全 文 ：杜仲中京尼平苷酸的提取工艺研究及应用
彭密军t ou o周春山t 3 o雷启福t o陈龙胜t
kt q中南大学 化学化工新技术研究所 o湖南 长沙 wtss{v ~
u q吉首大学 o湖南 张家界 wuzsssl
≈摘要  目的 }用正交试验法对杜仲中的活性成分京尼平苷酸的提取工艺进行了优选研究 ∀方法 }采用正交
表 tykwxl o以提取时间 !提取温度 !提取次数 !料液比以及提取有机溶剂乙醇含量为因素 o以京尼平苷酸提取率为指
标进行试验 ∀采用反相高效液相色谱法k• °2‹°≤l测定京尼平苷酸提取率 ∀结果 }最佳提取参数为 o温度为 xs ε o
时间 t «o提取 t次 o{s h的乙醇 o料液比为 tΒtu ∀应用最佳提取工艺对杜仲原料进行了筛选 ∀结论 }该工艺为杜仲
中京尼平苷酸的大规模提取提供理论依据 ∀
≈关键词  杜仲 ~京尼平苷酸 ~正交试验 ~高效液相色谱法 ~原料筛选
≈中图分类号  • u{v ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsv2suu|2sv
杜仲 ∞∏¦²°°¬¤ ˜¯ °¬²§¨¶是我国特有的木本植
物 o传统上以皮入药 ∀其药理活性的化学基础主要
为环烯醚萜类的京尼平苷酸kª¨ ±¬³²¶¬§¬¦¤¦¬§l !京尼
平苷kª¨ ±¬³²¶¬§¨ l o木脂素类的松脂醇二葡萄糖苷
k³¬±²µ¨¶¬±²2§¬ª¯∏¦²¶¬§¨ l等≈t2y  o特别是京尼平苷
酸≈z  ∀
由于京尼平苷酸具有多种活性 o特别是其优良
的降低血压和调节血压的功效 o引起了国内外的广
泛重视 ∀但关于京尼平苷酸提取方法的研究鲜有报
道 ∀本研究对京尼平苷酸的提取工艺进行优化研
究 o为该活性成分的批量生产提供理论依据 ∀
1 实验部分
1 q1 仪器 …¬²·µ²±¬® …×{tss 高效液相色谱仪 o
…×{uss ˜∂ p √¬¶检测器 o≤ p • y„ ¦«µ²°¤·²³¤¦自动积
分仪 o电子天平 o烘箱 ∀
1 q2 试剂与材料 氯仿 !甲醇 !丙酮 !乙醇等均为分
析纯 ~京尼平苷酸标准品由日本 ⁄µqפ®¨¶«¬⁄¨ ¼¤°¤
赠送 ∀
1 q3 样品处理 实验所用原料杜仲新干皮 !杜仲陈
干皮 !杜仲陈枝皮 !杜仲叶等均来自湖南省张家界市
永定区 o杜仲炮制皮购于中药店 ∀样品均用烘箱于
xx ε 烘干 !粉碎 !过 us目筛 o备用 ∀
≈收稿日期  ussv2sx2s{
≈基金项目  湖南省科技厅攻关计划ksv‘Ž≠ust|l ~湖南省教
育厅青年重点项目 ksu…su{l
≈通讯作者  3 周春山 oר¯ }kszvtl {{vs{vv o ƒ¤¬} kszvtl
{{z|yzu o∞2°¤¬¯} °¬­∏±³ƒ ¶¬±¤q¦²°
1 q4 原料筛选 由于杜仲在生长发育过程中其化
学成分的含量不断地发生变化 ∀所以选择原料显得
十分重要 ∀杜仲叶和皮中京尼平苷酸含量差异很
大 o而且京尼平苷酸的含量随产地和季节变化而变
化 ∀在此 o作者对几种不同的杜仲原料进行对比 o它
们分别是杜仲新干皮 !杜仲陈干皮 !杜仲陈枝皮 !杜
仲炮制皮及杜仲叶 ∀此外 o作者对 tx年树龄的杜仲
皮及同一株树上的叶子进行分析 o比较了不同采摘
时间样品中京尼平苷酸的含量 o以确定最佳提取原
料 ∀
作者用不同干燥方法对杜仲皮进行处理 o然后
分别对其中京尼平苷酸含量进行了的测定 o为杜仲
原料的干燥处理提供科学依据 ∀
1 q5 提取方法 称取适量杜仲样品 o按照工艺设计
加入一定量的提取溶剂 o在一定温度下提取一定的
