδιεσ ον τηε Αποπτοσισ οφ
ΗΛ2ys ΧελλσΙνδυχεδ βψ Βρυχεα ϑαϖανιχα Οιλ Ε µ υλσιον
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µ∏¦¨¤¤√¤±¬¦¤q Ρεσυλτ :
⁄ ¤¯§§¨µº¤¶¶¨ ±¨¬±·«¨ tΒws ªµ²∏³q× «¨ ¤³²³·²¶¬¶¦¨¯¯ ³¨µ¦¨±·¤ª¨¶²©tΒws ¤±§tΒus ªµ²∏³ º µ¨¨ {y q{ h ¤±§|z h µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ q
≤¨¯ ¶¯²©tΒws ªµ²∏³¶«²º §¨²¥√¬²∏¶¤³²³·²¶¬¶¦«¤µ¤¦·¨µ∏±§¨µ©¯∏²µ¨¶¦¨±¦¨ °¬¦µ²¶¦²³¨ q≤¨¯ ¶¯º µ¨¨ ¬±§∏¦¨§¤³²³·²¶¬¶¬± tΒus ¤±§tΒws
µ∏¦¨¤¤√¤±¬¦¤∏±§¨µ¨¯ ¦¨·µ²± °¬¦µ²¶¦²³¨ qΧονχλυσιον : tΒus ¤±§tΒws
µ∏¦¨¤¤√¤±¬¦¤¶«²º §¨²¥√¬²∏¶¤³²³·²¶¬¶¬±§∏¦¬±ª ©¨©¨ ¦·²©
2ys q
[ Κεψ ωορδσ]
µ∏¦¨¤¤√¤±¬¦¤²¬¯ ¨°∏¯¶¬²± ~ 2ys ¦¨¯¯¶~¤³²³·²¶¬¶
≈责任编辑 古云霞
茶多酚对大鼠系膜细胞
摄取氧化型低密度脂蛋白的影响
张 岩 o甘 华
k重庆医科大学 附属第一医院 o重庆 wssstyl
≈摘要 目的 }探讨茶多酚抑制大鼠肾小球系膜细胞摄取氧化型低密度脂蛋白k ÷2⁄l的作用 ∀方法 }以 ÷2
⁄刺激体外培养的大鼠系膜细胞 o同时用不同浓度茶多酚干预 o测系膜细胞内总胆固醇k× ≤l含量 o油红2 染色 o光
镜及电镜观察细胞形态 ∀结果 } ÷2⁄刺激下系膜细胞 × ≤ 含量及油红2 染色阳性细胞比例均较无脂蛋白刺激的
≈收稿日期 ussu2sz2vs
≈基金项目 重庆市卫生局资助项目kss2zsstl
≈通讯作者 ר¯ }tvtyyv{|xtu
#uyz#
第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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