全 文 ：青龙衣毒性作用及体外抗肿瘤作用的实验研究
刘 薇t o林文翰u o季宇彬t 3
kt q哈尔滨商业大学 药物研究所 博士后科研工作站 o黑龙江 哈尔滨 txsszy ~
u q北京大学 医学部 天然药物及仿生药物国家重点实验室 o北京 tsss{vl
≈摘要 目的 }青龙衣提取物及其分离成分的毒性及体外抗肿瘤作用 ∀方法 }采用常规小鼠急性毒性试验方
法 o×× ≈v2kw ox2§¬° ·¨«¼¯·«¬¤½²¯2u ¼¯ l2u ox2§¬³«¨ ±¼¯·¨µ¤½²¯¬∏° ¥µ²°¬§¨ o ×× 法和 ≥
k¶∏¯©²µ«²§¤°¬±
l法对青龙衣提取
物及其分离成分的抗肿瘤作用进行了初步筛选 ∀结果 }除小鼠腹腔注射青龙衣氯仿萃取物 ⁄xs为 xzx qv{ °ª#®ªp t
和青龙衣醋酸乙酯萃取物为 t vsv qx| °ª#®ªp t o青龙衣总提取物和青龙衣石油醚萃取物 !正丁醇萃取物和水萃取物
小鼠口服及腹腔注射 ⁄xs均大于 x ª#®ªp t ∀醋酸乙酯粗提部分对人白血病细胞株 ys在 tss Λª#°pt时 o细胞抑
制率 xs h o在 tss Λª#°pt剂量下 o青龙衣的氯仿粗提部分和醋酸乙酯粗提部分对白血病细胞株 ys !人胃癌细
胞株
≤{uv及人宫颈癌细胞株 ¨¯¤细胞的抑制率均 xs h o其 ≤xsk生长抑制l tss Λª#°pt ∀结论 }青龙衣氯仿
提取物和醋酸乙酯提取物具有一定的抗肿瘤作用 ∀
≈关键词 青龙衣 ~毒性作用 ~抗肿瘤筛选 ~××法 ~≥
法
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{{z2sw
青龙衣是胡桃科胡桃树属植物胡桃树未成熟果
实的肉质果皮≈t2x ∀近年来 o被广泛用于临床治疗肿
瘤等疾病≈y2tu o但是对青龙衣提取及有效部位分离
的研究尚少见有关报道 ∀因此 o通过对青龙衣进行
提取及初步分离 o并且对提取物及分离成分采用
××法和 ≥
法对人白血病细胞株 ys !人胃癌细
胞株
≤{uv及人宫颈癌细胞株 ¨¯¤进行筛选 o以
期得到具有体外抗肿瘤活性的有效成分部位 ∀
1 材料
1 q1 细胞株及试剂
人白血病细胞株 ys !人胃癌细胞株
≤{uv
及人宫颈癌细胞株 ¨¯¤}北京大学医学部天然药物
与仿生药物国家重点实验室体外活性筛选中心提
供 ∀v2kw ox2二甲基噻唑2ul2u ox2二苯基四氮唑
k×× o噻唑蓝l }瑞士 ƒ¯ ∏®¤公司出品 ∀ °2tyws
培养基干粉 }美国
≤公司出品 ∀胰蛋白酶 }美国
≥¨ µ√¤公司出品 ∀胎牛血清 }深圳晶美分公司出品 ∀
1 q2 药品配制
对于青龙衣的化学成分的提取与分离 o采用分
≈收稿日期 ussv2tu2st
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kv|vssstzv ~v|wzssx{l
≈通讯作者 3 季宇彬 oר¯ } kswxtl {w{yysst oƒ¤¬ } kswxtl
{w{yysst ~∞2°¤¬¯}¼¥ «µ¥¦∏q¨§∏q¦±
步提取法对其进行试验 }即将青龙衣生药材 o先粉碎
成药材粗粉 o再用乙醇和氯仿提取 o然后用沸腾的乙
醇提取得到提取物 o将提取物依次用石油醚 !氯仿 !