时间 o滤过 o合并滤液 o定容 o进行京尼平苷酸含量测
定 ∀
1 q6 色谱分析方法 选取 °²¯¼ª²¶¬¯p ≤t{kw qy °° ≅
uxs °° ox Λ°l色谱柱 ~甲醇2水溶液为流动相 ~辅以
适量醋酸作调节剂 ∀
2 结果与讨论
2 q1 原料筛选结果
2 q1 q1 不同杜仲样品中京尼平苷酸含量 由表 t
可知 o杜仲新皮中京尼平苷酸的含量最高 o是最合适
原料 o与文献报道一致≈{  ∀杜仲陈干皮和陈枝皮 o由
于放置过久 o植物体内的生化反应使有效成分京尼
平苷酸含量大大降低 ∀杜仲叶中也含有京尼平苷
#|uu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤µ¦«oussw
酸 o虽比皮少 u倍多 o但资源丰富 o而且杜仲叶的采
摘不影响树的生长 o符合生态环保的要求 o是很有利
用价值和开发前景的 ∀关于杜仲叶的利用 o见另文
报道 ∀
表 t 各种杜仲样品中京尼平苷酸含量
样品 样品重rª 含量r h
新干皮 x qsst u s qxz
陈干皮 w q||y x s quv
陈枝皮 x qssx { s qtt
炮制皮 x qstu v s qsx
杜仲叶 w q|y{ x s qut
2 q1 q2 杜仲皮中京尼平苷酸含量随采收季节的变
化 不同季节 o京尼平苷酸的含量变化很大 ∀杜仲
皮中京尼平苷酸的含量以 x 月最高 o落叶前后的
ts ott和 tu月含量较高 ∀结果见图 t ∀经综合分
析 o提取京尼平苷酸以 x月及落叶前后剥取的杜仲
皮作原料最好 o但对树的生长发育有不利影响 o其次
为 ts ott及 tu月采剥的杜仲皮 ∀
图 t 杜仲皮中京尼平苷酸含量的变化
t q蒸烘皮 u q阴干皮
2 q1 q3 干燥方法对原料中京尼平苷酸含量的影响
采摘后的样品必须进行适当的处理 o首先是干燥 ∀
中药材干燥的目的是除去新鲜药材中的大量水分 o
避免发霉 !变色 !虫蛀以及有效成分的分解和破坏 o
保证药材质量 o并利于贮藏 ∀不同的处理方式杜仲
皮中京尼平苷酸含量的影响情况如表 u ∀
表 u 不同干燥方法
对杜仲皮中京尼平苷酸含量的影响
编号 干燥方法 含量r h 损失率r h
t 烘干tl s qw|z tu q{
u 避光阴干ul s qxsu tt q|
v 晒干vl s qvys vy q{
w 熏干wl s qv|| vs qt
x 先蒸再烘k蒸烘lxl s qxyu t q|
注 }tlxs ε 在恒温干燥箱中烘 u qx «~ul阴凉干燥处自然风干 ~
vl 直接置于阳光下晒干 ~wl烟火熏干 ~xl先在水蒸气蒸馏装置中蒸约
ts °¬±o而后取出烘干
实验表明 o原料晒干 !阴干 !蒸烘 !熏干 !烘干等
不同干燥方法对京尼平苷酸含量的影响较大 o杜仲
原料以蒸烘干最好 o避光阴干次之 oxs ε 烘干又次
之 o晒干最差 ∀作者对蒸烘样品与阴干样品进行了
比较 o结果见图 t ∀
采摘后处理方式对杜仲原料中京尼平苷酸的含
量影响很大 o干燥前经过蒸汽处理的杜仲中京尼平
苷酸的含量较自然干燥的样品高 o且不同的干燥方
法之间差别很大 ∀这可能是由于杜仲中含有可分解
生物活性物质的胞内酶 o采集后的树皮和树叶在自
然风干过程中胞内酶会使生物活性成分分解 o而新
鲜的杜仲样品经过蒸汽处理可使胞内酶失活 o从而
有效地防止分解过程的发生 o使杜仲原料中的活性
成分保持较高的水平 ∀
2 q2 提取条件的选择
植物中有效成分的提取是十分重要的一步 ∀这
一步是使溶剂进入原材料 o将有效成分从固相转移
到液相的过程 ∀影响浸出的因素主要有溶剂 !温度 !
