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Study on the Anti-apopotosis Induced by Hypoxia/hypoglycemia and Reoxygenation of Panax Notoginseng Saponins in Cultured Rat Hippocampal Neurons

三七总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠海马神经细胞凋亡的研究



全 文 :三七总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠海马
神经细胞凋亡的研究
朱陵群t o范吉平t o黄启福t o孙塑伦t o高 颖t o
邹忆怀t o张 壮t o何丽云t o郑 宏u
kt q北京中医药大学 东直门医院 脑病研究室 o北京 tsszss ~
u q宣武中医医院 内科 o北京 tsssxsl
≈摘要  目的 }以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧r缺糖再给氧为模型 o观察三七总皂苷对神经细胞凋亡的
抑制作用 ∀方法 }流式细胞仪检测凋亡细胞百分率 o激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内 ≤¤u n浓度 o荧光显微镜观察
细胞形态学变化和坏死细胞百分率 o同时 o测定细胞乳酸脱氢酶k⁄‹l的释放 ∀结果 }神经细胞缺氧r缺糖 x «后再
给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死 o并显著增加细胞内 ≤¤u n浓度和 ⁄‹ 的释放 o并随再给氧时间的延长而增
加 ∀三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 o降低细胞内 ≤¤u n浓度 o减少 ⁄‹ 的释放 o三七总皂苷的作
用随剂量增加而作用增强 ∀结论 }三七总皂苷对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用 o这种作
用可能与其能降低细胞内 ≤¤u n浓度有关 ∀
≈关键词  三七总皂苷 ~神经细胞 ~凋亡 ~钙 ~缺氧r缺糖
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlst2ssxu2sw
缺血再灌注性脑损伤过程中存在着神经细胞的
凋亡 o抑制神经细胞凋亡的发生有利于缺血性脑血
管病的治疗 o药物可通过干预细胞凋亡过程阻止其
进一步发生而发挥对神经元损伤的保护作用≈t  ∀细
胞内 ≤¤u n超载是缺血再灌注性脑损伤的发病机制
之一 o又在缺血后神经元凋亡发生中起着关键作用 o
而一些钙离子抑制剂或药物可抑制细胞内 ≤¤u n升
高 o可阻止凋亡的发生≈u  ∀有关凋亡机制及抗凋亡
药物的开发研究 o是国内外研究的热点课题 ∀三七
总皂苷对大鼠局灶性缺血脑组织及培养的脑皮层神
经细胞具有保护作用 o这种作用认为与其能够降低
脑组织的总钙含量及抗缺氧性损伤有关≈v2x  ∀本实
验是通过培养大鼠胎鼠海马神经细胞的缺氧r缺糖
损伤模型 o观察三七总皂苷对神经细胞凋亡及胞浆
≤¤u n浓度变化的影响 o并探讨其作用机制 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料 三七总皂苷k°‘≥l o为本实验室提
≈收稿日期  usst2s|2tt
≈基金项目  国家人事部留学回国人员科技活动基金资助
kt|||年 osvz„l