醋酸乙酯 !正丁醇与水萃取 o得到 x个粗提部分 ∀分
别以青龙衣总提取物及 x个粗提部分为受试样品 o
分别配制成 s qt ot ots otss Λª#°pt溶液 ~以空白溶
液为对照进行抗肿瘤初步筛选 ∀
1 q3 细胞培养
将人白血病细胞株 ys !人胃癌细胞株
≤{uv及人宫颈癌细胞株 ¨¯¤o在含有 t h胎牛血
清的 °2tyws培养液中 ovz ε ox h ≤u 条件下培
养 ~隔天换液 o贴壁细胞用 s qux h胰蛋白酶消化后传
代 ∀
1 q4 溶媒
氯化钠注射液kuxs °l o哈药集团制药六厂 o批
号 svsuxy ∀山梨醇甲酯kxss °l o天津市化学试剂
工厂 o批号 sutttu ∀
1 q5 实验动物
昆明种小鼠 o雌雄各半 o体重kt{ ? ul ªo由哈尔
滨市汉方实验鼠类养殖所提供 o动物检疫合格证编
号 sv2vsst ∀
2 方法
2 q1 急性毒性实验
根据预试结果 o将受试样品设 x个剂量组 o青龙
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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衣总提取物和青龙衣石油醚萃取物 !正丁醇萃取物
和水萃取物 w部分 o每部分剂量组分别设计为 v qyu o
w qux ox qss ox q{{ oy qu| ª#®ªpt ∀青龙衣氯仿萃取物
剂量组设为 wss qu owzs qy oxxv qy oyxt qv ozyy qv °ª#
®ªpt ∀青龙衣醋酸乙酯萃取物剂量组设为|vs qu o
t s|w qw ot u{z qw ot xtw qz ot z{t q| °ª#®ªpt o剂距
为 s q{x ∀每组 ts只小鼠 o雌雄各半 ∀
将青龙衣石油醚萃取物和青龙衣氯仿萃取物用
含有 ts h山梨醇甲酯的氯化钠注射液充分溶解受试
样品 o配制成所需浓度 o按 s qst °#ªpt等容量不等
浓度 t次性灌胃给药 o连续观察 tw §o逐日观察记录
小鼠的毒性反应和死亡情况 o用
¯¬¶¶法 ⁄xs软件计
算半数致死量 ∀死亡动物作尸体剖检 ∀
青龙衣的其他提取物均用氯化钠注射液配制成
所需浓度 o按 s qst °#ªpt等容量 t次性灌胃给药 o
连续观察 tw §o逐日观察记录小鼠的毒性反应和死
亡情况 o用
¯¬¶¶法 ⁄xs软件计算半数致死量 ∀死亡
动物作尸体剖检 ∀
2 q2 ××法
肿瘤细胞株在 vz ε ox h ≤u 条件培养箱中培
养 uw «后 o加入相应药物 ∀细胞在 tss h湿度 ox h
≤u o|x h空气的培养箱中连续培养 w{ «o然后加入
ts Λx ª#pt的 ××溶液 o继续培养 ~w «后仔细吸
去上清液 o加入二甲基亚枫 tss Λr孔 o轻轻振荡以
使溴代噻唑蓝完全溶解 o约 t «后在 xzs ±°波长处
用酶标仪测其吸光度k Αl值 o测定时需减去空白对
照的 Α值 ∀细胞生长抑制率k h l kt p Α样品组r
Α对照组l ≅ tss h ∀
2 q3 ≥
法
细胞接种和药物处理同 ××法 o空白对照液只
加完全培养液 o不加细胞 ∀药物处理 w{ «后 o每孔加
入 xs Λ冰冻的 xs h三氯醋酸 ∀w ε 固定 t «后 o用
自来水洗去三氯醋酸 !培养剂 !小分子量代谢产物以
及血清蛋白 ∀将培养板纸在空气中干燥 o用 s qw h
≥
kt h醋酸溶解l对三氯醋酸固定的细胞染色 vs
°¬±o随后用 t h醋酸洗去游离染料 o置于空气中干燥