时间 !提取次数 !料液比等 ∀
2 q2 q1 提取溶剂选择 京尼平苷酸易溶于水 !甲
醇 o可溶于乙醇等有机溶剂 o可用水或不同浓度的甲
醇 !乙醇来提取 ∀不同提取溶剂对京尼平苷酸的提
取率有较大影响 ∀分别称取杜仲样品 x qs ªo在 xs
ε 条件下 o用不同浓度的甲醇 !乙醇提取 o时间 u «o
结果见图 u ∀考虑到试剂的安全性 o作者选择乙醇
水溶液为提取剂 ∀
图 u 不同溶剂对京尼平苷酸浸提效果的影响
t q乙醇 u q甲醇
2 q2 q2 提取条件优化试验设计 根据预实验结果 o
我们选出提取温度 !提取时间 !提取次数 !乙醇含量
及料液比 x个提取因素 o每个因素 w水平的正交试
验方案 o见表 v ∀
2 q2 q3 正交试验结果 实验结果见表 w ∀对有关
数据作极差分析 o结果见表 x ∀各因素对京尼平苷
#svu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
酸提取率的影响程度依次为 }∆  Α  Ε  Β  Χ∀
即提取因子中乙醇浓度k因子 ∆l对京尼平苷酸提
取率的影响最大 o其次是提取温度k 因子 Αl o最小
的是提取次数k因子 Χl ∀在实验条件下 o随着因素
∆乙醇浓度的提高 o京尼平苷酸的提取率逐渐增
大 ∀优选出的最佳工艺条件为 Αu Βu Χt ∆w Εv ∀
表 v 因素水平表
因素
水平

Α
提取温度
r ε
Β
提取时间
r«
Χ
提取次数

∆
乙醇含量
r h
Ε
料液
比k Ω/ ςl
t vs s qx t s tΒy
u xs t u vs tΒ|
v zs u v xs tΒtu
w |s v w {s tΒtx
表 w 正交试验结果
试验号
京尼平苷酸
提取率r h 试验号
京尼平苷酸
提取率r h
t wt qw | |u q|
u z| qu ts |z q|
v {w q| tt |u q{
w zs qx tu yw q{
x |u qv tv |u qz
y |{ qu tw {u qw
z ww qt tx |v q{
{ zt q| ty {x qz
表 x 试验结果直观分析
Α Β Χ ∆ Ε
Žt uzy qs vt{ qw vt{ qt uvu qz vsx qs
Žu vsy qx vxz qz vvs qt vvy qy uyt q|
Žv vw{ qw vtx qy vvu qt vys q{ vws qy
Žw vxw qy u|u q| vsx qu vxx qw vv{
®t y| qs z| qy z| qx x{ qu zy qv
®u zy qy {| qw {u qx {w qu yx qx
®v {z qt z{ q| {v qs |s qu {x qu
®w {{ qz zv qu zy qv {{ q| {w qx
• t| qz ty qu y qz vu qs t| qx
2 q3 分析方法的建立
2 q3 q1 测定条件的优化 由于杜仲中环烯醚萜类
的成分比较复杂 o性质相近 o所以要实现京尼平苷酸
与其他组分的分离 o必须对 • ° p ‹°≤ 的流动相进
行优化选择 ∀实验结果表明 o流动相甲醇2s qzx h醋