≈通讯作者  ר¯ }kstsl{wstvt|y ƒ ¬¨}kstslywsts{tz ∞2°¤¬¯}
¦¯±¥ƒ °∏¥¯¬¦qª¥q¦²° q¦±q
取 o含量以人参皂苷 • ¥t计为 {v qu h ~多聚2 Λ2赖氨
酸 !阿糖胞苷及碘化丙啶k°Œl均购自美国 ≥¬ª°¤公
司 ~‹²¨ ¦«¶·vvvwu 购自美国  ²¯ ¦¨∏¯¤µ°µ²¥¨ 公司 ∀
ƒ ∏¯²2vr„  和 °¯ ∏µ²±¬¦ƒ2tuz 均购自美国 …Œ’2• ∞⁄
公司 ~尼莫地平k‘¬°²§¬°¬±¨ l和 „uvt{z 购自美国
Œ≤‘公司 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 缺氧r缺糖损伤模型及分组 孕 t{ §的
• ¬¶·¤µ大鼠 o由中国医学科学院实验动物繁育场提
供 ∀无菌条件下取出胎鼠置于培养皿中 o断头取脑
分离出双侧海马 o置含有 s qtux h 的胰蛋白酶的 ⁄2
‹¤±®¶液中 ovz ε 消化 us °¬±o加入含 tss °#p t
胎牛血清的 ⁄ ∞ 培养液中终止胰蛋白酶的作用 o
轻轻吹打使组织分散成单细胞悬液 o并经 uss目不
锈钢筛过滤 o以 t ≅ ts|#pt的密度接种于 s qst h
多聚2 Λ2赖氨酸处理的培养皿中 o置 vz ε ox h ≤ ’u
的培养箱中培养 o于接种的第 v 天加入阿糖胞苷k终
浓度为 ts Λ°²¯#ptl处理 uw «以抑制胶质细胞的
增殖 ∀取培养第 ts 天的神经细胞用于实验 o随机分
为 }缺氧r缺糖组 }神经细胞用无糖 ∞¤µ¯¨ χ¶液置换 o
然后置于缺氧罐内充以 |x h ‘u和 x h ≤ ’u o罐内氧
气含量低于 t h ovz ε 培养 x «o然后从缺氧罐中取
#ux#
第 u{卷第 t期
ussv年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qt
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出 o将 ∞¤µ¯¨ χ¶液换为无血清的 ⁄ ∞ 培养液 o置培
养箱中继续培养 ~对照组 }不经缺氧r缺糖处理 ~尼莫
地平组 }ts Λ°²¯ #pt于缺氧r缺糖损伤时加入培养
液中 ~三七总皂苷 ´和 µ组 }终浓度分别为 ux °ª#
ptk ´组l和 xs °ª#ptk µ组l三七总皂苷 o于实验
前 tu «加入培养液中 o其余同缺氧r缺糖组 ∀
1 q2 q2 凋亡细胞计数 收集细胞悬液 ot sss µ#
°¬±p t离心 x °¬±o弃上清 o沉淀用 zs h 乙醇悬浮 ow
ε 冰箱内固定 tu «以上 o取固定后的细胞用 s qt
°°²¯#pt磷酸盐缓冲液k³‹ z qwl洗 u 遍并悬浮之 o
加入终浓度为 us °ª#p t • ‘¤¶¨ „ ovz ε 恒浴 t «o
再加入 °Œ染液至终浓度 xs °ª#pt o摇匀后 w ε 避
光静置 t «o经尼龙网过滤 o在 ƒ„≤≥ ≤¤¯¬¥∏µ型流式
细胞仪k美国 …⁄公司l上计数 ts sss个细胞 o测定
各期细胞 ⁄‘„ 含量并计算凋亡细胞所占比例 ∀
1 q2 q3 细胞形态学观察 参照文献≈y 方法 o细胞
用 ‹²¨ ¦«¶·vvvwu 和 °Œ双染色 tx °¬±o用磷酸缓冲
液洗 t 次 o重悬于磷酸缓冲液中 o然后涂片 o用荧光
显微镜观察 o同时 o用图象处理系统k≥°’ ×2u o美国
⁄¬¤ª±²¶·¬¦Œ±¶·µ∏° ±¨·Œ±¦l计算坏死细胞的百分率 ∀
1 q2 q4 乳酸脱氢酶k⁄‹l释放的测定 用试剂盒
k北京化学试剂公司提供l来测定培养液中的 ⁄‹
