全 文 ：中药注射剂溶血度测定的 v种方法比较
周燕文t o何淑华u o莫武宁t
kt q广西医科大学 第一附属医院 o广西 南宁 xvssuz ~
柳城县人民医院 o广西 柳城 xwxussl
体外溶血试验是中草药注射剂特别是供静脉使
用的中药注射剂的必要检查项目之一 ∀经典的常规
的体外溶血试验试管观察法 o是用肉眼来观察判断
溶血情况≈t ∗ v o主观误差较大 o曾有作者探讨了利
用仪器测定溶血度的方法≈w ox o但仪器测定法与经
典的试管肉眼观察法是否能建立一定的联系 o以建
立更为客观的体外溶血度试验法 o未见报道 o本文采
用同一种类同一批次的中药注射剂对 v种溶血试验
法进行了比较 ∀报道如下 ∀
1 仪器与试药
日本岛津 ∂2uust 型紫外2可见分光光度计 o
{s2u型电动离心机 o光学显微镜 o牛氏改良计数板 ∀
不同厂家生产的中草药注射剂 tt种共 uw批 o
均为市售品 o输液剂由我院药剂科生产提供 ∀见表
t ∀
2 u h红细胞混悬液制备≈u
健康家兔心脏取血 o除去纤维蛋白后 o用生理盐
水洗涤至上清液不显红色为止 o所得的红细胞配制
成 u h k ς/ ςl红细胞混悬液 ∀临用时摇匀 o实验时
新鲜配制 ∀
3 实验方法
3 q1 常规的试管肉眼观察法≈t
3 q2 分光光度法≈u
原理 }根据红细胞破裂释放出来的血红素在可
见光波长段具有最大吸收的原理 o采用分光光度法
测定溶血程度 ∀
最大吸收波长的确定 }取新鲜蒸馏水 u qx °o
加 u h红细胞混悬液 u qx °o轻轻摇匀 ovz ε 水浴
保温 t «o取出 o置离心机中离心 x °¬±ku sss µ#
°¬±p tl o取上清液在紫外可见分光光度计上扫描 o
≈收稿日期 usst2sw2sv
≈通讯作者 电话 }kszztlxvxys{s ∞2°¤¬¯}½¼ºzz{| ¶¬±¤q
¦²°
测得最大吸收波长为 xzy ±° ∀
溶血度的测定 }取中草药注射液每批各
s qv os qx °o分置试管中 o分别加 s q| h氯化钠注射
液 u qu ou qs °o作为试验管 ∀另取新鲜蒸馏水 u qx
°作阳性对照管 os q| h氯化钠注射液 u qx °作
阴性对照管 ∀上述各管分别加入 u h红细胞混悬液
u qx °o轻轻摇匀 ovz ε 水浴保温 t «o取出 ∀肉眼
观察并记录其溶血情况 ∀然后置离心机中离心 x
°¬±ku sss µ#°¬±p tl o吸取上清液在 xzy ±°波长处
测定各管溶液的吸收度 o空白参比为该样品s qv o
s qx °加 s q| h氯化钠注射液 w qz ow qx °稀释
后的溶液 o根据下式计算各注射液的溶血度值 }溶血
度k h l ≈( Α样 p Α阴)/ ( Α阳 p Α阴)] ≅ tss%( Α样 !
Α阳 !Α阴 分别为样品管 !阳性管 !阴性管的吸收度
值l ∀
3 q3 红细胞计数法≈v
采用显微镜直接计数红细胞的量 o计算溶血百
分率 ∀
取试管v支 o顺序编号 o依次分别加入试药
s qv os qx°o以 s q| h氯化钠注射液 u qx °作空
白对照 o加试药管以 s q| h氯化钠注射液补足体积
至 u qx °o立即加入 u h红细胞混悬液 u qx °o轻
轻摇匀 ovz ε 恒温水浴中 o每小时取样计数 t 次 ∀
取样计数方法 }每管摇匀后精确吸取 u h红细胞混
悬液 s qt °o以 s q| h氯化钠注射液稀释 ts倍 o摇
匀后加入计数板的计数室中 o加盖玻片 o静置片刻 o
置显微镜下计数 o取四角方格及中央方格 o共计 x个
中方格的红细胞数 o反复 u次取样 o求其均值 ∀溶血
度k h l ≈k空白对照管红细胞数 p试药管红细胞
数lr空白对照管红细胞数 ≅ tss h ∀
4 实验结果
tt种 uw批中药注射剂经 v种溶血试验方法测
定结果见表 t ∀常规法与分光光度法 !计数法结果
的相关性见表 u ∀
#xyw#
第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²qy
∏±¨ qoussu
表 t 中药注射剂 v种溶血试验方法测定结果比较
注射剂
品种
批号
加入量
r°
常规肉眼观察法
t« u« v« w«
分光光度法r h
t« u« v« w«
红细胞计数法r h
t« v«
普乐林 ||svtz2u s qv p p p p s t qxs s t qst t{ qzx t{ qzx
s qx p p p p x q|z u q|s ts q|z w qxt ux qss ux qss
||syty2u s qv p p p p s qxx s s s q|y us qs uu qx
s qx p p p p t q|w t qt| y qvt z q{s t{ qzx ux qss
||svty2t s qv p p p p s s s s s tt qux
s qx p p p p s qus s qts s qsxt t qyz u qx ut qx