酸水溶液 € t{Βzu o流速 t qs °#°¬±pt o检测波长 uws
±° o灵敏度 s qs{ „˜ƒ≥ o纸速 v °°#°¬±pt o京尼平苷
酸与其他成分能够达到基线分离 o且峰形对称 ∀标
样和样品经 s qwx Λ°滤膜过滤 o然后进行 ‹°≤ 分
析 ∀每次进样量为 y ˏo重复进样 x次 o计算峰面积
的平均值进行定量 ∀标样与样品的色谱图如图 v所
示 ∀
图 v 京尼平苷酸标准品及杜仲样品色谱图
„ q京尼平苷酸标准品 …q杜仲样品 t q京尼平苷酸
2 q3 q2 京尼平苷酸标准曲线 取京尼平苷酸对照
品 6 q| °ªo用色谱纯的甲醇溶解并定容至 x °∀得
到浓度为 t qvy ª#pt的京尼平苷酸标准储备液 ∀取
标准储备液用流动相溶液稀释 o配制成标准系列溶
液如下 s qsvw s os qsy{ s os qtvy s os quzu s os qxww s ª#
pt ∀各样品进样 y ˏo所得色谱峰面积与样品量
呈线性关系 o回归方程及其浓度范围如下 }
Ψ€ t yzw uys Ξ p w wsx .w ρ€ s q||| { os qt ∗ v qx Λª
Ψ表示色谱峰峰面积 , Ξ表示 Š°„的浓度kª#ptl
3 结论
正交试验结果表明 o杜仲中京尼平苷酸的最佳
提取条件是 Αu Βu Χt ∆w Εv o即温度 xs ε o时间 t «o
提取 t次 o乙醇含量为 {s h o料液比为 tΒtu ∀此条
件下京尼平苷酸的提取率可达到 |{ qu h ∀应用该
提取条件对提取原料进行了筛选 o得出结论如下 }提
取应选择杜仲新干皮为原料 o并且新采剥的杜仲皮
最好是先用蒸气蒸 ts °¬±后 o再放入烘箱中快速烘
干 ∀
≈参考文献 
≈t  阴 健 o郭力弓 q中药现代研究及临床应用ktl q北京 }学苑出
版社 ot||v q
≈u  朱振家 o钱之玉 q栀子提取物京尼平苷和西红花苷利胆作用的
研究 q中草药 ot||| ovskttl }{wt q
≈v  ˜ ½¨²±² ŽoŽ¤º¤¶¤®¬× q ∞©©¨¦·²©·«¨ ∏¨¦²°°¬¤¯¨ ¤© ¬¨·µ¤¦·¬± ¥¯²²§
³µ¨¶¶∏µ¨ q Τηεραπ Ρεσot||z ot{ }|w q
≈w  Ž¤º¤¶¤®¬× o˜ ½¨²±² Žo‘¤®¤½¤º¤ ≠ q „±·¬«¼³¨µ·¨±¶¬√¨ °¨ ¦«¤±¬¶° ²©
©²²§©²µ¶³¨¦¬©¬¨§«¨ ¤¯·«∏¶¨ }∞∏¦²°°¬¤¯¨ ¤©ª¯¼¦²¶¬§¨ ¤±§¬·¶¦¯¬±¬¦¤¯
¤³³¯¬¦¤·¬²±q ϑ Ηεαλτη Σχι ousss ouu }u| q
≈x  ¬≠ o≥¤·² × o  ·¨²µ¬Žo ετ αλq ׫¨ ³µ²°²·¬±ª ©¨©¨¦·¶²© ª¨ ±¬³²¶¬§¬¦
¤¦¬§¤±§¤∏¦∏¥¬±¬± Ευχοµ µια υλµοιδεσ ’¯ ¬√¨ ¯¨ ¤√¨ ¶²± ¦²¯ ¤¯ª¨ ± ¶¼±2
·«¨¶¬¶q Βιολ Πηαρµ Βυλλ, t||{ out }tvsy q