含量 o并将相应的培养细胞置于 p vs ε ov «以上 o
融解后以同法测定总 ⁄‹ ∀神经元损伤程度以培
养细胞释放的 ⁄‹ 占总 ⁄‹ 的百分比表示 ∀
1 q2 q5 细胞胞内钙离子浓度的测定 ≤¤u n荧光探
剂的负载 }将培养 ts §的神经元用 ‹¤±®¶液漂洗 v
次 o洗去细胞表面的残渣及其他杂质 o放入含有 x
Λ°²¯#pt ƒ ∏¯²2vr„  和 x Λ°²¯#pt °¯ ∏µ²±¬¦ƒ2tuz
的 t °‹¤±®¶液中 ovz ε 负载 ws °¬±o用不含荧光
探针的 ‹¤±®¶液洗涤 v 次 ∀细胞≈≤¤u n  ¬的测定 }
将负载好的细胞放在激光共聚焦扫描显微镜k  • ≤2
tsuw o美国 …Œ’2• ∞⁄公司l上 o荧光显微镜初调平
面 o观察细胞的状态及负载情况 o用激光扫描后设置
各种条件 ∀选择扫描时间及间隔 o然后正式选择整
个细胞 o扫描细胞并记录 ≤¤u n荧光强度 ∀加入 ts
Λ°²¯#pt „uvt{z 使 ƒ ∏¯²2v 与细胞内的 ≤¤u n饱和
结合 ∀用同一仪器参数扫描细胞并记录细胞内
≤¤u n的荧光强度kƒ°¤¬l o加入 u °°²¯#pt  ±≤ u¯作
用 ts °¬±使 ƒ ∏¯²2v荧光充分淬灭 o再用同一仪器参
数扫描并记录此时细胞内 ≤¤u n荧光图象kƒ°¬±l o用
ƒ ∏¯²2v 与细胞内 ≤¤u n的正常结合时平均荧光强度
ƒ !与 ≤¤u n饱和结合时平均荧光强度 ƒ°¤¬及荧光淬
灭后的平均荧光强度 ƒ°¬± o按下列公式可得到整个
细胞内的 ≤¤u n浓度 }≈≤¤u n  ¬€ ®§kƒ p ƒ°¬±lr kƒ p
ƒ°¤¬l oƒ }检测到的荧光强度 oƒ°¤¬ }加入 ≤¤u n载体
„uvt{z后细胞内饱和时的荧光强度 oƒ°¬± }加入  ±2
≤ u¯使荧光淬灭后的荧光强度 oƒ ∏¯²2v 的 ®§值为 wxs
±°²¯#pt ∀
1 q2 q6 统计方法 实验数据采用 ≥°≥≥ { qs 软件 τ
检验法进行统计学分析 o以均值 ? 标准差表示 ∀
2 结果
2 q1 三七总皂苷对 ⁄‹ 释放的影响 神经元缺氧
r缺糖损伤 x «后再给氧与对照组相比 o⁄‹ 的漏出
明显增加k Π s qstl o并随再给氧时间的延长而增
加 o°‘≥能够减少 ⁄‹ 的释放 o并随着剂量的增加
而作用增强k表 tl ∀
表 t 三七总皂苷对 ⁄‹ 释放的影响k ξ ? σ, ν € yl
组别
⁄‹ 释放率r h
v « tu « uw «
对照组 { q{w ? v q|tul | qty ? v qsul tw q{t ? w quzul
缺氧 r缺糖组 uz qyv ? y qxw wx qwt ? { qsu ys qvx ? z qvu
三七总皂苷 ´组 t{ q|{ ? v qzxtl vs qtw ? | q{ttl v| qs| ? { quxul
三七总皂苷 µ组 tx qty ? x q|ztl uw qst ? w qy|ul vx qt| ? { qsvul
注 }与缺氧r缺糖组相比 tl Π s .sx u) Π s qstk表 u ov ow同l
2 q2 三七总皂苷对细胞内 ≤¤u n浓度变化的影响
神经元缺氧r缺糖损伤 x «后再给氧 o≤¤u n的产生明
显增加 o并随再给氧时间的延长而有所增加 o尼莫
地平明显降低细胞内 ≤¤u n的浓度 o °‘≥ 能显著抑
制细胞内 ≤¤u n水平的升高 o剂量增加作用增强 o与
‹ ‹Š组相比有显著性差异k表 ul ∀
表 u 三七总皂苷对神经细胞胞内游离钙的影响 k ξ ? σ, ν € yl
组别
神经细胞胞内 ≤¤u n含量r±°²¯#p t
v « tu « uw «