样品 ~每孔加入 txs Λts °°²¯#pt ×µ¬¶o轻轻振荡 o
直至染料全部溶解 ∀于 xyw ±°波长处测 Α值 o测定
时应减掉空白 Α值 ∀细胞生长抑制率计算方法同
2 q1≈tv2tx ∀
3 结果
小鼠口服总提取物及青龙衣 x个粗提部分受试
样品后无其他异常现象 ∀给药 t §后 o小鼠自主活
动稍有减少 o随着剂量的增大其程度加剧 ∀于给药
v §后恢复正常 ~所有剂量组均未出现死亡现象 ∀
腹腔注射青龙衣总提取物和青龙衣石油醚萃取
物 !正丁醇萃取物和水萃取物后 o高剂量组小鼠 vs
°¬±后活动开始减少 ∀给药 t §后 o小鼠活动减少 o
眼睛颜色发暗甚至发黑 ∀随着剂量的增大其程度加
剧 o呼吸急促 ~不活动时 o高剂量组动物毛竖立 ∀低
剂量组动物的情况于给药 v §后恢复正常 ~高剂量
组于给药后第 x天全部恢复正常 ∀溶剂对照组 o给
受试验品后 o小鼠无异常情况发生 o活动自如 o正常
饮食 ∀
腹腔注射青龙衣氯仿萃取物和青龙衣醋酸乙酯
萃取物后 o高剂量组小鼠自主活动开始减少 otx °¬±
后出现扭体现象 ∀给药后 o小鼠主要异常表现为 }自
发活动减少 o呼吸急促 o运动失调 o随着剂量的增大
其程度加剧 ∀高剂量组动物呼吸抑制 o几乎不活动 ∀
低剂量组动物于给药 w §后恢复正常 ~高剂量组存
活动物给药第 x天后恢复正常 ∀动物开始死亡的时
间在 ts «以上 o最长的死亡时间是给药后第 y天 ~动
物死亡时身体瘦弱 o死亡动物尸检主要脏器未见异
常 ∀
小鼠腹腔注射青龙衣氯仿萃取物 ⁄xs为 xzx qv{
°ª#®ªpt o可信限为 xx{ qtt ∗ x|u qyw °ª#®ªpt ~青龙衣
醋酸乙酯萃取物为tvsv qx| °ª#®ªpt o可信限为
t uyw qw{ ∗ t vwu qzs °ª#®ªpt ∀
青龙衣总提取物及青龙衣 x个粗提部分 }石油
醚 !氯仿 !醋酸乙酯 !正丁醇及水对人白血病细胞株
ys !人胃癌细胞株
≤{uv 及人宫颈癌细胞株
¨¯¤作用有明显差异 o结果见表 t ∀
从表中可以看出 o青龙衣总提取物及青龙衣 x
个粗提部分中石油醚 !正丁醇及水对人白血病细胞
株 ys !人胃癌细胞株
≤{uv及人宫颈癌细胞株
¨¯¤作用效果虽然不同 o但是 o在给受试药物的最大
剂量下 o其细胞抑制率均 xs h o说明青龙衣总提
取物及青龙衣粗提部分 }石油醚 !正丁醇及水对人白
血病细胞株 ys !人胃癌细胞株
≤{uv及人宫颈
癌细胞株 ¨¯¤无明显的细胞毒作用 ∀
4 讨论
本次实验结果表明 o中草药青龙衣在经过提取
分离后 o各部分对小鼠的毒性作用各不相同 o口服青
龙衣以及其提取物在小于 x ª#®ªpt时未出现死亡现
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 t 青龙衣不同提取物对 ys o
≤{uv o
¨¯¤体外培养细胞抑制率
受试样品
剂量
rΛª#°pt
细胞抑制率r h
ys
≤{uv ¨¯¤
总提取物 s qt p | qsw p u qz{ p wx q|{
t p w qwx s qwv p u| qsy
ts ty qv| ts q|y p ts q|s
tss t| qu{ uw qtz p { qyw
石油醚提取部分 s qt s qw| s q|{ p uv qs|
t x q{s x quv p tx qy{
ts z qsu x quv p ts qvy
tss tx qv{ tt qz{ tx qwy
氯仿粗提部分 s qt p t qyx s qsz s qtu