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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积分值 o其 • ≥⁄为 t qs h ∀每天测 t次 o连测 x §o其 • ≥⁄为
t qv h ∀
2 q7 重现性考察 取同一批号样品k||suutlx份 o平行提
取 ∀测定肉桂酸得含量 o其 • ≥⁄为 t qv h ∀
2 q8 供试品溶液的制备与测定 取供试品 x粒 o倾出内容
物 o研细 o取 s qv ªk精确称定l药粉 o置 ux °锥形瓶中 o加内
标溶液 t qx °o加 xs h 甲醇2水k用磷酸调 ³‹ 为 v qsltv qx
°k称重l ∀摇匀 o浸泡 vs °¬±o超声 ux °¬±∀放冷 o补充溶剂
至原重量 o摇匀 ∀过 s qwx Λ°微孔滤膜 o滤液为 ‹°≤测试样
品 ∀按此法制备不含桂枝的阴性对照液 ∀样品测定结果见
表 u ∀
表 u 样品测定结果
批号 样品含量r°ªrª • ≥⁄r h
ussts|st s qvx t qu
ussts|u{ s qwz s q{
ussttsts s qws t qw
ussttstx s qvv s q|
usstttt’ s vu t qs
3 讨论
3 q1 文献≈u 报道 o所用流动相肉桂酸的保留时间约为 t{
°¬±o改为本试验所用流动相肉桂酸的保留时间约为 x qzu
°¬±o使分析速度明显加快 ∀同时应用本试验样品提取液使
肉桂酸的提取率高大约 | h ∗ tu h ∀按桂龙咳喘宁胶囊处
方 o制备阴性对照样品 o在本试验色谱条件下色谱分析 o不干
扰样品分析 ∀
3 q2 检测波长的选择 o将肉桂酸与丹皮酚分别用 xs h甲醇2
水溶解后在 ˜ p usssk日本日立公司l分光光度计上进行 wss
∗ uss ±°光谱扫描 o结果肉桂酸在 uys ∗ u|s ±°均有吸收 o
在 uz{ ±°处为最大吸收 ∀丹皮酚在 uys ∗ u{s ±°均有吸收 o
经 ‹°≤ 对肉桂酸 !丹皮酚及样品分析 o在 uz{ ±°均无干扰 o
故选择此波长为测定波长 ∀
3 q3 在本试验所确定的色谱条件下 o肉桂酸的理论塔板数
大于 y sss o肉桂酸与丹皮酚k内标l完全分离 o其分离度大于
w ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 q一部 qusss qxwx q
≈u  罗晋萍 o张中苏 o田 晨 q高效液相色谱法测定桂龙咳喘宁中肉
桂酸的含量 q药物分析杂志 ousss ouskvl }uss q
≈责任编辑 刘  
k上接第 uvt页l
≈y  ¬ ≠ o  ·¨²µ¬ ŽqŒ°³µ²√¨ °¨ ±·¬± ·«¨ ·∏µ±²√ µ¨µ¤·²©·«¨ ¶·µ¤·∏°
¦²µ±¨ ∏°¬±©¤¯¶¨ ¤ª¨§ °²§¨¯µ¤·¶¥¼·«¨ ¤§°¬±¬¶·µ¤·¬²± ²©ª¨ ±¬³²¶¬§¬¦
¤¦¬§¬± Ευχοµ µια υλµοιδεσ ’¯ ¬√¨ ¯¨ ¤©q Βιλο Πηαρµ Βυλλot||| ouu }
x{u q
≈z  ⁄∞≠„ „ פ®¨ ¶«¬o‘Œ≥‹Œ…∞ ≥¤±¶¨¬q ≤²±¶·¬·∏¨±·¶¤±§³«¤µ°¤¦²¯²ª¬2