对照组 xt qzw ? | quwul w{ qtu ? | q{vul xv qt| ? ts qtuul
缺氧r缺糖组 ty| qvu ? tt qzz usv qyt ? ut qz| u|{ qtt ? ux q{z
三七总皂苷 ´组 tux qzx ? uv q{vul txs qsx ? tz qtsul tzt qvv ? uw q{sul
三七总皂苷 µ组 tst quw ? t{ qysul tu| qty ? tw qvtul tvx qy{ ? ut qyyul
尼莫地平组 {{ qu| ? tx qxwul zx qsv ? ts qtzul y| q|t ? t{ qtuul
2 q3 三七总皂苷对神经细胞凋亡的影响 神经元
缺氧r缺糖损伤 x «后再给氧 o神经元凋亡发生率明
显增高 o并随再给氧时间延长 o凋亡的细胞也越多 o
尼莫地平能够拮抗这种作用 o°‘≥ 能抑制神经元凋
亡的发生 o与缺氧r缺糖组相比有显著性差异 o并随
剂量的增加而抑制作用更加明显 o与尼莫地平组相
比无显著性差异k Ё s qsxlk表 vl ∀
#vx#
第 u{卷第 t期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 v 三七总皂苷对神经细胞凋亡的影响 k ξ ? σ, ν € yl
组别
神经细胞凋亡率r h
v « tu « uw «
对照组 w quz ? t qv|tl x q{| ? t quxul x qtz ? t q{yul
缺氧r 缺糖组 t| qsy ? x qst wx qzv ? tt qxz w| q{x ? ts qt|
三七总皂苷 ´组tu qw| ? v qxztl u| qtt ? w qzvtl us qyv ? x qstul
三七总皂苷 µ组 | qv{ ? v qtytl tx qux ? v q|xul t| qtu ? y q|vtl
尼莫地平组 { qsx ? u qywul tv q|s ? w q{{ul ty quw ? w qt|ul
2 q4 三七总皂苷对细胞形态的影响 ‹²¨ ¦«¶·
vvvwu和 °Œ双染色检测时在荧光显微镜下可观察
到正常细胞发蓝色荧光 o染色质均匀分布 ~凋亡细胞
也发蓝色荧光 o但染色质凝集 o核皱缩 !碎裂 o细胞皱
缩出芽 o凋亡小体产生 ~坏死细胞发红色荧光 ∀对照
组只可见少量的凋亡细胞和极少量的坏死细胞 ∀缺
氧r缺糖损伤 x «再给氧后 o可见大量的凋亡细胞及
少量坏死细胞 o并随再给氧时间的延长而凋亡细胞
及坏死细胞均增加 o以凋亡细胞为主 o而加入 °‘≥
及尼莫地平后 o凋亡及坏死细胞均明显减少k表 wl ∀
表 w 三七总皂苷对神经细胞坏死的影响k ξ ? σ, ν € yl
组别
神经细胞坏死率r h
v « tu « uw «
对照组 s qxx ? s quuul s q{| ? s qvwul u q{| ? s qv| ul
缺氧r 缺糖组 y q{v ? t qxv z qxz ? t qvv tt qw| ? t qxs
三七总皂苷 ´组 v q{t ? s qv{ul w qtz ? s qxxul y qs{ ? s q|wul
三七总皂苷 µ组 u qvs ? s qxzul u qxs ? s qvtul x qt| ? s qz{ul
尼莫地平组 u qww ? s qytul u q|z ? s qwyul w qvx ? s qxvul
3 讨论
本文以培养大鼠海马神经元缺氧r缺糖再给氧
为模型 o模拟缺血再灌注状态 o诱导培养的海马神经
元凋亡的发生 ∀结果发现 o随着缺氧r缺糖 x «后再
给氧的时间延长 o细胞内的 ≤¤u n浓度随之明显增