t t qyu u qyu v q|y
ts u qxy tw qy{ ts qwt
tss zx q|z |w qyv {v quw
醋酸乙酯粗提部分 s qt p v qs{ p v q|{ p uv qyz
t s qsz s qxw p ty q{w
ts t qy{ y qw| p | qxu
tss uy qsu yy qw| zu quy
正丁醇粗提部分 s qt p ts qsx p ts qsv p vw q|{
t p { qz{ p { qs{ p ut qsx
ts p s quv p y q{{ p ts q|y
tss t q|z p x quy p y qy{
水粗提部分 s qt p vs qx{ p tx qxy p ws qvu
t p uw q|{ p ts qsx p uv q{z
ts p tz qs| p z qwv p tu qwx
ss p { qsy p t qzu p { qwx
象 o说明青龙衣是一味毒性小 !安全范围较大的中草
药 ∀同时 o腹腔注射青龙衣总提取物及各部分萃取
物 o其 ⁄xs各不相同变化较大 o说明通过对青龙衣的
分离 o将具有毒性作用的青龙衣萃取产物单独分离
出来 o确定青龙衣氯仿萃取物和醋酸乙酯萃取物腹
腔注射对小鼠具有毒性作用 o为其进一步药效及作
用机制的实验研究提供依据 ∀
随着分子肿瘤学研究的不断深入 o体外抗肿瘤
实验已成为抗肿瘤药物研发过程中必不可少的一部
分 ∀本次实验选用 v种与临床应用有较好一致性的
肿瘤细胞株进行细胞毒性试验 o以提高青龙衣抗肿
瘤研究的可信度 o同时为青龙衣的进一步研究提供
依据 ∀结果表明 o青龙衣的氯仿粗提部分和醋酸乙
酯粗提部分对白血病细胞株 ys !人胃癌细胞株
≤{uv及人宫颈癌细胞株 ¨¯¤有明显的细胞毒性
作用 o除醋酸乙酯粗提部分对人白血病细胞株 ys
在 tss Λª#°pt时 o细胞抑制率 xs h o其余细胞株
在 tss Λª#°pt受试药物剂量下 o细胞的抑制率均
xs h o其 ≤xsk生长抑制l tss Λª#°pt o以上各粗提
部分中以氯仿部分总作用效果最强 ∀
≈参考文献
≈t 李时珍 q本草纲目 qtx|s ovs }t{sz q
≈u 江苏新医学院 q中药大辞典 q下册 q上海 }上海科学技术出版
社 ot|{y qtxww q
≈v 林启寿 q中草药成分化学 q北京 }科技出版社 ot|zz q
≈w 季宇彬 q中药有效成分药理与应用 q哈尔滨 }黑龙江科技出版
社 ot||y qvyx q
≈x 王泽民 q当代结构药物全集 q北京 }北京科学技术出版社 q
t||{ qzzy q
≈y 杜 旭 o刘世宇 o张惠利 o等 q中药青龙衣镇痛机理研究 o哈尔
滨医科大学学报 ot||x ow oku|l }vtw q
≈z 杜 旭 o王美村 o孔令民 o等 q中药青龙衣镇痛机理研究 o哈尔
滨医科大学学报 ot||y otkvsl }ww q
≈{ 杜 旭 o宋永熙 o彭建华 o等 q中药青龙衣镇痛机理研究 o哈尔
滨医科大学学报 ot||y otkvtl }vs q
≈| 何天有 o赵亦工 q核桃皮煎剂外洗治疗子宫脱垂 wu例 q陕西中
医 ot||s ozkttl }vsz q
≈ts 李生正 o王云彩 o蒋东风 o等 o
≥¯
法筛选青龙衣与胡桃枝抗肿
瘤作用有效部位 o西北药学杂志 ousss oyktxlttw q
≈tt 张野平 o杨志博 q胡桃醌抗肿瘤作用的研究 q沈阳药学院学
报 ot||z ovkwl }tyy q
≈tu 许绍惠 o唐婉屏 o韩忠环 q核桃楸毒性成分研究 q沈阳农业大学