¦¤¯ ©¨©¨¦·¶²© ∞∏¦²°°¬¤ ¤±§ ≥¬¥¨µ¬¤± ª¬±¶¨±ªq Αχτα Πηαρµαχολ Σιν ,
usst ouuktul }tsxz q
≈{  赵 晖 q杜仲叶药理作用研究k µl ) ) ) 抗衰老作用 q国外医学#
中医中药分册 ousss ouukvl }txt q
Στυδψ ον τεχηνολογψ οφ εξτραχτινγ γενιποσιδιχ αχιδ
φροµ Ευχοµ µια Υλµιοδεσ ανδ ιτσ αππλιχατιον
°∞‘Š ¬2­∏±tou o‹’˜ ≤«∏±2¶«¤±t o∞Œ ±¬2©∏t o≤‹∞‘²±ª2¶«¨ ±ªt
(t . Ινστιτυτε οφ Νεω Τεχηνολογψ Χηεµιστρψ ανδ Χηεµιχαλ Ενγινεερινγ , Χεντραλ Σουτη Υνιϖερσιτψ, Χηανγσηα wtss{v , Χηινα ;
u . ϑισηου Υνιϖερσιτψ, Ζηανγϕιαϕιε wuzsss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ²³·¬°∏° ·¨¦«±²¯²ª¼ ²© ¬¨·µ¤¦·¬±ª¥¬²¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·±¤° §¨ª¨ ±¬³²¶¬§¬¦¤¦¬§¬± ∞∏¦²°°¬¤ ˜¯ 2
°¬²§¨¶¥¼ ²µ·«²ª²±¤¯ ·¨¶·q Μετηοδ : „± ²µ·«²ª²±¤¯ ·¨¶··¤¥¯¨tykwxl º¤¶∏¶¨§º¬·«·«¨ ©¤¦·²µ¶²© ¬¨·µ¤¦·¬±ª·¬°¨o·¨°³¨µ¤·∏µ¨ o·¬° ¶¨o ·¨«¤±²¯
¦²±¶¬¶·¨±¦¼ ¤±§·«¨ µ¤·¬²²©¶²¯¬§·² ¬¯´∏¬§q׫¨ ¦²±·¨±·²©ª¨ ±¬³²¶¬§¨¬¦¤¦¬§º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ • °2‹°≤ q Ρεσυλτ : ׫¨ ²³·¬°∏° ·¨¦«±²¯²ª¼
º¤¶ }·¨°³¨µ¤·∏µ¨ xs ε o·¬°¨t «o²±¦¨ o¦²±¶¬¶·¨±¦¼ {s h o¤±§·«¨ µ¤·¬²²©¶²¯¬§¤±§ ¬¯´∏¬§tΒtu q˜±§¨µ·«¨ ¦²±§¬·¬²±o·«¨ ¥¨¶·°¤·¨µ¬¤¯ ²©
∞∏¦²°°¬¤ ˜¯ °¬²§¨¶©²µ ¬¨·µ¤¦·¬±ªª¨ ±¬³²¶¬§¬¦¤¦¬§º¤¶¦«²¶¨±q Χονχλυσιον : ׫¨ ·¨¦«±²¯²ª¼ ¦¤± ³µ²√¬§¨ ¶²°¨·«¨ ²µ¨·¬¦¤§√¬¦¨ ©²µ¬±§∏¶·µ¼q
[ Κεψ ωορδσ] ∞∏¦²°°¬¤ ˜¯ °¬²§¨¶~ª¨ ±¬³²¶¬§¬¦¤¦¬§~²µ·«²ª²±¤¯ ·¨¶·~ ‹°≤ ~¦«²¬¦¨ ²© °¤·¨µ¬¤¯
≈责任编辑 袁桂京 
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