加 o神经元凋亡的发生也越来越多 o坏死的神经元也
增多 o代表神经元损伤程度的 ⁄‹ 的释放也越来越
多 ∀三七总皂苷能明显改善这种情况 o使细胞 ⁄‹
的释放 !细胞内 ≤¤u n水平 !细胞凋亡及坏死的神经
元百分率均明显降低 o对缺血再灌注损伤的神经元
有保护作用 ∀一些研究也表明各种原因诱导的细胞
凋亡出现之前 o胞浆内游离钙的浓度均持续升高 o抑
制胞浆内钙浓度的升高则可阻止诱导的细胞发生凋
亡及明显减轻细胞损伤的程度≈z  ∀尼莫地平是 型
钙通道阻断剂 o能阻止 ≤¤u n的跨膜内流 o抑制细胞
内 ≤¤u n的释放 o使细胞内 ≤¤u n保持在一定的水平 o
三七总皂苷降低缺血再灌注后海马神经细胞内
≤¤u n水平的升高效应与尼莫地平相仿 ∀实验结果提
示三七总皂苷对缺血再灌注后海马神经元的凋亡过
程具有抑制作用 o这种作用可能与其能降低细胞内
≤¤u n浓度有关 o但三七总皂苷的作用机制是影响细
胞外钙的内流 o还是调整细胞内钙库的释放 o尚需进
一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  × ±¨±¨ ·¬⁄o∞°¬¯¬¤ ⁄  o¬³·²± ≥ „ q≥∏³³µ¨¶¶¬²± ²© ‘¨ ∏µ²±¤¯
„³²³·²¶¬¶¥¼ ≥2±¬·µ²¶¼¯ ¤·¬²± ²© ≤¤¶³¤¶¨¶q ‘¨ ∏µ²¶¦¬¨··ot||z o
uvykvl }tv| q
≈u  蒋 犁 o丁艳洁 o黄晓明 o等 q神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损
伤 q中国实用儿科杂志 ot||{ otvkxl }vsu q
≈v  史以菊 o吴俊芳 o夏作理 o等 q三七总皂苷对大鼠局灶性脑缺血
的保护作用 q中国临床药理学与治疗学 ot||| owkwl }uzu q
≈w  马丽焱 o肖培根 o梁发权 o等 q三七总皂苷对原代培养大鼠皮层
神经细胞的保护作用 q中国药学杂志 qt||{ ovvkvl }twv q
≈x  马丽焱 o肖培根 o郭宝林 o等 q几种中药成分对脑组织的保护作
用 q中国中药杂志 ot||| ouwkwl }uv{ q
≈y  ƒ¤±ª  o«¤±ª ‹ ± o÷∏≥ … o¨·¤¯ q „³²³·²¶¬¶• ¶¨¬¶·¤±¦¨ ¤±§Œ·¶
• √¨ µ¨¶¤¯ ¬± ‹¤µµ¬±ª·²±¬±¨ • ¶¨¬¶·¤±·≤¨¯¯ ¬±¨ q „¦·¤ °«¤µ° ≥¬±o
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Στυδψ ον τηε Αντι2αποποτοσισΙνδυχεδ βψ Ηψποξια/ ηψπογλψχεµια ανδ Ρεοξψγενατιον
οφ Παναξ Νοτογινσενγ Σαπονινσιν Χυλτυρεδ Ρατ Ηιπποχαµ παλ Νευρονσ
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 ‹ „‘Š «∏¤±ªu o ‹∞ ¬2¼∏±u o ‹∞‘Š ‹²±ªu
kt q⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© ‘¨ ∏µ²¯²ª¼ o⁄²±ª½«¬° ±¨ª ‹²¶³¬·¤¯ o …¨ ¬­¬±ª ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ o …¨ ¬­¬±ª tsszss o≤«¬±¤~