学报 ot|{y otzkul }vw q
≈tv 李仪奎 q中药药理实验方法学 q上海 }上海科学技术出版社 o
t||t qvzy q
≈tw 陈 奇 q中药药理研究方法学 q北京 }人民卫生出版社 ot||v q
xy{ q
≈tx 徐叔云 q药理实验方法学 q北京 }人民卫生出版社 oussu q
tz|{ q
Στυδψ ον τηε αχυτετοξιχιτψ εξπεριµεντ οφ µιχε ανδ αντι2τυµ ορ φυνχτιον
ιν ϖιτρο οφ τηε θινγλονγψι
• ¬¨t o • ±¨2«¤±u o ≠∏2¥¬±t
(t . Ποστδοχτοραλ Ρεσεαρχη Στατιον οφ Ινστιτυτε οφ Ματερια Μεδιχα , Ηαρβιν Υνιϖερσιτψ οφ Χοµ µερχε , Ηαρβιν txsszy , Χηινα ;
u . Νατιοναλ Ρεσεαρχη Λαβορατοριεσ οφ Νατυραλ ανδ Βιοµιµετιχ ∆ρυγσ , Πεκινγ Υνιϖερσιτψ Ηεαλτη Σχιενχε Χεντερ, Βειϕινγ , tsss{v , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ¤±·¬2·∏°²µ ©¨©¨¦·¤±§ ¤¦∏·¨ ·²¬¬¦¬·¼ ιν ϖιτρο ²©·«¨ ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶©µ²° ±¬±ª¯²±ª¼¬q
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Μετηοδ : ׫¨ ¦²±√ ±¨·¬²±¤¯ ¤¦∏·¨·²¬¬¦¬·¼ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¶²©°¬¦¨ o·«¨ ×× ≈v2kw ox2§¬° ·¨«¼¯·«¬¤½²¯2u ¼¯ l2u ox2§¬³«¨ ±¼¯·¨µ¤½²¯¬∏° ¥µ²°¬§¨ o ××
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º¤¶ xs h ·²·«¨ ¯¨ ∏®¤¨ °¬¤¦¨¯¯ 2ys ²©«∏°¤±q • «¨ ± ¦«¯²µ²©²µ° ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ¤±§·«¨ ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶²©
±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶¤·tss °ª#°pt o º¤¶xu h ·²·«¨ ¯¨ ∏®¤¨ °¬¤¦¨¯¯ 2ys o·«¨ ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯
≤2{uv ¤±§·«¨ ¦¨µ√¬¦¤¯ ¦¤µ¦¬±²°¤
¦¨¯¯ ¨¯¤²©«∏°¤±qΧονχλυσιον : ׫¨ ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ²©·«¨ ¦«¯²µ²©²µ° ¤±§·«¨ ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ©µ²° ±¬±ª¯²±ª¼¬«¤√¨²¥√¬²∏¶o¤±·¬2·∏°²µ