||syty2v s qv p p p p s s s s z qx tz qx
s qx p p p p s t qzw s u qzw ty qux vs qs
||suts2t s qv p p p p s t qvz u qxu t qs|
s qx p p p p u qvv s w qtw s qux
葛根素 ssstuxt s qv p p p p t qx| s s qvy s q{t uy qux uu qxs
s qx p p p p s qzw s s qtx u qv{ ty qux vs qss
||tttzt s qv p p p ? t qz| tz qwz uu qt| x| qyv u{ qzx uz qxs
s qx p p ? n vu qs| vv qxw xs qvx yu qut ux qss yz qss
sssvu|t s qv p p p p s s s s qvs uv qzx vs qss
s qx p p ? ? t qt| u qzx v qw{ x q{{ ux qss ws qss
||tuuut s qv p p p ? s qz| w q|u v qxy tz q|u
s qx p p p ? u qsw v qxv v q|u tu qst
sssttut s qv p p ? ? v q{z w qsw z qw{ tz qst
s qx p p ? ? w q{z x qww z qv{ tt qsy
醒脑静 ||swstk厂l s qv p n n n t| q|t |v qz{ ttu qy ts{ qsx us qts tss
s qx n n n n z| qus tsx qzx tsx qys tst qvu z| qtx tss
||tttxk厂l s qv p ? ? n s qtx vx qzz wu qzs tsv qsw tv qzx ux qss
s qx p n n n u qw{ zw qu| tsv qwy tsy qy| s zx qss
||szu{k厂l s qv p p p n s qws tu qtv uz qwv |y qtx tv qzx ux qss
s qx p n n n u q{{ xw qvv |{ qz{ ttv qsz t{ qwy {z qxs
||tsuxk
厂l s qv p p ? n v qxv { qzy wu qs| y| qxy
s qx p ? n n us qx{ wy qut zt q|{
丹参 ||svst s qv p p 6 { q{w | qsu tv qxw tw qzz uy qtw
s qx p p 6 z q|w | q{x t{ qtu uy qtw wv qt{
ssstsv s qv p p p p z q{| tt q{u ty q{w tv qyv tx q|s
s qx p p p p ts qt{ tx qs| t| qs{ tu qxs tv qyv
sssust s qv p p p p y qwz { qux tv qyx u qx v q{
s qx p p p p | quw tu qvy tw qxv u qx w q{
复方丹参 ||svsv s qv p 7 7 7 y qvt y qzw { qs| tt qxy
s qx p 7 7 7 tt qzu | q|x tw q|y ty q|y
香丹 sssts| s qv p p p p v qv{ t quw w qsu v q|x s tu qx
s qx p p p p u q|{ w qxy { quw y qtv s ty qux
茵栀黄 ||tutz s qv p p p p t qz| s t qtz s qts us qss uu qxs
s qx p p p p t qt| s s qvy s us qss uu qxs
清开灵 ||stsvsv s qv p p p p s s s qsxt s x qss x qss
s qx p p p p s qws s s s tx qss t{ qzx
岩黄连 ||ttu{ s qv p ? ? n x qzy v| q{t ww qss x{ qxt tu qxs xs qss
s qx ? n n n wv q|w xz qtv wz qu{ wy qxy wu qxs tss qss
参脉 ||s{uv s qv p p p p s qws s s t qvy s s
s qx p p p p t qu| t qxs u qw| | qu| s s
黄芪 sssutx s qv p p p p s s s s qxy
s qx p p p p s s s s
注 }≠ p表示不溶 ? 表示部分溶 n表示全溶 6 表示真凝集 7 表示假凝集
参脉 !香丹 !清开灵液按药品说明书推荐的临床用浓度较高限度配制后再取样
5 讨论
5 q1 比较 v种实验方法可以看出 }用分光光度法 !