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·¶²© °¤±¤¬ ‘²·²ª¬±¶¨±ª≥¤³²±¬±¶k°‘≥l ²± ¤³²³·²¶¬¶¬±§∏¦¨§¥¼ «¼³²¬¬¤r
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«¼³²ª¯¼¦¨ °¬¤¤±§µ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±¬±¦∏¯·∏µ¨§µ¤·«¬³³²¦¤°³¤¯ ±¨ ∏µ²±¶q Μετηοδ : „³²³·²¶¬¶º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼ o¬±·µ¤¦¨ 2¯
∏¯¯¤µ©µ¨¨¦¤¯¦¬∏° ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±k≈≤¤u n  ¬lº¤¶° ¤¨¶∏µ¨§ º¬·«¦²±©²¦¤¯ ¤¯¶¨µ¶¦¤±±¬±ª °¬¦µ²¶¦²³¼ o°²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤±ª¨¶¤±§ ±¨ ∏µ²±¤¯
±¨ ¦µ²¶¬¶º µ¨¨ ²¥¶¨µ√ §¨ º¬·«©¯∏²µ¨¶¦¨±¦¨ °¬¦µ²¶¦²³¨ o¤±§ ° ¤¨±º«¬¯¨ ·«¨ ¯¨ ¤®¤ª¨ ²© ¤¯¦·¬¦§¨ «¼§µ²ª¨ ±¤¶¨k⁄‹l º¤¶ ° ¤¨¶∏µ¨§q Ρε2
συλτ : ‹¼³²¬¬¤r«¼³²ª¯¼¦¨ °¬¤¦∏¯·∏µ¨¶©²µx «²∏µ¶¤±§µ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±¬±§∏¦¨§±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¤±§±¨ ¦µ²¶¬¶o¤±§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±¦µ¨¤¶¨§
±¨ ∏µ²±¤¯ ≈≤¤u n  ¬¤±§·«¨ ¯¨ ¤®¤ª¨ ²©⁄‹ q × «¨ ©¨©¨ ¦·¶º µ¨¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§ º¬·«·«¨ ¬¨·¨±§¬±ª·¬°¨²©µ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²± q°‘≥ «¤¶¦²∏¯§¶¬ª2
±¬©¬¦¤±·¯¼ §¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ³¨µ¦¨±·¤ª¨ ²© ±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¤±§±¨ ¦µ²¶¬¶o¤±§µ¨§∏¦¨ ±¨ ∏µ²±¤¯ ≈≤¤u n  ¬¤±§·«¨ ¯¨ ¤®¤ª¨ ²© ⁄‹ qΧονχλυ2
σιον : °‘≥ «¤¶¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·²± ±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶q׫¬¶ ©¨©¨ ¦·°¬ª«·¥¨ µ¨ ¤¯·¨§·²¬·¶ ©¨©¨ ¦·²©§¨¦µ¨¤¶¬±ª¬±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ©µ¨¨¦¤¯¦¬∏°