©¨©¨¦·q
[ Κεψ ωορδσ] ±¬±ª¯²±ª¼¬~¤¦∏·¨·²¬¬¦¬·¼~¤±·¬2·∏°²µιν ϖιτρο ·¨¶·~ ×× ° ·¨«²§~≥
° ·¨«²§
≈责任编辑 方文贤
人参皂苷 ªt对 °≥诱导的
×vux
细胞株脑啡肽酶表达的影响
罗焕敏 o邓 惠 o黄 丰 o肖 飞 o李晓光 o章佩芬 o高 勤 o翁 文
k暨南大学 药学院 神经药理研究室 o广东 广州 oxtsyvul
≈摘要 目的 }探讨人参皂苷 ªt对 °≥诱导的
×vux细胞株脑啡肽酶表达的影响 ∀方法 }应用 ××比色法检
测一定剂量 °≥ 和不同浓度人参皂苷 ªt 对
×vux 细胞存活率的影响 o应用 ×2°≤ 观察细胞中脑啡肽酶
k±¨ ³µ¬¯¼¶¬±o∞°l表达的变化 ∀结果 }一定剂量 °≥作用于
×vux细胞株 o
×vux细胞存活率下降 o细胞内 ∞°的表
达降低 ∀人参皂苷 ªt能提高 °≥诱导的
×vux细胞的存活率 o使细胞内 ∞°的表达增高 ∀结论 }一定剂量的 °≥
能造成细胞损伤和细胞内 ∞°表达降低的模型 o人参皂苷 ªt 对 °≥造成的细胞毒性具有一定的保护作用 o并可
以增高细胞内 ∞°的表达 ∀
≈关键词 人参皂苷 ªt ~脂多糖 ~
×vux人胶质瘤细胞 ~脑啡肽酶
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{|s2sw
阿尔茨海默病k⁄l即老年性痴呆症 o是一种病
因不明的原发性脑退行性疾病 o是老年人的常见病
和多发病 o占全部痴呆症的 urv o一些科学家预言 ⁄
可能是本世纪最可怕的老年病 ∀老年性痴呆 ts多年
乃至数 ts年的漫长病程一般从 Β淀粉样肽kΒl从脑
中沉着开始 oΒ是一个生理性多肽 o它是淀粉样前体
蛋白k°°l的水解产物 ∀ Β的合成和分解代谢的平
衡决定它在体内有一个稳定的水平 ∀它代谢平衡的
改变不仅能影响 ⁄的病理过程 o而且能影响该疾病
的发病率 ∀脑啡肽酶k∞°l是一种含锌的金属肽酶 o
它有广泛的组织分布和底物特异性 o∞°是脑内 Β
的主要降解酶 o它可能与 ⁄的发生发展有密切
≈收稿日期 ussw2st2sz
≈通讯作者 3罗焕敏 oר¯ }ksusl{xuusuyv o ƒ¤¬}ksusl{xuustys o
∞2°¤¬¯}·¯«° ±∏q¨§∏q¦±
的关系≈t ∀临床实践证明 o人参是防治 ⁄有确切疗
效的中药 o其活性成分人参皂苷具有改善记忆和神
经保护作用≈u ∀本研究探讨了人参皂苷 ªt 对脂多
糖k°≥l诱导的
×vux细胞株中脑啡肽酶表达的影
响 o为进一步寻找治疗阿尔茨海默病的方法和药物
打下基础 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
1 q1 q1 细胞株 人胶质瘤细胞株
×vux购自中国科
学院上海生物细胞所 ∀
1 q1 q2 药物及试剂 人参皂苷 ªt购自中国药品生
物制品检定所k纯度为 || h l ~°≥购自北京鼎国公
司 ~ °2tyws为 ¬¥¦²公司产品 ~新生牛血清为杭州
四季青生物制品公司产品 ~×× 为 ≥¬ª°¤公司产品 ~
×试剂k¬©¨ 产品l ~ ×2°≤ 引物由上海 ≥¤±ª²±
#s|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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