血细胞计数法测得溶血度在 zs h以上 o常规肉眼观
察法均观察到产生溶血作用 ~溶血作用不太明显而
不易下结论的药品 o用分光光度法 !血细胞计数法测
得的溶血度分别在 z h ∗ us h otx h ∗ vs h ~分光光
度法测得的溶血度在 us h 以下 o血细胞计数法在
vs h以下的 o常规试管法观察基本为不溶血 ∀另从
#yyw#
第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²qy
∏±¨ qoussu
表 u v种方法测定溶血度值结果的相关性k ξ ? σl
常规法
ν 结果
分光光度法溶血度值
ν 含量r h
计数法溶血度值
ν 含量r h
twv p twv w qvz ? y qvx x| tx qu{ ? | qv|
ty ? ty uy qtz ? t{ qux { vv qzx ? us qxx
uv n uv {u qvz ? ux qsz y |s qu{ ? tt qv|
表 u可见 }分光光度法 !血细胞计数法测得溶血
度的均值具有一定的一致性 ∀
5 q2 本研究的 tt种中药注射剂中 o醒脑静的溶血
作用较强 ∀v种实验方法结果显示其均在 v «内产
生溶血 o另 v个批号的丹参注射液均发生假性凝集 o
这提示临床应用这两种注射剂时应密切观察 o注意
控制用量 o以防引起溶血反应 ∀
5 q3 同一厂家的同一种药物 o不同批号其溶血度也
有差异如葛根素 o这可能与生产中注射液的杂质除
去程度有关 o或与加入的附加剂的量有关 ∀因葛根
素在水中的溶解度较低 o且不同产地 !生长季节及品
种含量差异较大≈y o葛根素注射液是以 xs h丙二醇
水溶液作为溶媒或加入了助溶剂≈z 制备的 ∀我院曾
有 v例使用
厂家的注射液而出现溶血的≈{ ∀
5 q4 分光光度法操作时注意离心的速度及温度 o可
能有些药物分子及附加剂在离心时与红细胞发生碰
撞的力量加大 o速度加速 o易致溶血的出现 ∀不同的
中药注射剂颜色及深浅不同 o若中药注射剂的色泽
在血红素的最大吸收波长处有吸收 o则减去的中药
注射剂的空白值的大小直接影响溶血结果的判断 o
在实验中易由于操作误差而加大实验误差 ∀另产生
真凝集的样品用此法的测定结果与产生溶血的样品
的结果判断不一致 ∀
5 q5 我们曾尝试用 ≥¼¶° ¬¨ ≥ƒ2vsss型及 ≤¨¯ 2¯⁄≠
tzss型全自动血球分析仪计数红细胞 o并与常规肉
眼观察法结果比较 o发现当肉眼观察已发生溶血时 o
仪器计数的红细胞量仍未有改变 o考虑这与样本经
仪器系统自动稀释后红细胞的量少 o不在仪器计数
的线性范围内有关 o因此应采用人工法计数红细胞
进行溶血度的测定 ∀
5 q6 由此看来 o溶血度测定的计数法 !分光光度法
及常规法比较 o前两者的操作较复杂 o耗时长 o影响
因素较多 ∀但当采用常规法测定的结果有疑问或必
要时 o可采用计数法 !分光光度法作为一种辅助方
法 o帮助对结果进行更精确的判断 ∀
≈参考文献
≈t 徐叔云 q药理实验方法学 q北京 }人民卫生出版社 ot|{u qwtv q
≈u 陈 奇 q中药药理研究方法学 q北京 }人民卫生出版社 ot||v q
ty{ q
≈v 赵新先 q中药注射剂 q北京 }人民卫生出版社 ot||{ qtyv q
≈w 秦百宣 o尹 义 q精确测定中草药注射剂溶血作用的新方法 q中
国中药杂志 ot||s otxk|l }vu q
≈x 刘 萍 o杨建春 q分光光度法测定中草药注射剂的溶血度 q中成
药 ot||v ok{l }tw q
≈y 王 成 o刘玉玲 o谷士杰 q葛根素的溶解性及其络合助溶的研
究 q中国药学杂志 ot||v ou{kxl }u|w q
≈z 仲 英 o丁杏苞 o左春旭 o等 q高效液相色谱法测定葛根不同季
节葛根素的含量与质量 q中草药 ot||u ouvkyl }u|w q
≈{ 陈龙英 o黄伟强 o廖 宁 o等 q葛根素注射液引起溶血 v例 q药物
不良反应杂志 ousss okul }tuw q
≈责任编辑 李 禾
°≤ 测定顺气胃康胶囊中和厚朴酚与厚朴酚的含量
胡旭佳t o郭毅新t o何 红u
kt q云南省药品检验所 o云南 昆明 yxsstt ~u q昆明天紫红药厂 o云南 昆明 yxssttl
顺气胃康胶囊系由厚朴k姜炙l !木香 !香附k醋
炙l !乌药 !陈皮 !柴胡k醋炙l !草豆蔻k炒l !吴茱萸
k盐炙l !青皮k醋炙l !干姜 !苍术k炒l !茯苓 !泽泻
k炒l !草果k炒l !法半夏k砂炒l !槟榔 !升麻k炙l !益
≈收稿日期 usst2tu2sv
≈通讯作者 电话 }ks{ztlvtvsxv{
智仁k盐炙l !当归共 t|味中药组成的复方制剂 o具
有舒肝和胃 !理气化滞的功能 o用于治疗肝郁气滞 !
胃适合降 !胃腹涨满 !脘腹痞痛 !气滞食积 !恶心呕
吐 !不思饮食或两胁胀 o嗳腐吞酸 o大便不爽 o胃肠
炎 !胃肠功能紊乱及消化不良等症 ∀本品为地方保
健药 o收载于云南省药品标准滇 ±r • ≥tusw2t||y o
为提高该药品质量标准为国家标准 o以便更有效地
#zyw#
第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²qy
∏±¨ qoussu