¦²±¦¨±·µ¤·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] °¤±¤¬ ‘²·²ª¬±¶¨±ª≥¤³²±¬±¶~±¨ ∏µ²± ~¤³²³·²¶¬¶~¦¤¯¦¬∏° ~«¼³²¬¬¤r«¼³²ª¯¼¦¨ °¬¤
≈责任编辑 方文贤 
半夏厚朴汤醇提物对大鼠慢性抑郁模型的影响
李建梅t o杨 澄t o张伟云u o孔令东t
kt q南京大学 生命科学院 南京大学生物医药国家重点实验室 o江苏 南京 utss|v ~
u q南京大学 医学院 免疫医学研究室 o江苏 南京 utss|vl
≈摘要  目的 }研究半夏厚朴汤醇提物对大鼠慢性抑郁模型k≤  ≥l的影响 o探索其抗抑郁机制 ∀方法 }以 t h
蔗糖水摄入量作为指标 o慢性给予各种低强度复合刺激 o造成大鼠慢性抑郁模型 ∀按试剂盒酶法测定血脂 ~采用乳
酸脱氢酶k⁄‹l释放法测定脾细胞内自然杀伤细胞活性 ~采用邻苯三酚自氧化法测定红细胞内超氧化物岐化酶活
性 ~按试剂盒显色法测定血清和组织中一氧化氮合酶活性 ~采用硫代巴比妥酸法测定心脏中丙二醛含量 ∀结果 }在
大鼠 ≤  ≥ 模型中半夏厚朴汤醇提物可增加动物蔗糖摄入量 ~增加其脾脏自然杀伤细胞活性 ~升高血清中高密度脂
蛋白k‹⁄2≤l水平k Π s qsxl o降低甘油三酯水平k Π s qsstl ~降低血红细胞内超氧化物岐化酶活性及血清和肝
组织中一氧化氮合酶活性 ~同时抑制组织中脂质过氧化程度 o降低心肌组织中丙二醛含量 ∀结论 }半夏厚朴汤醇提
物通过多途径而达到抗抑郁作用 ∀
≈关键词  半夏厚朴汤 ~大鼠慢性抑郁模型 ~‘Ž细胞活性 ~≥’⁄o‘’≥活性 ~脂质过氧化
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlst2ssxx2sx
半夏厚朴汤是汉代张仲景治疗情志病名方之
一 ∀一直沿用至今用以治疗抑郁症 !焦虑症 !神经官
能症抑郁状态等疾病≈t ou  ∀抑郁症病因病机甚为复
杂 o长期抑郁会引起患者多种生化指标异常 ∀在前
文中亦已证实半夏厚朴汤可缩短小鼠强迫游泳和悬
尾不动时间 o具有抗抑郁作用≈v  ∀本文研究半夏厚
朴汤醇提物在大鼠慢性抑郁模型上对 t h蔗糖水溶
液摄入量 !脾脏自然杀伤k‘Žl细胞活性 !血清中的
血脂水平 o血红细胞中超氧化物岐化酶k≥’⁄l活性 o
≈收稿日期  usst2s{2s|
≈基金项目  国家自然科学基金kv||sst{|l !高等学校骨干教
师资助计划 !江苏省自然基金k…Ž||swsl
≈通讯作者  孔令东 ר¯ k ƒ¤¬l }ksuxlvx|wy|t ∞2°¤¬¯}
®²±ª¯§ƒ ±­∏q¨§∏q¦±
血清和心肌组织中一氧化氮合酶k‘’≥l活性和脏器
中脂质过氧化程度的影响 o为半夏厚朴汤治疗抑郁
症提供依据 ∀
1 实验材料
1 q1 仪器与试剂 ÷ ‹ƒ2t高速分散器k上海金生化
仪器厂l ~˜ ∂ v sss紫外分光光度计k日本岛津l ~人
白血病细胞 Žxyuk南京八一医院提供l ∀ ‘²±¬§¨µ
°ws k‘°2ws oƒ ∏¯®¤ „Šl ~总胆固醇k× ≤l 测定试剂
盒 o批号 usstsxst ~甘油三酯k× Šl测定试剂盒 o批号
usstsxst ~高密度脂蛋白k‹⁄2≤l测定试剂盒 o批号
usstsxst ~均由上海荣盛生物技术有限公司提供 ∀
低密 度 脂 蛋 白 k ⁄2≤ l 测 定 试 剂 盒 o批 号
ussttzssu o由温州东瓯生物技术有限公司提供 ∀一
氧化氮合酶k‘’≥l测定试剂盒 o批号 usstsvvs ~丙
#xx#
第 u{卷第 t期
ussv年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qt
¤±±∏¤µ¼ oussv